禽网状内皮组织增生症病毒蛋白酶PR酵母双杂交诱饵载体的构建及鉴定
禽网状内皮组织增殖病病毒PCR及RT—PCR检测方法的研究和p30主要抗原域的原核表达
ｎ ｃｅ ｔ ｅ ２ ７ ｂ ｏ ２ ７ ｂ ｏ ａ ｔ ｅ ｓ ｒ ｒ ｏ ｕ ｌ ｏｉ ｅ ４ ９ ｂ ｏ ５ ７ ｂ ｆｔ ｅ ｌｎ ｅ ｍｉ ａ ｅ ｅ ｔｏ ＮＶ ． ｆ ｇ ｎ ｕ ｌｏ ｉ ３ ｐ ｔ ６ ｐ ｔ ｎ ｉ ｎ ｅ ｐ ｍｅ ｆｎ ｃｅ ｔ ９ ｐ ｔ ｐ ｏ ｏ ｇ ｔ ｒ ｎ ｌ ｐ ａ ｆＳ ｄ ｓ ｉ ｄ １ ｈ ｒ Ａ ａ ｍｅ ｔ ｒ
ｏ ８ ｂ ｏ Ｔ ｇｎ ｗ ｓ ｍｐｉｅ ｙ Ｐ ｌ ｒｓ ｈｉ ｅｃｉ （Ｃ ） ｏ ｔｅ ｅ ｏ ｆ Ｃ Ｆ ｉｆｃ ｄ ｉ ｆ ２ １ ｐ ｆ Ｌ Ｒ ｅ ｅ ａ ａ ｌ ｄ ｂ ｏ ｍｅａｅ ａｎ Ｒ ａｔ ｎ Ｐ Ｒ ｆ ｍ ｇｎ ｍｅ ｏ Ｅ ｎｅｔ ｗｔ ｉ ｆ ｙ Ｃ ｏ ｒ ｈ ｅ ｈ Ｒ ｔ ｕｏｎ ｏｈｌ ｓ ｒｓ ｔ ｉ Ｒ Ｖ—、ｏ Ｔ Ｐ Ｒ ｆ ｍ ｉ ｌ ＮＡ ａ ｄｃ ｎ ｄｉｔ ｐａｍｉ Ｇ Ｍ— ａｙ Ｔ ｅｒｓｌｏ ｅ ｃｌｅｄ ｔｅｉ ｉ Ｖｉ ｓ ａ ｉ ｏ ｓ ｕ Ｔ ｒ ｎ（ Ｅ Ｔ ｒ —Ｃ ｏ ｖｒ Ｒ ｒ ａ Ｒ ｎ ｌ ｅ ｏ ｌ ｄｐ Ｅ ＴＥ ｓ ． ｈ ｅｕｔ ｆ ｏ ｎ ｓ
摘 要 ：根 据 ＭＯ Ａ Ｍ．Ｌ Ｎ Ａｌ Ｙ发表 的一对 引物 ，５ｃ Ｔ ｃ Ｇ Ａ ｃ Ａ Ｔ Ｇ Ｇ Ａ Ａ Ｇ Ｇ Ａ 一’（ 游 ｌ Ａ Ａ Ｔ Ｇ Ｇ ｃ Ａ Ｇ Ｔ Ｔ Ａ Ｇ Ｃ ＧＡ３ 上 －
引物） ｌ Ａ Ｇ Ｔ Ｔ Ｇ Ｇ Ａ Ｔ ｃ ３ 下游 引物） ，５Ａ Ｔ Ｔ Ｇ Ａ ｃ Ａ Ｇ Ａ Ｔ一’（ － ，上 游 引物位 于 Ｒ Ｖ Ｓ Ｖ 毒株 Ｌ Ｒ序 列上游 ２ ７ ｐ到 Ｅ —Ｎ Ｔ ３ ｂ
禽网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其体外复制研究
网状 内皮组 织增生病病毒 ，经间接 免疫荧光 、Ｐ － 电镜 鉴定，将该株 病毒命名 ＣＲ ￣ ｇ ，
ＨＬ Ｒ０ ０ 。克隆ＨＬＲ ９ １ Ｊ ９１ Ｊ ０ ０
主 要保 护 性抗原 的 基 Ｎｇ ０ ｐ９ ，并进 行 了序列 分析 。ＨＬ Ｒ０ ０ 与我 国早 期 分 离的 南方毒株ＨＡ９ ０ 亲缘 关 系 Ｊ ９１ ９１
较远 ，而 与 美 国和 台 湾的 某些毒株 同源性 较 高。ＨＬ Ｒ０ ０ 的Ｔ Ｉ １ ／ Ｊ ９ １ Ｃ Ｄ 。 ０ ｍＬ。通过 绘制 复制 动 力学 曲线 为
中国动物传染病学 报
２ １，８ １：３ ２ ０ ０１ （） — ７ ２
Ｃ ｉ ｓ Ｊｕｎｌ ｆ ｎ ｌ ｎｅｔ ｕ ｉ ａｅ ｈｎ ｅ ｏ ｒａ ｏ ｉ ｆ ｉ ｓＤ ｓ ｓｓ ｅ Ａ ｍａ Ｉ ｃ ｏ ｅ
研 究论 文
ห้องสมุดไป่ตู้
禽 网状 内皮组织增生病病毒 的分离鉴定 及其体 外复制研 究
ＧＡ Ｏ Ｌｉ ．Ｗ ＡＮ Ｇ ａ — ｅ Ｘｉ ｏ ｍ ｉ
（． ａｉｎ ｌ ｅ ａ ｏａｏｙｏ ｔ ｉａ ｉｔｃｎ ｌｇ， ａ ｂｎＶｔ ｉａ ｅｅ ｒｈ ｎｔｕｅ Ｃ Ａ ， １Ｎ ｔ ａ ｙ ｂ ｒｔｒ Ｖ ｅ ｎ ｒ Ｂ ｏｅｈ ｏｏｙ Ｈ ｒｉ ｅ ｒ ｒ Ｒ ｓａｃ ｓｉ ｔ． Ａ Ｓ ｏ Ｋ Ｌ ｆｅｒ ｙ ｅ ｎｙ Ｉ ｔ Ｈ ｒ ｉ １ ０ ０ ， ｈｎ ， ． ｏｌ ｅ ｆＶｔ ｉａ Ｍｅ ｉｉ ， ｏｔｅ ｓＡ ｒ ｕｔ ａ ｎｖｒｉ， ｒｉ １ ０ ３ ， ｈｎ ， ａｂｎ ５ ０ １ Ｃ ｉ ＂ Ｃ ｌ ｇ ｅ ｒ ｒ ａ２ ｅ ｏ ｅ ｎｙ ｄｃ ｅＮ ｒ ａｔ ｇ ｉ ｌ ｒ ｌ ｉ ｓｙＨａｂｎ ５ ０ ０Ｃ ｉａ ｎ ｈ ｃ ｕ Ｕ ｅ ｔ
