生物制品学考试要点

生物制品学

细胞破碎：通过机械法或非机械法破坏细胞壁，使细胞内容物有效的释放出来，获得有效的提取。

血液代用品：指具有载氧气功能，维持血液渗透压和酸碱平衡及扩充容量的人工制剂。

生物制品：泛指采用现代生物技术手段来人为的创造一些条件，借用某些微生物、植物或动物体来生产某些初级或次级代谢产物或利用生物体的某一组成成分，制成作为诊断或治疗或预防疾病或达到某种特殊医学目的的医药用品统称为生物制品。

基因工程疫苗：也称遗传工程疫苗，指使用重组DNA技术克隆并表达保护性抗原基因，利用表达的抗原产物，或重组体本身制成的疫苗。

灭活疫苗：又称死疫苗，指利用加热或甲醛等理化方法将人工大量培养的完整的病原微生物杀死，使其丧失感染性和毒性而保持其免疫原性，并结合相应的佐剂而制成的疫苗。

治疗性疫苗：指在健康人体中激活特异性免疫应答，产生特异性抗体和细胞毒性T淋巴细胞，从而对该病原体的免疫预防能力，但对已发病的个体不能诱生有效的免疫应答。

减毒活疫苗：又称弱毒疫苗，指将微生物的自然强毒株通过物理、化学和生物学的方法，连续传代，使其对原宿主丧失致病力，感染力下降，仍保持良好的免疫原性、遗传特性

万能型红细胞：根据红细胞表明分子结构，用工具酶将红细胞表面糖链切除或将A，B型比O型多余的糖分子切掉，使结构一致。

细胞因子：是一组由机体的免疫细胞和非免疫细胞分泌和合成的小分子或中等分子量的可溶性蛋白质与糖蛋白。

DNA疫苗：又称基因疫苗，核酸疫苗。是用编码抗原基因的真核表达质粒DNA直接于体内接种后，被细胞摄取并转录翻译，表达相应的抗原，通过不同途径诱导机体的特异免疫应答。抗体人源化：将鼠单克隆抗体（McAb）可变区中相对保守的FR按成人的FR框架区，仅仅保留抗原结合部位CDR（即CDR移植互补决定区），这才是真正意义上的抗体人源化，该种抗体又称为CDR移植抗体或改型抗体。

自身免疫病(AID)：是由于机体识别“自我”的耐受机制在某些情况下遭到破坏，机体免疫系统针对自身抗原产生过度应答，破坏正常组织结构，从而导致一系列病变。

血液制品：由健康人的血浆或特异性免疫人血浆分离，提取或由重铸DNA技术构成的血浆蛋白或血红蛋白制品

生物制品学的研究内容：生物制品的结构、功能、制备工艺、开发现状与发展战略等内容。生物制品的分类:1.按来源分：1人源生物制品（如各种血液成分等）； 2动物源生物制品（干扰素、激素、抗蛇毒血清等）；3植物源生物制品（植物激素、紫杉醇、长春碱、喜树碱等）；4微生物源生物制品（生长激素、干扰素、胰岛素等）。2.按使用对象分：①用于人的生物制品②用于家畜的生物制品③用于家禽的生物制品④用于作物的生物制品。3.按结构与功能分：Ⅰ.疫苗类：1)病毒疫苗：①灭活疫苗②减毒活疫苗③亚单位疫苗④基因工程疫苗⑤遗传重组疫苗⑥合成肽疫苗 2)细菌菌苗：①灭活菌苗②减毒活菌苗③亚单位苗④合成肽苗⑤基因工程菌苗⑥核酸菌苗 3)寄生虫疫苗 4)治疗性疫苗Ⅱ、抗体类1)多克隆抗体 2)单克隆抗体3)基因工程抗体 4)抗体诊断试剂或抗体诊断试剂盒5)抗体治疗药Ⅲ、人血液代用品 1)血浆2)血细胞3)血清白蛋白与γ—球蛋白4)修饰血红蛋白

原料的选择原则：①有效成分含量高，新鲜②原料来源丰富，产地较近③原料中杂质含量少④原料成本低等。

原料的预处理与保存：①动物原料：采集后要立即处理，去除结缔组织、脂肪组织等，并迅速冷冻贮存。②植物原料：要择时采集并就地去除不用的部分，保鲜处理；③微生物原料：要及时将菌细胞与培养液分开，进行保鲜处理。

原料的保存方法：①冷冻法。该方法适用所有生物原料。常用-40℃速冻。②有机溶剂脱水法。常用的有机溶剂是丙酮。③防腐剂保鲜。常用乙醇、苯酚等。该法适用于液体原料，如发酵液、提取液等。

