常用培养基制备 灭菌 与 消毒
实验一 培养基的制备消毒灭菌
(2) 装放待灭菌物品：将已包扎好的物品放入内桶。盖上锅盖，以两
两对称方式同时旋紧螺栓，勿使漏气。
(3) 加热排气：接通热源，同时打开排气阀，待见有大量水汽排出时，
维持3---5min，锅内空气排尽，关上排气阀。另外一种排气方法：先将排气 阀关闭，待加热升温内压达到5磅时再打开排气阀，等到压力表指针回到零， 关闭排气阀。
培养基的作用：微生物分离、培养、增殖、保藏及鉴定。
培养基配制原则
◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆ ◆
选择适宜的营养物质 营养物质浓度及配比合适 控制pH条件 控制氧化还原电位
原料来源的选择
根据培养目的不同调配
灭菌处理
2 消毒和灭菌的原理
★ 消毒与灭菌是确保 微生物纯培养 （由一个菌体
生长繁殖的群体）的最基本的实验技术。
高 压 蒸 汽 灭 菌 锅
a 方法：一般121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2） 20-30min。 b 适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。 c 注意事项：灭菌开始排净冷空气；
灭菌终了，自然缓慢降压回零；
灭菌结束，趁热取出物品。
三 实验操作步骤
分组操作：分6组，5人1组。
◆ ◆ ◆
牛肉膏蛋白胨琼脂培养基（第1~2组做，每组600ml） 马铃薯糖琼脂培养基（第3~4组做，400ml） 高氏1号培养基（第5~6组做，200ml）
每组需要做的其它工作
（1）每组包1ml吸管5支（塞棉花）（示范） 。 （2）每组包培养皿2包（每包6个） （示范）。 （3）每组装9ml无菌水5管。 （4）每组装20ml无菌水2瓶（50ml三角瓶，内有玻璃珠）。
（5）装锅灭菌。
高压蒸汽灭菌
(1) 灭菌前的准备：将高压蒸汽灭菌锅的内桶取出，向外锅内加入适
培养基的配制及灭菌实验报告
竭诚为您提供优质文档/双击可除培养基的配制及灭菌实验报告篇一：培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）n源：包括无机氮和有机氮。
（3）c源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如nacl、Kh2po4等。
微量元素：cu、K、mg、s、p、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1mpa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DnA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gnacl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
常用培养基制备灭菌与消毒方法
消毒与灭菌
消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体 灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。
方法：
物理的方法：加热、过滤、辐射 化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破
坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗 生素等。
常用培养基制备灭菌和消毒方法
加热法：
干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌
常用培养基制备灭菌和消毒方法
常用培养基制备灭菌和消毒方法
常压蒸汽灭菌：
对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛乳 培养基，含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采用 间歇灭菌方法。 煮沸灭菌法： 适用注射器和解剖器皿，时间10－15min， 超高温杀菌 135-150°C和2-8s对牛乳和其它液态食品灭菌。
常用培养基制备灭菌和消毒方法
常用培养基制备灭菌和消毒方法
湿热法 ：
原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固， 因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿 热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干 热好。
