结核菌涂片检查
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痰标本留取后，痰盒切勿倒置、 严防痰液外溢，应立即送检。
进行细菌学检查时，应在登记本和 检验报告单上注明标本性状。
20
国家结核病参比室
不同痰液涂片阳性率表 （仅供示例）
性质 干酪痰 血痰 粘液痰 唾液
21
例数 55 46 529 92
阳性数 36 16 56
7
国家结核病参比室
阳性率 65.5% 34.8% 10.6% 7.6%
历史条件：19世纪80年代是细菌 学的全盛时代。当时，用染片方 法找病原菌方面已有德国病理学 家魏格特的美兰法，又有德国科 学家欧利希德加热固定法。发现 结核菌的技术条件已成熟。
3
国家结核病参比室
科赫
科赫在发现结核菌之前，他 在细菌学领域已取得极大的 成就。1876年他发表了家畜 炭疽病的文章轰动当时的学 术界。1877年他奠定了细菌 学研究技术的基础：涂片制 作及染色方法，平皿培养， 悬滴检查法等。
显微镜检查操作（2）
6
国家结核病参比室
1882年欧利希
发现结核菌表现
出抗酸性，并
提出使用复红染 色剂寻找结核菌。
7
国家结核病参比室
1882－1883年萋尔对结核菌的 染色法进行了改进。提出用石 炭酸替代苯胺，使用石炭酸复 红。同年，德国病理学家尼尔 森建议用复红和硫酸替代龙胆 紫和硝酸。这就是萋－尼氏抗 酸菌染色法的由来。
火焰固定（5秒钟将玻片过火4次）
滴加石炭酸复红染液，盖满玻片。
火焰加热至出现蒸汽，勿使沸腾。脱离火焰， 保持5分钟。
26
国家结核病参比室
加热染色的原理
1.分枝杆菌细胞壁含有丰富的脂质，加热 会增加其流动性，增加与染色液结合的几 率
2.加热促进分子运动，增加分枝菌酸与染 色剂的碰撞的几率
27
14
国家结核病参比室
标本的采集（1）－容器
螺旋盖痰瓶 可密封的塑料盒 可密封的蜡纸盒
15
国家结核病参比室
16
国家结核病参比室
痰盒图例(1)
17
国家结核病参比室
初诊Baidu Nhomakorabea留取标本数量
以三份标本的阳性检出例数作为100％， 留取一份标本的阳性检出例数占全部阳性 例数的80％，留取两份标本的阳性检出例 数占全部阳性检出例数的95％。
细胞壁与抗酸性的相关性：
1) 分枝菌酸：为结核菌菌体 的重要成分，是抗酸性的物质 基础
2)细胞壁的完整性。
3)受紫外线影响
13
国家结核病参比室
痰标本直接涂片萋尼氏染色显微镜检查
主要检查对象 确定诊断： 就诊及转诊的结核病可疑症状者
疗效评价： 初治涂阳患者在疗程满2、5、6月时，复 治涂阳患者在疗程满2、5、8月时，按期 送检两份痰（当日即时痰、当日或次日 晨痰）
4
国家结核病参比室
科赫用他早期研究中
发现病原菌的方法致力于结 核病病原菌的发现。他注意 到以往运用碱性反应液可在 周围组织中获得染色清楚的 病原菌。因此他决定选用美 兰作染液，用俾士麦褐作背 景，找到了结核菌。(兰色)
5
国家结核病参比室
在一次偶然的机会，一张
感染结核菌组织的玻片，滴 上染液后，被遗忘在热火炉 表面。结果科赫发现玻片中 的结核菌着色鲜艳。从此在 结核菌染色过程中，加热成 为一项常规步骤。
直接涂片法步骤（1）
选择清洁无划痕的新玻片脱脂、干燥 编号。无磨砂面的玻片，需用玻璃刻 刀；有磨砂面的玻片，可用铅笔编号
22
国家结核病参比室
直接涂片法步骤（2）
使用折断的竹签茬端，取 痰标本中干酪样或脓样部 分，涂于玻片右2/3处，均 匀涂抹10x20毫米大小的椭 圆形痰膜。
不可在火焰上加热时涂片
可能情况：病人留一份即时痰，第二天送检两 份标本或者未送检
理论上登记本的查痰次数分布： 只有查一份痰和三份痰的记录， 没有查两份痰的记录
19
国家结核病参比室
留取标本
留痰时应嘱咐病人尽量深咳，留取痰 量3~5毫升。干酪痰、血痰、黏液痰为合格 的标本。唾液属不合格痰标本。
痰瓶上标明病人姓名，初诊门诊序 号（或随访病人登记号）。
8
国家结核病参比室
痰检工作的目的和意义
可疑者 随访患者
传染性结核病的诊断指标 评价传染性结核病的化疗效果
为结核病流行病学指标服务， 涂阳患病率、涂阳发病率
传染源－传播途径－易感者 DOTS策略：发现并治疗涂阳病人－控制传染源
痰检：发现传染源、评价疗效 三大目标：DOTS覆盖、病例发现、治愈病人
将涂抹后的波片痰膜朝上，自然干燥，一般情况 下约需30分钟 。切不可在火焰上加热。
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国家结核病参比室
同一标本不同操作人员涂抹比较
24
国家结核病参比室
涂片后的实验台：是否可接受？
25
国家结核病参比室
染色（1）
将玻片放置在染色架上，玻片间距保持10毫 米以上的距离；
不得使用染色缸：1）难以加热 2） 阳性涂片污染染色液
The Public Health Service National Tuberculosis Reference Laboratory and the National Laboratory Network
－－IUATLD
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国家结核病参比室
查痰次数的分布
留痰：
第一次就诊留一次即时痰，给就诊者两个痰 盒，嘱咐其留夜间痰和晨痰，于第二天送检。
结核菌涂片检查
国家结核病参比实验室 姜广路
1
国家结核病参比室
内
容
