植物检疫学1.

植物检疫学（总论与植物检疫性病害内容）复习大纲

1．举例阐述植物检疫的重要性,了解福建省发生的检疫性病害的主要种类

经济重要性:目前我国松材线虫的发生面积130多万亩，累计病死林木3500万株，据统计，全国因松材线虫造成的直接经济损失已达25亿元，间接损失250亿元。

生态重要性：大米草疯长，不但侵占沿海滩涂植物的生长空间，致使大片红树林消亡，而且导致贝类、蟹类、藻类、鱼类等多种生物窒息死亡，并与海带、紫菜等争夺营养，水产品养殖受到毁灭性打击。大米草还影响了海水的交换能力，导致水质下降并诱发赤潮，堵塞航道，影响各类船只出港。

社会重要性：在宁德沿海地区海滩近870公里长，原本拥有优良的近海生物栖息环境，可是，目前有3／4的滩涂被大米草侵占，水产品和其它植物因此无法立足，人们的生活受到威胁。仅宁德地区，农民每年减收达数亿元之巨、爱尔兰大饥荒。

我省主要检疫性病害：水葫芦，大米草、松材线虫、五爪金龙、蟛蜞菊、空心莲子草、马缨丹、福寿螺、甘薯瘟病、甘薯茎线虫、桑黄化萎缩病、龙眼贵帚病、桑青枯病、桑蟥、甘蔗斐济病、香蕉花叶心腐病、谷象、香蕉枯萎病、巴西豆象、苜蓿花叶病、马铃薯块茎蛾

2．了解世界各国植物检疫的基本类型，国际植物检疫发展的趋势及经验

环境优越型: 这些国家具有独特的地理环境，农业生产发达、经济实力强，国内有害生物控制措施得力，对进境植物检疫要求极高。这些国家包括澳大利亚、新西兰、日本、韩国等。

发达国家大陆型：地理位置毗邻的经济发达国家。较长的边界线，疫情比较清楚，因此这些国家间相互的检疫措施较松，对来自其他地区的动、植物及其他农产品的植物检疫要求十分严格，如美国、加拿大等。

经济共同体型：通过建立无内部边界的空间，加强经济、社会的协调发展和建立最终实行统一货币的经济货币联盟，促进成员国经济和社会的均衡发展。成员国通过欧盟检疫法规本国化执行统一的检疫政策，形成完备的法规体系，但同时其植物检疫做法又具有很强的针对性和灵活性。欧盟现有27个成员国和近5亿人口，总面积432.2万平方公里。

发展中国家大陆型：这些国家的农业生产技术不很发达，经济较差，对有害生物危害的控制受经济等方面因素的影响，因此这些国家往往采取进出口检疫都很严的植物检疫措施。如中国、泰国、印度、马来西亚及一些非洲国家。

工商城市型：这些国家其农牧业贫乏，工业基础好，或属于旅游城市，如新加坡，他们对进出境的植物产品检疫的要求比较松，但对动物、动物产品及种子、种苗实施较严格的检疫。

3．植物检疫基本术语：有害生物(Pest)、检疫性有害生物、植物检疫

有害生物：指任何对植物或植物产品有害的植物、动物或病原体的种、株（品）系或生物型。

检疫性有害生物：指在一个国家或地区未发生或分布未广，且官方正在积极控制中的有潜在重大经济重要性的有害生物。

植物检疫：是一项特殊形式的植物保护措施，涉及法律规范、国际贸易，行政管理、技术保障和信

息管理等诸多方面，为一综合管理体系。

4．我国大陆动植物检疫管理体系：出入境动植物检疫管理体系、国内植物检疫管理体系（全国农业植物检疫管理体系、全国森林植物检疫管理体系）,各管理体系的主管部门

5．植物检疫法规的性质：（科学性、权威性、强制性，涉外法规还具有国际性）

6．各英文缩略词的中文全称:《国际植物保护公约》（IPPC）、区域性的植物保护组织、亚洲和太平洋地区植物保护委员会（Asian and Pacific Plant Protection Commission, APPPC）、欧洲和地中海地区植物保护组织（EPPO）、北美洲植物保护组织（NAPPO）、世界贸易组织(World Trade Organization , WTO)、《SPS协定》、《植物检疫措施的国际标准》（ISPM）。