高压蒸汽灭菌法： 1、设备：高压灭菌锅 2、时间长短根据灭菌物品的种类和数量不同有
所变化。 3、适用于养基、工作服、橡胶物品等的灭菌，
养箱 中培养将生长好的菌种用牛皮纸包好，置4℃
高氏1号培养基是用于分离和培养放线菌的 合成培养基。其配方如下：
可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g， K2HPO4·3H2O 0.5g，MgSO4·7H2O 0.5g，FeSO4·7H2O 0.01g，琼脂15～ 20g，水1000mL，pH7.4～7.6。
常用培养基制备灭菌和消毒方法
也可用于玻璃器皿的灭菌。 4、注意事项：
1）冷空气彻底排除；2）加水；3）压力降为 “0”时方可打开。
培养基的灭菌
一、常用培养基配置及灭菌一、实验目的1．了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的一般方法和步骤；2．了解高压蒸汽灭菌的基本原理及应用范围。
3．学习高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、实验原理培养基是人工按一定比例配制的供微生物生长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。
培养基的原材料可分为碳源、氮源、无机盐、生长因素和水。
根据微生物的种类和实验目的不同，培养基也有不同的种类和配制方法。
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基，有时又称为普通培养基。
由于这种培养基中含有一般细胞生长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微生物生长繁殖之用。
1、热力灭菌：利用高温使菌体蛋白质变性或凝固，代谢发生障碍，导致细菌死亡。
包括：（1）焚烧法：用火焚烧，是很彻底的灭菌方法，适用于废弃的污染物品和有传染性的动物尸体等。
（2）烧灼法：直接再火焰上烧灼，用于接种环(针)和试管口或瓶口的灭菌。
（3）干烤法：在干烤箱通电后利用高热空气进行灭菌。
一般加热160-170℃，维持2小时即可杀灭包括芽胞在内的一切微生物。
主要用于玻璃器皿、磁器或需干燥的注射器等。
（4）煮沸法：煮沸100℃5分钟可杀死细菌的繁殖体，一般消毒以煮沸10分钟为宜。
如需要杀死芽胞则要煮沸1-3小时。
主要用于一般外科器械、注射器、胶管和食具等的消毒。
（5）间歇灭菌法：是利用反复多次的流通蒸汽，杀死细菌所有繁殖体和芽胞的一种灭菌法。
本法适用于耐热物品，也适用于不耐热(<100℃)的一些物质如某些培养基的灭菌。
具体做法是将待灭菌的物品置于阿诺氏流通蒸汽灭菌器内，100℃加热15-30分钟杀死其中的细菌繁殖体，然后将物品置37℃温箱中过夜，使芽胞发育成繁殖体，次日再通过流通蒸汽加热，如此连续三次，可将所有繁殖体和芽胞全部杀死。
若有某些物品不耐100℃，则可将温度降至75-80℃，每次加热的时间延长至30-60分钟，次数增至3次以上，也可达到灭菌目的，如用血清凝固器对血清培养基或卵黄培养基的灭菌。
菌种保存和微生物常识
菌种保存和微生物常识1、常用培养基的制备、灭菌与消毒营养：从外部环境摄取其生命活动所必需的能量和物质，满足生长和繁殖需要的一种生理过程。
是生命活动的物质基础，是生命活动的起点。
营养物：具有营养功能的物质。
也包括光能。
提供生物的结构物质、能量、代谢调节物质和良好的生理环境。
营养要素：碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水培养基：人工配制、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的混合养料。
要求：应具备6大营养要素；物质比例合适；必须灭菌。
2、选用和设计培养基的原则、方法及制备过程原则：目的明确、营养协调、经济节约物理化学条件适宜方法：生态模拟、查阅文献精心设计、试验比较步骤：称量、熔化、调PH、过滤、分装、加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查培养基种类：一、按成分的不同分天然培养基、合成培养基、半合成培养基二、按培养基的物理状态分固体培养基、液体培养基、半固体培养基三、按培养基用途基础培养基、选择培养基、加富培养基鉴别培养基消毒与灭菌：消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。
方法：一、物理的方法：加热、过滤、辐射二、化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。
主要破坏细菌代谢机能。
如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等。
