妇科感染常见病原菌及检测方法

病例一

患者，女性，24岁，已婚，孕25周。外阴瘙 痒一周来就诊。妇检：宫高与妊娠月份相符, 外阴潮红、充血，见大量黄色脓性分泌物。 考虑什么病？进一步做什么检查？

阴道炎


正常情况下阴道内寄居有大量需氧菌及 厌氧菌，形成正常的阴道菌群。 任何原因将阴道菌群生态平衡打破，可 形成条件致病菌，引起阴道炎。
转运拭子送检， 室温， 12h
室温，7d 置于 0.5mL 生理盐水或转运 拭子 ，室温， 2h 转运拭子送检， 室温， 12h 室温，7d
细菌性阴道病 （ pH>4.5 ）
定量革兰染色 DNA 杂交探针 盐水湿片 快速抗原检查
置于盐水送检， 室温， 30min（最佳）－ 2h
转运拭子或盐水送检， 室温， 24h 室温，7d 直接放入 InPouch TV 培养 系统送检 室温， 48h 室温，7d
6. 核酸扩增实验
盐水湿片
革兰染色
快速抗原检查

检测阴道毛滴虫特定的抗原 已有商品化试剂 最优试验条件并不需要活的微生物
培养
核酸扩增试验

APTIMA Trichomonas vaginalis (ATV) test （Gen-Probe, Inc. San Diego, CA）是近期 FDA 批准的检查，既可用于女性TV 的筛 检，也可用于诊断。


初代培养生长缓慢，24小时后可形成灰色/湿 润、半透明的小菌落（直径0.5-1mm）。 氧化酶阳性、触酶阳性、葡萄糖产酸试验阳性 且仅分解利用葡萄糖。
图片by陈东科
核酸扩增试验

已有商品化试剂盒。
优点是快速、准确，缺点是试验设备要求 高。 淋病奈瑟菌DNA 在感染成功治疗后，在标 本中仍可保留3周之久，所以不能作为治疗 评估指标。


为厌氧菌 革兰阴性弧菌 形态：呈弧形，两端尖细 排列：呈单个或呈双排列
细菌性阴道病的实验室诊断

1.
pH > 4.5
3.定量革兰染色——Nugent评分
2.
盐水湿片+10% KOH
4. DNA杂交探针
线索细胞
KOH 氢氧化钾
盐水湿片

线索细胞是诊断BV的最敏感特异的指标。
胺试验

将一滴阴道分泌物滴于玻片上，再加一滴 10％KOH，可闻到氨味或鱼腥样气味，即 胺试验阳性。
尿道炎/宫颈炎相关病原实验室检查
常见病原因子 诊断实验
盐水湿片 快速抗原检查 杂交探针 培养
最优标本
宫颈内或尿道拭子 宫颈内拭子 宫颈内或阴道拭子 宫颈内或尿道拭子 阴道、宫颈内拭子，尿，液基 细胞学标本，尿道、直肠、咽 部拭子 病变基底部刮取
转运要求及最佳时间
置于0.5mL盐水， 30min-2h 实验室提供转运装置， 室温， 24h 实验室提供转运装置， 室温， 7d
乳酸杆菌3分，加德纳菌/普雷沃菌等 3分，动 弯杆菌 4分。 评分：10分 诊断：BV
阴道毛滴虫
阴道的致病性厌氧寄生原虫，虫体为 845μm，呈梨形或椭圆形，无色透明，大小为
白细胞的2-3倍。
毛滴虫性阴道炎的实验室诊断

1.
pH > 4.5
4. DNA杂交探针
2.
盐水湿片
5. 培养
3.快速抗原检查
盆腔炎相关病原实验室检查
常见病原因 子 诊断方法 最优标本 转运要求及最佳时间
血培养和AST来评估少 见病原
混合厌氧菌 阴道菌从 肠杆菌科、 链球菌、 支原体 革兰染色 需氧和厌氧培养
血，20mL注入2瓶， 床边注入血培养瓶， 静脉穿刺采集 室温，1h
子宫内膜，输卵管卵巢脓肿和/或输卵 管内容物 子宫内膜活检 置入或注入无菌厌氧 容器，室温，30min 无菌容器，室温， 30min 福尔马林容器，室温， 30min-4h 实验室提供转运装置， 室温，2d
毛滴虫 （ pH>4.5 ）
DNA 杂交探针 培养
核酸扩增实验
病例1

患者，女性，24岁，已婚，孕25周。外阴瘙痒一 周来就诊。妇检：宫高与妊娠月份相符,外阴潮 红、充血，见大量黄色脓性分泌物。
医生：
根据病史及临床表现可初步诊断为阴 道炎。取阴道分泌物拭子，嘱病人立即送 检，以明确病原学诊断。
念珠菌性阴道炎
疾病
急性宫颈炎
致病菌
沙眼衣原体、淋病奈瑟菌
性传播病原体：沙眼衣原体、 淋病奈瑟菌、单纯疱疹病毒
慢性宫颈炎
内源性病原体：葡萄球菌、 链球菌、大肠杆菌等； 部分与引起阴道炎的病原菌 相同
尿道炎

