含有禽网状内皮组织增生病病毒基因组片段的天然重组禽痘病毒的研究
禽网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其体外复制研究
网状 内皮组 织增生病病毒 ，经间接 免疫荧光 、Ｐ － 电镜 鉴定，将该株 病毒命名 ＣＲ ￣ ｇ ，
ＨＬ Ｒ０ ０ 。克隆ＨＬＲ ９ １ Ｊ ９１ Ｊ ０ ０
主 要保 护 性抗原 的 基 Ｎｇ ０ ｐ９ ，并进 行 了序列 分析 。ＨＬ Ｒ０ ０ 与我 国早 期 分 离的 南方毒株ＨＡ９ ０ 亲缘 关 系 Ｊ ９１ ９１
较远 ，而 与 美 国和 台 湾的 某些毒株 同源性 较 高。ＨＬ Ｒ０ ０ 的Ｔ Ｉ １ ／ Ｊ ９ １ Ｃ Ｄ 。 ０ ｍＬ。通过 绘制 复制 动 力学 曲线 为
中国动物传染病学 报
２ １，８ １：３ ２ ０ ０１ （） — ７ ２
Ｃ ｉ ｓ Ｊｕｎｌ ｆ ｎ ｌ ｎｅｔ ｕ ｉ ａｅ ｈｎ ｅ ｏ ｒａ ｏ ｉ ｆ ｉ ｓＤ ｓ ｓｓ ｅ Ａ ｍａ Ｉ ｃ ｏ ｅ
研 究论 文
ห้องสมุดไป่ตู้
禽 网状 内皮组织增生病病毒 的分离鉴定 及其体 外复制研 究
ＧＡ Ｏ Ｌｉ ．Ｗ ＡＮ Ｇ ａ — ｅ Ｘｉ ｏ ｍ ｉ
（． ａｉｎ ｌ ｅ ａ ｏａｏｙｏ ｔ ｉａ ｉｔｃｎ ｌｇ， ａ ｂｎＶｔ ｉａ ｅｅ ｒｈ ｎｔｕｅ Ｃ Ａ ， １Ｎ ｔ ａ ｙ ｂ ｒｔｒ Ｖ ｅ ｎ ｒ Ｂ ｏｅｈ ｏｏｙ Ｈ ｒｉ ｅ ｒ ｒ Ｒ ｓａｃ ｓｉ ｔ． Ａ Ｓ ｏ Ｋ Ｌ ｆｅｒ ｙ ｅ ｎｙ Ｉ ｔ Ｈ ｒ ｉ １ ０ ０ ， ｈｎ ， ． ｏｌ ｅ ｆＶｔ ｉａ Ｍｅ ｉｉ ， ｏｔｅ ｓＡ ｒ ｕｔ ａ ｎｖｒｉ， ｒｉ １ ０ ３ ， ｈｎ ， ａｂｎ ５ ０ １ Ｃ ｉ ＂ Ｃ ｌ ｇ ｅ ｒ ｒ ａ２ ｅ ｏ ｅ ｎｙ ｄｃ ｅＮ ｒ ａｔ ｇ ｉ ｌ ｒ ｌ ｉ ｓｙＨａｂｎ ５ ０ ０Ｃ ｉａ ｎ ｈ ｃ ｕ Ｕ ｅ ｔ
《中国动物传染病学报》2010年第18巷1—6期总目录
・
龚 文 杰 ， （ ７ 等 ２～ ）
兰文 升 ， （ 等 ２—１ ） ８
・ ・
等 ２—１ ） ４ 猪 博 卡 病 毒 Ｐ Ｒ检 测 方 法 的建 立 及 其 应 用 …… … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … …… …… 翟 少伦 ， （ Ｃ
鲤 春 病 毒 血 症 病 毒 糖 蛋 白的 高 效 表 达 和 纯化 … … … … … … … … … … … … … … … … … … … … …… … …… … … …
・
・兔 肾上皮细胞 ｃ Ａ表达 的建立 ………………………………… ………………………………………… …‘ ＤＮ
…
宋毅 ， （ ２ ） 等 ２— ３
株番鸭源 Ｎ ６亚型禽流感病毒神经氨酸酶基因的克隆及序列分析 快速检测 Ａ型 流感病毒 的 Ｔ ｑ ａ ａ Ｍ ｎ实时荧光定量 Ｒ —Ｃ ＴＰ Ｒ方法 的建立 ………………………………………… …’ ‘
・ ・
一
等 ２—２ ） ８ ……………………………………………… 万春 和 ， （
等 １ ２） 禽 网状 内皮 组 织 增 生 病 病 毒 的 分 离 鉴 定 及其 体 外 复制 研 究 … … … … … … … … … … … … … … …… … …… … … … 邓 小 芸 ， （ — ３
・ ・
Ｔ ｑ ｎ荧 光 定 量 Ｐ Ｒ检 测 猪 流 行 性 腹 泻 病 毒 方 法 的 建 立 与 初 步 应用 ａＭａ Ｃ
… ・
马继红， （ 等 ３～１ ）
Ｈ９亚 型 禽 流 感 病 定 单
… … … … … … … … … … … … … … … … … … …… … － －
禽网状内皮组织增殖病毒(REV)诊断技术研究进展
极低时 ，阴性抗体检测结果易引起错误判断 ，因 此还 应该 进行 病毒 检测 。现 将 Ｒ Ｖ实验 室检 测 Ｅ 方法综述 如下 。
畜 牧兽 医
唼螨防治
禽 网状 内皮组织增殖病毒 （ Ｅ Ｒ Ｖ） 诊断技术研究进 展
马建 山 ，崔 基 贤 ，刘
中图分 类号 ￥５． ８ ８３ 文献标识码 Ａ
莹
１ ７ — ６ ２２ １ ）５ ０ ３ — ３ ２ ９ ９ （０ ０ — ０ ３ ０ ６ ２
（ 宁省 动物 疫病预 防控 制 中心 ，辽 宁 沈 阳 １０６ ） 辽 １ １４
行 隔离观 察 ，一般 隔离 观察 １ 月并检测 ，若 为 剧烈 、连雨 、潮湿 、炎热 恶劣气候条件 下都可 导 个 阴性 ，即可 与 原场 猪群 混 群饲 养 。还应 注 意 除 致 猪免疫 调节紊 乱 ，使该病 流行 。一般情况 下 ， 虫 ，阿维菌素和伊维菌素制剂效果 良好 ，可每季 单发蓝耳病 或附红体的情 况较 少，当发现 有猪蓝
坚持 自繁 自养 ，将外源 的致病 因子 阻碍在猪 疾 病 。一 旦发现 在 猪场 中出现 “ 耳病 样 ”的 蓝 场之 外 ，因此 自繁 自养 是 小规模 养 殖 的最佳 选 从外地购进仔猪 ，一定要严格进行 Ｅ 电解质等 ，提 高猪 的免疫力和抵 抗力 。猪 附 和 检疫 ，最好在非疫 区购买仔猪 ，并且查验 当地 的 红细胞体病 虽症状 明显 ，但不 易预 防，尚无有效 检疫合格证 明。仔猪 引进入场后 ，最好对仔猪进 疫苗 防治，因此 反复发生在所难免 。在气温变化
禽网状内皮组织增殖症研究进展
网状 内皮组织增殖病 是 由网状 内皮 组织增殖 １ 病 原 学
病病 毒群 （ ｅ ｃｌ ｄｔ ｌ ｓ ｉ ｓ ｒｕ ） Ｒ ｔｕｅ ｏ ｅ ｏｉ ｖ ｕ ｏｐ 引起 禽 １１ 分 型 ｉ ｎ ｈｉ ｓ ｒ ｇ ．
Ｒ Ｖ为反转录 病毒科 哺乳动物 Ｃ型 Ｅ