加热法：（1）干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。
1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。
2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170C）加热灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。
原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。
3、注意事项：1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；2）温度控制在<180°；3）物品不能太挤；4）温度降至70°时才开箱门。
（2）湿热法：原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。
所以效果比同温度下干热好。
常用培养基制备灭菌与消毒
分生孢子丝
气生菌丝 琼脂表 面 基内菌丝
The cross section of an actinomycete colony showing the substrate mycelium（基内菌丝） and aerial mycelium （气 生菌丝）with chains of conidiospores（分生孢子）
放线菌生长到一定阶段，大部分气生菌丝 分化成孢子丝，通过横割分列的方式产生 成串的分生孢子。孢子丝形态多样，有直、 弯曲、钩状、螺旋状、轮生等多种形态。 孢子也有球形、椭圆形、杆状和瓜子状等 等。它们的形态构造都是放线菌分类鉴定 的重要依据。 放线菌的菌落早期绒状同细 菌菌落月牙状相似，后期形成孢子菌落呈 粉状、干燥，有各种颜色呈同心圆放射状。
平板划线法： 1、倒平板，标记培养基名称，编号和实验 日期。
2、划线方法
稀释混合平板法 ： 1、先加菌 2、倒平板时注意培养基温度 3、混合均匀
微生物培养技术
1、斜面接种 2、液体培养基接种 3、穿刺接种 将已接种的斜面、半固体和液体培养基放置培
养箱 中培养将生长好的菌种用牛皮纸包好，置4℃
冰箱中
查氏合成培养基
查氏合成培养基是用来分类和培养霉菌的 培养基,其配方如下：
NaNO3 3g,K2HPO4 1g, KCl 0.5g, MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,蔗糖 30g, H2O 1000ml,pH自然
麦芽汁培养基
用来培养酵母菌,干麦芽粉加4倍水,在5060℃保温糖化3-4小时，用碘液试验检查至 糖化完全为止,调整糖液浓度,煮沸后，过滤， 调pH为6.0。
有二层小梗
青霉
青霉的形态结构 A单轮型 B非对称型 C对称二轮型
常用培养基的制备消毒与灭菌
化学药品灭菌：
原理：应用化学制剂破坏细菌代谢机能。
杀菌剂如重金属离子； 抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。
注意：与药品的浓度高低，时间长短，微生物种
类以及微 生物所处的环境有关。
常用化学杀菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸
福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等
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常用消毒剂种类
类别 酚类
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常压蒸汽灭菌：
对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛 乳培养基，含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采 用间歇灭菌方法。 煮沸灭菌法： 适用注射器和解剖器皿，时间10－15min， 超高温杀菌 135-150°C和2-8s对牛乳和其它液态食品灭菌。
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２、原种及栽培种培养基经灭菌后，从灭菌锅中上、中、 下三层进行取样，每层对角线随机取样５瓶（袋），放 置28-30℃恒温培养箱中培养5-7天，检查是否有霉菌 菌落生成。如检查是否有细菌没有杀死，必须使用细菌 培养基进行检测。上述抽取的样品，分别在无菌下取出 少量培养基接入细菌培养基，然后在37℃培养24小时， 检查结果没有细菌菌落产生，说明灭菌彻底。如某一位 置试样出现杂菌，可能是锅内有“死角”，也可能是灭 菌锅结构不合理，或没有按操作要求堆积， 气撒料， 或一次性撒料过厚，或菌种瓶、袋过于拥挤，蒸汽流通 不均匀造成；如不分部位，大部分或几乎全部瓶、袋都 出现杂菌，说明灭菌温度或灭菌时间不够，如果是高压 灭菌锅出现这种现象，则说明是冷窑没有排除干净所致。
