关于灵芝孢子油的扶正及减毒作用研究论文

关于灵芝孢子油的扶正及减毒作用研究

论文

（作者:___________单位: ___________邮编: ___________）

【关键词】灵芝孢子油；,,免疫,；,,环磷酰胺

摘要：目的观察灵芝孢子油的扶正减毒作用。方法以正常和H22荷瘤小鼠为对象，通过检测外周血WBC数、骨髓有核细胞数、脾脏指数、胸腺指数来观察口服灵芝孢子油(2.5，1.25，0.625 g/kg)对于环磷酰胺（Cy）化疗及60Co放疗的减毒作用；通过小鼠碳廓清实验、血清溶血素测定实验检测药物对H22荷瘤小鼠免疫功能的影响。结果灵芝孢子油中高剂量组均可明显对抗由大剂量Cy、60Co 照射造成的正常及荷瘤小鼠外周血WBC,骨髓有核细胞数，脾脏指数和胸腺指数下降(P＜0.01, P＜0.05)。灵芝孢子油各剂量均可显著提高荷瘤小鼠吞噬系数α，中高剂量组可明显提高荷瘤小鼠的血清半数溶血值（P＜0.01,P＜0.05)。结论灵芝孢子油可减低Cy和60Co所致的骨髓抑制毒性，并可显著提高小鼠细胞和体液免疫功能。

关键词：灵芝孢子油；免疫；环磷酰胺

灵芝是祖国医药宝库中的珍贵药品，我国最早的药学专著《神农本草经》将其列为“上品”。基于灵芝的确切临床治疗作用，近年来对其化学成分及作用机理进行了大量的研究，对灵芝的生殖细胞――孢子的药用价值研究也日趋深入。以往的研究表明，灵芝孢子具有显著的防癌、抗肿瘤作用，其功效是灵芝子实体的60～70倍。本实验所用灵芝孢子油是利用超临界CO2流体萃取技术从灵芝破壁孢子中提取出来并浓缩富集而得，其各种有效成分（如三萜类）的含量均较传统提取方法显著提高。本实验主要研究其对荷瘤小鼠的免疫调节及对常规放化疗的减毒作用，以期为灵芝孢子油的临床抗肿瘤辅助应用提供实验依据。

1 材料

1.1 药物灵芝孢子油，由广州灵芝孢子油现代中药研究开发有限公司提供，批号：050601，临用前用豆油稀释成所用浓度。云芝孢内糖肽胶囊，南京老山药业股份有限公司，批号：050104，规格：0.5 g×21粒，临用前用生理盐水成所用浓度。注射用环磷酰胺，上海华联制药有限公司，规格：200 mg/瓶，批号：020804。

1.2 瘤株与动物H22小鼠肝癌细胞，由中科院上海药物研究所提供。ICR小鼠，雌雄各半，18~22 g，由中国药科大学动物室提供,合格证号：苏动质SCXK（苏）2002-0011。

2 方法

2.1 灵芝孢子油对正常、H22荷瘤小鼠化疗(Cy)的减毒作用取ICR小鼠60只，按移植性肿瘤研究法［1］接种H22实体瘤，24 h

后随机分组，实验设：空白对照组，豆油对照组(20 ml/kg)，灵芝孢子油高、中、低剂量组(2.5，1.25，0.625 g/kg) ig给药，云芝胞内糖肽胶囊组(1 g/kg)ig给药。另取ICR小鼠60只，不接种荷瘤，分组给药方法同上。各组给药1次/d，共7次，各组于给药第4，5天（除空白组外），连续2 d ip Cy(100 mg/kg)，于停药后24 h，各组眼眶静脉取血，镜检外周血白细胞总数，同时摘取一侧完整股骨、胸腺、脾脏，分别测定骨髓有核细胞数，称胸腺、脾重，计算胸腺、脾脏系数，并进行统计学处理(t检验)。

