鸡传染性支气管炎病毒变异株ZZ2004RT—PCR检测方法的建立及应用

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姚四新一，王宪文，赵淑秋，刘兴友 ’
（１．河南科技学院动物科学学院，河南新乡４５３００３；２．动物疫病和残留物防控河南省高校工程技术研究中心，河南新乡４５３００３）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＡｃｃｏｒｄｉｎｇｔｏｔｈｅｓｅｑｕｅｎｃｅｓｏｆｔｈｅＺＺ２Ｏ０４ｓｅｒｏｔｙｐｅｏｆＩＢＶ３ａ，３ｂａｎｄＥｇｅｎｅｐｕｂｌｉｓｈｅｄｉｎＧｅｎＢａｎｋ，ａｐａｉｒｏｆｐｒｉｍｅｒｓｗａｓｄｅｓｉｇｎｅｄａｎｄｓｙｎｔｈｅｓｉｚｅｄｔｏｓｐｅｃｉｆｉｃａｌｌｙａｍｐｌｉｆｙｔｈｅ５４０ｂｐｎｕｃｌｅｏｔｉｄｅｆｒａｇｍｅｎｔ，ｔｈｅＲＴ — ＰＣＲｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｄｅｔｅｃｔｉｏｎｏｆｔｈｅＺＺ２００４ｓｅｒｏｔｙｐｅｏｆＩＢＶｗａｓｅｓｔａｂｌｉｓｈｅｄ．Ｔｈｅ５４０ｂｐｓｐｅｃｉｆｉｃｓｔｒｉｐｗａｓｆｏｕｎｄｏｎｌｙｉｎｔｈｅＰＣＲａｍｐｌｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｔｈｅＺＺ２００４ｓｅｒｏｔｙｐｅｏｆＩＢＶｉｎｔｈｅｓｐｅｃｉｆｉｃｉｔｙａｓｓａｙ，ｔｈｅｓａｍｅｓｔｒｉｐｄｉｄｎ ’ ｔａｐｐｅａｒｉｎｏｔｈｅｒｖｉｒｕｓｅｓａｎｄｓｔｒａｉａｓｏｆＩＢＶ．Ｔｈｅｓｅｎｓｉｔｉｖｉｔｙｒｅｓｕｌｔｉｎｄｉｃａｔｅｄｔｈａｔａｓｌｉｔｔｌｅａｓ１．５２５Ｐｇｉｎｔｈｅｓａｍｐｌｅｗｅｒｅｄｅｔｅｃｔｅｄｉｎ
关键词：传染性支气管炎病毒；ＲＴ－ＰＣＲ；鸡中图分类号：￥８５２．６５９．６文献标识码：Ａ文章编号：０５２９ — ６００５（２０１３）０４ — ００１５ — ０３
ＥｓｔａｂｌｉｓｈｍｅｎｔａｎｄａｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｏｆＲＴ－ＰＣＲｔｅｃｈｎｉｑｕｅｆｏｒｄｅｔｃｔｅｉｏｎｏｆｔｈｅＺＺ２００４ｓｅｒｏｔｙｐｅｏｆｉｎｆｃｔｅｉｏｕｓｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓｖｉｒｓｕ
能扩增出５４０ｂｐ的核酸片段，而ＩＢＶＭ４１、ＨＩ２０、Ｈ５２毒株以及新城疫病毒（ＮＤＶ）、禽流感病毒（ＡＩＶ）、传染性腔上囊病病毒（ＩＢＤＶ）均无特异性条带出现。敏感性试验结果表明，该方法的最低检出量为１．５２５Ｐｇ的模板。上述结果表明，本试验所
ＹＡＯＳｉ－ｘｉｎ１，ＷＡＮＧＸｉａｎ－ｗｅｎ１，ＺＨＡＯＳｈｕ－ｑｉｕ，ＵＵＸｉｎｇ－ｙｏｕ，。
（１．ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＡｎｉｍａｌＳｃｉｅｎｃｅ，ＨｅｎａｎＩｎｓｔｉｔｕｔｅｏｆｃｉＳｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ４５３００３，Ｃｈｉｎａ）２．ＨｅｎａｎＨｉｇｈｅｒＥｄｕｃａｔｉｏｎ
ＣｈｉｎｅｓｅＪｏｕｒｎａｌｏｆＶｅｔｅｒｉｎａｒｙＭｅｄｉｃｉｎｅ
中国兽医杂志２０１３年（第４９卷）第４期
１ห้องสมุดไป่ตู้５
鸡传染性支气管炎病毒变异株ＺＺ２００４ＲＴ — ＰＣＲ检测方法的建立及应用
ＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙＲｅｓｅａｒｃｈＣｅｎｔｅｒｆｏｒＡｎｉｍａｌＤｉｓｅａｓｅｓＣｏｎｔｒｏｌａｎｄＲｅｓｉｄｕｅｓＳｕｐｅｒｖｉｓｉｏｎ，Ｘｉｎｘｉａｎｇ４５３００３，Ｃｈｉｎａ）
摘要：根据ＧｅｎＢａｎｋ已发表的鸡传染性支气管炎病毒（Ｉｎｆｅｃｔｉｏｕｓｂｒｏｎｃｈｉｔｉｓｖｉｒｕｓ，ＩＢＶ）ＺＺ２００４３ａ、３ｂ及Ｅ基因序列，设计１对引物，扩增５４０ｂｐ特异性核酸片段，建立了检测ＩＢＶＺＺ２００４的ＲＴ — ＰＣＲ方法。特异性试验结果表明，ＩＢＶＺＺ２００４
建立的ＲＴ－ＰＣＲ方法敏感性高、特异性强。利用建立的ＲＴ－ＰＣＲ方法对从河南省分离的６株疑似鸡ＩＢＶＺＺ２００４进行检测，结果５株为阳性。该方法的建立为ＩＢＶＺＺ２００４的诊断及流行病学调查提供了可靠的方法。