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湿热法 ：
原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固， 因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿 热的蒸气有潜热存在。所以效果比同温度下干 热好。
【高中生物】菌种保存和微生物常识
（生物科技行业）菌种保存和微生物常识菌种保存和微生物常识1、常用培养基的制备、灭菌与消毒营养：从外部环境摄取其生命活动所必需的能量和物质，满足生长和繁殖需要的一种生理过程。
是生命活动的物质基础，是生命活动的起点。
营养物：具有营养功能的物质。
也包括光能。
提供生物的结构物质、能量、代谢调节物质和良好的生理环境。
营养要素：碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐和水培养基：人工配制、适合微生物生长繁殖或产生代谢产物的混合养料。
要求：应具备6大营养要素；物质比例合适；必须灭菌。
2、选用和设计培养基的原则、方法及制备过程原则：目的明确、营养协调、经济节约物理化学条件适宜方法：生态模拟、查阅文献精心设计、试验比较步骤：称量、熔化、调PH、过滤、分装、加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查培养基种类：一、按成分的不同分天然培养基、合成培养基、半合成培养基二、按培养基的物理状态分固体培养基、液体培养基、半固体培养基三、按培养基用途基础培养基、选择培养基、加富培养基鉴别培养基消毒与灭菌：消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。
方法：一、物理的方法：加热、过滤、辐射二、化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。
主要破坏细菌代谢机能。
如重金属离子，磺胺类药物及抗生素等。
加热法：（1）干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌。
1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管口和瓶口，涂布用玻璃棒。
2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170C）加热灭菌1－2h，适用于玻璃器皿和培养皿等。
原理加热使蛋白质变性，与水的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。
3、注意事项：1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法；2）温度控制在<180°；3）物品不能太挤；4）温度降至70°时才开箱门。
（2）湿热法：原理：因为湿热中菌体吸水，蛋白质容易凝固，因蛋白质含水量增加，所需凝固温度降低；湿热的蒸气有潜热存在。
培养基的制备与灭菌实验报告详细
培养基的制备与灭菌实验报告详细集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）N源：包括无机氮和有机氮。
（3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。
微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
培养基制备与消毒灭菌
2 湿热灭菌 (利用饱和热蒸汽灭菌)
消毒与灭菌
3）高压蒸汽灭菌法:利用水的沸点随水蒸气压力的增加
而上升，提高温度以达到高温灭菌目的方法。 a 方法： 一般121℃（1kg/cm2或15磅/英寸2）
20min-30min。 b 适用：耐高温物品如培养基，无菌水，培养皿。 c 注意事项：
▲灭菌开始排净冷空气； ▲ 灭菌终了，缓慢降压； ▲ 灭菌结束，趁热取出物品。
▼绝大多数微生物不能利用 ▼融化温度96℃ ，凝固温度45℃ ▼对微生物无毒性 固体培养基作用
培养菌落进行分离、鉴定、计数、保藏
培养基
（2）半固体培养基 加入凝固剂。琼脂加入量0.2～0.5% 作用：观察细菌的运动状况。
（3）液体培养基 不加凝固剂 用于发酵业。液体培养。
消毒与灭菌
▪ 消毒：应用理化方法杀灭部分微生物（主要是病 原微生物）。
2 马铃薯糖培养基（通常用于培养真菌）
实验内容
（1）
培养基组成： 马铃薯 葡萄糖或蔗糖 琼脂 水
