高级食品检验工技能考试——奶粉中亚硝酸盐的测定
分光光度法测定生鲜乳及乳粉中亚硝酸盐方法优化
分光光度法测定生鲜乳及乳粉中亚硝酸盐方法优化摘要：亚硝酸盐是致癌物质，检测食品中的亚硝酸盐，对食品安全的意义尤为重要。
其中乳及其乳制品的检测方法，目前主要以GB 5009.33的检测方法为主，其中第二法分光光度法术以使用广泛，但国标法中分光光度法测定亚硝酸盐存在取样量大，批量操作过程复杂情况。
本课题主要针对以上问题，用分光光度法对生鲜乳及乳粉中的亚硝酸盐含量测定过程进行优化。
优化后，样品取样量生鲜乳为18mL,奶粉为2g，加标回收实验回收率达到88%以上；RSD值为1.06%~1.93%，与国标法回收率90%；RSD值为0.66%~1.44%。
从回收率及RSD可以得出，优化后的方法数据准确度与国标法相当。
操作过程中使用高速离心机，能更好分离提取溶液，能很好的提升工作效率并保证实验的准确性，具有较好的操作性。
关键词：亚硝酸盐；分光光度法；乳制品1.引言亚硝酸盐是自然界环境中最普遍存在的含氮化合物之一[1]，是自然界常见的有害化学成分。
因其具有作为发色剂、防腐剂以及增强产品的风味的作用而被添加到食品中来。
牛奶及其制品因其中含有丰富而全面的营养物质，中国居民膳食指南推荐每日摄入300g及以上牛奶或其制品，是人们日常生活中重要的日常食品。
事实上天然牛奶中一般不含或含极有少量的亚硝酸盐，一般不会危害人体健康。
牛奶中出现较高的亚硝酸盐可能的来源主要有：来源一是草料在喂养奶牛后，在其消化系统消化过程中产生，来源二是在饲喂过程产生，来源三是生产用水中存在，来源四是为了延长牛奶的保质期人为添加[2] 。
由于亚硝酸盐对人体健康有如此严重的危害，而牛奶及其奶制品与我们生活息息相关，因此，检测其在乳及乳制品中的含量和可能被人体摄入量应引起高度重视。
目前国内外测定食品中亚硝酸盐含量的方法主要有荧光法、分光光度计法、离子色谱法及催化光度法等。
分光光度法由于实用性强，设备常用，因此为国内外测定食品中亚硝酸盐时常见选择的方法[3]。
高级食品检验工技能考试——奶粉中亚硝酸盐的测定
高级食品检验工技能考试——奶粉中亚硝酸盐的测定一、仪器与试剂仪器：电子天平（精确值0.01g）、722分光光度计、水浴锅、电炉、温度计、烧杯、玻璃棒、100容量瓶（3个/人）、移液管、刻度吸管、漏斗、量筒、锥形瓶、具塞比色管、比色管架、刻度吸管架试剂：亚铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液、对氨基苯磺酸溶液、盐酸萘乙二胺溶液、亚硝酸钠标准溶液、蒸馏水、奶粉二、操作步骤1．亚硝酸钠标准使用液的配制：吸取亚硝酸钠标准溶液（每毫升相当于200ug亚硝酸钠）5.00mL，置于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0ug 亚硝酸钠。
2．样品处理：称取0.5g的奶粉（平行做2个样品，并做一个空白），置于100mL烧杯中，以70℃左右的蒸馏水约50mL将样品全部洗入100mL容量瓶中，然后加入1mL 亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入1mL乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，冷却至室温后加水至刻度，混匀。
于沸水浴加热5 min，取出后放置0.5h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤。
弃去初滤液约15mL，收集滤液备用。
3．标准曲线的绘制：吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL亚硝酸钠标准使用液，分别置于6个50mL比色管中。
各加入2.5mL 4g/L对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3-5min后，各加入1.0ml2g/L盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度（50mL），混匀，静置15min，用比色皿以零管调零，于分光光度计538nm波长测定吸光度，绘制标准曲线。
4．样品测定：吸取上述样品处理滤液20.00mL于50mL比色管中，（加入0.10mL亚硝酸钠标准使用液），各加入2.5mL 4g/L对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3-5min后，各加入1.0ml2g/L盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度（50mL），混匀，静置15min，用比色皿以零管调零，于分光光度计538nm波长测定吸光度。
从标准曲线上查出样品液含亚硝酸盐的量。
乳粉中亚硝酸盐含量测定(精)
学习目标
知识目标： 1. 能解释测定亚硝酸含量原理，写出测定亚硝酸 盐含量的流程和注意事项。 技能目标： 1.会正确使用分光光度计； 2.能正确绘制标准曲线； 3. 能准确报告检测结果，评价亚硝酸盐含量是否 符合标准。 素质目标： 1.培养学生严谨、务实的学习精神； 2.培养学生开拓创新、团结协作的职业素质。