类 的一组症状不 同的综合症 ，包括 免疫抑制 、急 反转 录病毒属 。分离株存在 ３ 明显 的亚 型 ，网 个 性致死 性 网状 内皮细胞 瘤 、矮小综合征 以及淋 巴 状 内皮组织增殖病病 毒 Ｔ株 （ Ｅ — Ｒ Ｖ Ｔ株） ；脾坏死 组 织和其 他组 织 的慢性 肿瘤形 成 等【 由于 Ｒ Ｖ 病毒 （Ｎ ） 鸭传染性 贫血 病毒 （ＩＶ ；鸡 合胞 ” 。 Ｅ ＳＶ 和 ＤＡ ） 以淋 巴细胞或 网状 内皮 细胞为靶细胞 ，严重损害 体病 毒 （ Ｓ ）－ Ｃ Ｖ ［］ ２ 。核苷酸 和氨基 酸 的系统进化 树 ３ 了免疫 器官 的功 能，因而诱发 明显 的细胞和体液 分 析 表 明 ，各 个分 离 株 具有 相近 的种 系发 育 关 免疫抑 制 ，降低机体对 其他病原或抗 原的免疫应 系［ ］ Ｅ — ４ 。Ｒ Ｖ Ｔ为缺 陷型病毒 ，基 因组含 有 ｖ ｒｌ － ６ —ｅ
群 的检测 中发现 ，近 一半为血清学 阳性 ；同一 时 的总称 。病鸡生长停滞 ，消瘦 ，苍 白。羽毛粗 乱 期本病 在 日本 呈地 方流 行性 ９ ０年代 的 调查 表 和稀少 且生长不正常 。病鸡矮 小 ，胸腺和法 氏囊 明 ，韩 国和 埃及 有 ３ ％～ ５ ４ ７ ％韵 鸡群 有抗 体 ，而 萎缩 ，并 出现腺 胃炎、肠 炎症状 。非缺 陷型 Ｒ Ｖ Ｅ
群特异性抗原 ，在病毒粒子装配 过程 中起 作用 。
潜 伏 期最短 为 ３ｄ ，人工 接种 ６ ２ ～１ ｄ迅速 死 亡 。
应用PCR法检测禽源生物制品中禽网状内皮组织增生症病毒
应 用 Ｐ Ｒ法检 测禽源生物制 品 中 Ｃ 禽 网状 内皮组 织增生症病毒
庄 金秋 ， 梅建 国 ， 毕研 丽。王金 良１ ， ， 立 中１， 志强 ２苗 ，沈 ２ ，
（． １山东省滨州畜牧兽 医 究院， 研 山东滨州 ２ ６０ ；． ５ ６０２山东绿都生物科技有限公 司， 山东滨州 ２ ６ ０ ） ５６ ０
Ｓ ｇ ） 物制 品都 不 允许 存 在 与产 品无 关 的外 源 病 毒 。 果病 （ ｉｍａ 。 如
毒性 生物 制 品携 带外 源病 毒 ， 不仅 不 能有效 预 防疾病 ， １ １ ３ 引物 的设 计 与合 成 ． ．
根 据Ｇｅ Ｂ ｎ 中登 录 的 ｎ ａｋ
甚 至还 可 能 成 为传 播 动 物疫 病 的媒介 ， 给养 殖 业 带来 Ｒ Ｖ参 考 毒 株 Ｌ Ｒ基 因序 列 ， 用 Ｐ ｉ ｒＰ ｅ ｅ ５０ Ｅ Ｔ 利 ｒ ｒｍｉｒ ． ｍｅ
并且 愈发严重 Ｊ 。 １ １２ 细 胞 、 ．． 病毒 、 品等 样 ９ ｌ 日龄 Ｓ Ｆ 胚（ 南 ～０ Ｐ鸡 济 在 生物 制 品生 产企业 的实 际生产 中， 疫苗 中Ｒ Ｖ的 斯 帕 法 斯 ）原 代 Ｓ Ｆ 胚 成 纤维 细 胞 （ Ｅ ） Ｅ ， Ｐ鸡 Ｃ Ｆ 自制 ， 鸡 污染 和传 播也 是 引起 Ｒ Ｖ感染 和流 行 的重要 原 因『 。 新 城 疫活 疫 苗样 品Ａ０ １ （ ＧＯＬ 供 ） Ｒ Ｖ及 鸡 Ｅ ８ ０ 等 ＶＩ Ｙ提 ，Ｅ 因此 ， 了保 证病 毒性 生物 制 品安全 有 效 ， 何 一种 生 抗 Ｒ Ｖ特 异 性 血 清 （ 为 任 Ｅ 中监 所 ）ＦＴ 标 记 的兔 抗 鸡 ＩＧ 、Ｉ Ｃ ｇ
对 １Ｐ ， １ 严 重 的经济 损失 。 国外 曾经报 道 ， 因马 立克 氏病 疫苗 中 软 件 设 计 合 成 了 １ 特 异 性 引物 Ｐ 、 ２ 扩 增 长 度 ３ ４
国外禽痘病毒疫苗自然重组株整合序列的研究
Ａｎ ｌｓｓ ｏ ｎｅ ｒ ｔ ｄ ｓ ｑ ｅ ｃ ｎ ａ ａｙ ｉ ｆｉｔ ｇ ａ ｅ ｅ ｕ ｎ ｅ ｉ ｎ
Ａｍ ｅｒ ａ ａ ｃｎ ｆｆ ｗｌ ｏ ｖｒ ｓ ｉ ｎ ｖ ｃ ｉｅ ｏ ｏ ｘ ｉ ｃ ｐ ｕ
ＧＡＯ ｉ ｇ－ｈａ ，ＣＨＥＮ ｉ ｇ ，ＴＡＮ Ｍ ｎ ｃ ｏ’ Ｊｎ ３ Ｌｉ，ＺＨＡＮ Ｇ ｉ Ｚｈ ，ＤＵ ａ － ｈ ｏ ，ＬＩ ｔＸｉ －ａ Ｙｕ ｎ ｚ ａ Ｌ ｕ ｆｎ’
Ｑｉｇ ａ ６０ ２ Ｃ ｉａ ３ Ｙ Ｂ Ｏ Ｂｉｅｇｎ ｅｉｇＣ ． ｔ ｆ ｎ ｄｏ Ｑｎ ｄ ｏ２ ６ ３ ， ｈｎ ） ｎ ｄ ｏ２ ６ ３ ， ｈｎ ； ． Ｅ Ｉ ｏｎ ｉｅｒ ｏ Ｌｄｏ Ｑｉｇａ ， ｉｇ ａ ６ ０ ２ Ｃ ｉａ ｎ
Ａ ｓｒｃ： ａ ｆ ｒ ｒ ｗ ｓ ｅｉｎｄｔ ｌｙｔｅｉ ｅｒｔ ｑ ｅｃ ｆ ｅｃ ｌｅｄ ｔｅｉ ｉｖｒｓ Ｒ Ｖ ｉ ｔｅ ｅｏ ｂ ｔ ｔＡｐ ｉｏ ｐ ｍｅｓ ａ ｓ ｅ ａ ｉ ｔｇａｅ ｓ ｕ ｎｅｏ ｒｔ ｕｏ ｎ ｏ ｌ ｓ ｉ （ Ｅ ）ｎ ｈ ｎｍｅ ａ ｒ ｉ ｄ ｇ ｏ ｍｐ ｆ ｈ ｎ ｄｅ ｉ ｈ ｏｓ ｕ ｇ ｏ ｗｌ ｏ ｖ ｕ （Ｐ ． １４ ８ｂ Ｃ ｒ ｍｅｔ ｅ ｖ ｄｆ ｍ ｎＡ ｒ ａ ｏｖｒｓ ａｃ ｅ ｓｓｑ ｅｃｄ Ｔ ｅＰ Ｒ ｐｏ ｕｔ ｆ ｏ ｘ ｉ ｓ Ｆ Ｖ）Ａ ７ ｐＰ Ｒ ｆ ｇ ｎ ｒ ｅ ｏ ａ ｍｅ ｃ ｐ ｘ ｉ ｃｉ ｅｕ ｎｅ ． ｈ Ｃ ｒｄ ｃ ｆ ｐ ｒ ａ ｄｉ ｒ ｉｎ ｕ ｖ ｎ ｗａ
维普资讯
第３ ０卷 第 １ 期
２０ 年 １ 月 ０８
中 国 预
防 兽
医 学 报
Ｖｏ ．０． ． １ ３ Ｎｏ １ Ｊｎ ２ ０ ａ． ０ ８
禽网状内皮组织增生病诊断与防制研究进展
１０ ０ ； ５０ １
要 ： 网状 内皮 组织增 生症 （ ｔ ｕｏ ｎ ｏｈ ｌ ｓ ， Ｅ） 禽 类一种 重要 的致瘤性 和免 疫抑 制性 禽 Ｒｅ ｃ ｌｅ ｄ ｔｅｏｉ Ｒ 是 ｉ ｉ ｓ
疾病 。 近年 来 ， 群 中 Ｒ Ｖ 流行 比较 严 重 ； Ｅ 鸡 Ｅ １ Ｖ与 马立 克氏病病 毒 （ ｒｋ’ ｄ ｅｓ ｖ ｕ， Ｌ Ｍａ Ｓ ｉａ ｉ ｓＭＤＶ） ｅ ｓ ｅ ｒ 、 鸡 贫血病 病毒 （ ｈｃｅ ｎｅｔ ｕ ｎｍｉ， Ａ 和 Ｊ Ｃ ｉ ｎ ｉｆ ｉ ｓａｅ ａＣ Ｖ） 亚群禽 白血病 病毒 （ｕｇｏｐＪＡ ｉ ｅｋ — ｋ ｃｏ Ｓｂｒｕ ｖ ｎＬｕ ｏ ａ ｓ ｉ ｓＡ ｖ— ） 几种免 疫抑 制性病 毒 的混合 感染也 比较普遍 。 于 Ｒ Ｖ 正越 来越 受到 重视 。 ｉ Ｖｒ ， Ｌ Ｉ等 ｓ ｕ 鉴 Ｅ 本
