青藏高原沙棘属植物资源与品质评价

青藏高原沙棘属植物资源与品质评价
沙棘又名醋柳、酸刺、黑刺、达布（藏药名）、其察日嘎纳（蒙药名），系胡颓子科（Elaeagnaceae）沙棘属（Hippophae L．）的落叶灌木或乔木。

已知全世界共有沙棘属植物7种11亚种，广泛分布于欧亚大陆的温带和寒温带地区。

沙棘属植物是一类具有较大生态效益和药用价值的植物类群。

《中华人民共和国药典》2005年版一部收载沙棘药材为沙棘属植物沙棘（Hippophae rhamnoides L．）的干燥成熟果实。

本品系藏族、蒙古族习用药材。

公元八世纪的藏医名著《四部医典》即对其有详细记载。

近年来，随着国内外对沙棘研究的逐步深入，证实其对冠心病、胃溃疡等疾病具有良好的治疗和保健作用。

本课题对分布于青藏高原的沙棘属植物进行了种质资源调查；对中国沙棘H. rhamnoides subsp. sinensis Rousi果实进行了化学成分的研究，分离得到25个化合物，包括3个新化合物；建立了中国沙棘药材的黄酮类化学成分的HPLC指纹图谱，并确定了13个主要色谱峰的归属；根据植物化学分类学的基本原理，首次运用色谱指纹图谱技术并结合传统的形态分类方法，对沙棘属植物的演化与分类进行了探讨；对10种沙棘属植物果实中的黄酮类化学成分含量进行了比较分析；应用HPLC指纹图谱定性分析及含量测定方法对沙棘总黄酮制剂——心达康片进行了质量比较研究。

植物种质资源调查结果表明，东喜马拉雅至横断山及其边缘地区分布的沙棘属植物共有7种5亚种，是全国野生沙棘属植物种质资源最为丰富的地区，该地区被认为是沙棘属植物的起源中心、类群分化中心和原始类群中心。

本课题对青藏高原地区分布的10种沙棘属植物：柳叶沙棘H. salicifolia D. Don、中国
沙棘H. rhamnoides subsp. sinensis Rousi、云南沙棘H. rhamnoides subsp. yunnanensis Rousi、卧龙沙棘H. rhamnoides subsp. wolongensis Lian, K. Sun et X. L. Chen、理塘沙棘H. litangensis Lian et X. L. Chen ex Swenson et Bartish、棱果沙棘H. goniocarpa Lian et al. Swenson et Bartish、江孜沙棘H. gyantsensis（Rousi）Lian、密毛肋果沙棘H. neurocarpa subsp. stellatopilosa Lian et al. ex Swenson et Bartish、肋果沙棘H. neurocarpa subsp. neurocarpa S. W. Liu et T. N. He和西藏沙棘H. tibetana Schlecht．的分布地域、资源数量、生长环境、原植物形态和果实性状等进行了比较研究。

中国沙棘为我国特有的沙棘品种，是我国药用沙棘的主要来源。

为进一步阐明沙棘果实的活性基础，并为沙棘药材及制剂的质量评价提供化学对照品，本课题对采自四川省阿坝州小金县的中国沙棘果实进行了化学成分研究。

采用多种柱色谱分离技术从中国沙棘果实中共分离纯化出25个化合物，运用¹H-NMR、¹³C-NMR、DEPT、ESI-MS和IR等波谱分析技术，结合理化分析以及与对照品比较的方法，鉴定了22个化合物的结构。

其中黄酮醇类化合物18个：3个黄酮苷元分别是异鼠李素（1）、槲皮素（7）和山柰素（13），15个黄酮苷类分别是异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷（2）、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷（3）、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷（4）、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷（5）、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷（6）、丁香亭-3-O-β-D-芸香糖苷（8）、槲皮素-3-O-β-D-槐二糖-7-O-α-L-鼠李糖苷（9）、异鼠李素-3-O-β-D-槐二糖-7-O-α-L-鼠李糖苷（10）、山柰素-3-O-β-D-槐二糖-7-O-α-L-鼠李糖苷（11）、山柰素-7-O-α-L-鼠李糖苷（12）、异鼠李素-3-O-β-D-（6-O-反式芥子酰基）槐二糖-7-O-α-L-鼠李糖苷（14）、
山柰素-3-O-β-D-（6-O-反式芥子酰基）槐二糖-7-O-α-L-鼠李糖苷（15）、槲皮素-3-O-β-D-（6-O-反式芥子酰基）槐二糖-7-O-α-L-鼠李糖苷（16）、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖-7-O-α-L-鼠李糖苷（17）、槲皮素-3-O-β-D-芸香糖苷（18）；三萜类化合物1个：齐墩果酸（19）；甾醇类化合物1个：β-谷甾醇-3-O-β-D-葡萄糖苷（20）；芳香类化合物2个：对羟基苯丙酮（21）、苯甲酸（22）。

