肠膜蛋白技术资料

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猪肠膜蛋白与鸡肠膜蛋白的差异对比

猪肠膜蛋白与鸡肠膜蛋白的差异对比肠膜蛋白粉（Dried Porcine Solubles,DPS）是当下比较热门的一种新型动物蛋白质原料，因其富含小肽和游离氨基酸，具有易消化吸收、改善动物肠道健康、增强机体免疫力等特点，被广泛应用于多种动物及同种动物不同生发育阶段的饲料，尤其是在早期断奶仔猪饲料中可以部分或全部代替血浆蛋白粉（AP）、乳清粉和脱脂奶粉等较昂贵的动物蛋白原料，大大节约饲料成本（高欣等，2001）。

目前我们熟知的市场在售的肠膜蛋白粉产品有SDP50、DPS80、高利肽等。

一个蛋白产品的好坏可以从4个方面进行评价：1.产品营养成分和功能成分；2.产品的可消化吸收性；3.产品的稳定性；4.产品的生物安全性。

一、营养成分和功能成分的对比众所周知肠膜蛋白属于功能性蛋白，其主要功能均源于小肽。

然而小肽并不是原料赋予的，未经处理的鸡肠和猪肠不含任何小肽，小肽是生产工艺造就的，所以单从这点来看，肠膜蛋白的好坏与来源没有关系。

此外，氨基酸平衡性往往是蛋白原料最为关注的。

以1988年的生长猪氨基酸平衡模式NRC标准为参考，其中赖氨酸的需要量我们设定为100，其他氨基酸的数值均是其与赖氨酸的比值*100所得。

从下表中我们不难看出：动物蛋白氨基酸平衡性都不差，其中鱼粉、鸡肠膜蛋白、猪肠膜蛋白氨基酸组分都十分接近，氨基酸平衡性都很好。

而同样作为动物蛋白的血球蛋白和羽毛粉氨基酸平衡性却不好，这主要是因为血球蛋白主要为胶原蛋白，羽毛粉主要为角蛋白。

豆粕是公认的氨基酸平衡性最好的植物蛋白，从下表中也能看出端倪。

表1 不同原料氨基酸平衡性表由此可见，无论是从肠膜蛋白的主要功能成分小肽来考量，还是从蛋白原料最为关注的氨基酸平衡性来考量，肠膜蛋白的好坏与来源均无关系，其主要取决于后期加工工艺能否赋予原料更多的小肽。

二、产品的可消化吸收性对比在可消化吸收性方面，考察原料来源给肽产品带来的差异，其实没有太大的意义。

因为肽产品一定是经过酶解或者发酵等手段处理过的，这些手段的意义就在于改变原料的可消化吸收性，工艺对其影响程度远胜于原料本身带来的差异。

大肠癌患者肠黏膜的蛋白质组学研究

Ｄｉｕｆｄｓｍｅａｅ，－ｃｎ，ｍｏｔｔｅｅｐｏｅｎ，ｒｔＫｅａｉｘｕｅ１．ｅｅｗａｉｎｆｃｎｉｅｅｃｅｗｅｎｔｘｓｌｅｌｏｒｓａａｔｓｏｈｍｔｌｒｔｉＫｅａｉ９，ｒｔｎｍｉｔｒＴｈｒｓｓｇｉａｔｄｆｒｎｅｂｔｅｈｅｅ－ｉｉｓｎｉ
ＩＵＷ办洳，ｌｕｎｌｇ，ＡＹｎｌＪＱＮＨａ－ｎＭａ－ｉｏｅ
（ｈｉｈＰｏｌ’ ｏｉｌｆＳａｇａｉｔｎｅｉ，ｈｎｈｉ０２３Ｐ．Ｃｉ）ＴｅＳｔｅｅｓｓｔｈｎｈｉａｏＵｉｒｔＳａｇ０３，Ｒ．ｈｎｘｐＨｐａｏＪｏｎｇｖｓｙａ２ａ
ｅｕｉｅｔｓｏｋ２Ｄａｐｏｅｎ、ｈｔｒｇｎｏｓｎｃｅｒｒｂｕｌｏｒｔｉ／ｌｄｎｇｈａｈｃ７ｋｒｔｉｅｅｏｅｅｕｕｌａｏｎｃｅｐｏｅｎＡ２Ｂ１，ｒｏｐｏｐａｅｉｏｒｓ，ｙｕａｅｋｎｓｉｓＴｉｓｈｅｓｈｔｓｍｅａｅｐｒｖｔｉａｅ，
ｐｏｅｍｉｓａａｙｉ。Ｏａｏｆｎａｌｉｇｏｉｌｃｌｒｍａｋｅｓｏｏｏｅｔａｃｎｍａ．ｅｈｏＴｈｕｒｍｕｏａａｄｎｒｒｔｏｃｎｌｓｓＳｓｔｄｅｒｙｄａｎｓｓｍｏｅｕａｒｒｆｃｌｒｅａｃｒｉｏｉｌＭｔｄｅｔｍｏｃｓｎｏ —
正常肠黏膜组织问存在差异表达蛋白，些蛋白可作为大肠癌早期诊断和判断预后的分子标记物。这［关键词】大肠癌；白质组学；子标记物蛋分