禽痘病毒活疫苗中网状内皮组织增生病病毒的分离鉴定及其序列比较
ｉｏａｅ ｅｉｕｏ ｎ ｏｈ ｌ ｓｓ ｉ ｓ ＲＥＶ） Ｆｖ ａ ｓ ａｅ， ｌｓ ａ ｌｓ ｒ ｏｌｃｅ ｎ ｏ ｕａｅ ｔ ｈｃ ｅ ｓ ｌｔ ｔｃ ｌｅ ｄ ｔｅｉ ｉ ｖｒ （ ｒ ｏ ｕ ． ｉ ｅｄ ｙ ｔｒｐ ａｍａｓｍｐｅ ｅｃ ｌ ｔｄａ ｄｉ ｃ ｌｔｄｉ ｏｃ ｉｋ ｎ ｌ ｗｅ ｅ ｎ ｎ
同源性 较低 仅 为９ ．％。 本研 究证 实 了在我 国生 产 的 某些Ｆ Ｖ疫 苗 中存 在ＲＥ ７３ Ｐ Ｖ污 染 ，所 污 染 的ＲＥ Ｖ的ｅ ｖ ｎ
基 因更接近 最近 的流行 野毒 ，这 是 国 内 第一 次报道 从 禽痘 弱毒 疫 苗 中分 离到Ｒ Ｖ活毒 。 Ｅ 关键 词 ：禽 痘病毒 活疫 苗； 网状 内皮组 织增 片病 病毒 ；鉴定 ；序 列 分析
中 图 分 类 号 ：￥ ５ ．２ ．９ ： ８ ８３ ６５ ３Ｑ７ 文 献 标 识 码 ：Ａ 文 章 编 号 ： １７ ．４ ２ （ ０ ０ １０ ３ ．５ ６ ４６ ２ ２ １ ）０ ．０ ５０
Ｉ ｏＬＡＴＩ Ｓ ｏＮ ｏＦ ＲＥＴＩ ＣＵＬｏＥＮＤ ｏＴＨＥＬＩ Ｓ Ｓ ＶＩ Ｏ Ｉ Ｉ ＲＵＳ ＦＲｏＭ ＦｏＷ Ｌ Ａ ＰｏＸ
抗做 间接 免疫 荧光试验 ，确 ｉ Ｅ ＆Ｒ Ｖ感染 ，命名 为Ｊ ０ ０ 。提取 感 染细 胞 的ＤＮ Ｓ ８９ Ａ，采用Ｐ Ｒ扩￣ ｅ ｖ Ｃ ｇｎ． 基因。
测 序 分 析 表 明 ， 该 毒 株 的ｅ ｖ 因 开放 阅 读 框 同 大 部 分－Ｅ ｎ基 Ｒ Ｖ毒 株 一 致 ， 为 １ ６ ｐ Ｊ ０ ０ 的 囊 膜 蛋 白 基 因 ｌ 。 Ｓ ８９ ７ ｂ
Ｌ ＶＥ Ｖ ＣＩ ＮＤ Ｅ Ｉ ＡＣ ＮＥ Ａ ＮＶ ＧＥ Ｅ ，Ｅ ＣＥ ＡＮ ＹＳＳ ＮＥ Ｓ ＱＵ Ｎ ＡＬ Ｉ
禽网状内皮组织增殖症病原检测及其抗体检测分析
禽网状内皮组织增殖症病原检测及其抗体检测分析胡杰;蒋维维;李毅【期刊名称】《上海畜牧兽医通讯》【年(卷),期】2017(000)005【摘要】运用PCR方法对8种日龄(0、21、35、75、126、168、245、315 d)的400份棉拭子、水样和环境样本以及12个批次的疫苗样本进行禽网状内皮组织增殖症病毒(REV)病原检测;用间接ELISA方法对2208份8个日龄的鸡血清样品进行REV抗体检测.结果发现,400份棉拭子、水样和环境样本R EV病原检测全部为阴性,16个批次的疫苗有2个批次疫苗检测R EV病原阳性.抗体分布特点是刚出壳时R EV抗体滴度主要集中在3000~10000,占81.88%,抗体阳性率为90.58%;21~35 d抗体下降明显,抗体阳性率仅为0~1.09%;70 d抗体为0的鸡群占50.72%,1077~1500滴度之间的血清占30.43%;126~315 d抗体滴度主要集中在12000以上,占53.26%~65.94%.【总页数】3页(P21-23)【作者】胡杰;蒋维维;李毅【作者单位】广西动物疫病预防控制中心南宁530001;广西鸿光农牧有限公司容县537500;广西鸿光农牧有限公司容县537500【正文语种】中文【相关文献】1.禽网状内皮组织增殖症研究进展 [J], 李井春2.应用改良阻断ELISA检测禽网状内皮组织增殖病血清抗体 [J], 杨汉春;高云3.禽血清网状内皮组织增殖病毒抗体的检测 [J], Sasa.,T;金光明4.基于p30-gp90融合蛋白的禽网状内皮组织增生症病毒抗体间接ELISA方法的建立 [J], 栾晓宁;郭龙宗;马广斌;李玉燕;王一新;巩新民5.郑州地区鸡场禽白血病和禽网状内皮组织增殖症感染情况检测与分析 [J], 陈海燕因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