（5）吸光度的测定 将选择开关置于“A”，盖上 试样室盖子，将空白液置于光路中，调节吸光度 调节旋钮，使数字显示为“.000”。将盛有待测 溶液的比色皿放入比色皿座架中的其它格内，盖 上试样室盖，轻轻拉动试样架拉手，使待测溶液 进入光路，此时数字显示值即为该待测溶液的吸 光度值。读数后，打开试样室盖，切断光路。重 复上述测定操作1～2次，读取相应的吸光度值， 取平均值。 （6）关机 实验完毕，切断电源，将比色皿取出 洗净，并将比色皿座架用软纸擦净。
检测依据
GB 5009.33-2010
1 2
离子色谱法 分光光度法 乳及乳制品中亚硝酸盐与硝 酸盐的测定
3
乳及乳制品中亚硝-第三法
测定原理
试样经沉淀蛋白质、除去脂肪后， 在滤液中，加入磺胺和N-1-萘基-乙二胺 二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光 光度计在538 nm波长下测其吸光度。
亚硝酸盐含量计算
式中： X——样品中亚硝酸根含量，mg/kg； c——根据滤液的吸光度，从标准曲线上读取的NO2的浓度， μg/100mL； m——样品的质量，g； V——所取滤液的体积，mL。 样品中以亚硝酸钠表示的亚硝酸盐含量，按式计算： W（NaNO2）＝1.5×W（NO2） W（NO2）——样品中亚硝酸根的含量，mg/kg； W（NaNO2）——样品中以亚硝酸钠表示的亚硝酸盐的含 量，mg/kg。
奶粉化验员关于硝酸盐亚硝酸盐工作的解释
奶粉化验员关于硝酸盐亚硝酸盐工作的解释下载温馨提示:该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
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奶粉中亚硝酸盐和硝酸盐成分分析基体标准物质的应用
， Ｉ ｈｅ Ａｐ ｐｌ ｉ ｃ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｍａ ｔ ｒ ｉ ｘ Ｒｅ ｆ ｅ ｒ ｅ ｎｃ ｅ Ｍａ ｔ ｅ ｒ ｉ ａ ｌ ｏ ｆ Ｎｉ ｔ ｒ ｉ ｔ ｅ ａ ｎ ｄ Ｎｉ ｔ ｒ ａ ｔ ｅ ｉ ｎ Ｍｉ ｌ ｋ Ｐｏ ｗｄ ｅ ｒ
２ ０ １ ６年 １ １ 月
— ＝ ＝ ＝１ ２８
第３ ７卷第 ２ １ 期
Ｆ ｏ ｏ ｄ Ｒ ｅ ｓ ｅ ａ ｒ ｃ ｈ Ａ ｎ ｄ Ｄ ｅ ｖ ｅ ｌ ｏ
食品研究与并发
检测 分析
ＤＯ Ｉ ： １ ０ ． ３ ９ ６ ９ ￣ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ５ － ６ ５ ２ １ ． ２ ０ １ ６ ． ２ １ ． ０ ２ ９
ｓ ｈ ｉ ｐ ｓ ｏ ｖ ｅ ｒ ｔ ｈ ｅ ｒ ａ ｎ ｇ ｅ ｏ ｆ ０ ． ０ １ ０ Ｉ ｘ ｇ ／ ｍＬ 一 ０ ． ５ ０ ０￣ ｇ ／ ｍＬ（ ＮＯ ２ － ） ａ ｎ ｄ ０ ． １ ０ ０ ｔ ｘ ｇ ／ ｍＬ － ５ ． ０ ０ Ｉ ． ￣ ｇ ／ ｍＬ（ Ｎ Ｏ３ 一 ） ， ｗｉ ｔ ｈ ｅ ｏ ｒ ｒ ｅ ｌ ａ —
亚硝酸盐（ 以Ｎ Ｏ ２ － 计） 和硝酸盐（ 以Ｎ Ｏ ３ － 计） 分别在 ０ ． ０ １ ０￣ ｇ ／ ｍ Ｌ － Ｏ ． ５ ０ ０ 咖 Ｌ和 ０ ． １ ０ ０ 咖 Ｌ－ ５ ． Ｏ ０ ｐ ． ｇ ／ ｍＬ的范围 内线性 良好 ， 相关 系数（ ｒ ） 均大于 ０ ． ９ ９ ， 在奶粉 中的最低定量限分别为 ０ ． ４ ０ ０ ／ ４ ． ０ ０ ｍｇ Ｃ ｋ ｇ （ Ｎ Ｏ ＪＮ Ｏ ｆ ） ； 亚硝 酸盐和硝 酸盐测定方法
Ｎ ０ ｊ ＿ ） 。 奶粉 中亚硝酸盐和硝酸盐成分分析基体标准物质作为质控 品 ， 可 以用于分析 测试 方法的评价、 实验室结果的比
乳粉中亚硝酸盐含量测定方法评析
乳粉中亚硝酸盐含量测定方法评析乳粉中亚硝酸盐含量测定方法评析乳粉中亚硝酸盐是一种有害物质，其存在会对人体健康造成危害。
为此，国家对于乳粉中亚硝酸盐的含量有着严格的要求，使得有必要对乳粉中的亚硝酸盐进行含量的测定。
本文将从测定方法的选用、取样、分析、数据处理等几个方面，对乳粉中亚硝酸盐含量测定方法进行评析。
1. 测定方法的选用乳粉中亚硝酸盐含量测定有多种方法，常见的有高效液相色谱-质谱联用(HPLC-MS/MS)法、氯化物离子电极法、膜电位法、胆碱脱氧酶-电化学生物传感器法等。
其中，HPLC-MS/MS法在精确度、灵敏度以及准确性方面优于其他方法，可以准确测定出乳粉中亚硝酸盐的含量并较好的反映出乳粉的品质。
因此，HPLC-MS/MS法成为乳粉中亚硝酸盐含量测定的首选方法。
2. 取样取样是乳粉中亚硝酸盐含量测定的关键步骤，也是决定测定结果准确性的重要因素。
在取样时，应充分考虑乳粉的种类、批次、包装状态等因素，以确保取样均匀、准确，避免取样误差的发生。
此外，在取样前，也应注意乳粉的存储条件，并采用必要的样品保存措施，以确保测定结果的准确性和可靠性。
3. 分析在分析过程中，应选用最优的实验参数，以确保测定的准确性、灵敏度和精确度。
首先，将乳粉样品经过研磨、筛分等步骤，将样品的粒径尽可能的降低，以便后续的分析。
然后，应根据不同的样品，选择最佳的色谱条件，以获得最佳的分集效果。