肠膜蛋白简介

肠膜蛋白提高Gln利用率
激素分泌细胞生长和变异酸碱平衡
基因表达
蛋白质降解
谷氨酰胺
蛋白质合成细胞信号转导肠道完整性免疫反应
抗氧化反应
血流量
营养代谢
谷氨酰胺是胃肠粘膜和免疫细胞重要的营养素，日粮Gln及与Gln代谢有关的天冬氨酸、谷氨酸是小肠粘膜的主要能量来源，在小猪断奶时Gln属于“必需氨基酸”
3.3 18.34 1.31 0.37 0.90 0.58
营养水平
68 17 3 2.5 1 2 2 1.5 1.5 0.5 0.2 0.3 0.5 100
3.3 18.09 1.29 0.39 0.90 0.58
处理三 4%高利肽
68 17 3 2.5 1 0 4 1.5 1.5 0.5 0.2 0.3 0.5 100
小肽与氨基酸吸收对比
小肽吸收载体不易饱和载体对底物具有广泛性速度快、效率高
氨基酸吸收载体易饱和载体对底物广泛性差速度慢、效率低
氨基酸
注释：氨基酸的载体转运及转运载体的竞争性抑制
肠膜蛋白富含多种功能性小肽
蛋白质/小肽分类
参与
功
调解
能
身体
性
活动
等
蛋白质/ 小肽
营
为蛋
养
白质
性
合成
提供
氮架
消化吸收的小肽有一些特殊功能
1.79±0.06a
试验组2 711.26±21.66a 399.25±18.74a 1.78±0.03a
备注：同行相同字母表示差异不显著
高利肽蔗糖(%) 预混料(%) 大豆油(%) 赖氨酸(%) 食盐(%) 沸石粉(%) 合计(%)
消化能(Mcal/kg) 粗蛋白(%) 赖氨酸(%) 蛋氨酸(%) 钙(%) 总磷(%)

猪肠膜的研究现状——朱滔

肠膜蛋白的研究现状猪肠膜蛋白（DPS）是一种新型功能营养性动物蛋白质原料，其来自猪肠膜的酶水解蛋白，是一种肽类饲料。

DPS粉的主要成分是猪肠黏膜水解蛋白，是利用猪小肠黏膜或萃取肝素过程的副产物，经过特定的酶处理，浓缩，再以黄豆皮或小麦麸皮为赋形剂，最后经高温灭菌干燥等过程制造而成。

近年来的研究发现，蛋白质经消化道酶促水解后主要以小肽的形式吸收，比完全游离氨基酸更易、更快被机体吸收利用，这是肽理论和实践的重大突破。

新的蛋白质营养理论提出，小肽（二、三肽）可以在动物消化道完整吸收，由于动物蛋白质营养理论的研究进展，肽类饲料的理论研究和开发利用成为近期的研究热点。

1 肠膜蛋白的特性DPS源于健康猪肠道上皮黏膜，不含任何其他源性蛋白，其可减少幼龄乳仔猪采食植物性或动物性异源大分子蛋白而出现的肠道免疫应激；DPS含有丰富的蛋白质及脂肪、纤维和磷、钙、钾等矿物质元素，还含有8种氨基酸。

并具有独特的促进乳猪胃肠系统成熟的功效，可加快乳猪增重，提高饲料报酬，减少乳猪发病率，并降低死亡率；DPS中含有丰富的小肽。

其生物利用率高，提高抗病性，增强免疫力，能有效防止乳仔猪细菌性下痢和降低断奶应激；DPS 中含绒毛膜促生长因子，可诱导小肠绒毛发育，增强膜刷状缘酶活性，对断奶引起的肠膜损伤有修复作用；DPS肠膜蛋白为浅黄色粉状，具有肉腥香味，可增加饲料的风味，含丰富味觉刺激肽，提高动物的采食量；猪肠膜蛋白的生产过程包含了持续高温及蛋白酶消化两大步骤，猪的主要致病原，如猪繁殖与呼吸综合征病毒、猪伪狂犬病病毒以及传染性胃肠炎病毒等，都在肽生产的过程被杀灭。

因此，DPS 应用于养猪生产中是安全的。

2 肠膜蛋白的研究现状早在20世纪90年代，美国爱荷华州立大学就开始研究猪小肠水解，且目前美国爱荷华州Nutra-flo 蛋白质生物制品公司是生产DPS 较早的公司，其产品普遍应用于美国、越南、中国等区域。

王春维等对比研究胰蛋白酶与木瓜蛋白酶对猪肠膜的水解效果，试验证明木瓜蛋白酶效果较好，因其在相同时间内水解产生的可溶性蛋白及小肽含量均高于胰蛋白酶。

肠膜蛋白粉简介

肠膜蛋白粉肠膜蛋白粉（Dried Porcine Solubles,DIS）是以猪小肠为单一来源（防止交叉感染），经一系列蛋白酶长时间水解与特殊酶解处理，而后经高温灭菌和特殊条件下干燥等过程制造出来的新型动物蛋白质原料。

DPS含有大量的小肽和游离氨基酸（MeUor,2000），可应用于多种动物及同种动物不同生长发育阶段的饲料，尤其是在早期断奶仔猪饲料中可以部分或全部代替血浆蛋白粉（AP）、乳清粉和脱脂奶粉等较昂贵的动物蛋白原料，大大节约饲料成本（高欣等，2001）。

1 DPS的加工工艺及营养特性1.1 DPS的加工工艺DIS 是利用猪小肠黏膜萃取肝素过程的副产物，目前国内市场上的DIS 多为进口产品，其大致的生产工艺是将屠宰场收集的猪小肠及肠黏膜，用特定蛋白酶在62~74℃下处理5 h,浓缩，再与赋形剂充分混合，最后经107℃，15 min高温灭菌及干燥等工序加工制造而成。

加工工艺是影响DIS质量的重要因素。

王春维等（2005）在猪DIS 生产工艺的研究中指出，胰蛋白酶与木瓜蛋白酶对猪肠膜的水解效果相比，木瓜蛋白酶较好，因为其在相同时间内水解产生的可溶性蛋白及小肽含量均显著高于胰蛋白酶。

此外，木瓜蛋白酶价格低廉，酶解条件温和（最佳酶解条件为加酶量2% ,60℃ ,pH 6,水解7 h），生产出的DIS 主要指标达到或超过了进口产品DIS 50（美国伊阿华收稿日期2006-03-27州的Nutra-flo蛋白质制品公司生产）。

