结核病痰涂片检查及质量保证

3、载玻片



（1）新载玻片应经95%乙醇脱脂，检查 无划痕后，方可使用。 （2）一张载玻片只能涂抹1份痰标本。 （3）载玻片只允许一次性使用，严禁清洗 后重复使用。 （4）载玻片只允许左侧1/3处标注实验室 序号。 （5）载玻片正面右侧2/3中央处均匀涂抹 成面积为10× 20mm的卵圆形痰膜。
1.对技术人员复训 2.对假阳性涂片重新染 色并复检
1.2.3.对技术人员复训 4.现场检查显微镜状态 5.重新购置质量合格的 染料并重新配制染液
1.2.3.对技术人员复训 4.现场检查显微镜工作 状态
(六)废弃标本和污染物的处理


废弃标本、痰盒和污染物均须经高压蒸汽 灭菌后方能丢弃或清洗； 如需焚烧处理，须置于焚烧炉内彻底焚化。 焚化不彻底或暴露焚烧是危险的； 试验操作工作面应以3%石炭酸或其他可 靠的消毒液擦拭，再用紫外线灭菌灯照射 30分钟。
6、登记报告



（1）登记前应对检验单、标本盒、涂片上 的标注进行反复核对。 （2）检查后的第一张涂片结果，应按规定 准确记录在“结核病细菌学实验室登记本” 上。 （3）镜检结果报告应及时发出，以便尽早 为临床提供诊断依据。
7、痰涂片保存



（1）镜检后的涂片应及时用浸满二甲苯 （分析纯）的擦镜纸揭取数次，彻底祛除 涂片上的镜油。 （2）涂片脱去镜油后，必须再次核对实验 室登记本与每张涂片实验序号。 （3）涂片上严禁标记镜检的阴、阳性结果。 （4）全部涂片按实验室登记本序号连续排 列，存放于玻片盒中。



2、检查步骤：现场评价操作步骤 ①试剂 ②供应 ③实验室安全 ④显微镜 ⑤用于室间质量保证的玻片储存 ⑥涂片、染色和镜检 ⑦现场复检 ⑧督导小组检查和/或复检印象 ⑨盲法复检痰片抽样 ⑩现场评估概述
2、盲法复检





盲法复检原则： ①从各个实验室抽取的涂片样品必须是随机选出 的，并能代表整个实验室的操作水平。 ②负责抽样的督导员，必须保证复检技术人员不 知道初检结果，以确保盲法复检真实性。 ③严格按照随机原则抽取涂片，以保证抽取的样 本在统计学上真正代表被评估实验室的整体水平。 ④涂片初检结果与第一复检者盲法复检结果之间 的分歧，由第二复检者复检后最终确定。 ⑤督导者应及时将复检结果反馈给被督导实验室， 以利于涂片技术与质量的不断提高。



（5）涂片保存与实验室登记本记录应保持一致。 初诊病人第一张涂片存入涂片盒后需预留出两个 空位置，以备第二张、第三张涂片检查后放入； 随访病人每一张涂片存入涂片盒后需预留出一个 空位置，以备每二张涂片检查后放入。 （6）按规定数量保存的用于室间质量评估的涂 片，未经上级质控单位准许不能自行销毁。 （7）装满涂片的玻片盒，需用标签注明涂片实 验序号区间和日期区间，以便日后盲法复检或现 场评价时抽样。
1.例如染料沉渣或结晶等被误 识为抗酸杆菌 2.原始报告后着色的抗酸杆菌 退色 1.观察涂片的视野数量不够 假阴性 （FN） 2.镜检技术能力差 3.染色操作不规范 4.显微镜存在问题 5染液质量差 量化误差 1.观察涂片的视野数量不够 （QE） 2.阳性涂片的分级报告标准掌 握差 3.镜检技术能力差 4.显微镜存在问题 假阳性 （FP）
（二）室间质控评估

室间质量评估是根据与其它网络实验室 （中间级实验室和中心实验室）比较批量 测试和盲法复检结果评价基层实验室能力 的过程。EQA包括实验室现场评估以评价 操作质量并且也包括现场对涂片的复读。 EQA是国际肺病和防痨联合会描述的熟练 度检测的扩大。
1、现场评估




（1）要求： ① 国家参比室每年对省级参比室至少进行1次现 场评价，同时每省至少抽查一个市及县级结核病 实验室 ② 省级参比室每年对所辖地（市）级实验室至少 进行1次现场评价，同时每地（市）抽查1-2县 级实验室；必要时，对同批量测试或盲法存在问 题的市、县实验室，适当增加现场评价频率。 ③ 市（地）级实验室每年对所辖县（区）实验室 每年至少进行2次现场评价。
4、染色



（1）肉眼观察染色后的痰膜应呈均匀亮蓝 色，无红色斑块。 （2）将染色后的玻片放置在报纸上，如果 透过痰膜不能分辨报纸上的文字，则表明 该玻片涂抹过厚。 （3）染色后的痰膜脱落部分应小于整个涂 抹面积的10%。
5、镜检要求




（1）为防止抗酸杆菌的交叉污染，严禁油 镜头直接接触涂片上的痰膜。 （2）仔细观察300视野。 （3）每个工作日，一名镜检人员的涂片阅 读量不应超过25张。 （4）连续阅读10-20张涂片后，应休息 20分钟左右。 （5）采用自查和互查方式，至少抽查复检 当日10%涂片，并填写室内质控登记表。