东、 山东 、 宁 、 林 、 龙 江 ３ 辽 吉 黑 ９个 蛋 鸡 场 １４份 ８
性抗血清做免疫荧光试验 、免疫过氧化物酶染色 、 补 体 结 合 试 验 或 Ｅ ＩＡ来 检 测 Ｒ Ｖ抗 原 进 行 证 ＬＳ Ｅ
实 。这 一 过程 通常 需要 数 十天 的时间 ， 管本 方 法 尽
但 前仍然是 Ｒ Ｅ诊断的金标准。 作者 简介 ： 昊俊铭 （ ９ ３ ）哈 尔滨人 ， 士研 究 生 ， １８ ～ ， 硕 主 相对耗时 ， 目 要从事动物病毒学研究。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
纤维 细胞 单层 ， 附 ２ ， 吸 ｈ 加入 含有 ｌ 牛血 清 的培 ％犊
养基 ， 培养 ７ 。然后再消化和传代一次 ， ｄ 继续培养 ７， ｄ 电镜 下 观察 病毒 粒 子 的形 态 。同时 将样 品消 化
传 代 至 ９ 细 胞 培 养板 中 ， ６孔 培养 ７ ， Ｒ Ｖ特 异 ｄ用 Ｅ
禽网状内皮组织增生病最新研究进展
Ｂ、 Ｃ ３个 表 位 ， Ⅱ型 仅 有 Ｂ ２表 位 ， Ⅲ 型 含 有 Ａ、 Ｂ ２个 表位 。
以急 性 网状细 胞肿 瘤 形 成 、 矮 小 病综 合 征 和淋 巴组
织与 其他 组织 形成 慢 性 肿 瘤 ， 引 起严 重 的免 疫 抑 制 为 主要特 征 。１ ９ ５ ８年 Ｒ ＥＶ的 最初 分 离 株 Ｔ 毒 株 被首 次从 患 内脏 淋 巴肿瘤 的火 鸡 身 上 分 离 出来 ｎ 。 美国、 英 格 兰、 以色列、 澳大 利亚、 德 国、 南非和 日 本、 韩 国、 埃及 、 中国 台湾 等均 有报 道 ， 目前 我 国山
之一 。
东、 黑龙江、 安徽 、 四川、 广西 、 贵州 、 云南等 ２ Ｏ多个
省市 地 区有该 病 的报 道 ， 在 我 国家 禽 中 的感 染 率 已 达 ２ Ｏ ～３ Ｏ 。 。该病 不仅 可导 致 急慢 性 肿 瘤 、 矮
小病 综合 征 和免疫 抑 制 ， 严 重 影 响 鸡 的 生 长发 育 和
壳粒 和囊 膜 ， 直径为 １ ０ ０ ｎ ｍ， 表 面突 起 长 约 ６ ｎ ｍ、 直径 约 １ ０ ｎ ｍ。病毒粒 子 在蔗糖 密 度梯度 中 的浮密
度为 １ ． １ ６ ～１ ． １ ８ ｇ ／ ｍＬ 。ＲＥＶ 在 ３ ７℃ 下 ２ ０ ｍｉ ｎ感
染性 丧 失 ５ ０ ％， １ ｈ将 丧 失 ９ ９ 。ＲＥＶ对 乙 醚 敏 感， 不 耐酸 ， ５ 氯仿 可将 其 灭 活 。感 染 的 细 胞加 入 二 甲基 亚砜 后在 一１ ９ ６℃下 可长期 保存 。 Ｒ ＥＶ病毒 群 可分 为 完全 复制 型 和不 完 全 复 制 型两种 。其 中 ， 完 全复制型 Ｒ ＥＶ 实 验 室 内 主要 在 鸡胚、 火 鸡胚 、 鸭 胚 及 鹌鹑 胚 的成 纤 维 细 胞 内增 殖 ， 有 的毒 株 在 鸭 胚 和 火 鸡 胚 成 纤 维 细 胞 形 成 合 胞 体 细 胞病 变 。不 完 全 复 制 型 Ｔ 株 病 毒 的 复制 需 要 一 个 完全 复制 Ｒ Ｅ辅 助病 毒 。Ｔ株 病 毒经 体 内传 代 或
禽网状内皮组织增生症研究进展
摘要：禽网状内皮组织增生症（RE ），也被称为极性网状内皮组织细胞癌，是一种重要的家禽免疫抑制疾病。
其病原体禽网状内皮组织组织增生症病毒（REV ）广泛分布于不同鸟类，可引起亚临床感染。
REV 具有免疫抑制作用，REV 整合到其他较大DNA 病毒基因组中的能力使其诊断和预防变得复杂，可能导致其他疫病的疫苗接种失败。
目前还没有有效的治疗方案和预防疫苗，这也使如何限制RE 对家禽养殖的影响变得复杂。
本文综述了RE 已知的知识现状，强调了这一问题的严重性。
关键词：禽网状内皮组织增生症；病毒；共同感染禽网状内皮组织增生症研究进展刘洪勋（博兴县畜牧兽医服务中心山东滨州256500）doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2023.09.057收稿日期：2022-12-02禽网状内皮组织增生症（reticuloendotheliosis ，RE ）是家禽的一种恶性疾病，其病原体禽网状内皮组织组织增生症病毒（reticuloen -dotheliosis virus ，REV ）最早于1958年从患有肿瘤的火鸡内脏中分离而来，于1966年根据肿瘤病变存在的主要细胞成分首次被命名[1]。
我国2008年《一、二、三类动物疫病病种名录》将RE 列为二类动物疫病[1]。
长期以来，REV 一直与鸟类中广泛传播的疟原虫白斑疟原虫有关。
报道最多的是鸡和火鸡，鸭和鹅等水禽也有报道，其他野生鸟类包括鹌鹑、鹧鸪、孔雀、麻雀和鸽子等，成熟鹌鹑和10周龄鸡极易感染[2]。
尚没有证据证明哺乳动物能产生该病，而且REV 不会在任何哺乳动物来源的培养细胞中生长。
美国得克萨斯州濒临灭绝的阿特沃特草原鸡（tympanuchus cupido attwateri ）因为种群中流行的RE 致使种群恢复工作颇受阻碍，保护区内的雉和麻雀血液样本检测的阳性率极高[3]。
从组织病理学的角度来看，RE 导致淋巴组织的急性或慢性肿瘤。
RE 的临床过程类似于其他肿瘤性疾病，如淋巴性白血病（lym -phoid leukosis ）或由J 亚组禽白血病病毒（avian leukosis virus of subgroup J ，ALV-J ）引起的禽白血病等。
禽网状内皮组织增生症流行现状及检测技术研究进展
