高效液相色谱检测技术
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L/O/G/O
高效液相色谱检测技术
教师：刘深勇
内容概要
www.themegallery.com
HPLC概述 工作原理 结构组成 常见故障与维护 HPLC应用
一、HPLC 简介
高效液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起 来的一项高效、快速的分析分离技术，是现代分离测试的重 要手段。色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中 的各组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用 (吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞 留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层 析法。
HPLC的特点
GC与LC的比较 检测器不同
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测定对象拓展
ຫໍສະໝຸດ Baidu 高效液相色谱仪
液相色谱仪最基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检 测器和数据系统（记录仪、积分仪或色谱工作站）。此外，还 可根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗脱装置、自动进 样系统、柱后反应系统和全自动控制系统等。
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高效液相色谱法自20世纪60年代问世以来，由于使用了高压输液泵、 全多孔微粒填充柱和高灵敏度检测器，实现了对样品的高速、高效和高 灵敏度的分离测定。高效液相色谱由于吸取了经典液相色谱的研制经验， 并引入微处理机技术，极大的提高了仪器的自动化水平和分析精度。现 在用微处理机控制的高效液相色谱仪，其自动化程度很高，既能控制仪 器的操作参数(如溶剂梯度洗脱、流动相流量、柱温、自动进样、洗脱液 收集、检测器功能等)，又能对获得的色谱图进行收缩、放大、叠加，以 及对保留数据和峰高、峰面积进行处理等，为色谱分析工作者提供了高 效率、功能齐全的分析工具。
控制部分
见HPLC结构外观
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岛津LC-20A
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Waters
机 型
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Waters 机型
Thermo fisher液相色谱－质谱联用
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大连依利特
高灵敏度：采用高灵敏度的检测器，进一步提高 了分析的灵敏度，荧光检测器可达10-11 g 。
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HPLC主要知名品牌
• 沃特斯（Waters • 安捷伦（Agilent） • 岛津（Shimazu） • 其它：戴安、菲尼根、热电等。
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一、高效液相色谱仪流程
进样器
高压泵 储液器
流动相输 送系统
色谱柱
检测器 数据处 理系统
进 样 系 统
分辅 离助 系系 统统
检 测 系 统
高压输液系统 进样器 色谱柱 检测器
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梯度洗脱装置 馏分收集器
数据处理系统
HPLC的基本结构
分离部分
分析部分
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液相色谱仪的工作过程：输液泵2将流动相以稳定的流速（或 压力）输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器3将样品导入, 流动相将样品带入色谱柱4,在色谱柱中各组分因在固定相中的分 配系数或吸附力大小的不同而被分离，并依次随流动相流至检测
器5，检测到的信号送至数据系统6记录、处理或保存。
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HPLC是在经典的液相色谱法基础上发展起来的，其 以液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色 谱分离技术。其分离机制与常规柱色谱相同，但填料更加 精细，需高压泵推动，柱效高，分析速度快。与气相色谱 不同的是液相色谱中流动相亦参与组分的分离过程，其组 成、比例和pH值可灵活调节，分离模式多样。在实际操作 中主要通过改变流动相的组成来调节样品在色谱柱的保留 值和选择性，从而使不同样品得到分离。
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高效液相色谱法的应用范围十分广泛，对样品的适用性广，不受分 析对象挥发性和热稳定性的限制，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、 离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定，因而弥补了 气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约 占20% ，而80% 则需用高效液相色谱来分析。HPLC因其具有分离效能高、 分析速度快、检测灵敏度好、能分析和分离高沸点且不能气化的热不稳定 生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学、药物及临床分析，世界各 国己将该法收载于药典。
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高效液相色谱法特点
高压：液体作为流动相流经色谱柱时，受到 的阻 力较大，施加高压能使液体迅速通过，一般高达 150-350 ×105Pa。
高速：载液在色谱柱内的流速较之经典液相色谱 法高得多，一般可达1-10mL/min。
高效：高效液相色谱法的柱效能可达3万塔板/米 ，而气相色谱法的柱效能仅为2000塔板/米。
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一、HPLC 简介
HPLC即 High performance liquid chromatography, 或 High pressure liquid chromatography，译为：高效液相或高压液相。 高效液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的 一项高效、快速的分析分离技术，是现代分离测试的重要手 段。色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各 组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用(吸 附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留 时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析 法。