2.2 灵芝孢子油对正常小鼠、H22荷瘤小鼠60Co放疗的减毒作用取ICR小鼠60只，按移植性肿瘤研究法［1］接种H22实体瘤，24 h后除空白对照组10只动物外，其余50只小鼠进行60Co 照射，剂量为500 rad；60Co照射后动物随机分为5组，实验设：空白对照组，豆油对照组(20 ml/kg)，灵芝孢子油高、中、低剂量组(2.5，1.25，0.625 g/kg) ig给药，云芝胞内糖肽胶囊组(1 g/kg)ig给药。另取ICR小鼠60只，不接种荷瘤，除空白对照组10只动物外，其余50只小鼠进行60Co照射，剂量为500 rad；60 Co照射后动物随机分为5组，分组及给药方法同上。各组均给药1次/d，共7次，于停药后24 h，各组眼眶静脉取血，镜检外周血白细胞总数，同时摘取一侧完整股骨、胸腺、脾脏，分别测定骨髓有核细胞数，称胸腺、脾重，计算胸腺、脾脏系数，并进行统计学处理(t检验)。

2.3 灵芝孢子油对H22荷瘤小鼠网状内皮系统吞噬功能的影

响取ICR小鼠50只，按移植性肿瘤研究法［1］接种H22实体型瘤。次日随机分为5组，实验设：豆油对照组(20 ml/kg)，灵芝孢子油高、中、低剂量组(2.5，1.25，0.625 g/kg) ig给药，云芝胞内糖肽胶囊组(1 g/kg)ig给药。共给药11次。于末次给药后24 h，尾静脉注射印度墨水，注入后1 min及5 min从小鼠眼眶后静脉丛取血，立刻吹入Na2CO3液中，于680 nm处比色，按下式计算廓清指数K 及吞噬系数α值。所得数据进行统计学处理(t检验)

廓清指数K=(logOD1- logOD5)/(t5-t1)

吞噬系数α=(体重/肝脾合重)×(K)1/3

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2.4 灵芝孢子油对H22荷瘤小鼠体液免疫功能的影响取ICR 小鼠50只。按移植性肿瘤研究法［1］接种H22实体型瘤。次日随机分为5组，实验设：豆油对照组(20 ml/kg) ig给药，灵芝孢子油高、中、低剂量组(2.5,1.25,0.625 g/kg) ig给药，云芝胞内糖肽胶囊组(1 g/kg)ig给药。共给药11 d，于第7天，各组小鼠腹腔注入绵羊红细胞0.2 ml/只(20%)进行初次免疫，末次给药1 h后，取血，分离血清，测定并计算半数溶血值HC50，进行组间t检验，比较差异的显著性。

3 结果

3.1 灵芝孢子油对正常小鼠、H22荷瘤小鼠化疗(Cy)的减毒作用结果如表1~2所示，与空白组相比，Cy可显著抑制正常小鼠和荷

瘤小鼠外周血WBC、骨髓有核细胞数、胸腺系数和脾脏系数（P＜0.01）。与Cy模型组相比，灵芝孢子油中高剂量组及云芝胞内糖肽组均可对抗H22荷瘤和正常小鼠脾脏系数、胸腺系数、WBC数和骨髓有核细胞数的下降(P＜0.05或P＜0.01)。

表1 灵芝孢子油对正常小鼠化疗的减毒作用(略)

与空白组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；与豆油+Cy组比较,*P＜0.05，**P ＜0.01，n=10

表2 灵芝孢子油对H22荷瘤小鼠化疗的减毒作用(略)

与空白组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；与豆油+Cy组比较，*P＜0.05，**P ＜0.01

3.2 灵芝孢子油对正常小鼠、H22荷瘤小鼠60Co放疗的减毒作用结果如表3、4所示，与空白组相比，60Co可显著降低正常小鼠和荷瘤小鼠外周血WBC、骨髓有核细胞数、胸腺系数和脾脏系数（P＜0.01）。与60Co模型组相比，灵芝孢子油中高剂量组及云芝胞内糖肽组均可明显抑制正常及荷瘤小鼠脾脏系数、胸腺系数、WBC 数和骨髓有核细胞数的下降（P＜0.01，P＜0.05）。

表3 灵芝孢子油对正常小鼠60Co放疗的减毒作用(略)

与空白组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；与豆油+60Co组比较,*P＜0.05，**P＜0.01，n=10

表4 灵芝孢子油对H22荷瘤小鼠60Co放疗的减毒作用(略)

与空白组比较，▲P＜0.05，▲▲P＜0.01；与豆油+60Co组比较,* P＜0.05，**P＜0.01，n=10