肺结核痰涂片检查工作规范

肺结核痰涂片检查工作规范

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痰涂片检查是肺结核病人诊断与鉴别诊断、制定化疗方案、疗效考核的主要方法或手段。为贯彻落实市卫生局《关于在全市一级以上医疗单位中开展传染性肺结核筛查工作的通知》的精神，加强传染性肺结核病人发现力度，特制定本规范。

一、痰检的对象和要求

（一）对象

1．咳嗽、咳痰≥3周或有咯血或血痰症状以及胸片异常者。

2．进行疗效考核的病人：凡已确诊、登记、治疗的肺结核病人，在化疗期间应按规定定期作痰菌复查。

1）初治涂阳病人（含重症涂阴病人）在疗程满2、5、6个月时，复治涂阳病人在疗程满2、5、8个月时，各查痰一次。

2）初、复治涂阳病人在疗程满2个月时，痰菌仍为阳性者，应在治疗满 3个月时增加查痰一次。

3）确诊、登记的涂阴肺结核病人，即使病人因故未接受治疗，也应在登记后满2和6个月时进行痰菌检查。

（二）要求

1．初诊病人应送3份痰标本（夜间痰、清晨痰和即时痰）。如无夜间痰，在留清晨痰后2～3小时再留取一份痰标本；或在送痰时，留取两份即时痰。治疗中或复诊随访病人按期每次送检两份痰（清晨痰和夜间痰）。

2．痰标本采集：即时痰为病人就诊时咳出的痰液。清晨痰为清晨深咳出的痰液。夜间痰为就诊前一天晚睡前咳出的痰液。痰标本应以脓样、干酪样或脓性粘液样性质的痰液为合格标本，痰量应为3～5毫升。

应由检验人员或专人验收痰标本，痰液不合格者，要求重新送检。难以获得合格标本时，也应进行细菌学检查，但应注明标本性状以供分析结果时参考。

痰标本的容器，应采用国家参比实验室推荐的国际通用痰瓶或采用直径4厘米、高2厘米的塑料或涂蜡纸密闭盒。留痰容器上应注明病人姓名、编号（门诊序号或病人登记号）及日期。

3．痰标本的保存和输送：痰标本容器密封，勿倒置，严防痰液外溢。不能立即作涂片检查的痰标本，须置4℃冰箱保存，防止痰液干涸或污染。需送上一级细菌实验室培养的痰标本，外送前应认真核对痰标本容器上标

注，是否正确和清晰，是否与化验单一致。痰容器应采用专用的结核杆菌和痰标本冰盒运送，或以纸张和塑料袋封装、扎牢顺序放置于包装袋内。盒外注明勿倒置标志。

4．送检时，县（市、区）结防所（科）医师应填写检验单。填写项目包括：病人姓名、地址、登记号（或门诊序号）、送检日期（或初诊日期）、送检原因（初诊病人或随访病人）。检验单应与痰标本分别放置在不同容器中，一齐送交上级实验室。

5．收到痰标本后，实验室检验人员仔细核对标本和检验单各项内容，查看痰标本是否合格。随后按顺序编号，及时检查和登记。

6．废弃标本和污染物的处理：

1）痰盒和废弃标本等污染物，均须经高压蒸汽灭菌后才能丢弃或清洗，严禁不经灭菌随意处理。

2）痰盒等污染物如采用焚烧处理，须置于焚烧炉内彻底焚化。焚化不彻底，或暴露焚烧是有害的。

3）痰检工作台面的消毒：可将痰标本置于一搪瓷盘中，在操作厨中进行痰涂片操作。涂片操作完成后，将盘与废弃物等一并进行高压蒸汽灭菌，或与操作台面同时以3％石碳酸或其它可靠的消毒液擦拭后，再以紫外线灭菌灯（距离1米）照射30分钟。

二、痰直接涂片检查法

（一）涂片

取经95％乙醇擦拭脱脂过的干燥、清洁、无油污、无划痕的新玻璃片，于玻片背面的左端1／3处以蓝色或黑色记号笔（玻璃铅笔）编号。

用接种环或折断的竹签茬端，挑取痰标本的脓样、干酪样部分约0．05～ 0．1ml，于玻片正面的右侧三分之二处均匀涂抹成2×2．5厘米卵圆形痰膜。自然干燥后待检。

一张玻片只可涂抹一份标本。玻片只应使用一次，不得清洗后再次使用。

（二）萋尔—尼尔逊氏染色法（Ziehl—Neelsen）

简称萋尼氏染色法：

1．试剂：

1）碱性复红乙醇染色储存液：

碱性复红液：8克碱性复红溶于95％乙醇100毫升中。

5％石碳酸水溶液：5克石碳酸溶于100毫升蒸馏水中。

2）碱性复红乙醇染色液：

10毫升碱性复红储存液与90毫升5％石碳酸水溶液混合。

3）5％盐酸乙醇脱色液：

5毫升浓盐酸与95毫升95％乙醇混合。

4）0。3％亚甲兰复染储存液：

0．3克亚甲兰溶于50毫升95％乙醇中，完全溶解后加蒸馏水至终体积100毫升。

5）亚甲兰复染液：

以蒸馏水10倍稀释0．3％亚甲兰复染储存液即得亚甲兰复染液。

2．染色步骤：

1）火焰固定涂片。

2）滴加碱性复红乙醇染色液，盖满痰膜。小心火焰加热至出现蒸汽后，脱离火焰，保持染色三分钟。染色期间应始终保持痰膜被染色液覆盖，必要时可续加染色液。切勿使染色液沸腾。

3）流水自玻片背面上端轻洗，洗清染色液。

4）自痰膜上端外缘滴加脱色液，流过痰膜。需脱至痰膜无可视红色为止。脱色应单片进行。

5）流水自玻片背面上端轻洗，去脱色液。

6）滴加亚甲兰复染液，染色30秒钟。

7）流水自玻片背面上端轻洗，去复染液。

8）待干后镜检。

3．镜检与报告：

光学显微镜镜检(目镜lOX，油镜IOOX)染色痰片。在淡蓝色背景下，抗酸杆菌呈红色，其它

细菌和细胞呈蓝色。

按照下列标准报告所得结果：

1）抗酸杆菌阴性：连续观察300个不同视野，未发现抗酸杆菌。

2）抗酸杆菌可疑(土)：1—2条抗酸杆菌／300个视野。

3）抗酸杆菌阳性(1+)：3—9条抗酸杆菌／100个视野。

4）抗酸杆菌阳性(2+)：l—9条抗酸杆菌／10个视野。

5）抗酸杆菌阳性(3+)：l—9条抗酸杆菌／每个视野。

6）抗酸杆菌阳性(4+)：≥10条抗酸杆菌／每个视野。

镜检结果，应及时记录在“结核病细菌学实验室登记本“和化验报告单上。痰涂片化验单应包括痰标本的性状。阴性结果应填记“阴性”不得以“（—）”表达。300个视野内仅见1～2条抗酸杆菌者，应在报告单上注明条数，医生可结合胸片进行判断。必要时再取标本复查证实，仍见1～2条抗酸杆菌／300个视野，该病例可确诊为涂阳病人。标本应在送检48小时内报告结果。

三、痰涂片质控工作

为了进一步提高痰检涂片及诊断水平，市疾控中心每年两次组织专家对市（县）、区疾控中心痰片制做质量和诊断水平进行抽查。