PH
200 g 20 g 18---20 g 1000ml 自然
（2） 配制方法： ① 称量：注意马铃薯去皮后切成丝称量。 ② 溶化：将马铃薯丝放入水中置于电炉上加热并不断
搅拌，煮沸5—10min，用多层纱布过滤得滤液，在滤液中加入其他 药品，不断搅拌直至完全溶解。
再取物）
消毒与灭菌
★ 湿热灭菌较干热灭菌效果好
消毒与灭菌
1) 特点：温度低、时间短、灭菌效果好。 2) 灭菌效果好的原因：
菌体内含水量越高凝固温度越低。 蒸汽冷凝会放出潜热。 饱和水蒸汽穿透力强。
实验内容
分组操作：分8组，7~8人1组。每组需要做的工作。
（1）1、2、3、4、5组做牛肉膏蛋白胨培养基。每组做 600ml。装试管10支，余下装三角瓶。 （2）6、7、8组做马铃薯糖培养基。每组200ml。装试管10 管，余下装三角瓶。 （3）每组包 1 ml 吸管8-9支。（示范） （4）每组包10 ml吸管3支 （5）每组装9 ml无菌水10管。 （示范） （6）每组包培养皿2包（每包6个）（示范） （7）装锅灭菌。
实验二、常用培养基的制备、消毒与灭菌
实验二常用培养基的制备、消毒与灭菌一、实验目的1.了解配制培养基的原理，并掌握配制培养基的一般方法和步骤。
2.学习几种常用培养基的配制、分装和灭菌的操作方法。
3.掌握玻璃器皿的包扎与洗涤。
4.了解常用灭菌方法的基本原理及应用范围，掌握高压蒸汽灭菌的操作方法。
二、实验原理培养基是人工配制的适合微生物生长繁殖或积累代谢产物的营养基质，用以培养、分离、鉴定、保存各种微生物或积累代谢产物。
一般培养基中应含有水分、碳源、氮源、能源、无机盐和生长因子等。
在自然界中，微生物种类繁多，营养类型多样，加之实验和研究的目的不同，所以培养基的种类很多。
配制培养基时，都要根据不同微生物的要求将培养基的pH 调到合适的范围。
灭菌是指杀灭一切微生物的营养体、芽孢和孢子。
常用灭菌方法很多，一般可分为加热、照射和使用化学药品等方法。
加热灭菌法分为干热灭菌和湿热灭菌两类。
干热灭菌是利用高温使微生物细胞内的蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
细胞内的蛋白质凝固性与其本身的含水量有关，在菌体受热时，当环境和细胞内含水量越大，则蛋白质凝固就越快，反之含水量越少，凝固缓慢。
因此，与湿热灭菌相比，干热灭菌所需温度要高（160-170℃），时间要长（1-2h），但干热灭菌温度不能超过180℃，否则，包器皿的纸或棉塞就会烧焦。
高压蒸汽灭菌是将待灭菌的物品放在一个密闭的加压灭菌锅内，通过加热，使灭菌锅隔套间的水沸腾而产生蒸汽。
待水蒸气急剧的将锅内的冷空气从排气阀中驱尽，然后关闭排气阀，继续加热，此时由于蒸汽不能溢出，而增加了灭菌锅内的压力，从而使沸点增高，得到高于100℃的温度，导致菌体蛋白质凝固变性而达到灭菌的目的。
三、实验材料蛋白胨、牛肉膏、酵母膏、琼脂试管、三角瓶、烧杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH试纸、棉花、牛皮纸、记号笔、纱布、胶头滴管、全自动灭菌锅四、实验方法与步骤1、玻璃器皿的清洗——注意事项和方法（1）用过的器皿应立即洗涤（2）含有琼脂培养基的器皿可先将培养基刮去，或用水蒸煮，至培养基融化后倒出，然后再用洗洁精清洗。
培养基的配制和灭菌实验报告（共8篇）
培养基的配制和灭菌实验报告(共8篇) 培养基的制备与灭菌实验报告(详细)一、实验题目：培养基的制备与灭菌二、实验目的：1、明确培养基的配置原则，掌握配置方法。
2、了解灭菌的原理，学习掌握灭菌器的使用方法。
三、实验器材：1、药品：牛肉膏、蛋白胨、氯化钠、水、琼脂。
2、仪器：三角瓶、培养皿、试管、线绳、棉花、烧杯、报纸、移液管、试管架、铁针、量筒。
四、实验原理：1、培养基的制备包括一下几种成分：（1）水分：主要成分。
（2）N源：包括无机氮和有机氮。
（3）C源：主要是含碳有机物、碳氢化合物等。
（4）无机盐：如NaCl、KH2PO4等。
微量元素：Cu、K、Mg、S、P、Zn。
有些还需要添加“生长因子”，通常是维生素类、某些氨基酸或核酸等。
2、培养基配置的原则根据不同的培养对象及培养目的，选用不同的培养基，但有机物总量不得超过15%，盐类一般不超过1%。
培养基有以下分类：按成分：天然培养基、合成培养基、半合成培养基按状态：固体培养基、半固体培养基、液体培养基按用途：基础培养基、营养培养基、鉴别培养基、选择培养基培养基配好后应立即灭菌，防止营养物质中的微生物富集。
3、灭菌：用理化手段杀灭一切微生物的营养体，包括芽孢和孢子，在实验中应对所有仪器、操作场所、药品及培养基灭菌或消毒。
（1）高压蒸汽灭菌：将物品放入封闭的加压灭菌器，加热使灭菌锅套间的水沸腾产生蒸汽，将冷空气排尽，压力上升，使水沸点变高，导致菌体蛋白质变性，一般0.1MPa、121℃、15~30min 可以彻底灭菌，本次实验灭菌20min。