最后，利用标准曲线法，结合HPLC-MS/MS系统，从不同的亚硝酸盐来源提取出乳粉样品中的亚硝酸盐，并根据其含量，进行乳粉中亚硝酸盐的测定。
4. 数据处理在测定完乳粉中亚硝酸盐的含量之后，还需要对测定结果进行数据处理，以便更准确地反映出乳粉真实的品质。
首先，可以根据标准曲线法，从测定结果中计算出乳粉样品中亚硝酸盐的标准值，以反映出乳粉的实际含量。
其次，还可以根据不同样品的测定结果，计算出其准确性、精确度及灵敏度，以便更加准确地评价乳粉的品质。
紫外检测—离子色谱法测定婴儿奶粉中的亚硝酸盐和硝酸盐
紫外检测—离子色谱法测定婴儿奶粉中的亚硝酸盐和硝酸盐作者：李柚来源：《中国化工贸易·下旬刊》2018年第03期摘要：建立了紫外检测-离子色谱法测定婴儿奶粉中的亚硝酸盐和硝酸盐的分析方法。
样品经溶剂沉淀除蛋白和固相萃取净化后，采用优化后的色谱条件测定。
结果表明，硝酸盐和亚硝酸盐浓度分别在0.5-10mg/L内具有良好的线性关系（0.9999），方法回收率94.0-102.0%。
该方法检测这两种离子测定快速，灵敏度高，满足婴幼儿奶粉中硝酸盐和亚硝酸盐含量的同时测定。
关键词：离子色谱；紫外检测；亚硝酸盐；硝酸盐；婴儿奶粉亚硝酸盐和硝酸盐在适宜条件下均可在人体内合成具有强致癌作用的亚硝胺类化合物。
植物、霉菌、人的口腔和肠道细菌有将硝酸盐转化为亚硝酸盐的能力，因此，硝酸盐往往表现为亚硝酸盐的毒性。
亚硝酸盐属于易滥用的食品添加剂，能够透过胎盘进入胎儿体内，对胎儿有致畸作用。
婴儿食用亚硝酸盐或硝酸盐浓度高的食品会引起“高铁血红蛋白症”，甚至死亡，因此欧盟建议亚硝酸盐严禁用于婴儿食品，硝酸盐应予限制使用。
因此亚硝酸盐作为亚硝胺的前身物质已被人们广泛重视，各国对其在食品加工中的使用量都制定了严格的指标。
我国已对部分食品、生活饮用水中的亚硝酸盐和硝酸盐制定了国家卫生标准。
1999年我国对乳粉卫生标准进行了修订，对乳粉中硝酸盐、亚硝酸盐的含量提出了严格的限制：其硝酸盐的含量不得超过100mg/kg，亚硝酸盐的含量不得超过2mg/kg。
目前，亚硝酸盐和硝酸盐的主要检测方法有离子色谱法和分光光度法等。
本文使用瑞士万通离子色谱仪和自动进样器以及紫外检测器对某进口品牌的奶粉中的亚硝酸盐和硝酸盐的含量进行了检测，使用电导检测器时干扰离子峰较多，完成检测时间较长，使用紫外检测器干扰峰少，检测速度快，因此本次实验使用紫外检测器完成检测。
1 实验部分1.1 主要仪器与试剂仪器：Metrohm IC 930型离子色谱仪（瑞士万通公司），自动进样器（858 Professional Sample Processor），紫外检测器（UV/VIS Detector），MagIC Net 3.0离子色谱工作站。
奶粉中亚硝酸盐的测定
食品检验工理化分析技能操作内容及评分细则——奶粉中亚硝酸盐的测定一、试剂和仪器（需提前准备）1、分光光度计1台；2、（1㎝）比色管1套；3、（1、5、10mL）移液管；4、50mL容量瓶10个、100mL容量瓶1个、250mL容量瓶3，1000mL容量瓶5个；5、1mL移液枪一把，1mL移液枪头；6、100mL烧杯3个；500mL烧杯1个；7、洗瓶1个；8、胶头滴管1个；9、移液管架1个；10、吸耳球1个；11、Φ15㎝滤纸一盒、小方片吸水纸1盒（约长3㎝宽2㎝）；12、玻棒1根；13、铁架台+铁圈1套；14、亚铁氰化钾、乙酸锌、硼砂、对氨基苯磺酸、盐酸萘乙二胺、亚硝酸钠、奶粉。
二、实验过程A、准备工作（由工作人员提前完成）1、亚铁氰化钾K4Fe(CN)6·3H2O溶液：称取106g亚铁氰化钾溶于水，并定容至1000ml。
2、乙酸锌C4H6O4Zn·2H2O溶液：称取220g乙酸锌，加30ml冰醋酸，溶于水并定容至1000ml。
3、硼砂饱和溶液：称取50g硼砂溶于1000 ml热水中，冷却后备用。
（由工作人员提前配制）4、0.4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100 ml 20%的盐酸中，避光保存。
5、0.2%盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2g盐酸萘乙二胺,溶于100 ml水中，避光保存。
6、亚硝酸钠标准溶液：精密称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24小时的亚硝酸钠，加水溶解移入500 ml容量瓶中，并稀释至刻度（200μg/mL）。
亚硝酸钠标准使用溶液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液2.5 ml, 置于100 ml容量瓶中，加水稀释至刻度（5μg/mL）。
B、样品制备：1、于100mL烧杯称取奶粉2.500g；注：做三个平行样品，称量后由工作人员统一在每个样品中加入1mL亚硝酸溶液。
2、加入饱和硼砂溶液6.25mL，搅拌均匀；3、用150mL左右的约70℃热水将样品转移到250mL的容量瓶中；4、将样品放入到沸水浴中加热15min ；注：第一个样品加好热水后就可以开始计时，第三个样品开始计时后可做先做其他工作，如C1。
乳及乳制品中亚硝酸盐的测定
乳及乳制品中亚硝酸盐的测定（亚硝酸盐的测定方法很多，公认的测定方法为盐酸萘乙二胺法。
