舟山市首次由气单胞菌引起食源性疾病爆发的调查研究

[作者简介]　石亚素(1957-),女,副主任技师,主要从事微生物
检验及科研工作。

【调查报告】
舟山市首次由气单胞菌引起食源性疾病爆发的调查研究
石亚素1
,童国忠2
,张行钦1
,张全忠1
,金晓萍1
,周缀琴
1
(11浙江省舟山市定海区疾病预防控制中心,浙江舟山　316000;21浙江海洋学院医学院,浙江舟山　316000)[摘要]　目的:分析该起食源性疾病爆发的原因。

方法:采用流行病学调查、临床诊断和实验室检验结果相结合的方法。

结果:经市有关流行病学专家分析认定是因食用被气单胞菌污染食物而引起的群体性食源性疾病爆发,载体食物为农贸
市场市售熟素食。

结论:必须加强农贸市场的食品卫生监督与管理,以保障海岛居民的饮食安全和身体健康。

[关键词]　食源性疾病;爆发;气单胞菌
[中图分类号]　R15513+
1 [文献标识码]　B [文章编号]　1004-8685(2008)06-1174-03
I nvesti ga ti on on foodborne outbreak by aero m ona s i n fecti on i n Zhoushan C ity
Shi Ya 2shu 1
,Tong Guo 2zhong 2
,Zhang X ing 2qin 1
,Zhang Q uan 2zhong 1
,J in X iao 2ping 1
,Zhou Zhui 2qin
1
(11D inghai Center for D isease Contr ol and Preventi on,Zhoushan 316000,China;21Zhejiang Ocean College,Zhoushan 316000,China )
[Abstract]　O bjecti ve:To understand the causes of infecti on t o p r ovide scientific basis f or p reventi on 1M ethods:The ep idem i o 2l ogical investigati on and case of illness were used t o conduct a contrastive study 1The laborat ory tests and the clinical diagnosis method were adop ted as well for investigati on and analysis 1Results:The aer omonas infecti on leading t o the outbreak of f oodborne diseases and the food pathogen vect or was cooked f ood in l ocal far mersmarket 1Conclusi on:To strengthen f ood hygiene supervisi on and manage ment at l ocal far mers market is i m portant t o p r otect the health and diet safety of island residents 1[Key words]　Foodborne diseases;Outbreak;Aer omonas
由食品污染而引起疾病是当今世界上最广泛的卫生问题之一,据报告食源性疾患的发病率居各类疾病总发病率的第二位[1]。

本文拟对舟山市首次由气单胞菌引起的食源性疾病爆发进行调查分析。

1　基本情况
舟山市定海区X 镇下辖13个行政村、1个居委,人口
17223人,镇自来水厂负责向全镇提供生活饮用水。

镇农贸市场地处该镇中心,有水产、蔬菜、生肉、熟食、副食品等各类摊位56户,其中熟素食摊位2户、熟食(白斩)摊4户。

2　流行病学调查211　病例定义
按G B14938-94《食物中毒诊断标准及技术处理总则》,结合本次中毒病例的临床表现,有同一进餐史且有下列之一者确诊为中毒病例:发热伴消化道症状;发热38℃以上;腹泻(3次/日及以上)。

212　临床特征
共确诊中毒病例84人,以发热、腹痛、腹泻、恶心呕吐为主,伴头痛。

发热为起始症状,有发热者80人,占95124%(11例体温高于4011℃);腹泻者82人,占97162%(腹泻物为清水
样或糊状,一般3～7次/日,多者20次/日);腹痛者63人,占
75100%,多为脐周阵发性隐痛;恶心49人,占58133%;呕吐(1～10次/日)38人,占45124%;头痛38人,占45124%。

经解痉镇痛、抗炎输液等治疗后均痊愈,病程1～3天不等,无死亡及危重病例。

213　流行病学分布特征
21311　首发病例　刘某,女,54岁,家务,某年5月28日19:00出现发热、恶心、呕吐、脐周腹部阵发性疼痛、腹泻,伴头痛、
头晕。

21312　时间分布　首发病例5月28日19:00发病,5月30日19:30出现末例病人。

其中5月28日发病10人,占总发病人数的11190%;5月29日发病62人,占总发病人数的73181%;
5月30日发病12人,占总发病人数的14129%。

5月29日4:00～12:00发病41人,占总发病人数的48181%,为发病高峰。

发病为同源多餐次。

发病最短潜伏期2h,最长41h,平均
1415h (中位数)。

21313　人群分布　男性34人,占40148%,女性50人,占59152%,男女性别比差异无统计学意义;发病年龄最小3岁,
最大80岁,各年龄组均有发病,年龄分布差异无统计学意义。