若是含糖培养基，110℃、30min。
（2）干热灭菌：微生物细胞内蛋白质因高温而凝固变性。
因高温，所以含水量小，不利于蛋白质受热变性，所以温度高，时间长。
（3）紫外灭菌：诱导胸腺嘧啶二聚体形成抑制DNA复制。
（4）过滤除菌：实验室中用微孔滤膜（孔径一般为0.22μm）。
除病菌需更小。
五、实验步骤：1、牛肉膏蛋白胨培养基的制备依次准确称取0.5g牛肉粉、1.0g蛋白胨、0.5gNaCl放入烧杯，加入100mL水，用玻璃棒搅匀溶解，移入三角瓶，并加入1.5g琼脂。
培养基的灭菌
培养基的灭菌⼀、常⽤培养基配置及灭菌⼀、实验⽬的1．了解培养基的配制原理；掌握配制培养基的⼀般⽅法和步骤；2．了解⾼压蒸汽灭菌的基本原理及应⽤范围。
3．学习⾼压蒸汽灭菌的操作⽅法。
⼆、实验原理培养基是⼈⼯按⼀定⽐例配制的供微⽣物⽣长繁殖和合成代谢产物所需要的营养物质的混合物。
培养基的原材料可分为碳源、氮源、⽆机盐、⽣长因素和⽔。
根据微⽣物的种类和实验⽬的不同，培养基也有不同的种类和配制⽅法。
⽜⾁膏蛋⽩胨培养基是⼀种应⽤最⼴泛和最普通的细菌基础培养基，有时⼜称为普通培养基。
由于这种培养基中含有⼀般细胞⽣长繁殖所需要的最基本的营养物质，所以可供微⽣物⽣长繁殖之⽤。
1、热⼒灭菌：利⽤⾼温使菌体蛋⽩质变性或凝固，代谢发⽣障碍，导致细菌死亡。
包括：（1）焚烧法：⽤⽕焚烧，是很彻底的灭菌⽅法，适⽤于废弃的污染物品和有传染性的动物⼫体等。
（2）烧灼法：直接再⽕焰上烧灼，⽤于接种环(针)和试管⼝或瓶⼝的灭菌。
（3）⼲烤法：在⼲烤箱通电后利⽤⾼热空⽓进⾏灭菌。
⼀般加热160-170℃，维持2⼩时即可杀灭包括芽胞在内的⼀切微⽣物。
主要⽤于玻璃器⽫、磁器或需⼲燥的注射器等。
（4）煮沸法：煮沸100℃5分钟可杀死细菌的繁殖体，⼀般消毒以煮沸10分钟为宜。
如需要杀死芽胞则要煮沸1-3⼩时。
主要⽤于⼀般外科器械、注射器、胶管和⾷具等的消毒。
（5）间歇灭菌法：是利⽤反复多次的流通蒸汽，杀死细菌所有繁殖体和芽胞的⼀种灭菌法。
本法适⽤于耐热物品，也适⽤于不耐热(<100℃)的⼀些物质如某些培养基的灭菌。
具体做法是将待灭菌的物品置于阿诺⽒流通蒸汽灭菌器内，100℃加热15-30分钟杀死其中的细菌繁殖体，然后将物品置37℃温箱中过夜，使芽胞发育成繁殖体，次⽇再通过流通蒸汽加热，如此连续三次，可将所有繁殖体和芽胞全部杀死。
若有某些物品不耐100℃，则可将温度降⾄75-80℃，每次加热的时间延长⾄30-60分钟，次数增⾄3次以上，也可达到灭菌⽬的，如⽤⾎清凝固器对⾎清培养基或卵黄培养基的灭菌。
培养基的制备与灭菌
3. 马铃薯葡萄糖培养基（分离霉菌用） 制法：将马铃薯去皮，并切成薄片，立即放入水 中。否则马铃薯易氧化变黑。每200克马铃薯加 自来水1000 mL。80℃温水浸泡1小时，用纱布过 滤，然后稀释到1000 mL。15磅/寸2灭菌20分钟， 即为20%的马铃薯浸汁，贮存备用。 配制培养基时，按100 mL马铃薯浸汁加入葡萄糖 2克，琼脂1.5-2.0克。 4. 无菌水的制备 在每个250 mL锥形瓶内装99 mL自来水（或生理 盐水），在每个小试管内装4.5 mL自来水（或生 理盐水），塞上棉塞，15磅/寸2灭菌20分钟待用。
四、实验内容
（一）常用培养基的配制 1. 肉膏蛋白胨培养基（用于分离及培养细菌） 成分： 牛肉膏 0.5g； 蛋白胨 1.0g； 氯化钠 0.5g； 琼脂 1.5－2.0g； 水 100mL； PH 7.0－7.2 配制培养基的基本过程如下：
（1）称量：按照培养基配方，正确称取各种原料 放于烧杯中； （2）溶解：在上述烧杯中加入所需水量（根据实 验需要可加入蒸馏水或自来水）搅匀，加热溶解。 应在药品全部溶解后加水补足加热过程所蒸发的 水分。配制固体培养基时，应将已配好的液体培 养基煮沸，再将称好的琼脂加入，继续加热至琼 脂完全融化，并不断搅拌，以免糊底烧焦，最后 加水补足失去的水分； （3）调PH值：用1N NaOH或1N HCl调PH至7.2，尽 量避免回调； （4）过滤：用过滤纸或多层纱布过滤，一般无特 殊要求，此步可以省去。
图2-3 摆斜面
（三）玻璃器皿的洗涤和包装 1. 玻璃器皿的洗刷：玻璃器皿的使用前必须洗刷干净。锥形 瓶、试管、培养皿等浸入水中洗涤，用毛刷和洗衣粉洗刷，然 后再用水冲净。移液管先用洗液浸泡，再用水冲洗。洗刷干净 的玻璃仪器在电热干燥箱中烘干后备用。 2. 玻璃器皿灭菌前的准备工作： （1）培养皿又称双碟或平皿，由一底一盖组成一套。可以每 套单独使用纸包装，也可将几套一起用纸包装； （2）移液管应在距管口约1-2毫米处用铁丝塞入少许棉花（约 1-1.5厘米长）；以防止细菌吸入口中，并避免将口中细菌吹 入管内。棉花要塞的松紧适宜。炊时以能通气但不使棉花滑下 为准。江塞好棉花的移液管尖端，放在4-5厘米宽的长条纸的 一端，约成45℃角，折叠纸条包住尖端，用左手握住移液管身， 右手将移液管压紧，在桌上向前搓转，以螺旋式包扎起来。上 端剩余纸条，折叠打结，准备灭菌。