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北京普源精电
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北京北分
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上海伍丰
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江苏天瑞LC310
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FL2200 浙江福立
北京东西分析
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高效液相色谱检测技术
教师：刘深勇
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HPLC概述 工作原理 结构组成 常见故障与维护 HPLC应用
一、HPLC 简介
高效液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起 来的一项高效、快速的分析分离技术，是现代分离测试的重 要手段。色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中 的各组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用 (吸附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞 留时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层 析法。
HPLC的特点
GC与LC的比较 检测器不同
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测定对象拓展
ຫໍສະໝຸດ Baidu 高效液相色谱仪
液相色谱仪最基本的组件是高压输液泵、进样器、色谱柱、检 测器和数据系统（记录仪、积分仪或色谱工作站）。此外，还 可根据需要配置流动相在线脱气装置、梯度洗脱装置、自动进 样系统、柱后反应系统和全自动控制系统等。
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高效液相色谱法自20世纪60年代问世以来，由于使用了高压输液泵、 全多孔微粒填充柱和高灵敏度检测器，实现了对样品的高速、高效和高 灵敏度的分离测定。高效液相色谱由于吸取了经典液相色谱的研制经验， 并引入微处理机技术，极大的提高了仪器的自动化水平和分析精度。现 在用微处理机控制的高效液相色谱仪，其自动化程度很高，既能控制仪 器的操作参数(如溶剂梯度洗脱、流动相流量、柱温、自动进样、洗脱液 收集、检测器功能等)，又能对获得的色谱图进行收缩、放大、叠加，以 及对保留数据和峰高、峰面积进行处理等，为色谱分析工作者提供了高 效率、功能齐全的分析工具。
控制部分
见HPLC结构外观
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岛津LC-20A
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Waters
机 型
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Waters 机型
Thermo fisher液相色谱－质谱联用
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大连依利特
高灵敏度：采用高灵敏度的检测器，进一步提高 了分析的灵敏度，荧光检测器可达10-11 g 。
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HPLC主要知名品牌
• 沃特斯（Waters • 安捷伦（Agilent） • 岛津（Shimazu） • 其它：戴安、菲尼根、热电等。
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一、高效液相色谱仪流程
进样器
高压泵 储液器
流动相输 送系统
色谱柱
检测器 数据处 理系统
进 样 系 统
分辅 离助 系系 统统
检 测 系 统
高压输液系统 进样器 色谱柱 检测器
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数据处理系统
HPLC的基本结构
分离部分
分析部分
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液相色谱仪的工作过程：输液泵2将流动相以稳定的流速（或 压力）输送至分析体系，在色谱柱之前通过进样器3将样品导入, 流动相将样品带入色谱柱4,在色谱柱中各组分因在固定相中的分 配系数或吸附力大小的不同而被分离，并依次随流动相流至检测
器5，检测到的信号送至数据系统6记录、处理或保存。
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HPLC是在经典的液相色谱法基础上发展起来的，其 以液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的柱色 谱分离技术。其分离机制与常规柱色谱相同，但填料更加 精细，需高压泵推动，柱效高，分析速度快。与气相色谱 不同的是液相色谱中流动相亦参与组分的分离过程，其组 成、比例和pH值可灵活调节，分离模式多样。在实际操作 中主要通过改变流动相的组成来调节样品在色谱柱的保留 值和选择性，从而使不同样品得到分离。
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高效液相色谱法的应用范围十分广泛，对样品的适用性广，不受分 析对象挥发性和热稳定性的限制，几乎所有的化合物包括高沸点、极性、 离子型化合物和大分子物质均可用高效液相色谱法分析测定，因而弥补了 气相色谱法的不足。在目前已知的有机化合物中，可用气相色谱分析的约 占20% ，而80% 则需用高效液相色谱来分析。HPLC因其具有分离效能高、 分析速度快、检测灵敏度好、能分析和分离高沸点且不能气化的热不稳定 生理活性物质的特点而被广泛应用于生物化学、药物及临床分析，世界各 国己将该法收载于药典。
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高效液相色谱法特点
高压：液体作为流动相流经色谱柱时，受到 的阻 力较大，施加高压能使液体迅速通过，一般高达 150-350 ×105Pa。
高速：载液在色谱柱内的流速较之经典液相色谱 法高得多，一般可达1-10mL/min。
高效：高效液相色谱法的柱效能可达3万塔板/米 ，而气相色谱法的柱效能仅为2000塔板/米。
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一、HPLC 简介
HPLC即 High performance liquid chromatography, 或 High pressure liquid chromatography，译为：高效液相或高压液相。 高效液相色谱法(HPLC)是上个世纪七十年代迅速发展起来的 一项高效、快速的分析分离技术，是现代分离测试的重要手 段。色谱法的分离原理是：溶于流动相(mobile phase)中的各 组分经过固定相时，由于与固定相(station phase)发生作用(吸 附、分配、排阻、亲和)的大小、强弱不同，在固定相中滞留 时间不同，从而先后从固定相中流出。又称为色层法、层析 法。
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