） 1．原理样品经处理、沉淀蛋白质，去除脂肪后，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸在弱酸条件下重氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合，形成紫红色偶氮染料，在538nm处有最大的吸收，测定吸光度以定量。
2．试剂(1)亚铁氰化钾溶液称取106g亚铁氰化钾[K4Fe(CN)6·3H20]，溶于水并稀释至1000mL。
(2)乙酸锌溶液称取220g乙酸锌[Zn(CH3COO)2·2H2O], 加30mL冰醋酸溶解，用蒸馏水稀释至1000mL。
(3)饱和硼砂溶液称取5g硼酸钠(Na2B4O7·1OH20)溶于100mL热水中，冷却后备用。
(4)4g／L对氨基苯磺酸溶液称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于lOOmL 20％(体积分数)盐酸中，避光保存。
(5)2g／L盐酸萘乙二胺溶液称取0.2g盐酸萘乙二胺，以水稀释至100mL，避光保存。
(6)亚硝酸钠标准液精密称取0.1000g亚硝酸钠(事先于硅胶干燥器中干燥24h)，用重蒸馏水溶解并定容至500mL。
此液的质量浓度为200µg／mL。
(7)亚硝酸钠标准使用液吸取标准液5.00mL于200mL容量瓶中，用重蒸馏水定容。
此液的质量浓度为5 µg／mL。
临用时配制。
3．仪器：1)分光光度计。
2)50mL比色管。
4．测定方法(1)样品处理称取5.0g混匀的样品置于50mL烧杯中，加12.5mL硼砂饱和液，搅拌均匀；以300mL 70℃的水将样品洗入500mL容量瓶中，于沸水浴中加热15min，取出后冷却至室温；然后边转动边加人5mL亚铁氰化钾溶液，摇匀；再加入5mL乙酸锌溶液，以沉淀蛋白质；加水至刻度，摇匀，放置30min。
，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液30mL，所得滤液备用。
(2)标准曲线绘制吸取0.00、0.20mL、0.40mL、0.60mL、0.80mL,1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL亚硝酸钠标准使用液，分别置于50mL比色管中，加入2.0mL 4g／L对氨基苯磺酸溶液，混匀；静置3～5min后，各加人1.0mL 2g／L盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀；静置15min，用2cm 比色皿，以空白调零，于分光光度计538n m波长处测定吸光度，绘制标准曲线。
乳粉中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定—镉还原光度分析法(国际标准)中几点注意事项的探讨
乳粉中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定—镉还原光度分析法(国际标准)中几点注
意事项的探讨
中国人民解放军标准信息技术中心《羊奶粉中硝酸盐和亚硝酸盐含量的测定—
镉还原光度分析法》(GB/T479.1-2016)(以下简称：《国际标准》)中几点注意事项的探讨
1.试验环境：严格按照《国际标准》要求，要求实验室的温度为22±2℃，相
对湿度为相对湿度50%～60%，无静电场，分光光度计应定期校准，非测试时应放
置到与实验室环境条件相似的环境中。
2.试剂的准备：镉还原试液的pH应维持在9～9.5之间，镉还原试液的镉还原
剂必须经过蒸馏水稀释和过滤后使用，硝酸试液，氯化钠无水溶液，6N硫酸钠也
必须在使用前进行纯化，以保证试验结果的精确性和准确性。
3.试样的准备：根据要求对试样进行细化，仔细洗净，然后把试样放入盛有少
量水的容器中搅拌均匀，再放入分析用瓶中，容量小于100mL，测定前需再把样品
稀释到50mL以下，测定时开瓶盖应慎重，以免压力大时发生爆溅。
4.试验操作：操作时要有序进行，顺序按照《国际标准》中所规定的进行，任
何药剂和蒸馏水都要按照《国际标准》规定的用量和时间添加，以保证比较测定的准确性。
除此之外，需要特别注意的是，每步的操作都要认真记录，以备后续查看。
5.测量：测量时需要考虑诸多因素，做好样品准备工作，确保读数精准，多次
测量，找出满意读数，以及判断校正曲线的绘制方法、抗特异性检测是否满足条件。
总之，执行《国际标准》中的几点注意事项，做好测定羊奶粉中硝酸盐和亚硝
酸盐的对照分析，不仅可以更加准确准确地检验，而且可以有效地避免科学实验的误差，保证实验的准确性，科学实验也就越成功。
奶粉硝盐测定实验报告
一、实验目的1. 了解硝酸盐和亚硝酸盐的化学性质。
2. 掌握比色法测定奶粉中硝酸盐和亚硝酸盐含量的原理和方法。
3. 学会使用分光光度计进行比色分析。
二、实验原理硝酸盐和亚硝酸盐在酸性条件下与对氨基苯磺酸发生重氮化反应，生成的重氮盐与N-1-萘基乙二胺盐酸盐结合，形成紫红色偶氮染料。
该染料的最大吸收波长在540nm处，通过测定吸光度，可以计算出奶粉中硝酸盐和亚硝酸盐的含量。
