H7N9亚型重组禽流感病毒rGD76株灭活疫苗的研制

均表 明，这 种 氨 基 酸 的 插 入 可 以 导 致 Ｈ７Ｎ９ 亚 型 禽 流 感 病 毒 在 家 禽 中 的 毒 力 改 变 ［９］。
目前，Ｈ７Ｎ９ 亚 型 流 感 病 毒 已 经 存 在 于 我 国 多 个 省 份 ，２０１７ 年２ 月２０ 日 广 东 省 报 道 从 活 禽 交 易 市 场中分离到 Ｈ７Ｎ９亚型高 致 病 禽 流 感 病 毒［１０］，国 家 禽流感参考实验 室 也 证 实，２０１７ 年 在 广 东、湖 南、广 西、福 建 等 省 市 分 离 到 Ｈ７Ｎ９ 亚 型 高 致 病 性 禽 流 感 毒株。根据 世 界 动 物 卫 生 组 织 （ＯＩＥ）的 统 计 数 据， 截止至 ２０１８ 年 １２ 月 １９ 日，在 中 国 １２ 个 省 份 已 经 暴发了２７起家禽感染 Ｈ７Ｎ９亚型流感病毒的病 例， 超过９０万只 家 禽 被 扑 杀。鉴 于 当 前 Ｈ７Ｎ９ 亚 型 流 感病毒的疫情，迫切需要研发针对 性疫 苗，加强对 家 禽 Ｈ７Ｎ９亚型流感的有效防控。本研究重点介绍重 组禽流感病 毒 灭 活 疫 苗 （Ｈ７Ｎ９ 亚 型，ｒＧＤ７６ 株 ）的 研 制 情 况 ，为 疫 苗 的 进 一 步 研 发 奠 定 基 础 。
中 图 分 类 号 ：Ｓ８５２．６５９．５；Ｓ８５２．４３
文 献 标 识 码 ：Ａ
文 章 编 号 ：１００７５０３８（２０１９）０８００４４０５
禽流 感 （Ａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａ，ＡＩ）是 由 正 黏 病 毒 科 Ａ 型流感病毒属的流感病毒引起的一种禽类烈性传 染病，给养禽业造成巨大的经济损 失，同 时 也严 重危
害公共卫生安全。世界卫生组织（ＷＨＯ）在 ２０１３ 年 ３月３１日首 次 报 道 了 人 感 染 Ｈ７Ｎ９ 亚 型 流 感 病 毒 的病例［１］，随后暴 发 了 ５ 波 人 感 染 Ｈ７Ｎ９ 亚 型 流 感 病毒的疫情，其 中 前 ４ 波 疫 情 中 所 有 被 检 测 到 的 病 毒均属 于 流 行 于 家 禽 中 的 Ｈ７Ｎ９ 亚 型 禽 流 感 病 毒 。 ［２３］ 在第５波 疫 情 中 出 现 更 多 人 感 染 Ｈ７Ｎ９ 亚 型禽流感病毒的病例，２０１６ 年 由 于 感 染 Ｈ７Ｎ９ 亚 型 高致病性禽 流 感 病 毒 引 发 的 死 亡 病 例 备 受 关 注［４］。
动 物 医 学 进 展 ，２０１９，４０（８）：４４４８ ＰｒｏｇｒｅｓｓｉｎＶｅｔｅｒｉｎａｒｙ Ｍｅｄｉｃｉｎｅ
Ｈ７Ｎ９亚型重组禽流感病毒ｒＧＤ７６株灭活疫苗的研制
叶 贺 佳１，仇 微 红１，亓 文 宝２，万 红１，李 敏１，许 利 娜１，胡 秀 美１，廖 明１，２，梁 昭 平１，２
（１．广州市华南农大生物药品有限公司，广东广州 ５１１３００；２．华南农业大学，广东广州 ５１０６４２）
