3.干血斑样本的采集

3. 选定抽血部位,并请母亲为婴儿把选定部位捂热 • 其他必要文件
• 婴儿6周-4个月大: 脚后跟
• 婴儿4-10个月大:脚趾大拇指
4. 工作人员清洁准备 • 洗手擦干后,戴上手套; • 如果手套上有粉, 请用清水洗干净,擦
干之后再进行下一步。 • 填好采集卡上的资料。
• 婴儿大于10个月或超过10公斤重: 手指尖
早期婴儿诊断技术利用 DNA PCR 的方法进行 检测，可以了解出生后6周及以上的婴儿的感染状 况，为及时治疗争取了时间。
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为什么要进行早期婴儿诊断 （EID）？
尽早发现感染婴幼儿，为其提供相应的治疗关怀 抗病毒治疗 可母乳喂养，为婴儿提供更好的营养
尽早排除未感染婴儿 减轻不必要的家庭压力 停止复方新诺明预防性用药
DNA PCR 阳性
阴性
DNA PCR 阳性
阴性
尽快采集第三个样本，制备滤 纸片来自血斑DNA PCR 阳性
阴性
报告检测到HIV1
报告检测到HIV1
报告未检测到 HIV-1
报告未检测到 HIV-1
转诊到艾滋病治疗关怀机构，尽快开始抗病 毒治疗
临床随访，如婴儿母乳喂养，在停母乳 6周后按上述流程检测
• 一.基本信息 • 母亲姓名 _________________ • 儿童姓名 _________________ 性别 男/ 女 • 出生日期 年月日 • 现住址(详填)________乡(镇,街道)________村___(门牌号) • 联系电话 ________________ • 二.临床信息 • 1. 母亲抗病毒药物应用情况： 用药/ 未用药 • 如用药，原因为 抗病毒治疗/ 母婴阻断用药 • 开始用药时间 孕周 产时 产后 • 孕期 ： 用药 / 未用药 • 如用药，方案为 + + • 产时 ： 用药 / 未用药 • 如用药，方案为 + + • 产后： 用药 / 未用药 • 如用药，方案为+ + • 停止用药时间 孕周/ 产时/ 产后 周 • 2. 新生儿抗病毒药物应用情况： 用药/ 未用药 • 开始用药时间 年月日 • （或出生后 周） • 停止用药时间 年月日 • （或出生后 周） • 用药方案 + + • 3. 儿童应用复方新诺明预防耶氏肺孢子菌肺炎 (PCP)情况： • 已用药/ 今天开始用药/ 未用药 • 如已用药，开始时间 年月日 • 4. 喂养方式： • 目前为 人工喂养/ 纯母乳喂养/ 混合喂养 • 是否曾母乳喂养是/ 否/ 不知道 • 如曾母乳喂养，停止母乳喂养的时间为： • 年月日 • 5. 儿童出现HIV 感染疑似症状： 是/ 否，请说明为何 • 种机会性感染_______________________________________ • 三.样本信息 • 1. 取样日期 年月日 • 2. 这是第 次送检干血斑样本,此次送检原因: • 做第1 次检测 • 做第2 次检测 • 做第3 次检测,前2 次检测结果不确定 • 停止母乳喂养6 周以上 • 儿童出现HIV 感染疑似症状 • 其它,请描述________________________
1. 分装 将采集卡分别放入一薄玻璃纸袋,防 止样本相互感染. 10张采集卡可以 放到防水密封塑料袋内.
3. 封口 每包放至少一张湿度卡. 然后轻轻将袋内空气挤压出去, 妥善封口.
2. 除湿 每包防水密封塑料袋放入5-10包干燥剂
4. 核对/邮寄 • 把干血斑采集卡, 检测申请/报告表, 和送检清单一起放入一个大信封内.信封上注
8. 制作成功样本 • 将采集卡凑近采血部位,使滴落的血顺利滴落到圆
圈内并均匀散开. • 至少采集3个较好的圆圈, 样本才算完成.
5. 安抚婴儿, 清洁扎针部位 让婴儿手脚朝下定位, 方便采血.然后用酒精清洁选定部位, 等待30秒钟左右.