7．目前中国植物检疫法规：《中华人民共和国进出境动植物检疫法》（我国第一部由最高国家权力机构颁布的以植物检疫为主题的法律）、《中华人民共和国进出境动植物检疫法实施条例》、《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》（2007年5月28日发布）

8．中国国内植物检疫主要法规：《植物检疫条例》（是目前我国进行国内植物检疫的依据）、《全国农业植物检疫性有害生物名单》（2006年3月02日公布）

9．有害生物的传入主要途径，有害生物的入侵过程人为可分为几个时期

主要途径：1、有意引入：植物引种为我们国农林业等多种产业的发展起到重要的促进作用，但认为引种也导致了一些严重的生态学后果。

2、随人类活动无意传入：很多外来入侵生物是随人类活动而无意传入的。尤其是近年

来，随着国际贸易的不断增加、对外交流的不断扩大、国际旅游业的迅速升温，外来入侵生物借助多种途径越来越多的传入我国。（1）随人类交通工具带入（2）随国际农产品和货物中带入（3）动植物引种中带入（4）旅游者带

多途径、多次数的传入加大了外来生物定植和扩散的可能性。

3、自然传入：外来入侵种还有可能通过风力、水流自然传入，鸟类等动物还可传播杂

草的种子

侵入过程：1、引入和逃逸期:外来物种被有意或无意引入到以前没有这个物种的分布区域，这些个体经人类释放或无意逃逸到自然环境中。2、种群建立期：外来有害生物开始适应引入地气候和环境，在当地野生环境条件下依靠有性或无性繁殖形成自然种群。其中遗传特性是影响定殖与建立种群的一个重要因素。3停滞期:外来物种经过一定时间对当地气候、环境的适应，开始有一定种群数量，但是通常并不会马上大面积扩散，而是表现为“停滞”状态。4扩散期：当外来物种形成了适宜于本地气候和环境的繁殖机制，具备了与本地物种竞争的强大能力，当地又缺乏控制该物种种群数量的生态调节机制的时候，该物种就大肆传播蔓延，形成“生态”爆发，并导致生态和经济危害。10．限定性有害生物（Regulated Pest)、检疫性有害生物(Quarantine pest)、限定的非检疫性有害生物（ Regulated non-Quarantine PEST)、疫区（Quarantine area）、非疫区（Pest free area，PFA）、非疫产地

限定性有害生物：指一种检疫性有害生物或限定的非检疫性有害生物

检疫性有害生物：指在一个国家或地区未发生或分布未广，且官方正在积极控制中的有潜在重大经济重要性的有害生物。

限定的给检疫性有害生物：一种在供种植的植物中存在，危及这些植物的预期用途而产生无法接受的经济影响，因而在输入缔约方领土内受到限制的非检疫性有害生物。

疫区：指由官方划定的发现有检疫性有害生物存在与危害，并正由官方采取措施控制中的地区。可以是一个国家，一个国家的部分地区或是几个国家的全部或部分地区

非疫区：有科学证据证某种特定的有害生物没有发生并且官方能适时保持此状态的地区。

非疫产地：指科学证据表明特定有害生物没有发生并且官方能适当保持此状况到规定时间的地区。11．有害生物风险分析（Pest Risk Analysis，ＰＲＡ）、有害生物风险评估（Pest Risk Assessment）、有害生物风险管理(Pest Risk Management)的定义

有害生物风险分析：以生物或其他科学的和经济的证据，确定一种有害生物是否应该限制和加强防治措施力度的评价过程。包括三方面：有害生物风险分析的起点、有害生物风险评估、有害生物风险管理

有害生物风险评估：决定一种有害生物是否是限定的有害生物及评估检疫性有害生物传入的可能性。

有害生物风险管理：降低一种限定性的有害生物传入风险的决策过程。

12．检疫许可、检疫许可类型：一般审批、特许审批；禁止进境物主要哪几类

检疫许可：指在调运、输入单位须向当地的植物检疫机关预先提出申请，检疫机关经过审查作出是否批准引进的法定程序。

一般审批：针对是进境的植物种子、种苗及其他繁殖材料、水果、粮食等，面大量大的植检业务。

引进单位或个人必须事先办理检疫审批手续。

特许审批:针对是禁止进境物（“特批物”）

禁止进境物：害虫、植物病原体（包括菌种、毒种等）及其他有害生物；病虫害疫情严重流行的国家和地区的有关植物、植物产品和其他检疫物；土壤

13．批、样本量、样本数

批：指具有同一品名、同一商品标准、同一运输工具、来自或运往同一地点、并有同一收货人或发货人的称为同一批货物。

样本量：一份样品的重量或体积，苗木的样本量为株

样本数:从一批货物中抽取样品的份数

14．产地检疫（Produced-area Quarantine）、预检（Pre-clearance）、隔离检疫（Isolation Quarantine)