3种方法检测禽网状内皮组织增殖病毒人工感染鸡胚孵化雏鸡的带毒比较
3种方法检测禽网状内皮组织增殖病毒人工感染鸡胚孵化雏鸡的带毒比较徐凤霞;孙万里;张亚文;常爽;王一新;赵鹏【期刊名称】《中国动物检疫》【年(卷),期】2024(41)2【摘要】为比较血液和粪便等样品采用不同方法检测禽网状内皮组织增殖病毒(REV)的准确率,从而为制定禽网状内皮组织增殖病(RE)净化程序提供参考,利用鸡胚卵黄囊接种构建REV垂直传播感染雏鸡模型,分别采用DF-1细胞病毒分离、RT-PCR检测和荧光定量RT-PCR检测,对1日龄雏鸡血液和胎粪样品,7~70日龄鸡(每隔1周)的血液和泄殖腔棉拭子样品,进行REV检测和结果比较。
结果显示:对1日龄出壳的SPF鸡血浆进行检测,荧光定量RT-PCR灵敏度最高,阳性检出率为100%(25/25),其次为病毒分离,阳性检出率为96%(24/25),RT-PCR检出率最低;对1日龄出壳的SPF鸡胎粪进行检测,荧光定量RT-PCR与病毒分离灵敏度一致,阳性检出率均为80%(20/25),RT-PCR检出率最低,为28%(7/25)。
对7~70日龄鸡(每隔1周)进行血液和泄殖腔棉拭子检测,3种方法阳性检出率与1日龄检测情况总体相似,检出率从高到低依次为荧光定量RT-PCR、病毒分离和RT-PCR。
结果表明,在同一检测时间点使用同一检测方法,胎粪/泄殖腔棉拭子REV阳性检出率基本低于血液检出率。
本研究初步比较了不同方法检测REV人工感染鸡胚孵化雏鸡的带毒情况,为实施REV净化奠定了基础。
【总页数】6页(P80-85)【作者】徐凤霞;孙万里;张亚文;常爽;王一新;赵鹏【作者单位】山东农业大学动物科技学院【正文语种】中文【中图分类】S851.3【相关文献】1.禽网状内皮组织增生病病毒感染SPF雏鸡血液淋巴细胞增殖功能及其细胞周期相关因子变化2.鸡胚中人工感染网状内皮增殖病病毒的检测3.禽网状内皮组织增殖病病毒感染鸡的外周血白细胞动态变化4.SPF雏鸡人工感染禽网状内皮组织增殖病病毒后肝组织的超微结构观察5.禽网状内皮组织增生症病毒感染鸡胚成纤维细胞的转录组学分析因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
应用PCR法检测禽源生物制品中禽网状内皮组织增生症病毒
应 用 Ｐ Ｒ法检 测禽源生物制 品 中 Ｃ 禽 网状 内皮组 织增生症病毒
庄 金秋 ， 梅建 国 ， 毕研 丽。王金 良１ ， ， 立 中１， 志强 ２苗 ，沈 ２ ，
（． １山东省滨州畜牧兽 医 究院， 研 山东滨州 ２ ６０ ；． ５ ６０２山东绿都生物科技有限公 司， 山东滨州 ２ ６ ０ ） ５６ ０
Ｓ ｇ ） 物制 品都 不 允许 存 在 与产 品无 关 的外 源 病 毒 。 果病 （ ｉｍａ 。 如
毒性 生物 制 品携 带外 源病 毒 ， 不仅 不 能有效 预 防疾病 ， １ １ ３ 引物 的设 计 与合 成 ． ．
根 据Ｇｅ Ｂ ｎ 中登 录 的 ｎ ａｋ