物理破碎法的分类：温度差破碎法、压力差破碎法、超声波破碎法化学破碎方法：化学试

剂可分为有机溶剂和表面活性剂两大类。十二烷基硫酸钠：SDS 酶学破碎方法：分为：外加酶制剂和自溶法。

选择分离纯化方法的依据：根据分离单元之间的衔接选择①先选用非特异、低分辨的操作单元，以尽快缩小样品体积，提高产物浓度，去除最主要的杂质；②随后采用高分辨率的操作单元（如离子交换色谱和亲和色谱）；③凝胶排阻色谱这类分离规模小、分离速度慢的操作单元放在最后。

分泌型的表达产物体积较大、浓度较低，须纯化以前进行浓缩。浓缩包括：沉淀、超滤

细胞周质表达蛋白大肠杆菌细胞经低浓度溶菌酶处理后，一般用渗透压裂解法获取。

基因工程药物质量控制主要包括：产品的鉴别、纯度、活性、安全性、稳定性和一致性。生物制品的保存与运输:1、液态保存（1）低温保存（2）超低温保存：液氮超低温保藏（3）在稳定pH条件下保存（4）高浓度保存 (5）加保护剂保存2、固态保存：一般蛋白质含水量超过10%时容易失活。含水量降到5%时，在室温或冰箱中保存均比较稳定，在干燥器中在4℃以下可保存相当长的时间。

人源性生物制品的特点：1. 效价高、疗效可靠 2. 安全性好、不易产生副反应 3. 稳定性

是最有效的血容扩张剂。（2）为组织提供营养:白蛋白能结合阳离子，也能结合阴离子，故能输送性质不同的物质，如脂肪酸、激素、金属离子、酶和药物（3）运输和解毒：结合有毒物质运送至解毒器官，然后排出体外；

免疫球蛋白制剂的种类：1正常人免疫球蛋白（肌注免疫球蛋白2特异性球蛋白3静脉注射免疫球蛋白

正常人免疫球蛋白：又称丙种球蛋白或多价免疫球蛋白，仅供肌肉注射用，又称肌注免疫球蛋白制剂。采用低温乙醇法从大量混合血浆中分离制得的免疫球蛋白浓缩剂。有液体剂型和

1）加热法：巴氏消毒法（60℃/10h）即在60±0.5℃连续加热10-11小时。

N-乙酰色氨酸作为保护剂。（2）干热法(80℃/72h) （3）冻干品加热法：蛋白质冻干除去水分以后可以耐受60-80℃或更高温度。在80℃以上加热可以产生令人满意的病毒灭活效果。冻干品加热法的病毒灭活效果受产品的水分残留量、组成成分如蛋白质、糖、盐和氨基酸的含量以及冰冻与冻干时间的影响。

病毒去除方法：1.沉淀2.层析3.纳米膜过滤

（1）原理：1在介电常数大的溶液中，蛋白质的溶解度大，在介电常数小的溶液中蛋白质的溶解度就小。乙醇能显著地降低蛋白质水溶液的介电常数，从而使蛋白质从溶液中沉淀析出。 2蛋白质分子量越大，越先析出；蛋白质分子量越小，越后析出

乙醇为有机溶剂的优点：1.化学性质稳定，毒性低 2.可与水任意混合，使用方便 3.易得，易回收，污染小 4.冰点低，在生产条件下不产生具有爆炸性危险的气体混合物 5.抑制细菌生长，对病毒有较强的杀灭作用 6.对蛋白活性影响小

低温乙醇法中影响蛋白质沉淀反应的因素： 1. pH 2. 乙醇浓度 3. 温度 4. 蛋白质浓度5. 离子强度在五变系统中，对蛋白分离最重要的变化因素是pH和乙醇浓度。

低温乙醇法优点：1、相对简单的操作，产量高，适宜工业化规模生产2 、保持蛋白质的天然特性。 3 、抑菌作用。 4、同时分离多种血浆成分，适于血浆综合利用。5 、乙醇作为主要原材料，价格低廉，易于获得。

天然尿激酶（UK）是由两条肽链通过二硫键连接而成。血纤维蛋白溶酶原是唯一的天然蛋白质底物，使纤溶酶原转为纤溶酶。尿激酶用于治疗各种新血栓形成或血栓梗塞疾病。

动物来源药物的特点：1、原料来源丰富2、制品种类多3、要重视安全性

动物来源药物的种类：1蛋白质与多肽类制品2 酶与辅酶类制品3 动物核酸类药物4动物糖类药物 5 动物脂类药物 6动物细胞因子

胰岛素结构：胰岛素由A、B两个肽链组成。人胰岛素A链有11种21个氨基酸，B链有15种30个氨基酸，共26种51个氨基酸组成。四个半胱氨酸中的巯基形成两个二硫键，使A、B两链连接起来。此外A链中A6(Cys)与A11(Cys)之间也存在一个二硫键