纯肠黏膜蛋白的吸湿性很强，易板结，因此DIS的主要成分除了肠膜蛋白水解物外，还含有一定量的赋形剂。

进口DIS 多用黄豆皮作防板结分散剂，但黄豆皮中有抗营养因子存在，影响DIS 的吸收利用。

因此，去除黄豆皮中的抗营养因子或选用新材料作赋形剂是DIS 加工工艺中需要进一步研究的问题。

1.2 DIS 的营养特性1.2.1 含有丰富的游离氨基酸和小肽小肠黏膜经过酶解处理后，肠黏膜蛋白被分解为小肽（二肽、三肽、多肽和苦肽）和游离氨基酸，水溶性好，且易于被动物利用。

肠膜蛋白粉的营养特性

肠膜蛋白粉的营养特性及在养猪业生产中的应用贾晓燕浙江大学饲料科学研究所程文虹浙江杭州汇能生物技术有限公司摘要肠膜蛋白粉是一种新型的动物蛋白源，它是猪小肠黏膜水解萃取肝素过程的副产物，含有大量的游离氨基酸和小肽。

关键词肠膜蛋白粉营养特性仔猪母猪中图分类号：$872 文献标识码：B 文章编号：1002—2813(2006)08—0039—03肠膜蛋白粉(Dried Porcine Solubles，DPS)是以猪小肠为单一来源(防止交叉感染)，经一系列蛋白酶长时间水解与特殊酶解处理，而后经高温灭菌和特殊条件下干燥等过程制造出来的新型动物蛋白质原料。

DIS含有大量的小肽和游离氨基酸(Mellor，2000)，可应用于多种动物及同种动物不同生长发育阶段的饲料，尤其是在早期断奶仔猪饲料中可以部分或全部代替血浆蛋白粉(AP)、乳清粉和脱脂奶粉等较昂贵的动物蛋白原料，大大节约饲料成本(高欣等，2001)。

1 DPS的加工工艺及营养特性1．1 DPS的加工工艺DPS是利用猪小肠黏膜萃取肝素过程的副产物，目前国内市场上的DPS多为进口产品，其大致的生产工艺是将屠宰场收集的猪小肠及肠黏膜，用特定蛋白酶在62～74℃下处理5 h，浓缩，再与赋形剂壳分混合，最后经107 oC，15 rain高温灭菌及干燥等工序加工制造而成。

加工工艺是影响DPS质量的重要因素。

王春摊等(2005)在猪DPS生产工艺的研究中指出，胰蛋白酶与木瓜蛋白酶对猪肠膜的水解效果相比，木瓜翟白酶较好，因为其在相同时间内水解产生的可溶牲蛋白及小肽含量均显著高于胰蛋白酶。

此外，木圾碌白酶价格低廉，酶解条件温和(最佳酶解条件为寝嚼羊?％，60~C，pH 6，水解7 h)，生产出的DPs主鞯达到或超过了进口产品DPS 50(美国伊阿华“ka-k 州的Nutra—flo蛋白质制品公司生产)。

纯肠黏膜蛋白的吸湿性很强，易板结，因此DPS 的主要成分除了肠膜蛋白水解物外，还含有一定量的赋形剂。

肠膜蛋白粉

肠膜蛋白粉产品特性：采用猪小肠组织作为原料，经过生物酶水解、附着和烘干制成。

是一种新型的动物源性饲料蛋白质，富含短链肽和平衡的氨基酸；增强动物特别是幼小动物的生产性能和健康水平；以短链肽形式存在的氨基酸和自由氨基酸具有较高的生物活性。

在饲料中使用肠膜蛋白粉可以促成动物生长，保障健康，带来更好的经济效益。

高含量的蛋白质多以短链肽的形式存在，为生长动物提供极宜消化利用的蛋白质，特别适用于高档幼畜饲料的配制。

促进动物肠道健康发育；能够经济有效地替代幼小动物饲料里的高档鱼粉、血浆蛋白粉等昂贵的饲料蛋白质原料，并获得更高的生产性能；鱼粉生产的卫生安全程度常常没有保证，鱼粉的质量变化很大，不同产地、不同批次都会有差异；另外，鱼粉价格的大起大落，也使在幼小动物饲料中常规使用鱼粉增加了许多困难。

多美蛋白粉所含的水解短链肽能够促进动物的肠道健康及早日发育成熟，并可获得更高的生产性能；降低了使用其它昂贵蛋白原料（如血浆蛋白粉等）的可行性；有效地降低饲料成本，提高市场竞争力，在激烈的市场竞争中赚的更多的利润；流动性好，易于和其它饲料原料混合均匀。

成分：粗蛋白≥48.00%、粗纤维≤5.00%、粗脂肪≤2.00%、灰分≤18.00%、钙0.42%、磷0.49% 、钾1.88% 、钠5.67%、猪代谢能3.65Mcal/kg、猪消化能3.95Mcal/kg。

氨基酸组成：赖氨酸3.50%、蛋氨酸0.70%、胱氨酸0.77%、苏氨酸2.22%、色氨酸0.44%、精氨酸3.20%、组氨酸1.30%、亮氨酸3.81、异亮氨酸1.95%、苯丙氨酸2.32%、颉氨酸2.52%。

用法、用量及储存：仔猪或其它动物的全价饲料中添加，推荐用量25-50公斤/吨，或依实际情况作适当增减；存放于阴凉、干燥、通风处、注意避光、防潮、防霉、防鼠、开封后尽快使用完。

肠膜蛋白粉是采集健康猪小肠的肠粘膜在萃取肝素纳产品后，用蛋白酶在62～74℃下处理5小时，浓缩后经107℃高温喷雾干燥而成的。

贝倍壮(肠膜蛋白粉)