甚 至还 可 能 成 为传 播 动 物疫 病 的媒介 ， 给养 殖 业 带来 Ｒ Ｖ参 考 毒 株 Ｌ Ｒ基 因序 列 ， 用 Ｐ ｉ ｒＰ ｅ ｅ ５０ Ｅ Ｔ 利 ｒ ｒｍｉｒ ． ｍｅ
并且 愈发严重 Ｊ 。 １ １２ 细 胞 、 ．． 病毒 、 品等 样 ９ ｌ 日龄 Ｓ Ｆ 胚（ 南 ～０ Ｐ鸡 济 在 生物 制 品生 产企业 的实 际生产 中， 疫苗 中Ｒ Ｖ的 斯 帕 法 斯 ）原 代 Ｓ Ｆ 胚 成 纤维 细 胞 （ Ｅ ） Ｅ ， Ｐ鸡 Ｃ Ｆ 自制 ， 鸡 污染 和传 播也 是 引起 Ｒ Ｖ感染 和流 行 的重要 原 因『 。 新 城 疫活 疫 苗样 品Ａ０ １ （ ＧＯＬ 供 ） Ｒ Ｖ及 鸡 Ｅ ８ ０ 等 ＶＩ Ｙ提 ，Ｅ 因此 ， 了保 证病 毒性 生物 制 品安全 有 效 ， 何 一种 生 抗 Ｒ Ｖ特 异 性 血 清 （ 为 任 Ｅ 中监 所 ）ＦＴ 标 记 的兔 抗 鸡 ＩＧ 、Ｉ Ｃ ｇ
对 １Ｐ ， １ 严 重 的经济 损失 。 国外 曾经报 道 ， 因马 立克 氏病 疫苗 中 软 件 设 计 合 成 了 １ 特 异 性 引物 Ｐ 、 ２ 扩 增 长 度 ３ ４
禽活疫苗中网状内皮组织增生症病毒污染的检测方法比较
禽活疫苗中网状内皮组织增生症病毒污染的检测方法比较作者：***来源：《家禽科学》2021年第03期摘要：本研究随机抽取4种市售活疫苗，利用RT-PCR法、IFA检测法和SPF鸡检查法，检测活疫苗中的禽网状内皮组织增生症病毒的污染，比较三种检测方法的优劣以找到更好检测的方法。
試验结果表明，RT-PCR法虽然方便、快捷，但RT-PCR法检测会产生假阳性，影响结果的判定;SPF鸡检查法操作简单结果可靠，但该方法试验周期较长，成本高;IFA检测法与传统鸡检查法相比具有快速、准确、成本低的优点，利于推广应用。
关键词：IFA检测法;RT-PCR;SPF鸡检查法;禽网状内皮组织增生症病毒;家禽活疫苗禽网状内皮组织增生症（Reticuloendotheliosis，RE）是指由反转录病毒科网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus，REV）引起的禽类以急性网状细胞肿瘤、生长抑制综合征、淋巴组织及其他组织慢性肿瘤形成为特征的一群病理综合征[1-2]。
由于REV可以通过种蛋垂直传播，如果使用污染有REV的鸡胚生产的疫苗会造成疫苗中污染REV，这是REV独特的传播途径之一[3]。
REV是活疫苗污染中常见的一种外源病毒，当被污染的疫苗免疫鸡群后可引起雏鸡免疫抑制和矮小综合征，从而给家禽养殖业造成巨大经济损失。
国内外均有因REV污染疫苗引起严重损失的案例和报道[4-6]。
对禽源活疫苗进行REV污染检测，确保疫苗使用的有效性和安全性，是防止REV传播的重要手段。
目前对疫苗中REV污染的检测，我国应用方法主要包括细胞培养法和接种SPF鸡检查法，其中接种SPF鸡检查法被认为是经典的“金标准”，检测结果相对可靠容易判定，但缺点是检测周期长。
通常情况下，家禽活疫苗中REV等外源病毒的污染需要用非常灵敏、特异性强、检测周期短的方法来进行检测。
RT-PCR法、IFA检测法和SPF鸡检查法，目的就是为了找到更为合理的检测家禽活疫苗中禽网状内皮组织增生症病毒的检测方法。
禽网状内皮组织增生病诊断与防制研究进展
１０ ０ ； ５０ １
要 ： 网状 内皮 组织增 生症 （ ｔ ｕｏ ｎ ｏｈ ｌ ｓ ， Ｅ） 禽 类一种 重要 的致瘤性 和免 疫抑 制性 禽 Ｒｅ ｃ ｌｅ ｄ ｔｅｏｉ Ｒ 是 ｉ ｉ ｓ