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高氏1号培养基
高氏1号培养基是用于分离和培养放线菌的 合成培养基。其配方如下： 可溶性淀粉20g，KNO3 1g，NaCl 0.5g， K2HPO4· 3H2O 0.5g，MgSO4· 7H2O 0.5g， FeSO4· 7H2O 0.01g，琼脂15～20g，水 1000mL，pH7.4～7.6。
超高温杀菌
135-150°C和2-8s对牛乳和其它液态食品灭菌。
优点
：保持食品价值和营养成分。
过滤除菌：
原理：介质在有压力时阻隔微生物。 适用范围：许多材料如血清、抗生素及糖溶液采用此法。 设备：蔡氏过滤器，滤膜过滤器。 优缺点：不破坏培养基成分，只适用少量滤液。 注意事项：1、压力适当； 2、无菌条件下进行； 3、防止渗透现象。
形态特征（ Morphological characteristics ）
属异养型真核生物，具有丝状或管状结构， 单个分支称为菌丝。菌丝形成的网络状结 构称为菌丝体。
营养菌丝（vegetative mycelium）：汲取营养 气生菌丝（aerial mycelium） 繁殖菌丝:孢子丝，进行繁殖。
查氏合成培养基
查氏合成培养基是用来分类和培养霉菌的 培养基,其配方如下：
NaNO3 3g,K2HPO4 1g, KCl 0.5g, MgSO4.7H2O 0.5g,FeSO4 0.01g,蔗糖 30g, H2O 1000ml,pH自然
麦芽汁培养基
用来培养酵母菌,干麦芽粉加4倍水,在5060℃保温糖化3-4小时，用碘液试验检查至 糖化完全为止,调整糖液浓度,煮沸后，过 滤，调pH为6.0。
能将淀粉转化为 糖，用于生产糖 化酶，酿造甜酒 等
曲霉属
分解淀粉和蛋白 质能力强，用于 制曲、制醋、生 产柠檬酸、酶制 剂及糖化饲料等 青霉素产生菌， 也用于制备农用 抗生素和发酵饲 料
青霉属
根霉
根霉的形态结构
曲霉
曲霉的形态结构 左侧分生孢子梗具有一层小梗；右侧分生孢子梗具 有二层小梗
青霉
链霉菌的各种
孢子丝结构
链霉菌的分离 ：
• pH中性偏碱
• 喜干（含水少）
• 采用含各种无机盐的选择性培养基
放线菌Actinomycetes
Antibiotics
已知放线菌能够产生500多 种抗生素。
大多数抗生素对不同的细 菌有独特的疗效
有50多种被实际应用
霉菌
( molds)
是丝状真菌的总称,即“发霉的真菌”。通常指菌丝体比 较发达而又不产生大型子实体的真菌。常在潮湿的气候下 大量生长繁殖。
平板划线法： 1、倒平板，标记培养基名称，编号和实 验日期。 2、划线方法
稀释混合平板法 ： 1、先加菌 2、倒平板时注意培养基温度 3、混合均匀
微生物培养技术
1、斜面接种 2、液体培养基接种 3、穿刺接种 将已接种的斜面、半固体和液体培养基放臵 培养箱 中培养将生长好的菌种用牛皮纸包好，臵4℃ 冰箱中
分类（classification）
有隔菌丝：有隔菌丝中有横隔膜将菌丝分隔成多个细
胞，在菌丝生长过程中细胞核的分裂伴随着细胞的分裂， 每个细胞含有一至多个细胞核。横隔膜可以使相邻细胞之 间的物质相互沟通。如曲霉和青霉。
无隔菌丝：菌丝中无横膈膜，整个细胞是一个单细胞，
菌丝内有许多核，在生长过程中只有核的分裂和原生质体 质量的增加，没有细胞数目的增多。如毛霉和根霉。
分生孢子丝
气生菌丝 琼脂表 面 基内菌丝
The cross section of an actinomycete colony showing the substrate mycelium（基内菌丝） and aerial mycelium （气 生菌丝）with chains of conidiospores（分生孢子）
•细胞壁主要成分是肽聚糖，最适pH与细菌 相似。主要以孢子方式进行无性繁殖。 •其DNA 碱基组成中GC含量特别高。超过任 何已知的细菌。 • 许多临床应用的抗生素都由链霉菌种产生。
分生孢子丝
气生菌丝 琼脂表 面 基内菌丝
The cross section of an actinomycete colony showing the substrate mycelium （基内菌丝）and aerial mycelium（气生菌丝） with chains of conidiospores（分生孢子）
培养基种类:
碳源、氮源、能源、生长因子、无机盐、水 一、按成份的不同划分 天然培养基、合成培养基、半合成培养基 二、按培养基的物理状态划分 固体培养基、液体培养基、半固体培养基 三、按培养基用途划分 基础培养基、加富培养基、鉴别培养基、选择培 养基
牛肉膏蛋白胨培养基