产地检疫：是在植物或植物产品出境或调运前，输出方的检疫人员在其生长期间到其原产地进行检验、检测过程。

预检：是在植物或植物产品入境前输入方的检疫人员在植物生长期间或加工包装时到产地或加工包

装场所进行检验、检测过程。

隔离检疫：将从国外引进的种子、苗木等繁殖材料，放到隔离苗圃或隔离试种区种植，经过在生长期间的观察和检验，以确证是否嗲有危险性有害生物的一种检疫措施。

15．实验室检测（检疫性病害）的常用方法：比重检验、染色检验、洗涤检验、保湿萌芽检测、分离培养和接种检验法、噬菌体检验法（原理）、“鉴别寄主”接种检验法（原理）、血清学检验法（原理）、显微镜技术、分子生物学技术。（植物病原真菌、细菌、病毒、线虫主要常用检测方法及区别）比重检验：一般用于检验种子、粮谷、豆类中的钻蛀性害虫，也可检验其中的菌瘿、菌核和病秕籽粒及菟丝子等杂草种子。原理是有虫害的籽粒及菌瘿、菌核、病秕粒、草籽比健康籽粒轻，浸入一定浓度的食盐水（糖、泥土等）或其他溶液中，使线虫等浮于液面捞取浮物，再结合解剖镜检，即可鉴定种类。

染色检验：某些植物或植物器官，被害虫为害或病原物感染后，或某些病原物本身，常可用特殊的化学药品处理，使其染上特有颜色，帮助检出和区分病虫种类的方法。包括真菌染色（种子中菌丝体、卵孢子检测）、细菌染色（革兰氏染色、鞭毛染色鉴定种类）、病毒染色（落叶果树和内含体的检验）、线虫染色（组织中内寄生线虫检染色）。

洗涤检验：检查附着在种子表面的各种真菌孢子、细菌或颖壳上的病原线虫时，由于肉眼或放大镜不易检查，一般采用洗涤检验。方法是从平均样品中任取10～100g试样两份，分别放入三角瓶内，各注入无菌水10～100mL，振荡5～10min，是附着在种子表面的病菌孢子洗下来。

保湿萌芽检测：一般种子携带的病菌，无论是粘附在种子表面的，或是潜伏在种子表层或深层的，在种子萌发阶段即开始活动或侵染，其中很多是在萌芽期或幼苗的早期就表现症状，或者在种子未萌发时，在种子表面就长出菌丝。对这类病害，在种子发芽后，有的甚至在萌发前，即可检验带病情况。包括吸水纸法、冰冻吸水纸法、水琼脂检验法

分离培养和接种检验法：主要应用于检验潜伏在种子、苗木或其他植物产品内部不易发现的病原菌，或当种子、苗木或其他植物产品上虽有病斑，但不特殊性的病原菌可供鉴定时，或检测种子表面粘附的病菌时可采用此法。分离方法有：改良贝尔曼漏斗法、过筛检验法、漂浮分离法。

接种检验：从种子、苗木及其他繁殖材料上获得的病菌，有时还需接种到植株上，使其表现典型症状后，再检查鉴别。不同的病原种类与传播方式，其接种的方法也各不相同：拌种接种（用病菌孢子拌种，是接种黑粉病最常用的方法）、浸种接种（将病原真菌孢子或病原细菌的悬浮液浸种，浸种时先把病原真菌孢子也可用搅碎的菌丝或病原细菌配制成悬浮液，把种子放在三角瓶中，再加入适量的该悬浮液，不断振荡，然后除去悬浮液，然后把种子倒入垫有吸湿纸的培养皿中，在20℃下24h取出放在纸袋里，任其干燥后再播种。）、花器接种（主要用于从花期侵入的病菌。）、喷雾接种、针刺接种（植物细菌性常用）、剪叶接种（用于从伤口侵入的细菌性病害）、摩擦接种（许多病毒由汁液传染）