胰岛素的功能：胰岛素是机体内唯一降低血糖的激素，也是唯一同时促进糖原、脂肪、蛋白

质合成的激素。药理作用：治疗糖尿病、消耗性疾病。

目前临床使用的胰岛素来源: 1、动物胰岛素 2、半合成人胰岛素3、重组人胰岛素

人胰岛素的生产方法有四种大规模生产人胰岛素的方法：1、直接提取法生产人胰岛素 2、化学合成法生产人胰岛素 3、化学转型法生产人胰岛素 4、重组DNA技术生产人胰岛素

胰岛素制剂的非注射给药途径：1、肺部吸入给药途径2、口服给药途径3、黏膜给药途径4、经皮给药途径

RNA分离的最关键因素是尽量减少RNA酶的污染

RNA酶的特点及其存在形式：1、特点：是一类生物活性非常稳定的酶类；耐热、耐酸、耐碱；煮沸也不能完全失活；蛋白质变性剂可使之暂时失活，但变性剂去除后，又可恢复活性2、措施：严格控制外源性RNase的污染；最大限度的抑制内源性RNase的活力

基因工程疫苗：主要包括基因工程亚单位疫苗、基因工程载体疫苗、核酸疫苗、基因缺失活疫苗、蛋白工程疫苗。

常用的减毒方法有以下几种：1）体外减毒2）冷适应筛选：温病毒冷适应株常伴有毒力减弱和各种特征性标志。冷适应筛选稳定的减毒突变株是在传统疫苗设计中较早采用的方法，亚单位疫苗：提取或合成细菌、病毒外壳的特殊蛋白结构，即抗原决定簇制成的疫苗，这类疫苗不是完整的病毒，是病毒的一部分物质，故称亚单位疫苗。

基因工程亚单位疫苗：将基因工程表达的蛋白抗原纯化后制成的疫苗。优点：1产量高2纯度高3安全性高4用于病原体难于培养或有潜在致癌性，或有免疫病理作用的疫苗研究。基因工程载体疫苗：利用微生物做载体，将保护性抗原基因重组到微生物体中，使用能表达保护性抗原基因的重组微生物制成的疫苗。

基因缺失活疫苗：使用分子生物学技术去除与毒力有关的基因获得的缺失突变毒株制成的疫苗。

蛋白工程疫苗：将抗原基因加以改造，使之发生点突变、插入、缺失、构型改变，甚至进行不同基因或部分结构域的人工组合，以期达到增强其产物的免疫原性，扩大反应谱，去除有

3 母婴传播

HIV变异极快。

针对的是未感染人群。而治疗疫苗的作用，则是诱导人体免疫系统发挥抵抗病毒对人体的损伤，或者增强免疫系统对病毒的抵抗能力，针对的是已经感染病毒的人群。

1、传统HIV疫苗技术获得的疫苗: 1减毒活疫苗2 灭活疫苗

2、采用现代生物技术获得的HIV疫苗：1重组蛋白疫苗2 、DNA 疫苗

3、病毒载体疫苗

一、减毒活疫苗：现在普遍采用的“鸡尾酒”疗法，就是让患者服用抗逆转录酶等抗病毒药物，以控制病情的进一步发展，但它无法完全杀灭病毒，而且还会产生毒副作用。

用“治疗疫苗”抑制艾滋病毒的新思路的原理是：既然艾滋病患者最主要的问题是免疫功能的丧失，那么只要并恢复其自身免疫能力的方法，病情应该可以得到控制。

AIDS疫苗研究方向：1、能诱发有效的中和抗体，阻止HIV感染免疫细胞；2、能诱发强细胞免疫；3、中和抗体屏障被部分突破时能有效清除被感染细胞，是研究中应统筹考虑的。乙型肝炎病毒形态结构：乙肝患者血清中发现3种相关颗粒：1、小球形颗粒2、管形颗粒：小球形颗粒串连成3、大球形颗粒：

外衣壳：相当于一般病毒的包膜，由脂质双层与蛋白质构成。HBsAg抗原镶嵌于脂质双层中。内衣壳：是20面体对称，相当于一般病毒的衣壳。

HBV的抗原组成：1、表面抗原HBsAg 2、核心抗原HBcAg 3 、e抗原HBeAg

（1）表面抗原（HBsAg）：是HBV的外衣壳抗原，存在于Dane颗粒外衣壳、小球形颗粒和管形颗粒上。 HBsAg是检查机体是否受HBV感染的主要指标。相反，血清中出现抗－HBs 被认为是乙型肝炎恢复的标志。因此HBsAg是制备疫苗的最主要成分。（2）核心抗原（HBcAg）是CTL识别和攻击的主要抗原之一。（3）e抗原（HBeAg）是隐蔽的抗原决定簇，可作为HBV 复制及具有强感染性的一个指标。