疾病 。 近年 来 ， 群 中 Ｒ Ｖ 流行 比较 严 重 ； Ｅ 鸡 Ｅ １ Ｖ与 马立 克氏病病 毒 （ ｒｋ’ ｄ ｅｓ ｖ ｕ， Ｌ Ｍａ Ｓ ｉａ ｉ ｓＭＤＶ） ｅ ｓ ｅ ｒ 、 鸡 贫血病 病毒 （ ｈｃｅ ｎｅｔ ｕ ｎｍｉ， Ａ 和 Ｊ Ｃ ｉ ｎ ｉｆ ｉ ｓａｅ ａＣ Ｖ） 亚群禽 白血病 病毒 （ｕｇｏｐＪＡ ｉ ｅｋ — ｋ ｃｏ Ｓｂｒｕ ｖ ｎＬｕ ｏ ａ ｓ ｉ ｓＡ ｖ— ） 几种免 疫抑 制性病 毒 的混合 感染也 比较普遍 。 于 Ｒ Ｖ 正越 来越 受到 重视 。 ｉ Ｖｒ ， Ｌ Ｉ等 ｓ ｕ 鉴 Ｅ 本
东、 山东 、 宁 、 林 、 龙 江 ３ 辽 吉 黑 ９个 蛋 鸡 场 １４份 ８
性抗血清做免疫荧光试验 、免疫过氧化物酶染色 、 补 体 结 合 试 验 或 Ｅ ＩＡ来 检 测 Ｒ Ｖ抗 原 进 行 证 ＬＳ Ｅ
实 。这 一 过程 通常 需要 数 十天 的时间 ， 管本 方 法 尽
但 前仍然是 Ｒ Ｅ诊断的金标准。 作者 简介 ： 昊俊铭 （ ９ ３ ）哈 尔滨人 ， 士研 究 生 ， １８ ～ ， 硕 主 相对耗时 ， 目 要从事动物病毒学研究。
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
纤维 细胞 单层 ， 附 ２ ， 吸 ｈ 加入 含有 ｌ 牛血 清 的培 ％犊
养基 ， 培养 ７ 。然后再消化和传代一次 ， ｄ 继续培养 ７， ｄ 电镜 下 观察 病毒 粒 子 的形 态 。同时 将样 品消 化
传 代 至 ９ 细 胞 培 养板 中 ， ６孔 培养 ７ ， Ｒ Ｖ特 异 ｄ用 Ｅ
Peroxiredoxin Ⅱ酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活效应检测
Peroxiredoxin Ⅱ酵母双杂交诱饵载体的构建及自激活效应检测刘萍;奚玲;陶海鹰;卢运萍;马丁【期刊名称】《武汉大学学报：医学版》【年(卷),期】2007(28)4【摘要】目的:应用酵母双杂交体系,构建人peroxiredoxinⅡ(PrxⅡ)蛋白酵母双杂交诱饵载体,并检测该载体的表达产物对酵母细胞有无毒性作用及对报告基因有无激活作用。
方法:用PCR扩增PrxⅡ基因cDNA中编码完整开放阅读框的基因片段;将该基因片段与pGBKT7载体定向重组;用酶切和测序鉴定重组质粒;用醋酸锂法(Li-Ac)将序列正确的重组质粒pGBKT7-PrxⅡ转化入AH109酵母菌株,在缺陷性培养基上观察pGBKT7-PrxⅡ在AH109中的表达情况,检测诱饵载体有无毒性作用和单倍体及二倍体自激活功能。
结果:成功构建pGBKT7-PrxⅡ重组质粒。
转化有重组质粒和pGBKT7空载体的酵母菌都能在SD/-Trp/X--αgal平板上长出粉红色菌落,在SD/-His/-Trp/X--αgal,SD/-Ade/-Trp/X--αgal平板上不能生长,两种酵母菌在SD/-Trp液体培养基中培养16 h后,菌液的OD600均值均为0.9,说明AH109[pGBKT7-PrxⅡ]转化成功,对酵母菌株AH109无毒性且不具自主激活报告基因的功能。
结论:成功获得了在酵母细胞中正确表达,并对酵母细胞无毒性且未自主激活报告基因的诱饵表达载体pGBKT7-PrxⅡ,该载体可作为酵母双杂交系统中的“诱饵”,该诱饵载体可应用于酵母双杂交系统3筛选PrxⅡ相互作用蛋白。