噬菌体检验法：用已知寄主细菌（指示菌）测定噬菌体的存在，根据噬菌体只能在活的寄主细菌中增值和繁殖原理，以噬菌体中的数量是否增加测知寄主细菌的有无。

细菌转化性噬菌体

细菌

已有指示菌测定噬菌体存在反映病原寄主细菌存在

“鉴别寄主”接种检验法：对特定病原物有特殊反应或表现特定症状的植物称为鉴别寄主，主要用于可汁液传染的某些病毒，而且在某种寄主上可产生稳定的特异性的症状反应。

血清学检验法：抗原能与相对应的抗体产生特异性结合，来进行病原诊断和鉴定。抗原是凡注射到动物体内能刺激动物机体产生免疫反应的物质，由蛋白质或含蛋白质的物质，或多糖组织的大分子物质，病毒、细菌、真菌等植物病原物及他们的毒素、可溶性蛋白、多糖等都是良好的天然抗原。

抗体是免疫动物机体内在抗原物质刺激下形成的，能与抗原发生特异性结合反应的免疫球蛋白。抗血清是含有抗体的血清。

抗原（已知病专化抗体检测未知病原特异结合反应目标病原菌

毒或病原菌）（抗血清）（抗原）

显微镜技术：光学显微镜、扫描电镜、透射扫描电镜、电子透射扫描电镜（病毒的快速鉴定及其结构研究）分子生物学技术:1PCR技术、2核酸分析技术

16．木质包装材料的处理措施：热处理（HT）、溴甲烷熏蒸处理（MB）、窑内烘干法(kiln- drying,KD)、化学加压浸透法（CPI）

热处理：木材中心温度达56℃至少30分钟

化学加压浸透法：通过使用蒸汽、热水、干热来达到热处理的标准。

溴甲烷熏蒸处理：中国处理标准

温度在21℃或以上，剂量为48/m3，密闭熏蒸24h

温度在16℃或以上，剂量为56/m3，密闭熏蒸24h

温度在11℃或以上，剂量为64/m3，密闭熏蒸24h

温度在5℃/或以上，剂量为80/m3,密闭熏蒸24h

17．《中华人民共和国进境植物检疫性有害生物名录》\2006年新制定的<<全国农业植物检疫性有害生物>>\<<福建省补充植物检疫对象>>; 主要了解目前国内，特别是福建省发生的主要检疫性病原物,重点考察实验课看到的检疫性有害生物所属类型

18．大豆疫病病原、症状特点、病害循环（侵染循环）

病原：Phytophthora sojae Kaufmann&Gerdemann,大豆疫霉菌

症状特点：可以在大豆生育期的各个阶段为害，萌发期：根及下胚轴与子叶的连接处呈水渍状，缢缩、腐烂，引起种子出土前烂种。幼苗期：烂根、猝倒、烂苗。生长期：在植株复叶出现以后，

病菌继续侵染下胚轴和根部，呈水渍状褐色，根部逐渐腐烂。成株期：根部出现水渍状，逐渐

变为褐色至黑褐色，皮层腐烂。在成株期发病，为害茎秆时，病情较轻，病斑颜色较浅红褐色，

病部不会扩展，凹陷不明显，对植株生长发育不会造成很大影响。严重植株矮化，叶片从下而

上萎蔫，叶柄缓慢下垂，与茎秆呈八字形，顶端生长点低垂下弯，叶柄不会从茎秆上脱落，茎

基部出现水渍状褐斑，向上扩展，病部缢缩，最后变黑褐色，病健交界明显。开花结荚期：植

株长势弱小，结荚数少，叶片萎蔫，病菌侵染植株中上部茎秆，出现水渍状褐斑凹陷病斑，病

健交界处明显，叶柄下垂，与茎秆呈八字形，不脱落。在高温、高湿的天气叶片病斑呈开水烫

伤状，后转银灰色，并且很快枯萎。

病害循环：典型的土壤真菌，能以抗逆性很强的卵孢子在土壤中和土壤中的病残体越冬并长期生存。

连续4年耕作非寄主作物也不能消除病土中的病原菌。当春季温度和湿度适宜时，土壤深红的

卵孢子即打破休眠萌发，产生大量的孢子囊，孢子囊很快释放大量的游动孢子，并随水流或雨

滴传播，侵染植株，成为初侵染源，再侵染次数多，其实只要条件适宜，土壤中的菌丝会不断

形成卵孢子，卵孢子即可萌发形成孢子囊和游动孢子，侵染植株。

19．小麦矮腥黑穗病典型症状、病原、发生条件及适生性、目前国家采用的检验与检测的标准症状：矮化多分蘖(多达30多个)，小花多，仅为健株的1/4-2/3，小花增至5-7年，可达11个。