是指尿道黏膜的炎症 。多为致病菌逆行侵 入尿道引起。
疾病
淋病性尿道炎
致病菌
淋病奈瑟菌 沙眼衣原体、解脲支原体、 阴道毛滴虫、嗜血短杆菌、 单纯疱疹病毒最常见 大肠埃希杆菌、链球菌属及 葡萄球菌属
医生：根据临床表现初步诊断为宫颈
炎。取宫颈内拭子，嘱病人立即送检 （注意保温），以明确感染病原体。
淋病奈瑟菌

革兰染色
为革兰阴性双球菌，似肾形或咖啡豆状，常 成双排列，凹面相对。 急性淋病患者的淋球菌常被吞噬于中性粒细 胞内；慢性淋病患者的淋球菌多分布在细胞外。
简便、快速，可做出初步诊断。仅对男性患 者进行涂片革兰染色。
阴道毛滴虫
直接接种在InPouch TV 培养系统，2-5d
实验室提供转运装置， 室温， 2d 床边制片，室温，24h 置于VTM/UTM，室温或 置于冰上，2h 实验室提供转运装置
核酸扩增实验 直接免疫荧光染色
HSV
培养
核酸扩增实验
病变基底部刮取
病变基底部刮取或分泌物拭子
病例二

患者，女性，40岁，已婚，阴道分泌物增多， 伴腰酸，偶有性生活后出血2年。检查外阴 正常，宫颈肥大，Ⅲ度糜烂，接触性出血。
乳酸杆菌革兰染色
定量革兰染色 ——Nugent评分
阴道加德纳菌革兰染色
定量革兰染色 ——Nugent评分
动弯杆菌革兰染色
定量革兰染色 ——Nugent评分
线索细胞革兰染色
定量革兰染色 ——Nugent评分
分数解释标准： 0-3 分 4-7 分 7-10 分 正常 中介 细菌性阴道炎
定量革兰染色 ——Nugent评分


杂交探针

目前FDA 已有批准的GC的杂交试验试 剂盒。
不可针对尿标本。

病例三

病人，女，24岁，主诉为持续3天的轻度排 尿困难，化脓性阴道分泌物，发热，并伴 有中度的双侧下腹痛。查体：子宫和附件 压痛，化脓性宫颈分泌物。
考虑什么病？进一步做什么检查？

盆腔炎




盆腔炎症性疾病是女性上生殖道一系列疾 病的总称。 包括： 子宫内膜炎 输卵管－卵巢脓肿 输卵管炎症 盆腔腹膜炎
非淋病性尿道炎
非特异性尿道炎
尿道炎/宫颈炎相关病原实验室检查
常见病原因子 诊断方法
核酸扩增实验
杂交探针 培养 直接免疫荧光染色 革兰染色
最优标本
尿液、宫颈内、阴道和/或尿 道拭子（直肠、咽部、结膜、 液基细胞学标本） 宫颈内或尿道拭子 宫颈内、尿道、结膜、 NP、 咽、直肠拭子 结膜拭子 尿道分泌物 尿液、宫颈内、阴道和/或尿 道拭子（直肠、咽部、结膜、 液基细胞学标本） 宫颈内或尿道拭子 宫颈内、尿道、结膜、 NP、 咽、直肠拭子
阴道粘膜生态系统
阴道炎

临床常见有：细菌性阴道病、念珠菌性阴 道炎、滴虫性阴道炎。
吴文湘, 廖秦平. 阴道炎的诊治进展[J]. 中国实用妇科与产科杂志, 2009(12):949-952.
阴道炎相关病原实验室检查
常见病原因子 诊断方法
盐水湿片 和 10％KOH
最优标本
阴道分泌物拭子
转运要求及最佳时间

主要病原菌为：
白色假丝酵母菌 光滑假丝酵母菌 热带假丝酵母菌 近平滑假丝酵母菌 约占80%-90%
约占10%-20%
念珠菌性阴道炎的实验室诊断

1.
pH < 4.5
3.培养
2.
盐水湿片+10% KOH
4.
DNA杂交探针
盐水湿片和10％KOH

检出孢子及假菌丝即可确诊。
培养

复发病例或有症状，但盐水/KOH 镜检阴性 时考虑培养。
可以使用多种标本类型。


一些实验室也可通过比对，验证自己的 PCR方法。
病例二

患者，女性，40岁，已婚，阴道分泌物增多， 伴腰酸，偶有性生活后出血2年。检查外阴 正常，宫颈肥大，Ⅲ度糜烂，接触性出血。 考虑什么病？进一步做什么检查？

子宫颈炎

子宫颈可因各种致病因素的侵袭而发生炎症， 有急性和慢性两种。
子宫内膜炎组织学证据
淋病奈瑟菌 沙眼衣原体 阴道毛滴虫 HIV
核酸扩增试验
尿液，宫颈内拭子
HIV EIA抗体
血清
促凝管，室温，2h
病例三