【总页数】6页(P413-417)【关键词】Peroxiredoxin;Ⅱ;酵母双杂交系统;基因;克隆【作者】刘萍;奚玲;陶海鹰;卢运萍;马丁【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院肿瘤生物医学中心;武汉大学人民医院骨科【正文语种】中文【中图分类】Q554.6;Q782【相关文献】1.羊布鲁氏菌16M Omp25蛋白酵母双杂交诱饵表达载体的构建及其毒性和自激活效应检测 [J], 屈海龙;王海浪;李晓燕;张瑞;王秀然;陈思;钱晶;王兴龙2.CMV2b和TOMV CP酵母双杂交诱饵表达载体的构建及自激活效应检测 [J], 王子华;郑银英;崔百明;向本春3.酵母双杂交诱饵表达载体pGBKT7-cide-3的构建、鉴定以及毒性、自激活效应的检测 [J], 闵婕;李青;马楠;康艳霞;李娜4.香蕉ROP1基因酵母双杂交体系的诱饵载体构建及毒性与自激活效应检测 [J], 王卓;杨景豪;张建彬;刘菊华;金志强;徐碧玉5.拟南芥MAPKKK16酵母双杂交诱饵载体的构建及毒性和自激活效应检测 [J], 雷柯煜;邓治;吴文冠;程汉因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
多重实时荧光PCR检测禽网状内皮组织增生症病毒方法的建立以及初步应用
多重实时荧光PCR检测禽网状内皮组织增生症病毒方法的建立以及初步应用缪佶;鲍衍清;邵红霞;钱琨;秦爱建【摘要】本文建立了一种快速、灵敏、特异性强的禽网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus，REV）检测方法，并对REV在鸡胚成纤维细胞（chick embryo fibroblast，CEF）上的增殖动态规律进行研究。
分别针对gag、env以及LTR基因的保守序列设计3对引物，利用重组质粒作为模板，绘制3种不同基因的标准曲线。
检测结果显示，本研究建立了多重实时荧光PCR检测方法，所制备的标准品模板在108~101copies范围内与Ct值之间呈现良好的线性关系，且最低检出量为101copies。
REV感染CEF后gag、env、LTR基因的拷贝数均先减少后增多。
通过实时荧光PCR技术与间接免疫荧光方法检测，发现REV在CEF上复制的初始阶段呈现病毒适应过程，此后病毒大量复制，表现出明显的增长趋势。
该研究不仅为REV的诊断技术提供了一种新的方法，同时也为深入研究REV的感染机制和致病机理奠定了基础。
%The objective of the present study was to develop a rapid, sensitive and specific method for detection of Reticuloendotheliosis virus (REV) in host cells and evaluation of replication kinetics for REV in chicken embryo fibroblasts (CEFs). Real-time PCR was developed using SYBR Green I and three pairs of primers specific to the conserved regions of gag, env and LTR genes and used to measure copies of viral genes at different days post infection. The results