小鼠输精管结扎和简单精子操作

输精管结扎
术后处理
• 术后小鼠放回鼠笼 • 用50 W白炽灯加热，以维持体温。 • 小鼠苏醒后放回饲养间
精子操作
取精
• 断颈处死小鼠
• 开腹，取出睾丸、附睾和输卵管，放在载 玻片上 • 在解剖镜下观察结构 • 用注射器吸取0.1 ml生理盐水
• 用注射器针尖挑开附睾尾，用解剖针或镊 子轻压附睾尾 • 用注射器吸取精液，注入凹玻片
精子操作
挑单精子
• 用10倍镜观察精子活力 注意镜头不要沾水，用40倍镜时应加盖片 或取一滴在载片上，盖上盖片观察 • 组装口吸管
• 用口吸管吸取单个精子，放入另一个凹处 （先加一点生理盐水） 能否连续取出10个精子？分别放入凹片？
整理器材
• 手术器材和凹片洗净，放在来苏儿水盆中 消毒，放回原处 • 清理杂物，收拾台面
输精管结扎
麻醉
麻醉方法1： 拇指和食指捏住小鼠头部皮肤，小鼠背靠手掌，将尾 巴固定在小指和无名指缝中，此时小鼠牢固被固定 在左手中。使鼠腹部朝上，鼠头略低于尾部，右手 持注射器将针头在下腹部沿髂骨上缘水平、靠近腹 白线的两恻进行穿刺，针头刺入皮肤后进针3mm左 右，接着使注射针头与皮肤呈45°角刺入腹肌，穿 过腹肌进入腹膜腔，当针尖穿过腹肌进入腹膜腔后 抵抗感消失。固定针头，保持针尖不动，回抽针栓， 如无回血、肠液和尿液后即 可缓缓注射药液。注射 量为0.1-0.2ml/10g体重。
作业
• • • • 雄性小鼠外观特点 你选用的结扎方法、效果 附睾和输精管的形态 口吸管使用效果 注意写明你在小组实验中亲手操作了那些 步骤
输精管结扎
麻醉方法2： • 用浸润乙醚的棉球或纱布放在密闭的容器内， 再将动物放入，并注意动物的行为。开始时动 物出现兴奋，进 而出现抑制，自行倒下，当 动物角膜反射迟钝、肌紧张降低，即可取出动 物。若动物逐渐开始恢复肌紧张（重新挣扎） 则重复麻醉一次，待平静后即可进行实验。若 实验时间长，可先保定动物在实验台上，将乙 醚棉球或纱布靠近其鼻部，即可开始实验。实 验过程中，应注意动物的反应，适时追加乙醚 吸入量，维持其麻醉深度和 时间。
输精管结扎
消毒
• • • • •
将小鼠腹面向上放在手术蜡盘上 用细绳将小鼠四肢固定在蜡盘上 用70%酒精擦拭小鼠腹部 用棉花擦干 剪去腹部被毛（可不做）
输精管结扎
腹部横切法
• 在下肢上端水平线正中用剪刀横向剪开1.5 cm，同样剪开腹壁。用缝皮针缝住腹壁切 口边缘 • 用眼科镊斜向下 方夹住一侧的脂 肪垫将睾丸、附 睾和输精管拉出 切口
输精管结扎
用眼科剪在两侧剪断 • 夹住脂肪垫将睾丸放回 腹腔 • 同上处理另一侧 • 缝合腹壁 • 缝合皮肤
输精管结扎
阴囊纵切法
• 轻压腹腔，将睾丸 推回阴囊 • 沿阴囊正中线开口 1 cm • 确定白色的阴囊壁 中线
输精管结扎
阴囊纵切法
• 在中线左侧的阴囊包膜上 切开5 mm • 向左推睾丸，找到输 精管，夹出切口 • 剪断1 cm • 处理右侧睾丸 • 缝合切口
小鼠输精管结扎和简单精子操 作
实验目的
• 掌握小鼠手术的基本技巧 • 学习雄性小鼠生殖系统特点 • 练习显微操作技术
实验内容
• 雄性小鼠生殖系统观察 • 小鼠输精管结扎 • 使用移卵装置操作精子
设备、耗材
• • • • • • • • • • • • • • • • • • • 雄性小鼠 手术器械（外科镊、眼科镊、手术剪、手术弯针、解剖针、止血钳、1 ml注射器各一把） 酒精灯 酒精棉球 消毒酒精 苯扎溴胺 盆（配消毒水洗手术器械） 戊巴比妥钠以 6.7mg/ml （生理盐水配制） 乙醚 无菌生理盐水 1L或2L玻璃烧杯或搪瓷杯（麻醉用） 缝合线 蜡盘 细绳 脱脂棉 纱布 显微镜、解剖镜 凹玻片 载玻片