色氨酸（%）
≥0.3
蛋氨酸（%）
≥1.2
粗灰分（%）
≤18.0
赖氨酸（%）
≥3.4
消化能（Kcal/kg）
3500
苏氨酸（%）
≥3.0
粗灰分（%）
≤18.0
四、用法用量：
1、乳猪料（体重小于30公斤）：添加20-40公斤每吨配合饲料。
2、怀孕后期和哺乳期母猪料：添加10-30公斤每吨配合饲料。
3、貂、狐狸等毛皮动物幼仔料：添加20-40公斤每吨配合饲料。
4、犊牛料：添加20-40公斤每吨配合饲料。
5、特种水产料：添加30-80公斤每吨配合饲料。
五、规格：20kg/袋
3．含丰富免疫调节肽（Immunomodulator Peptides）提高乳猪免疫力和抗病能力。
4．含丰富游离氨基酸和大量寡肽（二肽、三肽）、易被仔猪消化、吸收，缓解断奶应激，减少断奶失重和降低腹泻，促进生长发育。
5．产品的水溶性高。
三、主要质量指标：
营养素名称
含量
营养素名称
含量
粗蛋白质（%）
≥50.0
贝倍壮（肠膜蛋白粉）是由北京中科景明生物技术有限公司利用农业部饲料工业中心的“948”项目的研究成果，通过消化吸收、改进后生产的新型活性蛋白原料。它是由猪小肠黏膜提取肝素钠经蛋白酶酶解的产物，其蛋白质结构多以短链小肽和寡肽的形式存在，极易消化吸收和高度的生物安全性，同时加入苦味肽分解酶，提高适口性，用膜分离技术清除大部分的灰分，然后喷雾干燥而成。通过该工艺加工的肠粘膜蛋白粉，蛋白质胃蛋白酶消化率为95%，并能够促进幼龄动物的肠道发育，较少断奶应激，提高动物的免疫功能和生长性能。
一、产品特点：
1、猪小肠黏膜经酶解后，喷雾干燥而成。

肠屏障相关紧密连接蛋白免疫荧光

肠屏障相关紧密连接蛋白免疫荧光全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：肠道是人体最重要的消化器官之一，同时也是人体内免疫细胞最为密集的器官之一。

肠道黏膜作为免疫屏障，不仅需要有效防止有害微生物通过，而且还需要保持足够的通透性以促进养分吸收。

在肠道黏膜细胞间的连接中，肠屏障相关紧密连接蛋白起着至关重要的作用。

肠屏障相关紧密连接蛋白是一类重要的跨膜蛋白，主要分布在肠道上皮细胞的细胞间连接处，负责维持细胞之间的紧密连接，防止有害微生物、毒素等物质通过肠道黏膜。

ZO-1、claudin和occludin是肠屏障相关紧密连接蛋白中最为重要的代表性蛋白。

ZO-1是一种与胞浆蛋白骨架相连的紧密连接蛋白，在肠道上皮细胞间的连接中起着至关重要的作用。

研究表明，当ZO-1的表达量降低或发生异常，会导致肠道屏障功能受损，促进有害微生物的穿透，进而引发肠道炎症和疾病。

ZO-1在维持肠道屏障功能和调控肠道免疫反应中具有重要作用。

claudin和occludin是另外两种与ZO-1密切相关的肠屏障相关紧密连接蛋白。

它们分别位于细胞间连接的不同位置，共同构成了肠道上皮细胞之间的紧密连接。

研究表明，claudin和occludin的表达水平与肠道屏障的通透性密切相关，过高或过低的表达都会影响肠道屏障的功能，导致肠道疾病的发生。

为了研究肠屏障相关紧密连接蛋白在肠道屏障功能中的具体作用，科学家们开发了肠屏障相关紧密连接蛋白免疫荧光技术。

这种技术利用特异性的抗体标记肠屏障相关紧密连接蛋白，在显微镜下观察和分析其在肠道上皮细胞中的分布和表达水平。

通过肠屏障相关紧密连接蛋白免疫荧光技术，科学家们可以深入了解肠道上皮细胞之间的连接状态，探究肠道屏障功能的变化与疾病的关联性。

除了作为科研工具，肠屏障相关紧密连接蛋白免疫荧光技术也在临床诊断和治疗中发挥着重要作用。

通过检测肠屏障相关紧密连接蛋白在患者肠道黏膜中的表达水平，医生可以及时发现肠道屏障功能的异常，指导治疗方案的选择和调整。

TritonX-114去污剂法提取大肠杆菌膜蛋白

TritonX-114去污剂法提取大肠杆菌膜蛋白摘要】目的：建立一种快速方便提取大肠杆菌膜蛋白的方法。

方法：收集临床分离的大肠杆菌，利用TritonX-114去污剂法提取大肠杆菌膜蛋白，Bradford法测定蛋白浓度，运用表面增强激光解析电离飞行时间质谱（SELDI-TOF-MS）进行质谱分析，采用CiphergenProteinchip软件采集数据。

重复测定20次大肠杆菌的混合标本，评价TritonX-114去污剂法提取大肠杆菌膜蛋白的重复性。

结果：TritonX-114去污剂法成功提取出了大肠杆菌膜蛋白。

重复测定20次大肠杆菌的混合标本，蛋白峰的分子量变异系数均小于0.05%。

结论：TritonX-114去污剂法可以快速方便的提取大肠杆菌膜蛋白，并具有很好的重复性，这不仅对大肠杆菌耐药机制和治疗方法的研究起着重要作用，也为膜蛋白的快速提取提供了新的思路。

