梅毒的实验室诊断

77%77%-88%
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TPPA
基本原理：用超声裂解梅毒螺旋体制备 抗原，致敏明胶颗粒，其致敏粒子与待 检血清中的抗梅毒螺旋体特异性抗体结 合，产生肉眼可见的凝集。
操作步骤
1. 试剂准备：试验前将试剂和待检标本恢复到室温。 2. 加稀释液：每份样本做4孔，加标本稀释液加至微量 反应板孔内，第1孔100微升，第2～4孔各25微升。 3. 样本稀释：取血清25微升加至第1孔，混匀后取25 微升至第2孔，混匀后取25微升至第3孔，混匀后取25微升 至第4孔，混匀后弃去25微升。 4. 加对照液：第3孔加未致敏颗粒25微升，第4孔加致 敏颗粒25微升。 5. 混合：将反应板置振荡器振荡30秒。 6.反应：置有盖湿盒，孵育2 h，或放4℃冰箱过夜观察 结果。
简单、可靠。 ①. 简单、可靠。 早期：硬下疳（梅毒血清学试验仍阴性）。 ②. 早期：硬下疳（梅毒血清学试验仍阴性）。 ③. 阴性不能排出患梅毒的可能性
暗视野显微镜下的梅毒螺旋体
螺旋体检查是诊断早期现症梅毒的最好方 法， WHO指定其为性病实验室必备项目之一 指定其为性病实验室必备项目之一
镀银染色检查
病原体为梅毒螺旋体，属于密螺旋体属，苍白 密螺旋体苍白亚种(Treponema pallidum subspecies pallidum)
苍白螺旋体 密螺旋体属 品他螺旋体 品他病 苍白亚种 地方亚种 极细亚种 梅毒 地方性梅毒 雅司病
梅毒螺旋体的生物学特性
1、直径 0.10~0.15µm，有8~14个致密而规则的 、 ， 个致密而规则的 小螺旋，两端尖直。 小螺旋，两端尖直。 2、原生质圆柱体上紧绕着3~4根周浆鞭毛 2、原生质圆柱体上紧绕着3~4根周浆鞭毛，故运 根周浆鞭毛， 动活跃，运动方式多样。 动活跃，运动方式多样。 3、G-，但不易着色。Fontana镀银染色呈棕褐色。 、 ，但不易着色。 镀银染色呈棕褐色。 镀银染色呈棕褐色 4、在无活细胞的人工培养基中难培养，生长慢。 、在无活细胞的人工培养基中难培养，生长慢。
定量试验 （1）稀释液准备：在圈内加入50微升 生理盐水（根据需要确定稀释度），勿 将盐水涂开。 （2）加样：吸取50微升血清与各圈中生 理盐水做系列稀释，并涂布整个圈内。 （3）同定性试验中的(2)、(3)。
凝集反应强度分级：
3+～4+：圆圈内出现中到大的红色絮状物，液体清亮。 ～ 2+：圆圈内出现小到大的红色絮状物，液体较清亮。 1+：圆圈内出现小的红色絮状物，液体浑浊。 —：圆圈内仅见红色集中于中央一点或均匀分散。
结果判断
1.观察加未致敏颗粒的第3孔，不出现凝集为 有效试验。 2. 观察凝集反应强度：分级如下。
4+：颗粒光滑覆盖整个孔底，有时边缘有折叠。 3+： 颗粒光滑覆盖大部分孔底。 2+：颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一颗粒环。 1+： 颗粒光滑集聚覆盖孔底，周围有一明显颗粒环。 ±：颗粒沉集孔底，中央形成一小点。 一：颗粒紧密沉积孔底中央。
抗原稳定性
血清试验前处理
不需灭活 玻片，肉眼或 玻片， 显微镜
不需灭活 纸卡片，肉眼 纸卡片， 结果容易判断
不需灭活 纸卡片，肉眼 纸卡片， 结果容易判断
反应板及结果 判断 注释
一期敏感性 未经治疗） （未经治疗） 二期敏感性 未经治疗） （未经治疗） 晚期敏感性 未经治疗） （未经治疗）
74%74%-87%
发生于硬下疳出现后2~8周。 周 发生于硬下疳出现后 皮疹泛发对称， 皮疹泛发对称，一般无自觉症状 梅毒疹和淋巴结中，存在大量梅毒螺旋体。 梅毒疹和淋巴结中，存在大量梅毒螺旋体。