容器上应注明与检验单一致的病人姓名、 编号及日期。 需送上一级实验室检查的痰标本应置4℃冰 箱保存，外送前认真核对检验单与痰瓶上 标注，放专用的冰盒内运送，或用纸袋、 塑料袋封扎牢后顺序放入包装盒，盒外注 明请勿倒置标志。
（三）痰涂片操作流程及显微镜检 报告方式



盲法复检评价： 盲法复检的目的不是为了验证某个病人诊 断正确与否，而是评价整个实验室操作水 平。评价的内容除了涂片镜检结果存在的 误差之外，还包括检查标本的质量（合格 标本和不合格标本的比例）、涂抹的大不 和厚度、染色质量如何等，以便采取纠正 措施，提高实验室的工作质量。
谢谢！
3、基层只从事涂片镜检的实验室只拥有 一间独立房舍的情况下，相对洁净区（镜 检区、登记区）与污染区（涂片、染色区） 要有明显区分。
（二）痰标本的收集和运送



干酪痰、血痰或粘液痰为合格标本，量应 为3-5毫升。 难以获得合格标本时，也应进行细菌学检 查，但应注明标本性状，以供分析结果时 参考。 收集标本的容器应采用国家参比室推荐的 标准痰瓶，或采用直径4厘米、高2厘米的 广口塑料（或蜡纸）的或密闭容器。


（3）初诊病人应收集3份痰标本（当日即 时痰、夜间痰或次日晨痰），治疗中或复 诊随访病人按期每次收集2份痰标本（当日 即时痰、当日痰或次日晨痰）。 （4）对当日不能进行涂片检查的痰标本， 须置于4℃冰箱保存，注意防止痰液干涸或 污染。
2、抗酸染色液制备


（1）有染色液制备配方和配制纪录。 （2）染色液试剂瓶须标明染色液名称、浓 度和制备时间。 （3）染色液置于棕色瓶内存放，避光保存。
直接涂片法操作流程： 1、涂痰膜（大小10×20㎜），自然干燥 2、复红加热初染5分钟 3、流水冲洗 4、盐酸酒精脱色3分钟(必要时重复脱色，但不 要过度） 5、流水冲洗 6、美兰复染30秒 7、流水冲洗 8、自然干燥，镜检


显微镜检报告方式： 0条/300视野：萋-尼氏抗酸杆菌阴性 1-8条/300视野：实报菌数并重检 3-9条/100视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（+） 1-9条/10视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（2+） 1-9条/1视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（3+） ≥ 10条/1视野：萋-尼氏抗酸杆菌阳性（4+）



④ 对批量测试或盲法复检存在总是的县级 实验室必须尽快查找原因 ，提高涂片镜检 质量。 ⑤ 现场督导员应由经验丰富的实验室技术 人员担任，必须经高一级实验室有资格督 导员培训后方可上岗。 ⑥ 现场评价要按本操作细则所列项目顺序 进行，评价结果可结合当地结核病控制工 作考核评比给分。


⑦现场督导员的主要责任是通过现场评价 发现问题，提出正确的建议解决问题，提 高痰涂片镜检质量。 ⑧ 上级实验室对下级进行督导的时候，应 当核对调查表和被评估实验室实际情况， 为此各级调查表应当保存五年以上。
结核病 痰涂片检查及 质量保证
一、痰涂片检查
（一）结核病细菌实验室布局原则


1、结核病细菌学检查要有独立的实验室， 不得与其他实验室混用，最好为P3级实验 室； 2、培养基制备、洗刷等相对洁净的操作与 涂片镜检、培养前处理、药敏试验等污染 操作要有独立分开的场所，最好分别在专 用的房间进行；

（四）细菌、血样、干酪样的部分涂 片阳性率较高； 一张玻片只涂一份标本，玻片一次性使用， 防止交叉污染； 打开痰盒、涂抹痰膜、烧灼接种环时容易产 生气溶胶，应注意正确操作和自身防护； 石炭酸复红初染时必须加温。
常见误差原因
见下表
常见类型 可能原因
建议
专业处理：

二、痰涂片镜检的实验室质量 保证

按照世界卫生组织（World Health Organization)和国家结核病防治规划 (Nationaltuberculosis programme）的要求，在我国已全面推 行DOTS策略或DOTS策略得到良好的贯 彻执行的地区，为了持续提高结核病实验 室痰涂片检查的工作效率和可靠性，必须 建立我国结核病实验室质量保证系统网络。 在实验室内部质量控制的基础上，应用实 验室间质量检查和评估的方法，进行实验 室检查系统的评价，并通过采用一系列措 施改进和不断提高实验室业务总体水平。
（一）室内质量控制

室内质量控制(Quality Control,QC)指实验室内部的操作规程、 设备和耗材、痰标本收集、染色剂制备、 涂片制备和染色、显微镜维护、显微镜镜 检、结果登记和报告、以及痰片保存等整 个过程的内部检查和监测。
1、痰标本的收集


（1）容器：采用WHO推荐的国际通用螺旋盖痰 瓶，或可密封塑料盒、蜡纸盒收集痰标本（参考 规格：直径4厘米，高度2厘米）。痰容器应标明 病人姓名、日期、编号（初诊病人门诊序号或随 访病人登记号）和容器序号1、2、3（1=当日 即时痰，2=夜间痰，3=次日晨痰）。 （2）痰标本性质：干酷痰、血痰、粘液痰为合 格标本；唾液或口水为不合格标本，除照常进行 涂片检查外，应要求患者重新送检。