根际分泌物收集方法及测定

一、文献总结：

根际分泌物收集方法：土壤溶液原位取样法优于根际土壤收集法、溶液培法

萃取剂：二氯甲烷优于乙酸乙酯、乙醚

衍生化所用试剂：吡啶、BSTFA-TMCS（99:1）（N,O-双(三甲基硅烷基)三氟乙酰胺,含1%三甲

基氯硅烷）

二、实验方法

土壤处理：采集土壤（0-20cm）在室温下风干——研磨过40目筛（60目），称

取3g于（50ml离心管）具塞三角瓶中，以1:10比例加入蒸馏水，30℃ 200r/min

震荡1h，过滤即为根际分泌物粗提物，然后用30ml二氯甲烷提取2次，再将二氯

甲烷提取液过0.45微米滤膜，取1ml于样品中，减压浓缩至干，加入吡啶和（BSTFA-TMCS（99:1））各100微升在70℃衍生化30min。6小时GC-MS上机测定。

Detailed Procedures:

1.采集0-20cm土壤在室温下风干，研磨过40目筛子

2.称取2g于50ml离心管中，以1:10比例加入蒸馏水

3.在30℃转速200r/min 震荡1h

4.静置过滤，滤液即为根际分泌物粗提物，然后再过0.45μm滤膜

5.20mlCH2Cl2提取2次，提取液旋转蒸发浓缩至1ml，转移至

1.5ml样品瓶中，再旋转蒸发至干

6.加入吡啶100μl进行溶解，再加BSTFA-TMC（99:1）100μl盖紧

盖子，在70℃衍生化30min。

7.6小时内GC-MS上机测定。

原位收集：

采用Rhizon 土壤溶液采样器收集水稻根际分泌物，用30ml二氯甲烷萃取根际分

泌物30ml二次，再将二氯甲烷提取液过0.45微米滤膜，取1ml于样品中减压浓缩至干，加入吡啶100微升进行溶解，再加（BSTFA-TMCS（99:1））100微升在70℃衍生化30min。6小时内GC-MS上机测定。

Detailed Procedures:

1.取20ml根际土壤溶液于50ml离心管中，过0.45μm滤膜

2.20mlCH2Cl2提取2次

3. 提取液过旋转蒸发浓缩至1ml

4.转移至1.5ml样品瓶中，再旋转蒸发至干

5.加入吡啶100μl进行溶解，再加BSTFA-TMCS（99:1）100μl拧紧

盖子，在70℃衍生化30min。

6.6小时内GC-MS上机测定。

References

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三、所需衍生化试剂资源

试剂一：Sigma

N,O-双(三甲基硅)三氟乙酰胺(含三甲基氯硅烷)（N,O-Bis(trimethylsilyl)trifluoroacetamide）

CAS号： 25561-30-2

货号与规格：5238-100ML

试剂二：Sigma

吡啶（pyridine）

CAS号：110-86-1

货号与规格：33553-500ML

试剂三：阿拉丁

二氯甲烷（Dichloromethane）色谱纯

CAS号: 75-09-2

货号与规格：D116146-4×4L

梨型分液漏斗：100ml X 9个

BSTFA-TMCS（99:1）