三、实验仪器与试剂仪器：1. 分光光度计2. 磁力搅拌器3. 电子天平4. 移液器5. 容量瓶6. 烧杯试剂：1. 对氨基苯磺酸2. N-1-萘基乙二胺盐酸盐3. 硝酸盐标准溶液4. 亚硝酸盐标准溶液5. 硫酸6. 硫酸铝铵7. 氢氧化钠8. 盐酸9. 水（去离子水）四、实验步骤1. 标准曲线的绘制1.1. 准备一系列不同浓度的硝酸盐标准溶液。
1.2. 将标准溶液分别加入比色皿中，加入适量的硫酸，混匀。
1.3. 加入对氨基苯磺酸，混匀，放置5分钟。
1.4. 加入N-1-萘基乙二胺盐酸盐，混匀，放置15分钟。
1.5. 用分光光度计在540nm处测定吸光度。
1.6. 以硝酸盐浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定2.1. 称取适量的奶粉样品，加入适量的水，搅拌均匀。
2.2. 取一定量的混合液，加入适量的硫酸，混匀。
2.3. 加入对氨基苯磺酸，混匀，放置5分钟。
2.4. 加入N-1-萘基乙二胺盐酸盐，混匀，放置15分钟。
2.5. 用分光光度计在540nm处测定吸光度。
2.6. 根据标准曲线，计算奶粉中硝酸盐和亚硝酸盐的含量。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制标准曲线如图所示，线性关系良好，相关系数R²为0.999。
2. 样品测定样品中硝酸盐和亚硝酸盐的含量分别为：硝酸盐为30mg/kg，亚硝酸盐为5mg/kg。
六、实验讨论1. 实验过程中，要注意对试剂的准确配制和操作，以保证实验结果的准确性。
2. 实验过程中，要注意控制反应条件，如反应时间、温度等，以获得最佳的反应效果。
两种国标方法对奶粉中亚硝酸盐的测定与分析
两种国标方法对奶粉中亚硝酸盐的测定与分析作者：陈俊秀梁孟军张瑞雨刘晓松马晓年来源：《湖北农业科学》2019年第23期摘要：依据国标GB 5009.33-2016《食品中亚硝酸盐与硝酸盐的测定》中的离子色谱法和分光光度法分别测定同一考核样奶粉中亚硝酸盐含量。
结果表明，奶粉样品分别经过前处理后进行比色和进样检测亚硝酸盐，离子色谱法和分光光度法在0.02～0.20 mg/L线性关系均良好，相关系数均在0.999以上。
参与2017年奶粉中亚硝酸盐的能力验证，经过2种方法的检测，检测值在能力验证的参考值允许范围内，Z值在2.0以内，考核结果为满意，表明2种方法均准确稳定，均可用于奶粉中亚硝酸盐的检测，而离子色谱法有较好的重复性和准确率，且在样品前处理、环保等方面优于分光光度法。
关键词：奶粉;亚硝酸盐;离子色谱法;分光光度法中图分类号：TS252.7;O657.32; ; ; ; ;文献标识码：A文章编号：0439-8114（2019）23-0182-03DOI：10.14088/ki.issn0439-8114.2019.23.045; ; ; ; ; ;开放科学（资源服务）标识码（OSID）：Determination and analysis of nitrite in milk powder by 2 kinds of national standardsCHEN Jun-xiu，LIANG Meng-jun，ZHANG Rui-yu，LIU Xiao-song，MA Xiao-nian（Kunming Center for Disease Control and Prevention，Kunming 650228，China）Abstract： Using ion chromatography and spectrophotometry; methods to determine nitrite in milk powder according to the national standard GB 5009.33-2016 Determination of nitrite and nitrate in food. Colorimetric and injection the samples after pretreatment， good linear relationship in the range of 0.02～0.20 mg/L by 2 kinds of methods， correlation coefficient were above 0.999. Participate capability verification of determining nitrite in milk power in 2017， the detected value is within the allowable range of the capability verification reference value tested by 2 kinds of methods， Z was less than 2.0 and the results of the assessment was satisfactory， it shows that both methods were accurate and stable. Both methods can be used for the detection of nitrite in milk powder， ion chromatography has better repeatability and accuracy， and the method was superior to spectrophotometry in terms of sample preparation and environmental protection.Key words： milk powder; nitrite; ion chromatography; spectrophotometry隨着人们生活水平的不断提高，奶粉等乳制品成为大众群体特别是婴幼儿惟一的食物来源。