Ⅲ期（晚期）梅毒： 晚期）梅毒：
皮肤粘膜 二期复发 梅毒可反 复出现
2年后
晚期 梅毒
侵犯
骨骼 心血管系统 神经系统
Ⅲ期（晚期）梅毒： 晚期）梅毒：
梅毒螺旋体抗原血清试验
（1）FTA-ABS
（2）TPPA/ TPHA （3）TP-ELISA （4）发光法 发光法 （5）胶体金法 胶体金法
暗视野显微镜检查
标本类型：梅毒硬下疳、扁平湿疣、 标本类型：梅毒硬下疳、扁平湿疣、黏膜斑等 皮损的渗出液、 皮损的渗出液、淋巴结穿刺液 方法：暗视野显微镜下查找梅毒螺旋体。 方法：暗视野显微镜下查找梅毒螺旋体。 结果：典型的梅毒螺旋体呈白色发光, 结果：典型的梅毒螺旋体呈白色发光 其螺旋 较密而均匀。运动方式： 较密而均匀。运动方式： ①伸缩其螺旋间距离 而移动（主要方式） 蛇行式③ 而移动（主要方式）②蛇行式③旋转式 评价： 评价：
5、抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感；对青霉 、抵抗力极弱，对温度和干燥特别敏感； 素、四环素、红霉素等抗生素敏感。 四环素、红霉素等抗生素敏感。
梅毒螺旋体
梅毒的传播途径
1、直接性接触 、 2、血液传播：输血 、血液传播： 3、垂直传播：胎盘传播。 、垂直传播：胎盘传播。 4、间接传播：日常用品、接吻、哺乳、 、间接传播：日常用品、接吻、哺乳、 医疗器械等途径。 医疗器械等途径。
梅毒的实验室诊断
梅毒是一种几乎可以侵犯全身所有器官， 而产生多种症状和体征的慢性传染性疾 病。 十六世纪初由欧洲传入亚洲，后蔓延我 国。梅毒又称为杨梅疮、广东疮、疳疮、 下疳、霉疮等。
《本草纲目》：“杨梅疮，古方不载，亦有无 病者；近时起于岭南，传及四方。” 第一部论述梅毒最完善的专著： 霉疮秘录》 第一部论述梅毒最完善的专著：《霉疮秘录》 明代 陈同成 我国解放后，基本上消灭了此病， 我国解放后，基本上消灭了此病，但近年来又 有新的病例发现 2009年广东省报告梅毒39112例，报告数占全 国报告总数的11.95%，位居全国第二位，较 2008年增长10.44%。
USR
同前+EDTA+氯 同前+EDTA+氯 +EDTA+ 化胆碱
稳定4℃ 稳定4℃ ～8 ℃ 保存12 12个月 保存12个月
RPR
同前+EDTA+氯 同前+EDTA+氯 +EDTA+ 化胆碱+活性炭 化胆碱+
稳定4℃ 稳定4℃ ～8 ℃ 保存12 12个月 保存12个月
TRUST
同前+EDTA+氯化 同前+EDTA+氯化 +EDTA+ 胆碱+ 胆碱+甲苯胺红 稳定4℃ 稳定4℃ ～8 ℃ 保存12 12个月 保存12个月
非梅毒螺旋体抗原血清试验
TRUST（甲苯胺红不加热血清试验） 基本原理：在心磷脂、卵磷脂和胆 固醇等组成的抗原中加入甲苯胺红， 与待检血清中的反应素结合，形成 肉眼可见的红色絮状物。
定性试验
(1)加样：吸取50微升血清（浆）放在卡片 圈中，并均匀地涂布在整个圈中。 (2)加抗原：将抗原轻轻摇匀，用9号针头 加1滴抗原。 (3)反应：将卡片置水平旋转仪旋转8分钟 [(100±5)转/分钟]，立即在亮光下观察结果
梅毒的分期
Ⅰ期（初期）梅毒： 初期）梅毒：
梅毒螺旋体 皮肤或粘膜局部繁殖 局部无任何症状
14～40天 潜伏期平均3 14～40天(潜伏期平均3周)
淋巴管
附近淋巴结
入侵部位炎症反应 初疮（硬下疳） 初疮（硬下疳）一期梅毒
不治疗4～8周 ～ 周
一期潜伏梅毒
自然消失
Ⅰ期（初期）梅毒： 初期）梅毒：
Ⅰ期梅毒（包皮硬下疳）
Ⅰ期梅毒 （巨大下疳）
部位：绝大部份在外生殖器。 部位：绝大部份在外生殖器。 形态：园形或椭园形，直径约1 2cm，边界清楚，周围稍隆起， 形态：园形或椭园形，直径约1～2cm，边界清楚，周围稍隆起， 内含大量梅毒螺旋体，传染性极强。 内含大量梅毒螺旋体，传染性极强。 特点: 常单个；触诊有软骨样感；无痛可自愈。 特点: 常单个；触诊有软骨样感；无痛可自愈。