【关键词】大肠杆菌；膜蛋白；TritonX-114；表面增强激光解析电离飞行时间质谱【中图分类号】R446 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2017）12-0059-03MEMBRANE PROTEINS OF ESCHERICHIA COLI WERE EXTRACTED BY USING TRITON- X-114 Wang Qin, Xu Jian, LIiu Chenggui.Clinical Laboratory of Chengdu Women and Children Center Hospital, Chengdu, Sichuan, 610091, China【Abstract】Objective To establish a rapid and convenient extracted method of membrane proteins from Escherichia coli. Methods The clinical isolates of E. coli were collected, membrane proteins of E. coli were extracted by using Triton X-114 detergent, and protein concentrations were detected by Bradford method. The membrane proteins of E. coli were analyzed by surface enhanced laser desorption /ionizationtime-of-flight mass spectrometry (SELDI-TOF- MS), and the data was collected by Ciphergen Proteinchip software. The mixed proteins of E. coli were measured for twenty times to evaluate the repeatability. Results The membrane proteins of E. coli were successfully extracted by using Triton X-114 detergent. The mixed samples of E. coli were measured for twenty times, and the results showed that the CV of protein in molecular weight was less than 0.05%. Conclusion The membrane protein of E. coli can be extracted quickly and easily by using Triton X-114 detergent. This method has good repeatability, which provides a new idea for the extraction of membrane protein, this study not only make an important role in the research of E. coli resistance mechanisms and treatment, but also is beneficial to the further study of membrane proteomics.【Key words】Escherichia coli; Membrane protein; Triton X-114; SELDI-TOF- MS 大肠杆菌(E.coli)是引起临床感染最常见的革兰阴性杆菌，该菌易产生超广谱B-内酰胺酶（ESBL），从而导致对第三代头孢菌素耐药，甚至引起严重的院内感染暴发[1]。

肠道中特异表达的蛋白质

肠道中特异表达的蛋白质
在肠道中特异表达的蛋白质包括：
1.肠特异蛋白（intestinal-specific protein，ISP）：这是一种在肠道中特异表达的蛋白质，也被称为肠细胞刷状缘膜蛋白（intestinal brush border membrane protein，IBBMP）。

它主要在肠道上皮细胞中表达，参与肠道营养物质的吸收和运输。

2.肠富集因子（intestinal enriched factor）：这是一种在肠道中表达的蛋白质，也被称为肠富集因子或肠激酶原激活蛋白。

它主要在肠道内分泌细胞中表达，参与调节肠道激素的合成和分泌。

以上信息仅供参考，如需获取更多详细信息，建议您查阅相关文献。

肠屏障相关紧密连接蛋白免疫荧光

肠屏障相关紧密连接蛋白免疫荧光1. 引言1.1 背景介绍肠道是人体最大的外界环境与内部环境接触的部位，它既需要充分吸收养分，又需要有效阻止有害物质的进入。

肠屏障是肠道内的保护屏障，它由肠上皮细胞和相关蛋白结合而成，起着防止有害物质侵入体内、维持内环境稳定的重要作用。

肠屏障相关紧密连接蛋白是一类位于肠上皮细胞之间的蛋白质，其主要作用是通过连接细胞与细胞之间的紧密连接，形成一个完整的屏障，防止细菌、毒素和其他有害物质通过间隙进入体内。