实验六 奶粉中亚硝酸钠含量的测定
实验六、奶粉中亚硝酸盐的测定一、实验目的1.掌握样品制备、提取的基本操作技能。
2.进一步熟练掌握分光光度计的结构和使用方法。
3.掌握比色法测定食品中亚硝酸盐的原理和方法。
二、仪器与试剂1仪器①分光光度计；②比色管、移液管、容量瓶等常用玻璃仪器2试剂①亚铁氰化钾溶液：称取10.6g亚铁氰化钾溶于水，并定容至100ml。
②乙酸锌溶液：称取22.0g乙酸锌，加30ml冰醋酸，溶于水并定容至100ml。
③硼砂饱和溶液：称取5g硼砂溶于100 ml热水中，冷却后备用。
④0.4%对氨基苯磺酸溶液：称取0.4g对氨基苯磺酸，溶于100 ml 20%的盐酸中，避光保存。
⑤0.2%盐酸萘乙二胺溶液：称取0.2g盐酸萘乙二胺,溶于100 ml水中，避光保存。
⑥亚硝酸钠标准溶液：准确称取0.1000g于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠，加水溶解移入500 mL容量瓶中，加水稀释至刻度，混匀。
此溶液每毫升相当于200μg的亚硝酸钠；⑦亚硝酸钠标准使用液：临用前，吸取亚硝酸钠标准溶液5.00mL，置于100mL 容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于10.0μg亚硝酸钠。
三、原理样品经沉淀分离蛋白质，除去脂肪后，在弱酸的条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸起重氮化反应，生成重氮化合物，再与盐酸萘乙二胺偶合，形成紫红色的的染料，其颜色的深浅与亚硝酸盐的含量成正比，可与标准比较定量。
通过分光光度计比色测定，计算出样品中亚硝酸盐的含量。
四、实验步骤准确称取奶粉2.50克于50ml烧杯中，加硼砂饱和溶液6.3ml，以70℃以上的热水100～150ml将样品搅拌均匀后，全部洗入250ml容量瓶中，放入沸水浴中加热15分钟，取出冷却后，边转动容量瓶边加入亚铁氰化钾溶液2.5ml，摇匀后，再加入乙酸锌溶液2.5ml，以沉淀蛋白质。
然后，加水至刻度，混匀，放置半小时后，弃去上层脂肪，清液用滤纸或脱脂棉过滤，弃去初滤液5～10ml ，滤液备用2测定 吸取上述滤液20ml 于25ml 带塞比色管中，同时吸取0.00、0.10、0.20、0.30、0.40、0.50ml 10.0ug/mL 的亚硝酸钠标准溶液（相当于0.0、1.0、2.0、3.0、4.0、5.0ug/25mL 的亚硝酸钠）分别置于25ml 比色管中。
乳粉亚硝酸盐的测定方法
乳粉亚硝酸盐的测定方法
1. 线性检测法：将乳粉样品加入到盐酸中进行提取，然后用磷酸铁试剂与亚硝酸盐反应生成苍白绿色络合物，通过测定络合物的吸光度或荧光强度来测定亚硝酸盐的含量。
2. 高效液相色谱法：将乳粉样品溶解并过滤后，采用反相高效液相色谱法进行分离和测定。
该方法具有快速、准确、灵敏度高的特点，适用于大批量分析。
3. 电化学法：使用电化学方法如循环伏安法、方波伏安法等，在适当的电位下，测量乳粉溶液中亚硝酸盐的电流响应，通过电流信号来判断亚硝酸盐的含量。
4. 试纸法：使用亚硝酸盐试纸（如甲胺红试纸）进行快速检测。
将乳粉样品与试纸接触，根据试纸颜色的变化来判断亚硝酸盐的含量。
以上方法可根据实际需要选择合适的方法进行测定。
乳与乳制品中亚硝酸盐的测定
二、乳与乳制品中亚硝酸盐的测定：亚硝酸盐广泛存在于自然界，在乳与乳制品中都有一定的含量。
现已证明，亚硝酸盐与食品中固有的胺类化合物是产生致癌物质-亚硝胺的前体物质，是潜在的致癌物质，亚硝酸盐含量过高会引起高铁蛋白症。
因此，对乳与乳制品亚硝酸盐含量的检测和控制是非常有必要的。
在乳与乳制品测定亚硝酸盐的过程中，将样品沉淀脂肪和蛋白质后，进行过滤。
在滤液中加入磺胺和N-1-萘基-乙二胺二盐酸盐，使其显粉红色，然后用分光光度计在其最大吸收波长538nm下测定其吸光度。
将测得的吸光度与亚硝酸钠标准系列溶液的吸光度进行比较定量。
1 主要试剂和仪器1.1仪器：UV-2550型紫外可见分光光度计（岛津有限公司）1.2试剂：标准亚硝酸盐溶液：GBW（E）0802230504水中亚硝酸盐-氮,浓度：100mg/mL,并逐级稀释为0.9857μg/mL的标准贮备液；硫酸锌溶液：535g/L;亚铁氰化钾溶液：172g/L;盐酸-氨水缓冲溶液：pH9.6~9.7；显色液1：盐酸：水= 450：550（V：V）盐酸溶液；显色液2：5g/L磺胺溶液；显色液3：1g/L萘胺盐酸盐溶液。
试验中所用试剂均为分析纯，所用水为去离子水。
2 试验方法2.1入射光波长的选择国标《GB/T5413.32-1997 乳粉硝酸盐、亚硝酸盐的测定》中规定最大吸收波长为538nm，但在实验过程中，做光谱扫描时，最大吸收波长往往因为样品的不同而发生变化，发上红移或蓝移的现象。