病穗穗部扭曲，颖壳炸开，外观呈暗褐色。

菌瘿：籽粒变成充满黑粉的菌瘿,粗短而坚硬,破碎后露出黑粉。每个菌瘿内可有冬孢子30-60

万个,多的可达300万个,鱼腥味重（“三甲胺”）。

病原：小麦矮腥黑粉菌Tilletia controversa Kuhn(简称TCK)，属担子菌门冬孢菌纲，冬孢子近球形，黄褐色至暗褐色。

发生条件：1、温度条件：?侵染幼苗时环境条件十分重要?国外研究一般认为，持续30—60 d的积雪是小麦矮腥黑穗病发生的必要条件，凡冬麦区出苗期的土温或气温在10 °C 以下,0 °C

以上时间有45天以上，有利于病菌的侵染，稳定积雪60天及积雪厚度10cm以上，最适于

发生。

2、最低接种体数量，Goats等通过试验发现种传的最低接种量为每粒种子5 000个TCK冬孢

子，而土传接种仅为8．8个TCK孢子／cm2。

检验与检测标准：1、扦取复合样品和现场检查（每份样品至少1kg?筛检：1.7mm X 20mm长孔筛或2.5mm 圆孔规格筛，检查菌瘿或碎片）2、洗涤检验及病原菌鉴定：油镜（1000倍）下观察，每个样品

检查25-30个孢子，测量网目、网脊高度、胶鞘厚度、孢子大小：平均网脊高度≥1.25μm为TCK、平均网脊高度≤0.7μm为TCT、> 0.7μm ，<1.25μm 时参照自发荧光实验。3、冬孢子自发萌发试验（落射荧光显微镜485nm, 其网脊大都会立即出现黄绿色荧光，自发荧光率大于或等于80%、自发荧光率大于30%，小于80%，有萌发结果作最终判定）。4、冬孢子萌发试验:区分网腥黑粉菌TCK 只能在5 °C有光照条件下萌发，时间长（3周以上），TCT 5°C有光照及17 °C无光照条件

下均能萌发,5天可观察到。5、PCR技术检验（利用一组特异性引物进行扩增，获得特异性扩增带）

20．香蕉枯萎病症状特点、病原、侵染途径、防治方法

症状特点：各个生长期都会发生：幼龄蕉树发病后，多表现生长不良，植株矮小，心叶抽不出，甚至生长停滞，病叶“一黄二枯三倒挂”，假茎“外皮纵裂内部褐变腐烂”。成株期下部叶片先发

生，发病初期叶片边缘变黄，叶缘黄化后向主脉扩展，整个叶片黄化，病叶叶柄在靠近叶鞘处折曲、下垂，其它叶子相继下垂，由黄变褐而干枯，倒挂假茎四周，根部木质导管，常产生红棕色病变，一直延伸至根茎内，后期大部分根变黑褐色而呈枯干，有的假茎外会形成裂缝。

病原：古巴尖镰孢菌Fusariumoxysporumf. cubense(E.F.Smith) Snyder et Hasen，4个生理小种?侵染途径：（1）种苗带菌：由病蕉根茎通过吸芽的导管扩伸至繁殖的吸芽内传播开来。病区的组培苗假植杯苗是远距离传播的主要媒介。（2）土壤、水流等传播，可通过泥土、流水、工具、鞋、蕉桩等传播，带病菌的泥土、水、病株组织使病区不断扩大。可从伤口侵入或直接侵入根部，通过维管束向茎上发展。