其中，化合物14、15、16为新化合物；化合物6、8、12、17为首次从胡颓子科植物中分离得到；化合物2、5、10、11为首次从中国沙棘果实中分离得到。

本课题采用反相HPLC方法，以黄酮类成分作为评价指标，选择分布地域、生长环境、植株和果实形态有代表性的中国沙棘果实样品进行了测定，采用《中药色谱指纹图谱相似度评价系统》进行色谱数据分析，建立了分离度和重现性较好的中国沙棘药材的指纹图谱。

通过与对照品比较，确定了指纹图谱中13个主要色谱峰的归属，分别是槲皮素-3-O-β-D-槐二糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、山柰素-3-O-β-D-槐二糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、异鼠李素-3-O-β-D-槐二糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖-7-O-α-L-鼠李糖苷、槲皮素-3-O-β-D-芸香糖苷、槲皮素-3-O-β-D-葡萄糖苷、异鼠李素-3-O-β-D-芸香糖苷、丁香亭-3-O-β-D-芸香糖苷、异鼠李素-3-O-β-D-葡萄糖苷、槲皮素、山柰素-7-O-α-L-鼠李糖苷、山柰素和异鼠李素。

结合植物化学分类学的基本原理，本课题对色谱指纹图谱技术在沙棘属植物分类上的应用作了初步探讨。

本课题采用HPLC和TLC指纹图谱技术对10种沙棘属植物果实中的黄酮类成分进行了比较分析。

结果显示：相同种群的样品之间，其种内相似度通常较高，反映出相同种沙棘由于相同的遗传背景决定了其黄酮类化学成分在种类及相对
含量上的一致性，而不同种样品间则通常存在较大的差异。

从沙棘属植物进化的角度看，随着进化水平的增加，果实中的黄酮类成分显示出逐渐降低的趋势。

通常在原始类群的果实中，中高极性的黄酮类成分占主导；而在进化类群中，低极性的黄酮类成分含量较高。

这种化学成分在不同种群间的变化，为研究沙棘属植物的类群分化和演变提供了佐证。

本课题采用HPLC法对不同基源、不同生长环境、不同采集时间的沙棘果实中的总黄酮含量进行了测定。

结果表明，鼠李沙棘的三个亚种，即中国沙棘、云南沙棘、卧龙沙棘的总黄酮含量分别为5.70±1.62 mg/g、7.00±1.60 mg／g、5.84±1.05 mg/g，明显高于该属其它种。

其它种的总黄酮含量由高到低依次为：棱果沙棘3.07±0.92 mg/g、理塘沙棘2.97±1.18 mg／g、肋果沙棘2.43±1.03 mg／g、江孜沙棘1.98 mg／g、西藏沙棘1.93±0.84 mg／g、柳叶沙棘1.86±0.32 mg/g、密毛肋果沙棘1.77±0.42mg/g。

心达康片系国家中药保护品种，主要成分为沙棘总黄酮，具有补益心气，化淤通脉，消痰运脾的功效。

为了解心达康片的质量状况，本课题采用HPLC法测定心达康片中槲皮素、山柰素和异鼠李素的含量，比较了不同厂家产品的总黄酮及苷元含量的差异。

结果显示：不同厂家生产的心达康片中沙棘总黄酮的含量存在显著的差异，含量高者达每片6.03mg，占其标示量的120.6％；含量低的为每片3.38mg，仅占其标示量的67.6％。

而且就3种主要黄酮苷元的相对比例而言，不同厂家生产的产品也存在很大的差异，推测可能有人为添加槲皮素代替沙棘黄酮的情况存在。

此外，与沙棘果实中黄酮类化合物主要以黄酮苷的形式存在不同，所测定的心达康片样品中的沙棘总黄酮全部由槲皮素、山柰素、异鼠李素这三种苷元组成，几乎不含黄酮苷类成分。