梅毒血清试验假阳性因素： 梅毒血清试验假阳性因素：
技术性： 技术性：
标本的污染 溶血 操作失误
生物学假阳性： 生物学假阳性：
某些疾病：结核、疟疾、肝病、红斑狼疮、流感、 某些疾病：结核、疟疾、肝病、红斑狼疮、流感、肺 类风湿性关节炎、风湿性心脏病、风疹、 炎、类风湿性关节炎、风湿性心脏病、风疹、系统性 硬化症等， 硬化症等，疾病发展过程中释放心磷脂到血液中假阳 性。 生理机能发生变化：少数孕妇也可发生生物学假阳性。 生理机能发生变化：少数孕妇也可发生生物学假阳性。
基本损害为慢性肉芽肿 病损内螺旋体少但破坏性大
Ⅲ期梅毒（树胶肿） 期梅毒（树胶肿）
Ⅲ期梅毒（溃疡坏死） 期梅毒（溃疡坏死）
梅毒的实验室检测方法
显微镜检测法： 显微镜检测法：
（1） 暗视野显微镜检查 （2） 镀银染色检查
血清学检测法： 血清学检测法：
非梅毒螺旋体抗原血清试验
性病研究实验室试验)： （1）VDRL(性病研究实验室试验 ：需灭活 ） 性病研究实验室试验 （2）USR（不加热血清反应素试验） ） （不加热血清反应素试验） 加速血浆反应素环状卡片试验) （3）RPR(加速血浆反应素环状卡片试验 ） 加速血浆反应素环状卡片试验 甲苯胺红不加热血清试验) （4）TRUST(甲苯胺红不加热血清试验 ） 甲苯胺红不加热血清试验
源自文库期（中期）梅毒 中期）
梅毒螺旋体 血液 人体免疫作用
大部分螺旋体被杀死
其余的螺旋体繁殖
低热、 低热、浅表淋巴结肿大 二期梅毒 皮肤粘膜疹 骨骼、眼晴、 骨骼、眼晴、神经系统等的炎症症状
不治疗
二期潜伏梅毒
症状可自然消失， 症状可自然消失，呈现潜伏状态
Ⅱ期（中期）梅毒 中期）
Ⅱ期梅毒（玫瑰疹）
Ⅱ期梅毒（梅毒疹）
TRUST — + + —
TPPA 临床意义 — 初期梅毒早期或排出 + 现症梅毒 — 生物学假阳性 + 梅毒经治疗后
梅毒实验室检测的特点
临床表现
一期梅毒 二期梅毒 潜伏梅毒 三期梅毒 神经梅毒
取材部位
溃疡 淋巴结 血液 皮损 淋巴结 血液 血液 血液 血液 脑脊液
检查方法
病原学检查 血清学检查 病原学检查 血清学检查 血清学检查 血清学检查 血清学检查 细胞、蛋白量检查 细胞、蛋白量检查VDRL等 等
-
-
50.0
-
50.0
抗原悬液(ul) 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7 16.7
四种非特异性试验方法比较 VDRL
抗原成分 心磷脂、 心磷脂、卵磷 脂、 胆固醇 不稳定,1天 不稳定,1天 ,1 需灭活 玻片，肉眼或 玻片， 显微镜
唯一用于检查脑 脊液的试验，诊 脊液的试验， 断神经梅毒
操作步骤 操作步骤
孔 号
稀释倍数
生理盐水(ul) 样 阳性血清(ul) 阴性血清(ul)
2 3 4 5 6 7 8 原倍 1:2 1:4 1:8 1:16 1:32 阳性K 阴性K 阳性K 阴性K - 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 -
1
品(ul) 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0 50.0弃50.0
基本原理：梅毒螺旋体具有亲银性，可被银溶 液染色，从而可以在镜下观察到梅毒螺旋体 结果：棕褐色的梅毒螺旋体
血清学检测法
梅毒螺旋体侵入人体后产生： 梅毒螺旋体侵入人体后产生： 抗心磷脂抗体：即非特异性抗体、反应素。 抗心磷脂抗体：即非特异性抗体、反应素。 两种抗体 抗梅毒螺旋体抗体： 抗梅毒螺旋体抗体：