防治方法：（1）严格执行检疫措施

（2）采用无病种苗?感病品种栽培上要选用不带病的组培苗，于排水良好的无病新区小面积种植。多施蔗渣、石灰等改善土壤环境。起畦种植，注意排水，防止烂根。施肥要

适当远离蕉头，防止断根伤根，减少病菌侵染机会。

（3）选用抗病品种?为土壤性病害，目前还未有理想的特效药。台湾利用组培苗变异选出耐该病生理小种4号的台蕉1号及多个耐病优系。Formosana即宝岛蕉品种于2002年正式

推广，成为能替代优质高产但易感枯萎病的‘北蕉’以及较抗病的‘台蕉1号的品种。

洪都拉斯利用杂交育种育成FHIA一01即金手指香蕉（AAAB）可抗黄叶病。

（4）隔离病区，毁灭病菌株,病土处理：株铲除前可先用10％草甘膦10毫升加2～3克多菌灵注射生长点，待病株死后烧灭枯干枯叶，挖除球茎，植穴（2米范围内）用32.7%威

百亩300倍液10～20千克淋土，穴外用石灰进行土壤消毒。10～20天后扒开病穴土，撒

上石灰晒干后再补种发病率20％以上的蕉园应改种抗病品种。

（5）轮作对病区来说，与水稻轮作是控制病害的最有效途径，可在1～2年的短期内就能有效减少枯萎病的发生程度。

（6）药剂防治在2003年国际香蕉枯萎病研讨会上，Nel等作了关于香蕉枯萎病化学防治的综述，认为除苯并噻二唑对香蕉枯萎病有一定的防治效果外，其它化学药剂几乎无效。21．梨火疫病病原、寄主范围、症状特点、侵染循环、主要检验方法

病原：解淀粉欧文氏菌Erwiniaamylovora，杆状，有荚膜，周生鞭毛，革兰氏阴性，兼性厌氧，菌落乳白色，直径3-7mm，半圆形隆起，有一稠密绒毛状的中心环，表面光滑，边缘整齐，稍具粘寄主范围：寄主范围广，大部分为蔷薇科仁果类植物，主要有梨、苹果、山楂、李、木瓜、草莓、石楠等40多个属220多种植物。