近年来，研究人员对肠屏障相关紧密连接蛋白进行了深入的研究，以揭示其在肠道健康和疾病发生中的作用机制。

本文将介绍肠屏障的功能及重要性，以及肠屏障相关紧密连接蛋白的研究进展。

还将探讨免疫荧光技术在肠屏障相关紧密连接蛋白研究中的应用，并展示相关研究结果。

通过深入分析肠屏障相关紧密连接蛋白的分子机制，我们可以更好地理解肠道屏障功能的调节机制，为相关疾病的防治提供新的思路和策略。

1.2 研究目的研究目的是对肠屏障相关紧密连接蛋白进行深入探讨，了解其在维持肠道屏障功能和免疫调节中的作用机制。

通过分析这些紧密连接蛋白在肠道屏障维持和破坏过程中的表达和功能变化，可以揭示肠道疾病发生发展的机制，并为相关疾病的预防和治疗提供理论依据。

研究还旨在探索免疫荧光技术在肠屏障相关紧密连接蛋白研究中的应用价值，为肠屏障研究提供新的技术手段和方法。

通过本次研究，我们希望能够深入了解肠屏障相关紧密连接蛋白的功能和作用机制，为肠道健康提供新的治疗策略和研究方向。

1.3 研究方法研究方法是指在进行肠屏障相关紧密连接蛋白免疫荧光研究时所采用的方法和技术。

在本研究中，我们将主要采用以下几种方法：1.标本采集：我们将从实验动物或人体肠道组织中采集样本进行研究。

在进行标本采集过程中，需要严格遵循相关伦理要求，确保样本的来源合法和道德。

2.免疫荧光染色：免疫荧光技术是本研究的核心技术之一。

通过使用特异性的抗体标记肠屏障相关紧密连接蛋白，我们可以在细胞或组织中准确地识别和定位这些蛋白质的表达情况。

肠膜蛋白对加州鲈肠道消化酶活力的影响

第42卷㊀第6期2023年12月黑龙江水产Northern Chinese FisheriesVol.42No.6December 2023文章编号:1674-2419(2023)06-0422-03作者简介:郑伟(1973.9-),男,汉族,福建福清人,大专学历㊂广东鱼兴港水产有限公司工程师㊂主要从事大口黑鲈和鳜鱼的养殖与物流技术工作㊂E -mail:26064979@㊂肠膜蛋白对加州鲈肠道消化酶活力的影响郑㊀伟,郑时忠,郑智鹏(广东鱼兴港水产有限公司,广东佛山528203)摘㊀㊀要:试验旨在研究不同水平的肠膜蛋白对加州鲈肠道消化酶活力的影响,并确定肠膜蛋白在加州鲈(Micropterus salmoides )生产中的最适添加水平㊂试验选择480尾健康㊁体况相近㊁体重约为5g 的加州鲈,按照单因素试验设计,随机分成4组个处理,每个处理组3个重复,每个重复40尾加州鲈㊂试验加州鲈分别饲喂含有2%㊁4%和6%的肠膜蛋白的基础饲料,肠膜蛋白等比例替代鱼粉㊂饲养期60d㊂试验结束,采集各组加州鲈的肠道组织,检测肠道消化酶活力㊂结果显示,2%㊁4%和6%肠膜蛋白组加州鲈肠道中脂肪酶活力显著比对照组提高(P <0.05),且4%和6%肠膜蛋白组脂肪酶活力显著高于2%肠膜蛋白组(P <0.05);4%和6%肠膜蛋白组加州鲈肠道中胰蛋白酶活力显著高于对照组(P <0.05);2%㊁4%和6%肠膜蛋白组加州鲈肠道中糜蛋白酶活力显著高于对照组(P <0.05)㊂研究表明,加州鲈饲料中添加一定剂量的肠膜蛋白可以提高肠道中消化酶活力,且以4%的添加剂量为宜㊂关键词:肠膜蛋白;肠道;消化酶;加州鲈(Micropterus salmoides )中图分类号:S965.211文献标志码:A㊀㊀近些年,随着水产养殖业的快速发展,导致养殖中需要大量的饲料,且饲料成本约占养殖成本的70%,尤其是动物性蛋白原料的缺乏,限制了水产养殖业的快速发展㊂鱼粉是水产养殖业中主要的蛋白原料,蛋白含量较高,氨基酸较平衡并富含大量的不饱和脂肪酸,是一种优质的动物性蛋白原料;但由于其价格的不断上涨,过量依赖进口,导致其在水产饲料中应用受限[1]㊂寻找鱼粉的替代品对水产养殖业的健康发展至关重要㊂其中,鸡肠膜蛋白是以新鲜的鸡肠为原料,经过蛋白酶处理后,喷雾干燥制得的动物性蛋白原料[2]㊂肠膜蛋白经蛋白酶酶解后会产生大量的游离氨基酸和小肽,营养丰富,在畜禽养殖生产中具有广泛的应用前景[3]㊂目前,肠膜蛋白在猪生产中的应用研究结果较多㊂谢飞等[4]研究了肠膜蛋白对猪营养物质消化率的影响,研究发现适量的肠膜蛋白粉可以提高猪对饲料总能㊁中性洗涤纤维及粗蛋白的消化率,且肠膜蛋白粉的最适添加水平为20%㊂胡玲玲等[5]研究了肠膜蛋白对仔猪生长性能的影响,发现添加2.5%的肠膜蛋白可以显著提高仔猪的生长性能,且鸡肠膜蛋白与猪肠膜蛋白对仔猪生长性能的影响效果相当㊂在珍珠龙胆石斑鱼的研究中发现,肠膜蛋白替代9%的鱼粉对其生长性能无显著影响[6]㊂唐涛[7]研究发现,适量的肠膜蛋白可以有效提高黄鳝生长性能的趋势,可以降低肠道炎症反应,有效促进肠道黏膜紧密连接蛋白的表达,提高肠道绒毛高度,且肠膜蛋白的最适添加水平为5%㊂加州鲈(Microp-terus salmoides )是从20世纪70年代引入中国,主要在中国南方养殖,由于其肉质鲜美㊁营养丰富,深受广大消费者的喜爱㊂该试验以加州鲈为研究对象,探究不同水平的鸡肠膜蛋白对其肠道消化酶活力的影响,并确定肠膜蛋白在加州鲈养殖中的最适添加水平,为加州鲈的低成本㊁可持续养殖提供参考㊂1材料与方法1.1肠膜蛋白该研究中使用的肠膜蛋白由山川生物科技有限㊃224㊃公司提供㊂试验加州鲈购自福清本地水产养殖场㊂1.2试验设计试验选择480尾健康㊁体况相近㊁体重约为5g 的加州鲈,按照单因素试验设计,随机分成4个处理,每个处理4个重复,每个重复40尾加州鲈㊂试验加州鲈分别饲喂含有2%㊁4%和6%的肠膜蛋白的基础饲料,肠膜蛋白等比例替代鱼粉㊂饲养60d㊂试验结束,采集各组加州鲈的肠道组织,检测肠道消化酶活力㊂试验分组及处理见表1㊂表1㊀试验分组及处理分组处理对照组基础饲料2%组基础饲料+2%肠膜蛋白4%组基础饲料+4%肠膜蛋白6%组基础饲料+6%肠膜蛋白1.3试验基础饲料试验加州鲈的基础饲料以豆粕㊁鱼粉㊁肠膜蛋白为蛋白源,以豆油和鱼油为脂肪源配制,其原料组成及营养成分含量见表2㊂表2㊀试验加州鲈的基础饲料组成及营养成分/%原料比例营养成分含量豆粕15粗蛋白45.59鱼粉43粗脂肪10.03面粉20水分9.04鱼油4豆油3磷酸二氢钙1纤维素10预混料41.4养殖管理试验加州鲈采取循环水养殖㊂正式试验开始前,先驯养7d适应养殖环境,期间投喂基础饲料㊂正式试验期,每天投喂饲料量为加州鲈体重的3%~ 4%,投喂2hrs后吸出残饵㊂养殖水pH值约为7.5,水温约为27.5ħ,溶解氧含量大于5.5mg/L㊂1.5肠道酶活力的测定试验结束后,从每个重复中选择3尾加州鲈麻醉采集肠道组织样品,-80ħ冰箱中保存,用于测定胰蛋白酶㊁糜蛋白酶㊁脂肪酶活力,检测方法参考试剂盒(南京建成生物工程研究所)说明书㊂1.6数据处理各组加州鲈肠道酶活力指标数据采用SPSS24采用单因素方法分析显著性,LSD分析组间差异, P<0.05表示数据具有显著差异㊂2结果不同水平的肠膜蛋白对加州鲈肠道消化酶活力的影响见表3㊂表3㊀不同水平的肠膜蛋白对加州鲈肠道消化酶活力的影响指标对照组2%肠膜蛋白组4%肠膜蛋白组6%肠膜蛋白组SEM