病人，女，24岁，主诉为持续3天的轻度排 尿困难，化脓性阴道分泌物，发热，并伴有 中度的双侧下腹痛。查体：子宫和附件压痛， 化脓性宫颈分泌物。
乳酸杆菌0分，上皮细胞周围非常清楚。 评分：0分
定量革兰染色 ——Nugent评分
乳酸杆菌0分，少量杂菌，见白细胞和菌丝。 评分：1分 诊断：BV阴性，但诊断为VVC
定量革兰染色 ——Nugent评分
乳酸杆菌2分，加德纳菌/普雷沃菌等 3分， 动弯杆菌 1分。 评分：6分 诊断：BV中间型
定量革兰染色 ——Nugent评分
妇科感染常见病原菌及检测方法
妇科感染常见疾病
阴道病/阴道炎 尿道炎
子宫颈炎
盆腔感染

子宫内膜炎 输卵管－卵巢脓肿 输卵管炎症
妇科感染实验室检查的意义

很多妇科感染症状、体征有很多相似之 处。临床诊断本身既不敏感，也不特异。
实验室诊断可以：


明确病原微生物，使治疗更具针对性； 提高患者治疗依从性； 使患者更有可能遵从性伴侣告知。
10%KOH 氢氧化钾
定量革兰染色 ——Nugent评分

定量革兰染色是BV 诊断最特异的检查。
形态类别 每个油镜视野菌体数 / 分值
0Βιβλιοθήκη Baidu
加德纳菌/普雷沃菌 (革兰染色不定、球杆 菌) 动弯杆菌 乳酸杆菌
得分
≤1
1-5
5 -30
>30
0
1
2
3
4
0 4
1 3
2 2
3 1
4 0
定量革兰染色 ——Nugent评分
盆腔炎致病菌
外源性病原体 主要为性传播疾病 病原体：淋病奈瑟 菌、沙眼衣原体、 支原体等
内源性病原体
来自于原寄生于阴道 的正常菌群，包括： 需氧菌和厌氧菌
内源性病原体

需氧菌及兼性厌氧菌：
金黄色葡萄球菌、链球菌、大肠埃希菌、 阴道加德纳菌等

厌氧菌：
脆弱拟杆菌、消化链球菌、普雷沃菌、真杆 菌等 感染特点：容易形成盆腔脓肿、感染性血栓 静脉炎，脓液有粪臭并有气泡
阴道加德纳菌




为革兰阴性或染色不定的球杆菌，有细胞 壁，无鞭毛，不形成荚膜和芽孢。 兼性厌氧 最适温度：时35℃-37 ℃ 最适PH：6.0-6.5
阴道加德纳菌


革兰染色：
大小：0.5μm ×1.5 - 2.5μm 形态：具有多形性，呈小杆状或球状 排列：呈单个或成双排列

动弯杆菌
置于 0.5mL 生理盐水或转运 拭子 ，室温， 2h
酵母菌 （ pH<4.5 ）
培养
DNA 杂交探针 盐水湿片和 10％KOH
阴道分泌物拭子
阴道分泌物拭子 阴道分泌物拭子 阴道分泌物拭子 阴道分泌物拭子 阴道分泌物拭子 阴道上皮/分泌物拭子 阴道分泌物拭子 阴道分泌物拭子 阴道拭子、宫颈拭子、尿液、 液基细胞学标本、尿道拭子、 直肠拭子、咽拭子
DNA 杂交探针

不需要活的微生物
需要特殊转运管


仅针对白色假丝酵母菌
FDA 批准仅用于有症状女性阴道分泌物

细菌性阴道病(BV)


阴道正常菌群（乳酸杆菌）减少，而其他 条件致病菌大量繁殖。 主要致病菌有：阴道加德纳菌、动弯杆菌、 普雷沃菌等厌氧菌和支原体等。
Fredricks D N, Fiedler T L, Marrazzo J M. Molecular identification of bacteria associated with bacterial vaginosis.[J]. New England Journal of Medicine, 2005, 353(353):1899-911.
转运要求及最佳时间
实验室提供转运装置， 室温， 2d 实验室提供转运装置， 室温， 2d 实验室提供转运装置， 4℃冷藏；< 2h 转运培养基，室温，2h 直接涂片或将拭子置于转 运培养基，室温，立即
沙眼衣原体
核酸扩增实验
淋病奈瑟菌
杂交探针 培养
实验室提供转运装置， 室温， 2d
实验室提供转运装置， 室温， 2d 转运培养基， 室温， ≤ 1h， 不要冷藏 标本
淋病奈瑟菌
细胞内革兰阴性双球菌 ——对GC 特异性达95％
细胞外革兰阴性双球菌 ——对GC 特异性达10-29％
培养

诊断淋病的重要手段
接种到选择培养基，置于36℃、含5-10% CO2 ，湿润环境中培养。 如果床边直接接种标本到选择培养基，加 CO2 药片形成气体环境，培养敏感性会更好。


培养