21314　地区分布　涉及该镇7个行政村、1个居委会。

发病
范围以镇农贸市场为中心向周围呈放射状分布。

位置离镇农贸市场相对较远的6个行政村无病例发生。

各村发病情况如下:中心居委会发病16人(总人口1445人),一村发病17人(总人口1129人);二村发病7人(总人口997人);三村发病7
人(总人口521人);四村发病13人(总人口1263人);五村发病6人(总人口1319人);六村发病11人(总人口781人);七村发病1人,另有两人非该镇村民但近日均有食用从镇农贸市场购入的熟素食史。

214　调查结果
所有发病村民近期均无聚餐史,72h内的进食食谱各不相同,但发病前(5月27日～29日期间)都食用了从镇农贸市场熟素食摊上购买的熟素食如烤麸、什锦等。

本次发病有明显的家庭集聚性,多个家庭有共同食用熟素食共同发病、未食用者不发病现象。

同一家庭多人发病有22户涉及61人,提示熟素食是此次事件的源头食品。

其中有79名发病村民确认所食用的熟素食系从镇农贸市场某熟素食摊处购买。

3　现场卫生学调查
镇农贸市场整体布局不合理,各类摊点未做到划行就市,熟素食、熟食(白斩)与水产摊相连;市场内卫生设施简陋,用水缺乏。

熟素食加工间面积狭小,采光、通风不良,地面多处积有污水、油垢,内无清洗设施;加工间室外有一水井,上盖木板,加工用水取自室外井水;熟素食摊点每日加工熟素食14种,分早上、下午两次在镇农贸市场售卖;早上卖剩的熟素食部分放入冰柜,待下午卖前稍微加热,其余则置放于室温下直接拿去销售。

另据气象资料显示,5月27～29日最高气温在26℃～27℃之间,气候闷热潮湿。

4　实验室检验
411　采样情况
现场共采集各类有关样品163份,其中食品48份(甲摊熟素食14份,乙摊熟素食16份,熟肉制品18份),自来水8份、井水1份(甲摊生产加工用水),物表涂抹物19份,病人呕吐物1份、粪便36份,当地村民大便肛拭20份、血清10份(对照),病人发病初期及恢复期血清各10份。

412　检测项目
41211　一般项目　水样检测细菌总数、总大肠菌群、粪大肠菌群、肠道致病菌及霍乱弧菌;食品及物表涂抹物检测菌落总数、大肠菌群、沙门菌、志贺菌、金黄色葡萄球菌、副溶血性弧菌、致病性大肠埃希菌、霍乱弧菌、蜡样芽胞杆菌等致病菌;粪便肛拭检测肠道致病菌及霍乱弧菌。

各项指标分别依据《生活饮用水卫生规范》2001-卫生部,G B/T4789-2003《食品卫生微生物学检验》,G B15984-1995《霍乱诊断标准及处理原则》,《全国临床检验操作规程》1997-卫生部等进行检验。

41212　菌株鉴定与药物敏感性检测　依据G B/T18652-2002《致病性嗜水气单胞菌检验方法》及参考文献[2],对检出的优势菌进行鉴定。

用生物梅里埃公司生产的药物敏感性试验纸片,按照2000年美国国立临床实验室标准委员会(NCC LS)颁布的方法进行药敏试验。

41213　血清抗体检测　分别用致病性嗜水气单胞菌1号菌(井水中分离)、2号菌(熟素食中分离)及3号菌(患者中分离)进行试管定量凝集试验,检测血清抗体效价。

41214　毒力试验　用血琼脂平板检测HEC毒素,在菌落周围出现清晰β溶血圈判为阳性。

用脱脂奶蔗糖琼脂平板检测蛋白酶,在菌落周围出现清晰的溶蛋白圈判为阳性。

用乳鼠腹腔注射检测致病力。

41215　优势菌计数　用TC BS平板涂布法,经28℃培养24h 后进行黄色菌落计数,同时挑取5个黄色菌落进行生化鉴定。

413　检测结果
41311　一般项目阳性检出情况　5份熟素食(其中2份菌落总数分别为213×105cfu/g和119×105cfu/g,大肠菌群均≥24000MP N/100g)、2份食品容器物表涂抹物、7份病人粪便及1份井水(细菌总数为316×104cfu/m l,总大肠菌群、粪大肠菌群均≥1600M P N/100m l)检出致病性嗜水气单胞菌。

41312　优势菌鉴定结果　熟素食、水和大便中分离的菌株为: G-无芽孢短小杆菌,在营养琼脂平板上菌落淡黄色、半透明、光滑圆整;在TC BS平板上为黄色菌落;在血平板上菌落较大、扁平、有较大的β溶血环。