禽网状内皮组织增生症流行现状及检测技术研究进展邓小芸;祁小乐;高玉龙;高宏雷;秦立廷;王永强;王笑梅【摘要】禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病.近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)几种免疫抑制性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中均普遍存在,使得鸡群处于免疫力低下的状态,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,并容易造成继发感染,使疫病的诊断和防控难度加大.另外,REV可以整合到MDV和鸡痘病毒(Fowlpox virus, FPV)基因组中,从而导致商品化疫苗受到污染,并可用做将外源基因插入到鸡和哺乳动物细胞内的表达载体;基于REV传统检测方法的基础上,新型的分子生物学检测技术如PCR、实时荧光PCR、LAMP提高了诊断REV的敏感性和特异性.【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2010(031)009【总页数】4页(P93-96)【关键词】禽网状内皮组织增生症;流行;感染;基因重组;检测技术【作者】邓小芸;祁小乐;高玉龙;高宏雷;秦立廷;王永强;王笑梅【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨,150030;黑龙江畜牧兽医职业学院,黑龙江双城,150111;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001【正文语种】中文【中图分类】S856.5禽网状内皮组织增生症(Reticuloendotheliosis,RE)是由网状内皮组织增生症病毒(Reticuloendotheliosis virus,REV)引起鸡、鸭、鹅、火鸡及其他禽类的,以急性网状细胞肿瘤形成、矮小综合征、淋巴组织和其他组织的慢性肿瘤形成为特征的一群病理综合征[1]。
一种禽网状内皮组织增殖症DNA疫苗[发明专利]
![一种禽网状内皮组织增殖症DNA疫苗[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/77343661680203d8cf2f24be.png)
专利名称：一种禽网状内皮组织增殖症DNA疫苗专利类型：发明专利
发明人：陈瑞爱
申请号：CN201410422626.1
申请日：20140825
公开号：CN104195163A
公开日：
20141210
专利内容由知识产权出版社提供
摘要：本发明涉及动物病毒学领域，提供了一种禽网状内皮组织增殖症DNA疫苗及其构建与应用，本发明将密码子优化的禽网状内皮组织增殖症病毒的env基因，其核苷酸序列如SEQIDNO.1所示，克隆于pec启动子下，构建重组质粒Puc57-pec-env，质粒瞬时转染CEF后通过间接免疫荧光与荧光定量PCR可以检测到env基因的体外表达，将该重组质粒免疫SPF鸡后，鸡体可以产生较高的抗体水平，作为疫苗可以起到较好的免疫保护作用，为禽网状内皮组织增殖症的防控提供了一种全新的免疫方式。
申请人：肇庆大华农生物药品有限公司,广东大华农动物保健品股份有限公司
地址：526238 广东省肇庆市高新技术产业开发区创业路5号
国籍：CN
代理机构：济南舜源专利事务所有限公司
代理人：苗峻
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不同来源禽网状内皮增生病病毒株的致病性比较-论文
不同来源禽网状内皮增生病病毒株的致病性比较1孙淑红，崔治中，王辉山东农业大学动物科技学院，山东泰安（271018）E-mail:**************.cn摘要：目的：比较不同禽网状内皮增生病病毒株（REV）的致病性。
方法：本研究用包括分子克隆化病毒REV-C99在内的不同来源的6个REV毒株在1日龄SPF鸡上进行人工感染试验，对禽流感灭活疫苗（H9-和H5-）和新城疫灭活疫苗（NDV）免疫后抗体水平的测定结果进行分析。
结果：6个REV毒株分别用剂量为3000个TCID50/只感染1日龄SPF鸡后，感染组较对照组极显著降低，其对H5抗体与对照组相比同样差异极显著（p<0.01），6个感染组之间则差异不显著（p>0.05）。
研究结果表明，不同来源REV株对体液免疫反应造成明显的抑制，揭示REV感染可能是免疫失败的重要原因之一。
关键词：禽网状内皮增生病病毒；禽流感病毒；新城疫病毒；免疫抑制；致病性中图分类号：禽网状内皮增生病病毒（Reticuloendo- theliosis Viruses, REV）可感染多种家禽和野鸟，在不同的群体可有不同的病变表现，诸如肿瘤、生长滞缓或免疫抑制综合症等（Witter, 1983）。
REV感染在我国非常普遍。
它是造成疫苗污染的最常见的外源病毒（丁家波等，2004），它与其它病毒共感染时可造成鸡群的免疫抑制加重从而降低多种疫苗的免疫效力（庄国庆等，2006），也常与其它肿瘤病毒混合感染后大大提高了肿瘤的发病率（张志等，2003，2004；崔治中等，2000）。
因此，REV感染已在我国养鸡业中造成很大危害，对其致病性的研究将有助于我们认识其危害并为最终控制REV提供科学依据。
本研究用不同来源的REV毒株人工感染1日龄SPF鸡进行致病性比较，包括鸭源的经典REV的原始毒SNV-ori株和分子克隆化毒REV-C99株。
这是国内首次对不同来源REV 株的致病性在SPF鸡上进行比较。
鸡痘病毒活疫苗污染禽网状内皮组织增生症病毒的间接免疫荧光法检测研究