症状特点：最典型症状是花、果实和叶片受侵染后，很快变黑褐色枯萎，但不落叶，犹如火烧一般(火疫）。根据病害发生的部位，可分为花腐、枝枯、溃疡及果腐。

（一）花腐：直接侵染开放的花引起花腐，一般发生于早春，花器侵入，初为水渍状，花基部或花柄暗色，不久萎蔫。随病情扩展，花梗、花等变褐至黑褐色

（二）枝枯：嫩枝是除花外最感病的部位。最初枝尖萎蔫，呈“牧羊鞭”状，发展快，造成整枝、叶变黑死亡，潮湿时出现菌脓侵染主干，形成溃疡斑

（三）果腐：引起幼果和成熟果实的腐烂，表面通常有菌脓，在贮藏期可引起烂果。

侵染循环：1、越冬：病部越冬。主要在枯萎的嫩枝和茎杆处的溃疡处、挂在树上的病果越冬。

2、传播：远距离是带菌的接穗和种苗，被病菌污染的果箱和迁飞的侯鸟重要途径。近距

离传播主要是风雨，许多昆虫也是传播介体。

3、侵染：可从伤口、自然孔口、花侵入寄主组织。

主要检验方法：

1、产地检验主要通过症状检验确认。在发病盛期到田间检查与观察。

2、分离培养试验可采用选择性培养基和鉴别培养基进行。如MS培养基、CG培养基、TTC培养基等。

3、血清学检验：（1）常规的血清学方法：如ELISA、凝集试验、免疫荧光等。

（2）免疫分离法检测技术：近年发展起来的一项新技术，利用抗血清特异性吸附

目标菌，并使之在适当培养基上形成菌落。

4、致病性检验可用幼梨或梨嫩枝测定。以菌苔或菌悬浮液接种幼梨切片，在梨片上形成乳白色高度

隆起的球状菌脓，而其它细菌不产生菌脓或菌脓平铺不隆起。针刺接种巴梨枝条

5、过敏性枯斑反应：在幼嫩石楠、烟草和蚕豆叶片可产生典型的过敏性坏死反应，可作为快速鉴定

的辅助手段。

6、核酸探针技术及PCR技术核酸探针技术是利用带有适当标记物的核酸片断，体外通过碱基配对与

特定的靶序列结合形成双链复合物，通过放射自显影或化学显色成为可见信号利用pEA29质粒上

0.9kb的pst1 片断，经部分测序，合成引物，对DNA进行特异性扩散，检测灵敏度可达50个菌体细

胞，并在6小时内得到结果。

7、其它检测方法：如传统的生理生化反应测试、噬菌体技术、菌体脂肪酸分析及国内外或半自动的

专家鉴定系统，如Biolog细菌鉴定系统。

22．柑桔黄龙病病原、主要症状特点、传播途径、主要检测与检疫方法

病原：韧皮部杆菌（CandidatusLiberobacter）可分为两个生态型：亚洲耐热型：https://www.360docs.net/doc/f315994541.html,nticum，多发生热带亚热带地区，喜高温，30-35C发病严重。非洲热敏感型：L .africanum，多在冷凉气候下发生，在22-24C症状明显，30C以上症状受抑制

症状特点：所有品种均能感染。全年发病，以夏梢、秋梢发生最多，其次春梢。典型为叶片黄化或形成黄绿色相间的斑驳，初发病时，往往在病树的树冠上有少数新梢的叶片表现黄化，易脱落。病叶叶脉肿突，叶质硬化无光泽病树花早而多，畸形，大量落果，小而畸形，着色不正常，脐部不着色。

有的品种果蒂附近橙红色，“红鼻果”

传播途径: 新区的传播主要是病区调运的苗木、接穗。柑桔木虱是自然界的传病虫媒。

主要检测与检疫方法：

1、生物学诊断法：鉴别寄主柑、蕉柑和甜橙。南非专家建议用伏令夏橙或奥兰多桔柚作指示植物，中

国专家建议用柑作指示植物。方法是将病树或待测树上的冬芽枝段侧接在柑实生苗上，接种后截去实生苗顶部促其长出新梢，根据产生黄化或斑驳型黄化症状做出诊断

2、产地检疫：田间主要症状有4种，最好于每年10-12月①斑驳状黄化：是田间判断的主要症状。②均

匀黄化：主要是新梢不转绿，以柑、蕉柑的夏、秋梢较多，也是田间判断的主要症状。③缺素状黄化：以类似缺锌状或缺锰状黄化为主，不能作为田间判断的主要症状。④“红鼻子果”或“青果”：目前已成为果农识别黄龙病的主要症状诊断易误诊。

3、电镜检查：检查病树或待测叶片叶脉筛管细胞内的病原细菌。但电子显微镜容易造成漏检

4、荧光显微镜检查：在荧光显微镜下检查茎、叶柄韧皮部切片，可见有多个发黄色荧光的团块

5、化学诊断

6、血清学诊断：不同类型的病菌制备的单抗在检测上存在株系专化性

7、分子生物学方法：柑桔黄龙病病原亚洲种的特异引物, PCR方法或荧光定量PCR方法检测

23．松材线虫病的症状发展特点、侵染循环、检验及检测

症状特点：无论是幼树还是大树都发病，先是松脂分泌减少，蒸腾作用减弱，部分针叶退绿，病情加重，针叶变成黄褐色，松脂停止分泌，并在短时间内整株萎蔫枯死。在感病早期大部分松树并不立即表现症状，而是有一个潜伏侵染期，但在两三个月后立即表现萎蔫症状，整株松树枯死。枯死后针叶呈红褐色，不脱落，被害松林从远处看一片火红。

病害发展过程分4个阶段：1、外观正常，树脂分泌减少，蒸腾作用下降，在嫩枝上往往可见天牛啃食树皮的痕迹；2、针叶开始变色，树脂分泌停止；3、大部分针叶变为黄褐色，萎蔫；4、针叶全部变为黄褐色至红褐色，病树整株干枯死亡。大多病株从针叶开始变色至整株死亡约30天。