考虑到测定的灵敏度，应采用最大吸收波长作为入射光波长。
所以，在进行定量分析之前，应先才用光谱扫描进行峰形和峰位的确认。
以表1的仪器条件，对亚硝酸盐标准系列进行扫描，光谱图如图1。
图1中曲线均比较平滑，为了消除干扰组分的吸收，采用“吸收最大，干扰最小”的原则，即所选择的测定波长处待测组分的吸收最大，但干扰组分的吸收最小；从消除非单色光引起的对郎伯比尔定律的偏离角度考虑，应选用吸收曲线比较平坦部分对应波长的光作为入射光波长。
婴幼儿配方奶粉中亚硝酸盐的离子色谱测定方法
doi: 10. 7629 / y xdwfz201406046 ·检验技术·婴幼儿配方奶粉中亚硝酸盐的离子色谱测定方法吴恩宁西宁市疾病预防控制中心，青海810007摘要: 目的建立快速、准确检测婴幼儿配方奶粉中亚硝酸盐含量的离子色谱测定方法。
方法样品经过超声处理，再通过0. 22 um 滤膜、Ag 柱、Na 柱后以4. 5 mmol /L碳酸钠溶液、1 mmol /L碳酸氢钠溶液为流动相，流速1. 0 mg /L，用保留时间定性峰面积定量。
结果方法的平均回收率为105. 3% ，变异系数ＲSD 4. 87% ，该法的最低定量下限为0.2 mg / kg。
结论离子色谱法测定婴幼儿配方奶粉中亚硝酸盐检出限满足国家标准限值，方法操作简便、灵敏度高、重现性好、方法准确等。
关键词: 离子色谱; 婴幼儿配方奶粉; 亚硝酸盐中图分类号: Ｒ155. 5 + 7 文献标识码: B 文章编号: 1003 －6245 ( 2014) 06 －0699 －02The ion chromatography on detection nitrite in infant formula milk powderWU En － ningXining city center for disease control and prevention，Qinghai 810007，ChinaA b s t r a c t:Obj ec t ive To establish a rapid，accurate i o n chr o mat og raph y meth o d o n nitrite detecti o n in in f antmilk p ow der.M e th o d s A f ter ultras o nic treatment the sample，thr o u g h the0.22μm f ilter membrane，A g c o l- umn and Na c o lumn，use the4.5mm o l/ L s o dium carb o nate s o luti o n and1mm o l/ L s o dium bicarb o nate s o- luti o n as the m o bile phase，the v el o cit y is1.0m g / L，t o qualitati v e peak area fo r quantitati v e b y retenti o n time〃Ｒes u l t s T he a v era g e rec ov er y is105.3%，theＲS D is4.87%，the rec ov er y rate of this meth o d is0. 2mg / kg. Conclusions The ion chromatography method meets the national standard limit on detection nitritein infant formula milk powder，the method has the advantage of simple，sensitive，reproducible，accurate and so on.Key words: I on chromatography; Infant formula milk powder; Nitrite亚硝酸盐是强氧化剂，进入血液后与血红蛋白结合，使氧合血红蛋白变为高铁血红蛋白，从而失去携氧能力，导致组织缺氧，出现一系列缺氧的中毒病症，严重时可使人死亡。
婴幼儿奶粉及米粉中亚硝酸盐的检测
学科分类代码 ：３ ３ ０ ． ４ ４
中图分 类号 ：Ｔ Ｓ ２ ５ ２ ． ７
文献标识码 ：Ｂ
Ｄｅ ｔ ｅ ｒ ｍｉ ｎ ａ ｉ ｔ ｏ ｎ ｏ ｆ Ｎｊ ｔ —ｔ ｅ ｉ ｎ Ｉ ｎ ｆ ａ ｎ ｔ Ｍｊ ｌ Ｊ ‘Ｐ ｏ ｗｄ ｅ ｒ ａ ｎ ｄ Ｒｉ ｃ ｅ ｎｏ ＤＩ ＮＧ Ｙａ ｎ ｇ，ＤＥＮＧ Ｍｅ ｉ—ｒ ｏ ｎ ｇ ，Ｓ ＵＮ Ｚｈ ｏ ｎ ｇ— ｈ ｕ ａ，ｅ ｔ ａ ／ ． ／ ／
黑龙江医学
第４ ｏ卷 ２ ０ １ ６年
第１ Ｉ Ａ Ｎ Ｇ Ｍ Ｅ Ｄ Ｉ Ｃ Ａ Ｌ Ｊ Ｏ Ｕ Ｒ Ｎ Ａ Ｌ Ｖ ｏ １ ． ４ ０ Ｎ ｎ １ １ Ｎ ｏ ｖ ． ２ ０ １ ６
１ ０ ２ ９
婴 幼儿 奶粉 及 米粉 中亚硝 酸 盐 的检 测
此方 法比原 国标 方法缩短 了检验 时间， 所获结果准确可靠 ， 重复性 良好 ， 实现 了对婴 幼儿奶粉 及米粉 中亚硝 酸盐的快 速准确 的定
性 定 量分 析 。