摘 要：利用 Ｈ７Ｎ９亚型重组禽流感病毒ｒＧＤ７６株进 行 灭 活 疫 苗 的 研 制，并 对 疫 苗 的 免 疫 效 果 进 行 评 价，为家禽 Ｈ７Ｎ９亚型流感的防控 提 供 科 学 数 据 及 手 段。 将 ＡＩＶｒＧＤ７６ 株 用 灭 菌 生 理 盐 水 作 １０４ 倍 稀 释 后，接种１１日龄非免疫鸡胚，３７ ℃孵育７２ｈ后收获感染鸡胚尿囊液，经甲醛灭活后，加矿物油佐剂乳化制成 油 乳 剂 灭 活 疫 苗 ，对 制 备 疫 苗 的 性 状 、安 全 性 、免 疫 效 力 等 进 行 检 验 。 结 果 显 示 ，制 备 的 ３ 批 重 组 禽 流 感 病 毒 灭 活疫苗（Ｈ７Ｎ９亚型，ｒＧＤ７６株）均为油包水型，黏度均在５０ｃＰ 以内，对３批疫苗取样，样品经３０００ｒ／ｍｉｎ 离心１５ｍｉｎ，管底无水相析出。安全性试验结果显示，将疫苗按１ｍＬ／只超剂量接种３周龄 ＳＰＦ 鸡，试验鸡 在观察期内全部健活，未出现局部或全身不良反应，表明疫苗对 ＳＰＦ 鸡具有良 好的安 全性；免疫 效力及攻 毒 保护试验结果显示，用疫苗按０．３ｍＬ／只的剂量免疫接种３周龄 ＳＰＦ 鸡 １ 次，免 疫接种 后 ２１ｄ试验鸡血 清 中ｒＧＤ７６株的 ＨＩ抗体平均效价可达８ｌｏｇ２以上，使 用 Ｈ７Ｎ９ 亚 型 高 致 病 性 禽 流 感 病 毒 ＧＤ１６ 株 滴 鼻 接 种 ０．２ｍＬ／只（含１００ＬＤ５０）对免疫鸡进行攻毒，疫苗对免疫鸡的保护率均为１００％。 在 实 验 室 条 件 下 研 制 出 重 组 禽 流 感 病 毒 灭 活 疫 苗 （Ｈ７Ｎ９ 亚 型 ，ｒＧＤ７６ 株 ），疫 苗 的 各 项 指 标 均 符 合 标 准 。 关 键 词 ：重 组 禽 流 感 病 毒 灭 活 疫 苗 ；Ｈ７Ｎ９ 亚 型 ；研 制
截止２０１７年１１月，ＷＨＯ 报道已出现１５６４例人感 染 Ｈ７Ｎ９ 亚 型 流 感 病 毒 的 病 例，包 括 至 少 ６１２ 例 死 亡病例 。 ［５］ 分 离 毒 株 的 遗 传 进 化 树 分 析 结 果 表 明，
Ｈ７Ｎ９亚型高致病性禽流 感病毒（ｈｉｇｈｌｙｐａｔｈｏｇｅｎｉｃ ａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎｚａｖｉｒｕｓ，ＨＰＡＩＶ）来 源 于 Ｈ７Ｎ９ 亚 型 低 致病性禽流感病毒（ｌｏｗｐａｔｈｏｇｅｎｉｃａｖｉａｎｉｎｆｌｕｅｎ ｚａｖｉｒｕｓ，ＬＰＡＩＶ）［６７］，且 Ｈ７Ｎ９ 亚 型 ＨＰＡＩＶ 与 ＬＰＡＩＶ 的显著遗 传 差 异 在 于 ＨＡ 蛋 白 裂 解 位 点 存 在４个碱性氨 基 酸 的 插 入［８］，体 内 及 体 外 试 验 结 果
１ 材 料 与 方 法
１．１ 材 料 １．１．１ 种 毒 Ｈ７Ｎ９ 亚 型 重 组 禽 流 感 病 毒 ｒＧＤ７６ 株 Ｅ３代生产用毒种，由广州市华南农大生物药品有 限公司技术部 制 备 提 供，原 代 种 毒 由 华 南 农 业 大 学
收 稿 日 期 ：２０１８０７１３ 作 者 简 介 ：叶 贺 佳 （１９８０－ ），男 ，广 东 东 莞 人 ，硕 士 ，主 要 从 事 兽 用 生 物 制 品 的 研 wk.baidu.com 及 注 册 工 作 。 通 讯 作 者