鸡痘病毒活疫苗污染禽网状内皮组织增生症病毒的间接免疫荧光法检测研究孙淼;李岭;李启红;夏业才;李慧姣;李俊平;杨承槐【摘要】In this study, the fowlpox live vaccine, not contaminated with exogenous viruses, was added with different doses of avian reticuloendotheliosis virus ( REV) and REV was detected by indirect immunofluorescence assay ( IFA) . The results indicated that the lowest detection limit was 20 TCID50 for 500 doses of vaccine. 60 batches of fowlpox live vaccine from 16 companies were selected to detect REV contamination using IFA method. The results showed that 4 batches of vaccine were REV positive. 5 batches of REV negative vaccine and 4 batches of REV positive vaccine were selected randomly for exogenous virus detection using chicken test method. The coincidence rate of the two methods was 100％.%通过向无外源病毒污染的鸡痘病毒活疫苗中添加不同剂量的禽网状内皮组织增生症病毒(REV),然后用间接免疫荧光法(IFA)进行检测,确定了该IFA方法的最低检出量为每500羽份疫苗中污染20 TCID50的REV.使用该方法对国内16家企业生产的60批鸡痘病毒活疫苗进行了检验,结果显示2个企业生产的4批疫苗REV检测为阳性.随机选取5批IFA检测阴性样品和4批IFA检测阳性样品,按鸡检查法进行外源病毒检验,结果两种方法对REV污染的检测结果的符合率为100％.【期刊名称】《中国兽药杂志》【年(卷),期】2018(052)005【总页数】5页(P24-28)【关键词】鸡痘病毒活疫苗;网状内皮组织增生症病毒;间接免疫荧光法【作者】孙淼;李岭;李启红;夏业才;李慧姣;李俊平;杨承槐【作者单位】中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081;中国兽医药品监察所,北京100081【正文语种】中文【中图分类】S852.65禽网状内皮组织增生病是由反转录病毒科的网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosis Virus，REV)引起的一种禽类肿瘤性疾病[1-2]。
禽痘病毒活疫苗中网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其序列比较
禽痘病毒活疫苗中网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其序列比较王景艳;李中明;赵鹏;陈浩;崔治中【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2010(018)001【摘要】为了从怀疑污染禽网状内皮组织增生病病毒(Reticuloendotheliosisvirus,REV)的禽痘病毒(Fowl pox virus,FPV)活疫苗中分离病毒,将市场上购买的某些厂家的禽痘弱毒疫苗接种7日龄SPF雏鸡.在5d后采其抗凝血浆接种鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF),在连续传2代后,用REV特异性单抗做间接免疲荧光试验,确5AREV感染,命名为JS0809.提取感染细胞的DNA,采用PCR扩增env基因.测序分析表明,该毒株的env基因开放阅读框同大部分REV毒株一致,为1761 bp.JS0809的囊膜蛋白基因(envelope protein gene,env)与国内已发表株的同源性高达96.0%～99.%.相对而言,它与早年分离到的毒株的同源性只有96%～97.3%,但与近几年的分离珠的同源性则均高达99.5%～99.8%.它与整合进FPV野毒株中的全基因组REV的env基因同源性很高为99.8%,而与整合进FPV疫苗株中全基因组REV的env基因同源性较低仅为97.3%.本研究证实了在我国生产的某些FPV疫苗中存在REV污染,所污染的REV的env基因更接近最近的流行野毒,这是国内第一次报道从禽痘弱毒疫苗中分离到REV活毒.【总页数】6页(P35-40)【作者】王景艳;李中明;赵鹏;陈浩;崔治中【作者单位】山东农业大学动物科技学院,泰安,271018;山东农业大学动物科技学院,泰安,271018;山东农业大学动物科技学院,泰安,271018;山东农业大学动物科技学院,泰安,271018;山东农业大学动物科技学院,泰安,271018【正文语种】中文【中图分类】S858.326.593;Q7【相关文献】1.含有禽网状内皮组织增生病病毒基因组片段的天然重组禽痘病毒的研究 [J], 丁家波;崔治中;于立娟;孙淑红;姜世金2.寿光鸡中禽网状内皮组织增生病毒的分离鉴定及其env基因序列分析 [J], 王海燕;李志松;李志杰3.鸡马立克病活疫苗中污染禽网状内皮组织增生症病毒检测方法的建立 [J], 李启红;杨承槐;刘丹;夏业才;李慧姣;李俊平4.禽网状内皮组织增生症病毒的分离鉴定、全基因序列分析及致病性试验 [J], 王建丽;郭凯;刘正伟;刘郁夫;刘传高;赵大伟;李慧敏;董楠;陈瑞爱5.禽活疫苗中网状内皮组织增生症病毒污染的检测方法比较 [J], 李雪莲;张雪乾;单峰;刘雪慧;陈学杰;徐太辉;刘相娥因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