P值脂肪酶(U/L)80.54c96.05b107.65a102.98a5.850.028胰蛋白酶(U/mg)1253.87b13.25.84ab1475.97a1407.51a26.850.041糜蛋白酶(U/mg)74.31b86.65a94.65a92.31a 5.970.026注:同行数据被标注不同字母表示差异显著(P<0.05)㊂由表3数据可见,2%㊁4%和6%肠膜蛋白组加州鲈肠道中脂肪酶活力显著比对照组提高(P<0.05),且4%和6%肠膜蛋白组脂肪酶活力显著高于2%肠膜蛋白组(P<0.05);4%和6%肠膜蛋白组加州鲈肠道中胰蛋白酶活力显著高于对照组(P<0.05);2%㊁4%和6%肠膜蛋白组加州鲈肠道中糜蛋白酶活力显著高于对照组(P<0.05)㊂3讨论肠道是水产生物消化吸收饲料中营养物质的主要场所,肠道的消化吸收能力与其中的消化酶活性直接相关㊂胰蛋白酶和糜蛋白酶主要消化饲料中蛋白质;而脂肪酶可以将长链的甘油水解为脂肪酸供机体消化吸收㊂该试验中,2%㊁4%和6%肠膜蛋白组加州鲈肠道中脂肪酶活力显著比对照组提高,且4%和6%肠膜蛋白组脂肪酶活力显著高于2%肠膜蛋白组;4%和6%肠膜蛋白组加州鲈肠道中胰蛋白酶活力显著高于对照组;2%㊁4%和6%肠膜蛋白组加州鲈肠道中糜蛋白酶活力显著高于对照组,表明适量的肠膜蛋白显著提高了加州鲈肠道消㊃324㊃化吸收能力㊂熊娟等[8]研究了肠膜蛋白对加州鲈生长性能㊁肠道及肝脏的影响,研究发现,肠膜蛋白替代3%的鱼粉可以显著降低饲料系数,可以显著降低丙二醛㊁谷草转氨酶及谷丙转氨酶活力,显著提高肠道中脂肪酶㊁胰蛋白酶㊁糜蛋白酶等消化酶活性,也显著提高了血清中抗氧化酶活力㊂目前,肠膜蛋白在加州鲈养殖生产中应用研究结果较少㊂陈灵涵等[9]研究了肠膜蛋白对大鳞副泥鳅生长㊁消化酶及抗氧化能力的影响,发现适量的肠膜蛋白对大鳞副泥鳅肠道消化酶活力未产生显著性影响,但可以提高其生长性能㊂以上研究结果与本试验研究结果不完全相同,可能是因为试验鱼种类㊁肠膜蛋白来源不同导致的,未来还需要进一步研究相关的作用机制㊂4结论该试验结果表明,在加州鲈养殖中添加一定水平的肠膜蛋白可以提高肠道中脂肪酶㊁胰蛋白酶及糜蛋白酶活力,增强了肠道的消化吸收能力;综合各项数据来看,4%的肠膜蛋白添加水平较为适宜㊂参考文献:[1]周歧存,麦康森,刘永坚,等.动植物蛋白源替代鱼粉研究进展[J].水产学报,2005,29(3):404-410. [2]朱滔.肠膜蛋白营养价值及其在水产动物饲料中的应用[J].水产养殖,2021,42(05):11-14.[3]朱滔,黄小燕.肠膜蛋白在动物生产中应用研究进展[J].饲料研究,2015(20):9-13.[4]谢飞,赵金标,黄强,等.不同替代比例肠膜蛋白粉对猪有效能及营养物质消化率的影响[J].饲料工业,2020, 41(03):21-26.[5]胡玲玲,杨红军,顾莞婷.鸡肠膜蛋白对保育猪生长性能的影响[J].饲料与畜牧,2018(11):74-76. [6]植心妍,杨烜懿,王光辉,等.酶解肠膜蛋白粉在珍珠龙胆石斑鱼饲料中的应用[J].水产科学,2023,42(03): 509-516.[7]唐涛.肠膜蛋白对黄鳝生长和肠道健康的影响[D].长沙:湖南农业大学,2019.[8]熊娟,王标,杨红军,等.肠膜蛋白对加州鲈生长性能和肝肠健康的影响[J].饲料工业,2021,42(01):17-23. [9]陈灵涵,郑宗林,朱成科,等.肠膜蛋白对鱼粉的不同替代水平对大鳞副泥鳅幼鱼生长性能㊁消化酶活性及抗氧化能力的影响[J].饲料与畜牧,2017(07):39-43.Effects of intestinal membrane proteins on the activity of intestinal digestive enzymes in Micropterus salmoidesZHENG Wei,ZHENG Shizhong,ZHENG Zhipeng(Guangdong Yuxing Harbor Aquatic Co.,Ltd,Foshan528203,Guangdong China)Abstract:The experiment was designed to investigate the effects of different levels of intestinal membrane proteins on the activity of intestinal digestive enzymes of Micropterus salmoides,and to determine the optimum level of intes-tinal membrane proteins to be added in the production of Micropterus salmoides.A total of480healthy Micropterus salmoides in similar body condition and weighing about5grams were randomly divided into four treatments with three replicates of40Micropterus salmoides each,according to a one-way experimental design.The experimental Micropterus salmoides were fed a basal diet containing2%,4%and6%of enteric membrane protein,with enteric membrane protein replacing fishmeal in equal proportions.The feeding period was60days.At the end of the ex-periment,the intestinal tissues of Micropterus salmoides in each group were collected and the intestinal digestive en-zyme activities were tested.Membrane protein groups were significantly higher(P<0.05)than the control group. The study showed that the addition of a certain dose of enteromucosal proteins to Micropterus salmoides feed can im-prove the digestive enzyme activity in the intestine,and the4%additive dose is suitable. Keywords:intestinal membrane protein;intestine;digestive enzymes;Micropterus salmoides㊃424㊃。