目前使用乙肝的疫苗有：1乙肝血源性疫苗2 基因工程乙肝疫苗（酵母系统、哺乳动物细胞系统）3合成肽乙肝疫苗4 乙肝DNA疫苗

流感病毒灭活疫苗是目前注册的唯一人用流感疫苗。正在研制的主要有：减毒活疫苗、基因工程疫苗、核酸疫苗、通用疫苗。

基因工程多肽或寡肽疫苗成败的关键是如何克服免疫原性弱、免疫综合性差的问题。

目前基因工程菌苗存在的问题：1）小于5岁的婴幼儿每年死于传染病的数目仍然很高。（2）与病毒相比,基因工程菌苗及细菌核酸苗报导明显为少。

理想菌苗的条件：①安全，遗传性状稳定，无毒性，无致癌性，无致畸变或致流产性。②结构简单清楚，可生物降解，有生物相容性，与组织抗原无免疫学交叉反应。③对各年龄组人群均有长时间的免疫保护作用。④多价，有更大的覆盖面，最好一次性免疫。⑤能口服，能有效诱导粘膜免疫。⑥为大量人群应用，疫苗必须廉价⑦易于生产，储存及服务，不需冷藏。霍乱根据弧菌O抗原不同，分成多个血清群。第Ⅰ群有A、B、C三种主要抗原成分，A抗原为特异性抗原，与其他两个抗原成分相结合而成为: 1稻叶型（原型，含AC） 2 小川型(异型，含AB) 3彦岛型(中间型，含ABC)。目前流行的霍乱为O1和O139两种血清型。

痢疾菌共有4群：A志贺氏痢疾菌（Shigella dysenteriae），B福氏痢疾菌（S.flexneri），C鲍氏痢疾菌（S.bordii）和D宋内氏痢疾菌（S.sonnei）。在我国及其他发展中国家主要流行型是福氏痢疾和宋内氏痢疾。按其菌膜表面LPS-O抗原分为44个血清型

伤寒杆菌①口服Ty21a减毒活菌苗②注射用伤寒Vi多糖苗

卡介苗（BCG）：预防结核病的唯一活菌苗，经大量资料的统计指出BCG的效果波动很大（0%-80%）。

DNA苗分类：1、裸核酸菌苗2、用减毒的细菌做载体，将重组的DNA转化至载体上，再去转染人或动物细胞

与裸DNA释放相比，用细菌释放DNA的优点：1增加靶向性2）增加免疫原性3）增加免疫途径：

迄今仍无公认的寄生虫病疫苗，究其原因：（1）多数寄生虫为多细胞生物，抗原成分复杂，免疫应答机制不清。（2）大都为部分保护性免疫力。（3）其机制尚待阐明。（4）寄生虫一般

引起慢性长期感染。

疟疾疫苗的分类：1. 抗红前期原虫疫苗2. 抗红内期原虫疫苗3. 传播阻断疫苗

治疗性疫苗的作用机理：机体已经感染病毒之后再注射疫苗，此时机体已经具有病毒的抗原，但由于机体免疫反应的部分缺陷，不能发挥作用，治疗性疫苗通过不同途径把微生物抗原提呈给免疫系统，来弥补或激发机体的免疫反应(特别是细胞毒性T淋巴细胞的杀伤活性)，从而达到清除病毒的治疗作用，

治疗性疫苗与预防性疫苗的比较：①接种对象：预防性疫苗的接种对象是健康群体，对易感人群均可应用，主要起免疫预防作用，它对机体大多无病理损伤，使用安全可靠；而治疗性疫苗的使用对象是感染者，或免疫应答低下的患者，故疫苗疗法属免疫治疗。②目的：预防性疫苗是为了防病治疗性疫苗是为了治疗或防止病情恶化。③特点：治疗性疫苗的另一个突出特点是应用时必须考虑适应证与禁忌证，也可根据需要进行各种组合和调整。

根据治疗性疫苗针对疾病种类的不同，可分为细菌型治疗性疫苗、病毒型治疗性疫苗、肿瘤型治疗疫苗、自身免疫病治疗性疫苗等。

重症肌无力(MG)是由T细胞调节失调引起的疾病，重症肌无力是由乙酰胆碱受体抗体介导的AID，这些抗体通过减少肌肉中AchR的数量或阻碍乙酰胆碱与受体的结合，影响突触传递而使骨骼肌变得无力，

1．以肿瘤细胞为基础的第一代疫苗和树突细胞痘苗 2、转基因肿瘤细胞疫苗3．抗原合成肽疫苗4．肿瘤核酸疫苗

核酸疫苗安全性问题：最大风险是整合问题，即核酸疫苗整合到宿主DNA中，导致插入突变的产生。另一个问题在于进入体内的DNA是否会造成抗DNA抗体而引起自身免疫病。