禽痘疫苗病毒中网状内皮组织增生病病毒5LTR整合位点序列分析
禽痘疫苗病毒中网状内皮组织增生病病毒5LTR整合位点序列
分析
禽痘疫苗病毒中网状内皮组织增生病病毒5LTR整合位点序列分析参照国外发表的禽网状内皮组织增生病病毒(REV)5'长末端重复序列(LTR)在禽痘病毒(FPV)疫苗株基因组上的整合位点及相关序列,合成一对来自FPV的引物,从国内5个不同厂家生产的禽痘疫苗中经PCR均扩增到REV-5'LTR.通过序列比较发现,我国5个FPV疫苗毒株中REV-5'LTR整合位点与美国和澳大利亚的天然重组禽痘疫苗完全一致.其中,有3个的REV-5'LTR插入序列也与美国的Vac-3-Am株和澳大利亚的Vac-M3-Au株有100%的同源性.另2个中国疫苗毒株中的REV-LTR 插入序列与美国疫苗毒株Vac-1-Am中的REV-LTR插入序列有99.6%的同源性.但是,这5个中国禽痘疫苗毒株中整合的REV LTR与中国近年分离到的REV野毒株HA9901[1]的5'LTR的同源性只有75.4%～92.4%.
作者：于立娟崔治中 YU Li-juan CUI Zhi-zhong 作者单位：山东农业大学动物科技学院,泰安,271018 刊名：微生物学报 ISTIC PKU 英文刊名：ACTA MICROBIOLOGICA SINICA 年，卷(期)：2006 46(4) 分类号：Q78 关键词：禽痘疫苗病毒网状内皮组织增生病病毒 LTR 整合位点。
国外禽痘病毒疫苗自然重组株整合序列的研究
国外禽痘病毒疫苗自然重组株整合序列的研究高明超;陈静;谭莉;张志;杜元钊;刘秀梵【期刊名称】《中国预防兽医学报》【年(卷),期】2008(030)001【摘要】本文根据禽痘病毒(FPV)基因组中禽网状内皮组织增生症病毒(REV)常见整合区域的序列设计合成一对引物,对国外一株FPV疫苗进行了PCR扩增,结果扩增出一条1 478 bp的片段,经过测序和序列分析表明该片段为REV和FPV的整合序列,FPV序列中整合了大小为193 bp的REV长末端重复序列,进一步比较显示该序列与国外REV毒株APC566、713和SNV的同源性分别为:99.6%、98.0%和87.3%,与我国REV分离株HA9901的同源性只有83.6%.同时该REV整合序列与国外已经测定的FPV毒株AJ581527、AY255633、AF198100、AF006064和AF246698比较时发现,这些毒株中含有的REV序列不仅完全一致,而且REV序列的插入位点也完全相同.这说明国外FPV疫苗中不仅含有REV整合序列,而且已经存在多年了.【总页数】4页(P26-29)【作者】高明超;陈静;谭莉;张志;杜元钊;刘秀梵【作者单位】扬州大学,农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏,扬州,225009;青岛易邦生物有限公司,山东,青岛,266032;青岛易邦生物有限公司,山东,青岛,266032;中国动物卫生与流行病学中心,山东,青岛,266032;青岛易邦生物有限公司,山东,青岛,266032;扬州大学,农业部畜禽传染病学重点开放实验室,江苏,扬州,225009【正文语种】中文【中图分类】S852.659.5【相关文献】1.应用禽痘病毒表达载体研制重组疫苗的研究进展 [J], 乔传玲;袁远;于康震2.禽痘病毒载体在新城疫病毒重组疫苗研究中的应用 [J], 梁荣;陈杰3.禽流感灭活疫苗(H5N2,N28株)和重组禽流感灭活疫苗(H5N1,Re-1株)免疫鸡和鸭后抗体消长规律的比较研究 [J], 雷彩侠;李俊平;李启红;曲鸿飞;夏业才4.禽流感重组禽痘病毒rFPV-HA-NA活载体疫苗的研究 [J], 乔传玲;姜永萍;李呈军;田国斌;孟庆文;邓国华;王秀荣;于康震;唐秀英5.汉坦病毒疫苗株Z10与Z37重组核蛋白NP的表达纯化及其特异结合基因组末端反向重复序列的功能研究 [J], 刘合宾;刘克洲;翁景清;朱智勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
不同来源禽网状内皮增生病病毒株的致病性比较
不同来源禽网状内皮增生病病毒株的致病性比较孙淑红;崔治中;王辉【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2009(040)011【摘要】This experiment was conducted to investigate the pathogenicity of different Reticuloen-dotheliosis virus (REV) strains on 1-day-old SPF chickens. 