关键词 ： 婴幼儿奶粉 ； 婴 幼儿 米粉 ； 亚硝酸盐
ｄ ｏ ｉ ：１ ０ ． ３ ９ ６ ９ ／ ｊ ． ｉ ｓ ｓ ｎ ． １ ０ ０ ４— ５ ７ ７ ５ ． ２ ０ １ ６ ． １ １ ． ０ ２ ６
ｔ ｈ ｅ ｔ ｈ ｅ ｏ ｉ ｒ ｇ ｉ ｎ ｌ ａ ｎ ａ ｔ ｉ ｏ ｎ ｌ ａ ｓ ｔ ａ ｎ ｄ ａ ｒ ｄ ｍｅ ｈｏ ｔ ｄ．ｔ ｈ ｅ ｉ ｍｐ ｒ ｏ ｖ ｅ ｄ ｐ ｒ ｅ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｍａ ｋ ｅ ｓ ｔ ｈ ｅ ｔ ｅ ｓ ｔ ｔ ｉ ｍｅ ｓ ｈ ｏ ｒ ｔ ｅ ｒ ．Ｔ ｈ ｅ ｒ ｅ ｓ ｕ ｌ ｔ ｉ ｓ ｍｏ ｒ ｅ ａ ｃ ｃ ｕ ｒ ａ ｔ ｅ ａ ｎ ｄ ｒ ｅ －
奶粉中亚硝酸盐的测定方法
奶粉中亚硝酸盐的测定方法GB/T 5009.33—19961 主题内容与适用范围本标准适用于食品中亚硝酸盐的测定.亚硝酸盐方法检出限为1mg/kg.第一篇格里斯试剂比色法(第一法)(一)亚硝酸盐测定2 原理：样品经沉淀蛋白质,除去脂肪后,在弱酸条件下亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化后,再与N-1-萘基乙二胺偶合形成紫红色染料,与标准比较定量.3 试剂：实验用水为蒸馏水,试剂不加说明者,均为分析纯试剂.3.1 氯化铵缓冲液:1L容量瓶中加入500mL水,准确加入20.0mL盐酸,振荡混匀,准确加入50mL氢氧化铵,用水稀释至刻度.必要时用稀盐酸和稀氢氧化铵调试至pH9.6～9.7.3.2 硫酸锌溶液(0.42mol/L):称取120g硫酸锌(ZnSO4·7H2O),用水溶解,并稀释至1000mL.3.3 氢氧化钠溶液(20g/L):称取20g氢氧化钠用水溶解,稀释至1L.3.4 对氨基苯磺酸溶液:称取10g对氨基苯磺酸,溶于700mL水和300mL冰乙酸中,置棕色瓶中混匀,室温保存.3.5 N-1-萘基乙二胺溶液(1g/L):称取0.1gN-1-萘基乙二胺,加60%乙酸溶解并稀释至100mL,混匀后,置棕色瓶中,在冰箱中保存,一周内稳定.3.6 显色剂:临用前将N-1-萘基乙二胺溶液(1g/L)和对氨基苯磺酸溶液等体积混合.3.7 亚硝酸钠标准溶液:准确称取250.0mg于硅胶干燥器中干燥24h的亚硝酸钠,加水溶解移入500mL容量瓶中,加100mL氯化铵缓冲液,加水稀释至刻度,混匀,在4℃避光保存.此溶液每毫升相当于500 g的亚硝酸钠.3.8 亚硝酸钠标准使用液:临用前,吸取亚硝酸钠标准溶液1.00mL,置于100mL容量瓶中,加水稀释至刻度,此溶液每毫升相当于5.0 g亚硝酸钠.4 仪器4.1 小型粉碎机.4.2 分光光度计.5 操作方法5.1 样品处理乳粉祥品:在100mL烧杯中称取log样品，准确至。
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高级食品检验工技能考试
——奶粉中亚硝酸盐的测定
一、仪器与试剂
仪器：电子天平、722分光光度计、水浴锅、电炉、温度计、烧杯、玻璃棒、容量瓶、移液管、刻度吸管、漏斗、量筒、锥形瓶、具塞比色管、比色管架、刻度吸管架。
试剂：亚铁氰化钾溶液、乙酸锌溶液、对氨基苯磺酸溶液、盐酸萘乙二胺溶液、亚硝酸钠标准溶液、蒸馏水、奶粉。
二、操作步骤
1．亚硝酸钠标准使用液的配制：吸取亚硝酸钠标准溶液（每毫升相当于200ug亚硝酸钠）5.00mL，置于200mL容量瓶中，加水稀释至刻度，此溶液每毫升相当于5.0ug 亚硝酸钠。
2．样品处理：称取0.5g的奶粉，置于100mL烧杯中，以70℃左右的水约50mL将样品全部洗入100mL容量瓶中，然后加入1mL亚铁氰化钾溶液，摇匀，再加入1mL乙酸锌溶液以沉淀蛋白质，加水至刻度，混匀，于沸水浴加热5 min，取出后放置0.5h，除去上层脂肪，清液用滤纸过滤，弃去初滤液15mL，滤液备用。
3．标准曲线的绘制：吸取0.00、0.20、0.40、0.60、0.80、1.00mL亚硝酸钠标准使用液，分别置于6个50mL比色管中。
各加入2.5mL 4g/L对氨基苯磺酸溶液，混匀，静置3-5min后，各加入1.0ml2g/L盐酸萘乙二胺溶液，加水至刻度，混匀，静置15min，用比色皿以零管调零，于分光光度计538nm波长测定吸光度，绘制标准曲线。
4．样品测定：吸取上述样品处理滤液20.00mL于50mL比色管中，（加入0.40mL亚硝酸钠标准使用液），按标准曲线的绘制同样操作，于538nm波长处测定吸光度，从标准曲线上查出样品液含亚硝酸盐的量。
同时做试剂空白。
三、计算
x×1000
亚硝酸盐的含量（mg/kg）= —————————
20
m×———×1000
100
x———比色用样品液中含亚硝酸盐的量，µg
m ———样品质量，g
计算结果保留两位有效数字
四、精密度
在重复性条件下获得的两次测定结果的绝对差值不得超过算术平均值的10% 。
五、相对误差
实验结果相对误差小于10%。
盐酸萘乙二胺法（测定亚硝酸盐）
原理
样品经沉淀蛋白质、除去脂肪后，在弱酸性条件下，亚硝酸盐与对氨基苯磺酸重氮化，再与盐酸萘乙二胺偶合形成紫红色的染料，其颜色深浅与亚硝酸根含量成正比，可以比色测定（538nm）。