血浆蛋白粉、肠膜蛋白、乳清粉

氨基酸天门冬氨酸苏氨酸丝氨酸谷氨酸甘氨酸丙氨酸胱氨酸缬氨酸蛋氨酸异亮氨酸亮氨酸酪氨酸苯丙氨酸赖氨酸组氨酸精氨酸脯氨酸合计
ASP THR SER GLU GLY ALA CYS VAL MET ILE LEU TRY PHE LYS NH3 HIS ARG PRO 血浆蛋白粉 6.85 4.57 3.83 9.94 2.46 3.87 0.7 4.24 0.94 2.01 6.89 3.34 3.82 6.17 0 2.17 3.85 3.2
单项结论 × ×
具典型喷雾特征
干燥无定型粉，无块状物
√
√ √ ×
溶解试验凝胶试验
大部分溶解无
案例1：样品A
检验项目
理化指标
检验纪录
粗蛋白质,%
单项结论 √
79.2
粗灰分,%
水分,% 挥发性盐基氮（mg/100g） IgG/粗蛋白质
13.5
5.8
√
√ √ ×
17.8
0
案例1：样品A
ASP THR SER GLU GLY ALA CYS VAL MET ILE LEU TRY PHE LYS NH3 HIS ARG NP-2002 6.85 4.57 3.83 9.94 2.46 3.87 0.7 4.24 0.94 2.01 6.89 3.34 3.82 6.17 0.79 2.41 4.16 3.2
血浆、血球分离
血球储藏罐低温储存无菌包装离心喷雾血浆储藏罐 CCP2 CCP: Critical Control Point,关键控制点全程依HACCP标准执行.
血球浓缩
血浆浓缩
1 .从大型屠宰场收集经严格检疫的新鲜猪血

核酸、蛋白技术参数资料、分子量标准及常用试剂的配制

核酸、蛋白技术参数资料、分子量标准及常用试剂的配制•一、核酸及蛋白质常用数据1．核苷三磷酸的物理常数2．常用核酸的长度与分子量3．常用核酸蛋白换算数据〔1〕重量换算1μg=10-6g 1pg=10-12g 1ng=10-9g 1fg=10-15g 〔2〕分光光度换算：1A260双链DNA=50μg/ml 1A260单链DNA=30μg/ml 1A260单链RNA=40μg/ml 〔3〕DNA摩尔换算：1μg 100bp DNA=1.52pmol=3.03pmol末端1μg pBR322 DNA=0.36pmol 1pmol 1000bp DNA=0.66μg 1pmol pBR322=2.8μg 1kb双链DNA〔钠盐〕=6.6×105道尔顿1kb 单链DNA〔钠盐〕=3.3×105道尔顿1kb单链RNA〔钠盐〕=3.4×105道尔顿〔4〕蛋白摩尔换算：100pmol分子量100，000蛋白质=10μg 100pmol分子量50，000蛋白质=5μg 100pmol分子量10，000蛋白质=1μg 氨基酸的平均分子量=126.7道尔顿〔5〕蛋白质/DNA换算：1kb DNA=333 个氨基酸编码容量=3.7×104MW蛋白质10，000MW蛋白质=270bp DNA 30，000MW蛋白质=810bp DNA 50，000MW蛋白质=1.35kb 100，000MW蛋白质=2.7kb DNA4．常用蛋白质分子量标准参照物5．常用DNA分子量标准参照物a：以水为溶剂的抗生素贮存液通过0.22μm滤器过滤除菌。

以乙醇为溶剂的抗生素溶液无须除菌处理。

所有抗生素溶液均应放于不透光的容器保存。

b：镁离子是四环素的拮抗剂，四环素抗性菌的筛选应使用不含镁盐的培养基〔如LB培养基〕。

五、常用贮存液的配制1．30%丙烯酰胺溶液【配制方法】将29g丙烯酰胺和1g N，N’-亚甲双丙烯酰胺溶于总体积为60ml的水中。

ZO-1、Occludin、IL-18在急性重症胰腺炎肠黏膜中的表达

ZO-1、Occludin、IL-18在急性重症胰腺炎肠黏膜中的表达钟文雁【摘要】目的：观察急性重症胰腺炎肠黏膜紧密连接蛋白-1（ ZO-1）、Occludin及IL-18的表达变化，探讨急性重症胰腺炎时肠道屏障功能损伤的机制。

方法：选取60例胰腺炎患者为胰腺炎组，选取正常健康人30名为对照组。

采用免疫组织化学SP法检测肠组织ZO-1、Occludin、IL-18蛋白表达，采用Western bloting法检测肠组织ZO-1、Occludin、IL-18蛋白半定量检测。

结果：胰腺炎组ZO-1阳性率低于对照组（ P<0.05），胰腺炎组Occludin阳性率低于对照组（ P<0.05），胰腺炎组IL-18阳性率高于对照组（P<0.05），胰腺炎组ZO-1、Occludin 蛋白表达水平均低于对照组，IL-18高于对照组（P<0.05）。

结论：急性重症胰腺炎时，紧密连接相关蛋白ZO-1、Occludin表达降低，IL-18表达增加，可能共同参与了急性胰腺炎肠黏膜屏障功能损伤的病理过程。

【期刊名称】《齐鲁护理杂志》【年(卷),期】2015(000)013【总页数】2页(P123-124)【关键词】ZO-1;Occludin;IL-18;急性胰腺炎【作者】钟文雁【作者单位】济南市儿童医院山东济南250022【正文语种】中文【中图分类】R473.73肠道是急性胰腺炎最常累及的胰腺外器官之一。

急性重症胰腺炎时，全身炎性细胞被过度激活，炎性因子大量释放，可造成毛细血管渗漏，导致肠黏膜组织水肿、缺血坏死，紧密连接蛋白－1( ZO－1)被破坏，加重肠道屏障功能障碍，甚至导致全身炎性反应综合征［1］。

Occludin蛋白石紧密连接的主要蛋白之一，对维持细胞间基本结构和功能起到重要作用。

IL －18是一种促炎性细胞因子［2］。

2012年10月～2013年10月，我们对急性重症胰腺炎患者肠黏膜ZO－1、Occludin、IL－18的表达进行检测，探讨急性重症胰腺炎肠道屏障损伤的机制。