结核细菌学检查早期历史简介 痰检工作的目的和意义 结核菌的形态和结构 涂片操作程序 碱性复红 EQA痰检规程与原规程的比较 讨论 附件图例
2
国家结核病参比室
结核细菌学检查早期历史简介
结核菌是由德国科学家科赫 于1882年发现的。
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国家结核病参比室
结核菌形态结构
光学显微镜下为细长稍弯曲， 两端钝圆的杆菌 ，菌体长度多为
1.5~3.5um。生长发育期间形成分 支(分枝杆菌)。经萋尼氏染色
后在显微镜蓝色背景下呈红色杆状。
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国家结核病参比室
萋尼氏染色镜下形态
11
国家结核病参比室
结核菌菌落及荧光染色镜下形态
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国家结核病参比室
国家结核病参比室
染色(2)
脱色： 流水自玻片一 端清缓冲洗染 色液，沥去玻 片上的水。滴 加脱色液，保 持1分钟。
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国家结核病参比室
复染
滴加亚甲蓝复染液， 保持30秒钟
流水冲洗，沥去玻 片上的水。
玻片干燥后镜检
问题：染色后的 涂片是否安全？
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国家结核病参比室
显微镜检查操作（1）
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国家结核病参比室
进行细菌学检查时，应在登记本和 检验报告单上注明标本性状。
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国家结核病参比室
不同痰液涂片阳性率表 （仅供示例）
性质 干酪痰 血痰 粘液痰 唾液
21
例数 55 46 529 92
阳性数 36 16 56
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国家结核病参比室
阳性率 65.5% 34.8% 10.6% 7.6%
历史条件：19世纪80年代是细菌 学的全盛时代。当时，用染片方 法找病原菌方面已有德国病理学 家魏格特的美兰法，又有德国科 学家欧利希德加热固定法。发现 结核菌的技术条件已成熟。
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国家结核病参比室
科赫
科赫在发现结核菌之前，他 在细菌学领域已取得极大的 成就。1876年他发表了家畜 炭疽病的文章轰动当时的学 术界。1877年他奠定了细菌 学研究技术的基础：涂片制 作及染色方法，平皿培养， 悬滴检查法等。
显微镜检查操作（2）
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国家结核病参比室
1882年欧利希
发现结核菌表现
出抗酸性，并
提出使用复红染 色剂寻找结核菌。
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国家结核病参比室
1882－1883年萋尔对结核菌的 染色法进行了改进。提出用石 炭酸替代苯胺，使用石炭酸复 红。同年，德国病理学家尼尔 森建议用复红和硫酸替代龙胆 紫和硝酸。这就是萋－尼氏抗 酸菌染色法的由来。
火焰固定（5秒钟将玻片过火4次）
滴加石炭酸复红染液，盖满玻片。
火焰加热至出现蒸汽，勿使沸腾。脱离火焰， 保持5分钟。
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国家结核病参比室
加热染色的原理
1.分枝杆菌细胞壁含有丰富的脂质，加热 会增加其流动性，增加与染色液结合的几 率
2.加热促进分子运动，增加分枝菌酸与染 色剂的碰撞的几率
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国家结核病参比室
标本的采集（1）－容器
螺旋盖痰瓶 可密封的塑料盒 可密封的蜡纸盒
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国家结核病参比室
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国家结核病参比室
痰盒图例(1)
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国家结核病参比室
初诊Baidu Nhomakorabea留取标本数量
以三份标本的阳性检出例数作为100％， 留取一份标本的阳性检出例数占全部阳性 例数的80％，留取两份标本的阳性检出例 数占全部阳性检出例数的95％。
细胞壁与抗酸性的相关性：
1) 分枝菌酸：为结核菌菌体 的重要成分，是抗酸性的物质 基础
2)细胞壁的完整性。
3)受紫外线影响
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国家结核病参比室
痰标本直接涂片萋尼氏染色显微镜检查
主要检查对象 确定诊断： 就诊及转诊的结核病可疑症状者
疗效评价： 初治涂阳患者在疗程满2、5、6月时，复 治涂阳患者在疗程满2、5、8月时，按期 送检两份痰（当日即时痰、当日或次日 晨痰）