9. 采血后处理 • 用酒精清洁采血部位, 不用贴邦迪
6. 扎针 轻轻按摩并使选定部位放松;然后扎入特定的2毫
程中不要与其它界面接触。
EDTA抗凝静脉血制备干血斑注意事项：
静脉血充分与EDTA混合；
最好采集后立即制备干血斑；
血浆与血细胞分层的全血在制备干血斑前，应 轻柔地上下颠倒采血管（避免血细胞破裂）， 使血液混匀后制备；
续：
在滤纸片血斑充分干燥后，将滤纸片放 入玻璃纸或塑料纸里，避免滤纸之间标 本的污染,再放入一个大的密封袋里，加 入干燥剂和湿度指示卡，和送检清单、 申请报告单，邮寄运输；
干血斑样本的采集、运输 和保存
为什么要进行早期婴儿诊断 （EID）？
全球每年有650,000例新发儿童 HIV 感染，其中90％以 上源于母婴传播。
如不接受治疗，35％的 HIV 感染婴儿会在一年内死于 艾滋病，而超过半数的儿童会在两岁前死亡。
WHO 推荐，HIV 感染产妇所生婴儿应在出生6周后尽早 做病毒学检测，确认其感染状况。
明: - 采血点(门诊) - 送检人/单位 -送检日期
• 把信封放在实验室特定地方(如抽屉)等待邮寄. • 在规定时间邮寄至指定地点和指定接收单位/人.
入选婴儿，编号，签知情同意书
婴儿满6周后采集第一个样本，制备滤纸血斑
DNA PCR
阳性
阴性
报告阳性，尽快采集第二个样本， 制备滤纸片干血斑
报告阴性，婴儿3个月龄以上时采集第二 个样本，制备滤纸片干血斑
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滤纸片干血斑
特殊的样本采集方法－滤纸片干血斑（DBS）法，其优点为：
采血量少 简便样本采集 保持样本生物稳定性 降低生物危险性 便于运输和保存
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样本检测 DNA提取 DNA扩增 DNA检测
采血前的准备：手套、采 血针、酒精棉球、滤纸片
填写样本信息。注意 不要污染滤纸上的圆 圈及血斑。
1. 采血处酒精未擦干； 2. 滤纸沾染酒精，洗手液； 3. 用毛细管转移血液
1. 同一采血圈多次滴血； 2. 用风机吹干
疏忽未采血
干血斑样本采集过程简易图
1. 搜集必需的耗材
•
手套
•
滤纸干血斑采集卡
•
采血针 (2毫米)
• 浓度70%的酒精 • 药棉或纱布 •笔
2. 完成必要的文件 • 婴儿注册表 • 检测申请/报告表 • 干血斑采集卡
谢谢！
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如果无条件立即运输可暂保存－20℃ 冰柜中。
血液充分吸收透过滤纸，填满印圈，不要在 一个圈上重复采血，避免触摸或涂抹血斑。
无效样本： 1. 血液未渗透滤纸或未填满圆圈 2. 在取样前后用手触摸滤纸，滤纸上粘有洗手液
样本在干燥小于4小时前即寄出 吸附血液过多
1. 用力挤压针刺点周围； 2. 采血前后滤纸面沾染洗手液、滑石粉、酒精、水等
WHO 推荐，小于12个月的 HIV 感染婴幼儿,无论其 CD4 细胞数量及是否出现 HIV 感染症状，应尽快开始抗病 毒治疗。
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为什么要进行早期婴儿诊断 （EID）？
HIV 感染妇女所生的婴幼儿，通过胎盘获得母亲 HIV 抗 体，并于生后在体内保存15至18个月。
现有的抗体检测技术（ELISA、快速检测及WB）不能在婴 儿出生后及时了解其感染状况，错过了治疗最佳时机。
采血部位 用热毛巾捂
酒精消毒，干棉球擦干 针刺足跟，擦去第一滴血
轻挤滴血 每圈只滴一滴血
标本干燥及运送
9. 滤纸片干血斑的干燥
10. 滤纸片干血斑的邮寄
续：
不采集第一滴末梢血。 将第二滴血滴于滤纸上。滤纸每个印圈约需
100ｕl血液。 让血液滤纸片于室温下自然干燥至少4小时
（在潮湿气候下至少24小时）。 不要加热血片或将他们堆叠在一起，干燥过
米采血针.
7.开始采血 用纱布和棉球擦掉第一滴血;滴落适量血样到
采集卡上的圆圈内.
11.不合格样本 •右图中为不合格样本
10.合格样本 •左图中为合格样本
婴儿干血斑样本风干和包装
1. 选一干净,通风的地方, 把制成的样
本放置在纸质干燥架上至少4小时或隔
夜.
风
干
包装
2. 如果地方狭小,可以将检测申 请表与采集卡贴在墙上.