侵染循环：松材线虫是一种移居型内寄生线虫，环境因子如温度和土壤中水分含量与发病率有密切相关性。高温和干旱有利于该病发生。年评价你气温是衡量某地区松材线虫发病程度与分布最有用的指标之一。低于10℃不发生，10-12℃零星发生，14℃以上的地区是最适发生区。由卵发育为成虫，其间要经过4龄幼虫期。雌、雄虫交尾后产卵，雌虫可保持30天左右的产卵期，1条雌虫产卵约100粒。在生长最适温度25℃下约4天1代，发育的临界温度为9.5℃，高于33℃则不能繁殖。秋末冬初，病死树内的松材线虫已逐渐停止增殖，并有自然死亡，同时开始出现另一种类型的3龄幼虫，称为分散型3龄幼虫，浸入休眠阶段。翌年春季，松材线虫分散型3龄幼虫明显地分布在松墨天牛蛀道周围，并逐渐向蛹室集中，这主要是由于蛹室内含有大量的不饱和脂肪酸，对线虫产生趋化活性。当松墨天牛即将羽化时，分散型3龄幼虫蜕皮形成分撒型4龄休眠幼虫，通过松墨天牛的气门进入气管，随天牛羽化离开寄主植物。

检验及检测：1、产地检疫：观察该地区有无线虫为害的病株，在为发现典型症状的地区，先查找有天牛为害虫孔、碎木屑等痕迹的植株，在树干任何部位做一个伤口，几天后观察，如伤口充满大量的树脂为健树，否则为可疑病株，半个月后再观察，如发现针叶失绿、变色等症状，并在45天内死亡，表明该病发生。取样，分离线虫。

2、抽样和取样：抽取有上述症状的部分检疫物，数量为每批次总件数的0.5%-5.0%，但最低不得少于5件。若无明显症状时可随机抽样，在所抽取的样木（或样品）上取部分样品，或钻取少量木屑（不得少于20g），每样3个重复，标号后带回实验室检验。取样时注意选取靠近蛀道、蛹室的部位。

3、分离线虫：贝尔曼漏斗法或浅盘法。对媒介昆虫进行线虫分离时，可将其用剪刀或尖头镊子、解剖针等剪碎或撕碎后同样采用上述方法进行。调至20-35℃后浸泡分离材料，3-4小时线虫游离出一定数量后即可镜检，一般需经24小时后镜检。

4、病原线虫鉴定：（1）线虫培养：鉴定需要相当数量的雌、雄成虫，但在检验时分离到的线虫多是出于休眠阶段的分散型3龄幼虫（L）；有时虽可见雌雄成虫，但数量较少；而从媒介昆虫分离到的线虫为分散型4龄幼虫。用会葡萄孢霉、盘多毛孢等真菌培养，以获得大量雌雄成虫供鉴定。（2）虫体测量：分别测量虫体上各个特征器官的长短和位置，用不同的符号来表示，一般雌雄虫各测20-60头，取平均值。（3）形态鉴定：注意与一近似种拟松材线虫（B.mucronontus）区别，拟松材线虫雌虫尾部末端有明显的指状尾尖突，长达3.5-5.0μm，雄虫尾端抱片为方状铁铲形，致病性微弱，为害轻。

5、分子鉴定及快速检测：等位酶分析：酯酶和苹果酸脱氢酶同工酶存在明显差异、酶联免疫吸附法、

DNA探针杂交、RADP技术、ITS-RFLP技术

24．香蕉穿孔线虫的雌雄虫形态特点,主要寄主

形态特点：雌虫：虫体细长，头不缢缩、骨质化明显，口针粗短、口针基部球发达，中食道球发育良好、食道腺覆盖于肠背面。双卵巢对生、平伸，阴门位于虫体中后部，尾长圆锥形。雄虫：唇部高、圆、缢缩，口针细，口针基部球和食道发育差，交合伞包至尾的近末端

主要寄主：寄主范围广，多达200多种，主要侵染单子叶植物的芭蕉科、天南星科和竹芋科，也可为害双子叶植物。主要农作物和经济作物包括香蕉、胡椒、芭蕉、椰子树、槟榔树、咖啡、茶树、大豆以及一些观赏植物等，但不侵染柑橘。

25．烟草环斑病毒的传播途径、检验与检测方法

传播途径：介体传播：主要由美洲剑线虫、叶蝉、叶甲、蓟马、蚜虫、螨等种传：有16种植物可通过种子传播。适应性广、寄主多，传毒方式多样，很易漏检而扩散。

检验与检测方法：

１、鉴别寄主：苋色藜、昆诺藜上产生局部斑普通烟、豇豆、克氏烟２、电镜观察：３、血清学检测：４、分子生物学手段：如RT-PCR