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国家结核病参比室
科赫用他早期研究中
发现病原菌的方法致力于结 核病病原菌的发现。他注意 到以往运用碱性反应液可在 周围组织中获得染色清楚的 病原菌。因此他决定选用美 兰作染液，用俾士麦褐作背 景，找到了结核菌。(兰色)
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国家结核病参比室
在一次偶然的机会，一张
感染结核菌组织的玻片，滴 上染液后，被遗忘在热火炉 表面。结果科赫发现玻片中 的结核菌着色鲜艳。从此在 结核菌染色过程中，加热成 为一项常规步骤。
直接涂片法步骤（1）
选择清洁无划痕的新玻片脱脂、干燥 编号。无磨砂面的玻片，需用玻璃刻 刀；有磨砂面的玻片，可用铅笔编号
22
国家结核病参比室
直接涂片法步骤（2）
使用折断的竹签茬端，取 痰标本中干酪样或脓样部 分，涂于玻片右2/3处，均 匀涂抹10x20毫米大小的椭 圆形痰膜。
不可在火焰上加热时涂片
可能情况：病人留一份即时痰，第二天送检两 份标本或者未送检
理论上登记本的查痰次数分布： 只有查一份痰和三份痰的记录， 没有查两份痰的记录
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国家结核病参比室
留取标本
留痰时应嘱咐病人尽量深咳，留取痰 量3~5毫升。干酪痰、血痰、黏液痰为合格 的标本。唾液属不合格痰标本。
痰瓶上标明病人姓名，初诊门诊序 号（或随访病人登记号）。
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国家结核病参比室
痰检工作的目的和意义
可疑者 随访患者
传染性结核病的诊断指标 评价传染性结核病的化疗效果
为结核病流行病学指标服务， 涂阳患病率、涂阳发病率
传染源－传播途径－易感者 DOTS策略：发现并治疗涂阳病人－控制传染源
痰检：发现传染源、评价疗效 三大目标：DOTS覆盖、病例发现、治愈病人
将涂抹后的波片痰膜朝上，自然干燥，一般情况 下约需30分钟 。切不可在火焰上加热。
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国家结核病参比室
同一标本不同操作人员涂抹比较
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国家结核病参比室
涂片后的实验台：是否可接受？
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国家结核病参比室
染色（1）
将玻片放置在染色架上，玻片间距保持10毫 米以上的距离；
不得使用染色缸：1）难以加热 2） 阳性涂片污染染色液
The Public Health Service National Tuberculosis Reference Laboratory and the National Laboratory Network
－－IUATLD
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国家结核病参比室
查痰次数的分布
留痰：
第一次就诊留一次即时痰，给就诊者两个痰 盒，嘱咐其留夜间痰和晨痰，于第二天送检。
结核菌涂片检查
国家结核病参比实验室 姜广路
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内
容
结核细菌学检查早期历史简介 痰检工作的目的和意义 结核菌的形态和结构 涂片操作程序 碱性复红 EQA痰检规程与原规程的比较 讨论 附件图例
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国家结核病参比室
结核细菌学检查早期历史简介
结核菌是由德国科学家科赫 于1882年发现的。
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国家结核病参比室
结核菌形态结构
光学显微镜下为细长稍弯曲， 两端钝圆的杆菌 ，菌体长度多为
1.5~3.5um。生长发育期间形成分 支(分枝杆菌)。经萋尼氏染色
后在显微镜蓝色背景下呈红色杆状。
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国家结核病参比室
萋尼氏染色镜下形态
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国家结核病参比室
结核菌菌落及荧光染色镜下形态
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国家结核病参比室
国家结核病参比室
染色(2)
脱色： 流水自玻片一 端清缓冲洗染 色液，沥去玻 片上的水。滴 加脱色液，保 持1分钟。
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国家结核病参比室
复染
滴加亚甲蓝复染液， 保持30秒钟
流水冲洗，沥去玻 片上的水。
玻片干燥后镜检
问题：染色后的 涂片是否安全？
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国家结核病参比室
显微镜检查操作（1）
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国家结核病参比室