牛肉膏蛋白胨培养基是一种应用最广泛和 最普通的细菌基础培养基。其配方如下： 牛肉膏3g，蛋白胨10g，Nacl5g，琼脂15～ 20g，水1000mL，PH7.0～7.2(后调)
实验三 常用培养基的制备、灭菌与 消毒
实验目的：1.了解培养基的配制原理 2.掌握配制培养基的一般方法和步骤
培养基是人工配制的，适合微生物生长繁殖或产生代谢产物 的营养基质
原则：目的明确 ;营养协调;控制PH、渗透压等条件;经济节 约 方法：查阅文献;精心设计;试验比较
步骤：称量、熔化、调PH、过滤、分装、 加塞、包扎、灭菌、冷却、无菌检查
杀菌剂如重金属离子； 抑菌剂如磺胺类及多数抗生素。
注意：与药品的浓度高低，时间长短菌剂有：乙醇、醋酸、石碳酸
福尔马林、升汞、高锰酸钾、新洁尔灭等
实验四 微生物的分离、纯化及培 养技术
分离与纯化：从混杂的微生物群体中获得只含 某一种 或某一株微生物的过程。 为什么要进行纯培养：平板上的单一菌落并不 一定保 证是一种菌。 常用的分离、纯化方法： 单细胞挑取法、稀释涂布平板法 稀释混合平板法、平板划线法
稀释涂布平板法 ：
步骤： 1、倒平板：牛肉膏蛋白胨培养基，高氏I号培养基，查 氏培养基冷却至55-60℃时，混匀后倒平板，牛肉膏蛋白胨培 养基倒4皿，高氏I号培养基和查氏培养基各倒3皿。 2、制备污水稀释液：10g土样，加入90ml无菌水中，在 三角瓶中振摇20min。取0.5ml 加入盛有4.5ml无菌水的试管中， 以此类推，制成不同稀释度。 3、涂布：将上述每种培养基平板底面标记稀释度，然后 用无菌吸管从最后三种稀释度，即10-4、10-5和10-6的试管中吸 取0.1ml对号放入平板上，用玻棒涂布。 4、培养：高氏I号和查氏倒臵培养于28℃培养箱中培养 3-5days，牛肉膏蛋白胨琼脂培养基在37℃培养1-2days。 5、挑菌落：转至斜面，检查是否一致，保存。
青霉的形态结构 A单轮型 B非对称型 C对称二轮型
实验内容
人们设计了各种培养和观察方法，
这些方法的主要目的是为了尽可能 保持放线菌和霉菌自然生长状态下 的形态特征。本实验采用插片法。
插片法: 倒平板→插片→接种→培养→镜检 →记录绘图 压印法: 倒平板→划线接种→挑取菌落→加 盖玻片→镜检→记录绘图 埋片法: 倒琼脂→切槽→接种→培养→镜 检→记录绘图
在使用高压蒸气灭菌锅灭菌时，灭菌锅内 冷空气的排除是否完全极为重要，因为空 气的膨胀压大于水蒸气的膨胀压，所以， 当水蒸气中含有空气时，在同一压力下， 含空气蒸气的温度低于饱和蒸气的温度。 灭菌锅内留有不同分量空气时，压力与温 度的关系见表2
常压蒸汽灭菌：
对于不宜用高压蒸汽灭菌的培养基如明胶培养基、牛 乳培养基，含糖培养基等可采用此法。彻底灭菌则采 用间歇灭菌方法。 煮沸灭菌法： 适用注射器和解剖器皿，时间10－15min，
消毒与灭菌
消毒：消灭病原菌和有害微生物的营养体 灭菌：杀灭一切微生物的营养体，芽胞和孢子。
方法：
物理的方法：加热、过滤、辐射 化学的方法：用化学试剂抑制或杀灭微生物。主要破 坏细菌代谢机能。如重金属离子，磺胺类药物及抗 生素等。
加热法：
干热法：火焰灼烧灭菌和热空气灭菌
1、火焰灼烧适用于接种环、接种针和金属用具如镊子等，试管 口和瓶口，涂布用玻璃棒。 2、热空气灭菌利用高温干燥空气（160－170C）加热灭菌1－2h， 适用于玻璃器皿和培养皿等。原理加热使蛋白质变性，与水 的含量有关，当环境和细胞含水量越大，凝固越快。 3、注意事项： 1）培养基、橡胶制品、塑料制品不能用此法； 2）温度控制在<180°； 3）物品不能太挤； 4）温度降至70°时才开箱门。
属 主要特征 分布 作用与用途
根霉属
菌丝无隔,单细胞 常长在淀粉类食 迅速蔓延,有假根, 品上如馒头、面 孢子囊呈黑色,产 包、甘薯等 生孢子囊和接合 孢子
菌丝分隔，分生 空气、谷物、土 孢子梗顶端膨大， 壤和各种有机物 上 顶囊上生辐射状 小梗菌落疏松、 颜色多样 菌丝分隔，孢子 空气、土壤及物 梗呈扫帚形，菌 品上，腐烂的柑 橘上更多 落由紧密到疏松， 多呈蓝绿色
节孢子Arthrospores
分生孢子Conidiospores
卵孢子（Oospores）
oogonium
antheridium
Oospores formation
oospheres
oospores
接合孢子 Zygospores
接合孢子 形成过程
子囊孢子 Ascospores
几种常见霉菌
倒平板 将培养基熔化后，倒10-12毫升左右于灭菌培养皿 内，凝固后使用. 插片 将灭菌的盖玻片以45度角插入培养皿内的培养基 中，插入深约为1/2或1/3。 接种与培养 用接种环将菌种接种在盖玻片与琼脂相接的沿线， 放臵28℃培养3～7天。 观察 培养后菌丝体生长在培养基及盖玻片上，小心用 镊子将盖玻片抽出，轻轻擦去生长较差的一面的 菌丝体，将生长良好的菌丝体面向的载玻片，压 放于载玻片上。直接在显微镜下观察。