1-day-old SPF chickens were inocula-ted with six REV strains including REV-C99, a cloned strain. The pathogenicity of REV from different strains was evaluated by the measurement of growing rate of chicks and the antibody ti-ters to the Newcastle disease virus(NDV) and Avian influenza virus (H9-AIV and H5-AIV) after vaccination. The results showed that REV challenge at a dose of 3 000 TCID_(50)/bird resulted in the significantly (P<0.05) suppressed HI titers of NDV, AIV(H5-, H9-) at the 4-, 5- and 6-week after vaccination compared to control group, whereas there was no significant difference be-tween the 6 REV strains. The results indicated that REV challenge at 1-day of age would retard the growth of chicks and suppressed the humoral immunity. The result suggests that REV chal-lenge is one of the important reasons of immune failure.%本研究旨在探讨不同来源的禽网状内皮增生病病毒(REV)对1日龄SPF鸡的致病性.用包括分子克隆化病毒REV-C99在内的不同来源的6个REV株人工感染1日龄SPF鸡,以禽流感病毒灭活疫苗(H9-AIV、H5-AIV)与新城疫病毒灭活疫苗(NDV)免疫后HI 抗体滴度的测定结果为指标,比较不同REV株的致病性.结果表明,分别用3000TCID_(50)·只~(-1)的剂量人工感染1日龄SPF鸡,6个REV感染组与对照组相比,H9-AIV、H5-AIV与NDV免疫后4、5与6周的HI抗体水平均极显著降低(P<0.01).但6个REV感染组之间差异不显著(P>0.05).研究结果显示,不同来源REV株感染1日龄SPF鸡后均造成生长迟缓,并对体液免疫反应有明显的抑制作用,同时,这也揭示出REV感染可能是免疫失败的重要原因之一.【总页数】4页(P1658-1661)【作者】孙淑红;崔治中;王辉【作者单位】山东农业大学动物科技学院,泰安,271018;山东农业大学动物科技学院,泰安,271018;山东农业大学动物科技学院,泰安,271018【正文语种】中文【中图分类】S852.659.3【相关文献】1.马立克病病毒与禽网状内皮增生病病毒的混合感染及在传代过程中的重组 [J], 宿靖伟;滕蔓;罗俊;迟佳琦;余祖华;禹乐乐;胡博;张改平2.12株禽痘疫苗毒中禽网状内皮组织增生病病毒5'LTR整合位点的比较研究 [J], 孔祥伟;王丹;王世新;王海明;杨树青;孙淑红3.禽网状内皮增生病病毒对不同日龄SPF鸡的致病性比较 [J], 孙淑红;赵鹏;刘绍琼;崔治中4.表达禽网状内皮组织增生病病毒gp90蛋白的重组马立克氏病病毒的构建及生物学特性分析 [J], 许曾焜;王笑梅;李凯;刘永振;高立;刘长军;张艳萍;高玉龙;祁小乐;崔红玉5.不同来源禽网状内破增生病病毒株的致病性比较 [J],因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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45- 和 !"# 基因探针的标记及对样品的检测 以表 - 中的 E8B*、 *8B* 以及 E !"# 、 * !"# 为引 物， 以 T.-7- 质 粒 #@A 为 模 板， 扩 增 *+,L8B* 和 *+,L !"# 基因片段。 *+,L8B* 和 *+,L !"# 12* 产物 经测序验证无误后， 作为标记用的探针 #@A。各取
［%5］ 由美国 18A. [.A,./C WC=\./A=6 因组克隆质粒 ZT%$%
， 而且用这种病毒的基因组
能够检测 到 传 染 性 O0L 转染鸡胚成纤维细胞时， ［%!］ H;& 的形成 。种种研究表明， H;& 的基因片段甚 至完整的基因组整合在痘病毒基因组中的现象是普 遍的， 其可能带来的危害也应得到重视。 但到目前为止， 尚未见有关我国禽痘疫苗毒和 野毒株中 H;& 的污染和基因整合的报道。为了解 我国这方面的情况， 我们收集了来自全国 " 个不同 省份不同生产厂家的禽痘冻干疫苗和本实验室分离
［%D］ ［5］
北京、 山东、 浙江、 辽宁等地厂家生产的冻干产品， 已 本研究中分别表示为 L、 在 !S 下保存数月， T、 1、 O、 （ UO64LV#$$2） 从山东某爆 ; 样品； % 株禽痘病毒野毒 发禽痘的鸡场分离到。取临床上典型发病鸡的鸡 痘， 碾 碎 后 加 入 含 %$$$WV<N 双 抗 的 生 理 盐 水 于 离心， 取上清接种 : Q %% 日龄的 UM7 鸡 2DS 孵育 %G， 胚尿囊腔， 2 Q !B 后收获鸡胚尿囊液。将收获的尿 囊液稀释 %$$ 倍， 取 $X#<N 接种到适龄鸡胚， 并以此 连续传代到鸡胚绒毛尿囊膜上直至 7M& 特异的痘 斑出现。经 UM7 鸡胚连传 2 代后冻存。用于制备鸡 胚成纤维细胞的 UM7 鸡胚购自济南斯帕法斯公司。 !"# 材料和试剂 M1H Y=, 购于 48Y8H8 公司；O0L O=E’9=E.C=C 标 记和检测试剂盒购自 H’+G. 公司； H;& 前病毒全基
基金项目： 国家自然科学基金重点项目 （ 1$#$2$"2565#!%"3$； 789： 536"2565#!%!%:； ;6<8=(： >>+?=@ AB8? ) .B? ) +C
作者简介： 丁家波（%:D"6） ， 男， 江苏泰州人， 博士研究生， 主要从事动物分子病毒学研究。 ;6<8=(： B=CEF=8-’@ A’G? ) +’< 收稿日期： #$$!6$%6$5，修回日期： #$$!6$!6%#