系统生化试验结果:氧化酶、动力、VP、靛基质、七叶苷、水杨素、阿拉伯糖、甘露醇、蔗糖、葡萄糖产气,赖氨酸脱羧酶、精氨酸脱羧酶、七叶苷、水杨苷、明胶、0%NaCl肉汤、3%NaCl肉汤均为阳性;H2S、肌醇、鸟氨酸脱羧酶、6%NaCl肉汤、8%NaCl肉汤均为阴性;对弧菌拟制剂O/ 129(10μg,150μg)呈完全抗性;AP I20NE试剂条(法国生物梅里埃公司生产)生化鉴定结果见表1,优势菌经系统生化和AP I20NE试剂条两种生化鉴定结果均符合嗜水气单胞菌生化特性。

表1　优势菌在20NE生化鉴定条码上的结果
项目NO3TRP G LU ADH URE ESC GEL
结果++++-++
项目P N G GI U ARA MNE MAN NAG MAL
结果+++++++
项目G NT CA P AD I MLT C I T P AC OX
结果++-++-+
查编码7577755,嗜水/豚鼠气单胞菌鉴定百分率%id=9913,T= 0196
41313　药敏试验结果　检出的15株嗜水气单胞菌药敏试验结果基本相同,对培氟沙星、氟哌酸、环丙沙星、利福平、氯霉素、四环素、庆大霉素、卡那霉素、强力霉素、氧哌嗪青霉素、头孢噻肟、头孢哌酮敏感;对羟氨苄青霉素+棒酸、羟氨苄青霉素、亚胺培南、氨曲南、头孢三嗪、多粘菌素E、万古霉素耐药。

41314　血清抗体检测效价　10份患者急性期血清与1号、2号、3号致病性嗜水气单胞菌的凝集效价分别为1:10～1:20,恢复期血清分别为1:40～1:320(其中6份为1:80,2份为1: 320,1份为1:160,1份为1:40);当地健康村民10份对照血清与1号、2号、3号致病性嗜水气单胞菌的凝集效价8份为<1: 10,2份为1:20。

41315　毒力试验结果　将熟素食、水和大便中分离的菌株新鲜培养物,接种于8%绵羊血琼脂平板28℃24h培养后,在菌落周围均有清晰β溶血环,检测HEC毒素均为阳性。

接种于脱脂奶蔗糖琼脂平板培养后结果在菌落周围均出现清晰的溶蛋白圈,蛋白酶均为阳性。

将熟素食、水和大便中分离的菌株各1株肉汤培养物015m l,每株菌培养物注射3只小白鼠共9只,3只对照注射015m l肉汤,于注射后8～24h内全部死亡,解剖可见腹腔积液、内脏肿大,取心血及肝组织培养,均分离出与接种菌相同的嗜水气单胞菌株;对照小白鼠3只全部存
活;分离的优势菌判定为致病性嗜水气单胞菌。

41316　优势菌计数结果　井水嗜水气单胞菌为312×103cfu/m l,2份熟素食(烤麸、素几)嗜水气单胞菌分别为413×104cfu/g和319×104cfu/g。

5　讨论
气单胞菌(Aer omonas)是革兰阴性杆菌,隶属于弧菌科气单胞菌属,分为10个菌种,其中7个有临床意义,嗜水气单胞菌是较常见的代表种[3],是气单胞菌的模式菌种[4],广泛分布于自然界的各种水体,有致病性菌株和非致病性菌株之分。

致病性菌株可感染鱼类、两栖类、爬行类、鸟类和哺乳类等动物,是一种人、畜、鱼共患病原体,致病性与相关毒力因子关系密切。

目前已发现的嗜水气单胞菌毒力因子有外毒素、蛋白酶、S层、菌毛、转铁蛋白和外膜蛋白等,然而更多的研究报道认为,嗜水气单胞菌所产生的外毒素才是重要的致病因子,已确定的外毒素有其Aer o基因编码的气胞溶素(aer olysin)、溶血素(he molysin)、溶血毒素(hemolytic t oxin)和细胞毒性肠毒素(cyt olytic enter ot oxin)等[5]。

本次食源性疾病爆发事件的各类样品中分离的嗜水气单胞菌株显示:HEC毒素均为阳性,蛋白酶均为阳性,对小白鼠有很强的毒力,判定为致病性嗜水气单胞菌。

通过现场流行病学调查、临床表现及实验室结果综合分析,此次食源性疾病爆发事件是由村民直接食用了被致病性嗜水气单胞菌污染的熟素食引起的,在舟山市尚属首次。

主要原因是含有致病性嗜水气单胞的井水直接用来清洗、泡发素食物及洗涤食品加工器具,加上经营人员缺乏卫生知识、加工条件较差、加工过程中未杀灭病原菌,还有气温适宜(26℃～27℃),被污染的食物中致病菌大量繁殖,以及村民购回后未重新进行加热处理而直接食用等造成本次事件的爆发。

