实验方法总结：动物模型部分

从肿瘤起源分，肿瘤动物模型的分类如下：
实验动物肿 瘤模型
自发性肿瘤 诱发性肿瘤
模型
模型
移植性肿瘤 人体肿癌的
模型
异种移植性
原位诱发
异位诱发
原位移植
异位移植
同种可移植 异种可移植 性肿瘤 性肿瘤
从研究目的来分，可以从增殖、转移、耐药三个角度来分析：
1、研究肿瘤细胞增殖
细胞准备：GeneA 敲减慢病毒感染细胞扩增至需要的细胞量。分为：空白对照 组、阴性对照组、实验组。 取 Balb/c 裸鼠，雄性，6 周龄，每组 10 只，适应一周后进行肿瘤细胞注射。
2、研究肿瘤细胞转移
肿瘤转移的模型包括两大类：体外(浸润模型)和体内(转移模型)。体外(浸润模 型)：了解肿瘤细胞对周围相连组织的侵润性。体内模型主要研究肿瘤细胞的转 移性即肿瘤细胞在远端组织形成病灶的能力。
2.1. 体外(浸润模型)
例：浸润型脑胶质瘤动物模型的建立 方法：取若干只 Balb/c 免疫缺陷裸鼠，将分离和鉴定并转染携带绿色荧光蛋白 的脑胶质瘤干细胞立体定向法行小鼠颅内接种，每组 10 只。小鼠麻醉后头部正 中切口，剥离骨膜后钻孔(坐标是冠状缝后 0.5 cm，矢状缝右侧 2.5 cm) 。取 2 μL 胶质瘤干细胞以 1×104 cells /只小鼠的剂量，经微量注射器缓慢注射入鼠脑 纹状体内(深度是 2.5 ～3 mm) 。在确定的时间点处死一部分动物进行荧光( 立 体荧光显微镜下) 病理证实和比较，同时检查脑胶质瘤干细胞的体内生长特征以 及干细胞标志物等。
实验方法总结：动物模型部分
1、研究肿瘤细胞增殖...................................................................................................................... 1 2、研究肿瘤细胞转移...................................................................................................................... 2 2.1. 体外(浸润模型).........................................................................................................................2 2.2. 体内(转移模型).........................................................................................................................2 3、研究肿瘤细胞耐药...................................................................................................................... 4 3.1. 耐药细胞株的建立....................................................................................................................4 3.2. 裸鼠移植瘤耐药模型的建立....................................................................................................5
3、研究肿瘤细胞耐药
3.1. 耐药细胞株的建立
本实验以紫杉醇为诱导药，以人食管鳞癌细胞系 EC109 为诱导对象，采用高剂 量间歇诱导结合时间递增的方法建立耐药细胞株。终浓度为 0.625 μg/ml 的紫 杉醇（此浓度是紫杉醇对 EC109 细胞 IC50 的 12.5 倍）作用于对数生长期的 EC109 两个小时，之后弃含药培养基，用 4℃PBS 洗三次，0.25%胰蛋白酶消 化处理，800r/min 离心 4min 收集细胞，加培养基重悬，重新接种于培养瓶继
例：原位移植建立人肾透明细胞腺癌裸鼠转移模型，观察肿瘤病理学特征。 方法：收集体外培养的对数生长期 786-0 细胞（人肾透明细胞腺癌细胞），进行 裸鼠皮下注射，待皮下移植瘤长至直径为 1.5cm 左右时取出，以相同方法进行 鼠间传代（每代 2 只），3～4 代后取出移植瘤，剪成 1mm3 大小进行肾包膜下 原位接种，获人肿瘤裸鼠转移模型，即外科原位移植（Surgical Orthotopic Implantation，SOI）模型，裸鼠垂死时脱颈处死，取出肺脏转移灶体外培养， 胰酶消化传代 4～5 次后即获得较纯的肿瘤细胞，命名为 786-0-LM1。同时采用 786-0 细胞悬液进行肾包膜下原位注射，建立细胞原位注射模型。
XXX 细胞消化离心后制成单细胞悬液，计数后取适量的细胞用 PBS 悬浮，在 Balb/c 裸鼠侧腹部皮下接种。每只接种 2×106 个细胞，注射体积为 100 μL。 此后，每隔 5 天测量注射部位肿瘤的体积。30 天后裸鼠小鼠腹腔注射 80 mg/kg 戊巴比妥钠，小鼠麻醉后置蓝色背景布上拍照（侧卧位，接种部位朝上），小鼠 颈椎脱臼处死，取出肿瘤称重，将肿瘤置蓝色背景布上拍照，肿瘤一分为二，一 份 4%多聚甲醛固定，待后续病理分析，一份-80℃冻存。
2.2. 体内(转移模型)
来自百度文库
例：肩胛部皮下接种的方法建立裸鼠乳腺癌移植瘤模型，目的：观察壮骨镇痛胶 囊对裸鼠乳腺癌移植瘤模型骨转移相关指标整联蛋白αvβ3（ITG-αvβ3）及骨唾 液酸蛋白（BSP）表达的影响。 方法：取处于对数生长期的乳腺癌细胞 MDA-MB-231，用 0.25%胰蛋白酶消化 制成单细胞悬液，收集细胞，细胞计数板法计数，调节细胞浓度为 2×107 个/mL， 按 0.2 mL/只接种于裸鼠右前肢肩胛上区，接种部位可以见一皮丘，质软，2 天 后，皮丘基本吸收，10 天后接种部位可触及米粒大结节，质硬，即乳腺癌移植 瘤组织。检测壮骨镇痛胶囊对移植瘤组织中 IGT-αvβ3 和 BSP 表达的影响。