禽网状内皮组织增生病病毒 （ !"#$%&’(")/ 有别于禽淋巴白血病病毒 （ 0-$/ *(#+"’$(,$, -$.&, ， H;&） ， 能引起肿瘤和免疫抑制的 1 1) ’"&2(,$, -$.&, ， LN&） 型反转录病毒
［%，#］
的一株禽痘野毒， 通过 M1H、 核酸杂交和 I7L 的方 法， 证实了在我国禽痘疫苗株和野毒株基因组中， 存 在 H;& 基因片段的整合。这是对国内 7M& 基因组 中整合进 H;& 基因组成分的首次报道。
6期
丁家波等： 含有禽网状内皮组织增生病病毒基因组片段的天然重组禽痘病毒的研究
6/0
!" 医学院 #$ % &’() 惠赠； *+, 特 异 的 单 克 隆 抗 体 ［-0］ --.--/ 由本实验室保存。 12* 引 物 合 成 和 12* 产物的序列测定由上海 34()5( 公司完成。 !"# 原始冻干疫苗产品中病毒基因组 $%& 的提取 将收集的市售禽痘弱毒苗用 677 8 - 9 1.3 稀 ! 释后， 取 -77 8 悬液按常规方法提取核酸。简略步 ! 骤如下： 每样品加入 :77 8 的组织消化液和蛋白酶 ! （-77 ， & );<8） 6=> 消化 =? 以上。用苯酚和氯仿分 ! 别抽提两遍后， 用 = 倍体积的无水乙醇沉淀核酸， 最 后溶解于含 *@A 酶的 B+ 缓冲液中。 !"’ 病毒在 ()* 中的传代和 $%& 的提取 每瓶冻干疫苗用 6<8 - 9 1.3 稀释后， 小滤器过 滤， 取 -<8 的滤液接种到已长满约 C7D 的鸡胚成纤 维细胞 （ 2+E） 单层上， 间隔 F G :H 后取上清接种到
用于扩增 -)3245- 和 -)32 !"# 基因片段的 ,(- 和 ./012,(- 引物
B4NOJ 3JQ’J(RJK 6VL2ABA2BWWAW22AABWWBBLFV 6VLAABWBBWBA22WAAWBA2BLFV 6VLWBAAAWWW2AWABW2BALFV 6VLBA2BA2WWABB2AWB22LFV 6VLAW2BAWW2B2WBABWAALFV 6VLBABBWA22AWWBWWWBBWLFV 6VLABWAAWA2WWW22BAALFV 6VLAAAWWWWAWW2BAAWALFV 1$M<J$K P5$ 8B* 4(H !"# )J(J P$4)<J(!K 5P *+, 15KM!M5(K M( *+, )J(5<J! FF6 G F6= YCC G Y60 F6F G FY0 YYF G Y:Y Y67: G Y6=7 Y0:7 G Y0=F Y6-6 G Y6FY0-Y G Y0-7 :7= :F/ =Y7 E$4)<J(! KMSJK;NT =0F
用 7I=6D 的胰蛋白酶将细胞单层消化成细胞悬 -/?， 液， 再重新接种于预先放入盖玻片的 Y7<< 瓶皿中， 维持 :H 后， 取出盖玻片。用针对 *+, 的单克隆抗 （ [<<’(5PO’5$JKRJ(RJ 体 --.--/ 做间接免疫荧光试验 ， 检测有无传染性 *+, 的存在。将接种 [EA） 4KK4"， 用同法检测 了病毒 的 细 胞 上 清 连 传 至 第 6 代 时， *+,。
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结果
*,3 野毒株感染鸡胚尿囊液和 *,3 疫苗产品 用特异性核酸探针检测禽痘冻干疫苗核酸提取
中 -)3 基因组的检测 物时， A、 .、 2、 #、 + 6 个样品的 *+,L8B* 和 *+,L !"# 全为阴性。但 E1, 野毒株 3#LBA;=77F 接种鸡胚的 尿囊液核酸提取物中 *+,L8B* 呈弱阳性， 而 *+,L !"# 仍呈阴性。以 6 支疫苗产品直接提取的 #@A 为
荣 % 禽网状内皮增生症病毒分子生物学特性的研究 % 硕士论文 % 扬州， 扬州大学运行医学系， =77= %
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微
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物
学
报
’’ 卷
模板， 经 !"# 扩增后， 电泳观察到 $、 %、 "和&’个 样品出现微弱的相当于 #&()*+# 大小的条带， ,样 品为阴性 （图 -)$） 。. 个样品的 !"# 基因 !"# 均为 阴性。以这 . 个样品的 *+# 和 !"# 基因的 !"# 产物 作为模板， 用相应的 /012)!"# 引物 （表 -） 进行同一 结 果 所 有 样 品 的 #&()*+# 和 程序 的 !"# 反 应， #&() !"# 基因均为强阳性。以野毒株尿囊液核酸提 取物为模板， 得到清晰的 #&()*+# 和 !"# 循环后， #&() !"# 基因片段。这些 !"# 产物不仅在电泳中大 小符合， 其特异性也为特异性核酸探针作分子斑点 杂交得以验证 （图 -)$， 表 3） 。 -)%，
另一瓶新鲜的 2+E 细胞上。按此法传至出现细胞 病变时收获细胞。将收集的细胞消化， 抽提， 最后用 乙醇沉淀 #@A， 溶解于含足量 *@A 酶的 B+ 缓冲液 中。取接种了野毒株的鸡胚尿囊液 7I6<8 到细胞 上， 按同样的方法传代。 !"+ ,(- 和 ./012,(- 扩增 -)3 45- 序列和 !"# 基因片段 分别用痘病毒冻干疫苗核酸提取物和病毒感染 细胞的核酸提取物为模板， 参照文献 ［=7， ， 设计 =-］ 两对引物分别用于扩增 *+, 的 8B* 和 !"# 基因片 段， 同时设计这两对引物的 (JK!L12* 引物。 : 对引 物的 序 列 见 表 -。 12* 反 应 程 序： 06> :<M(； 06> F7K， 6:> F7K， C=> F7K， =/ 个循环； C=> -7<M(。 12* 产物经 7I/D 的琼脂糖凝胶电泳观察。