嗜水气单胞菌菌落易与肠杆菌科细菌(特别是大肠杆菌)、溶藻性弧菌、麦氏弧菌相混淆,在TCBS平板上均为黄色菌落,氧化酶试验阳性区分大肠杆菌和麦氏弧菌,无盐生长试验区分溶藻性弧菌和麦氏弧菌。

与霍乱弧菌的区别在于本菌不能利用鸟氨酸、对弧菌拟制剂O/129(10μg,150μg)呈完全抗性,以及粘丝试验为阴性。

嗜水气单胞菌生化试验很不稳定,在突发性事件检测中,最好仪器鉴定与传统生化试验同时进行,能准确及时地报告结果,为行政部门控制疫情和临床治疗提供技术支撑。

根据蛋白酶阳性区分致病性菌株和非致病性菌株,有助于致病性嗜水气单胞菌感染的确切诊断。

有条件的实验室可用PCR方法扩增检测aer基因,以分子水平测定气胞溶素来区别致病性菌株和非致病性菌株[6]。

嗜水气单胞菌在国内开展的专项研究较少,一般教科书和专业书刊系统介绍其致病特征的也不多见,被人们视为毒力不强的条件致病菌,一般情况下对人的致病性弱,因此从客观上造成人们对其引起疾病的认识不足。

目前,嗜水气单胞菌未列入常规食物中毒病原菌检验程序,因而常被遗漏,给食物中毒定论和处理带来困难。

但国外已将嗜水气单胞菌纳入腹泻病原菌的检测范围,是食品卫生检测的对象。

因此,建议在食品、饮用水检测指标中增加嗜水气单胞菌作为细菌学指标。

[参考文献]
[1]盛维立,汪道发,秦阿敏1铜陵市33起食源性疾病微生物学检验
结果的分析[J]1疾病监测,2005,20(4):187-1881
[2]李影林1临床微生物学及检验[M]1北京:人民卫生出版社,
1995:330-3321
[3]刘运德,楼永良1微生物学检验[M]1第2版1北京:人民卫生出
版社,2003:2181
[4]叶应妩,王毓三1全国临床检验操作规程[M]1第2版1南京:东
南大学出版社,1997:5171
[5]Chop ra AK,Houst on C W,Peters on J W,et al1Cl oning,exp ressi on,
and sequence analysis of a cyt olyic enter ot oxin genefr om Aer omonas hy2 dr ophila[J]1Can J M icr obi ol,1993,39(5):513-5231
[6]林万明1PCR技术操作和应用指南[M]1北京:人民军医出版社,
1993:178-1791
(收稿日期:2008-02-15)
(上接第1156页)
率不高的主要原因。

在合浦县熟肉类制品全为家庭加工场所生产,这些加工场所规模很小,卫生条件差,“三防”措施不力,从业人员卫生意识淡薄,在销售环节中没有做好保洁工作,许多销售点的从业人员既售货又收钱,手刚抓完钱马上又用来抓肉,极不卫生。

冷冻饮品的合格率低主要是因为冷饮大都没有经过煮沸处理,常常是用冷水冲兑而成,而合浦县的生活饮用水水质卫生较差,微生物污染严重。

淀粉类制品的不合格产品主要是湿米粉,它是广大城镇居民喜欢食用的早餐食品,粉体本身湿润,它在夏季高温时极容易繁殖细菌而变质,从而引起食物中毒。

如将熟肉、淀粉类制品和冷冻饮品这三类产品弃去不计,合浦县食品卫生微生物合格率将达到96115%。

总的来说,合浦县在食品生产方面属于欠发达地区,很多食品生产厂家设备简陋,生产环境条件差,生产人员卫生意识不够强,缺乏卫生设施,工艺落后,食品卫生存在较大的安全隐患。

我们建议食品质量监督机构应重视产品的源头监管,建立从源头抓质量的工作方针,健全食品安全监管制度,对食品实行严格的质量安全监管。

在产品监测中要重点抽查熟肉制品、冷冻饮品、淀粉类制品、腌腊肉食品、植物油、酱腌菜、糕点和酒类等日常消费的主要食品,并重点对生产这些食品的小作坊进行调查,对质量不稳定的生产厂家进行跟踪抽查,增加监督、检测频次,对抽查中发现有问题的产品和生产厂家要加大整改和处罚的力度,对不达到标准的企业应撤回和注销其食品生产许可证,对危害食品安全的加工场所应坚决取缔,把好食品流通环节关,让全县人民吃上安全卫生的健康食品。

[参考文献]
[1]G B/T500911～100-20031食品卫生检验方法理化部分(一)[S]1
[2]G B/T478911～4789131-20031食品卫生微生物学检验[S]1
[3]袁文彬,赵玉招,李琼,等1吉水县办2003-2005年食品检测结果
分析[J]1中国卫生检验杂志,2007,17(3):521-5221
(收稿日期:2008-01-21)。