showed real-time PCR assay detected REV in the range of 108 to 101 copies with the detection limit at 101 copies. The copy numbers of these viral genes were detected in low level at initial infection stage followed by abundantincrease. As compared with indirect immunofluorescence assay (IFA), real-time PCR demonstrated the presence of REV in CEFs at early infection immediately following by massive virus replication. In conclusion, development of real-time PCR provided a new method for REV detection and further research on mechanisms of infection and pathogenesis.【期刊名称】《中国动物传染病学报》【年(卷),期】2015(000)001【总页数】8页(P1-8)【关键词】禽网状内皮组织增生症病毒;鸡胚成纤维细胞;实时荧光PCR;复制【作者】缪佶;鲍衍清;邵红霞;钱琨;秦爱建【作者单位】教育部禽类预防医学省部共建重点实验室，扬州225009; 扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室，扬州225009;教育部禽类预防医学省部共建重点实验室，扬州225009; 扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室，扬州225009;教育部禽类预防医学省部共建重点实验室，扬州225009; 扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室，扬州225009;教育部禽类预防医学省部共建重点实验室，扬州225009; 扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室，扬州225009;教育部禽类预防医学省部共建重点实验室，扬州225009; 扬州大学江苏省动物预防医学重点实验室，扬州225009【正文语种】中文【中图分类】S852.659.3禽网状内皮组织增生症病毒（Reticuloendotheliosis virus，REV）最初于1958年从火鸡脾脏中分离出，属于反转录病毒科，能引起鸡、鸭、鹅、火鸡和其他禽类发生免疫抑制、肿瘤形成和矮小综合征[1]。
寿光鸡中禽网状内皮组织增生病毒的分离鉴定
１ ． ３ 分离毒株ｅ ｒ ｗ基因的扩增、克隆和测序 １ ． ３ ． １ 模板ＤＮ Ａ的提取 Ｃ Ｅ Ｆ 在接 种Ｒ Ｅ Ｖ维 持６ ｄ 后收 获
细 胞 ，经 洗 涤 、 离心 沉 淀 再用 抽 提 缓 冲 液 （ １ ０ ０ ｍｍｏ ｌ ／ Ｌ
Ｎａ ＣＩ ・１ ０ ｍｍｏ ｌ ／ Ｌ Ｔ ｒ ｉ ｓ － ＣＩ ｐ Ｈ８ ． ０ ，２ ５ ｍｍｏ ｌ ／ Ｌ ＥＤＴ Ａ ｐ Ｈ８ ． ０ ・
文献标识码 ：Ａ 文章编号 ：１ ０ ０ ７ － １ ７ ３ ３ （ ２ ０ １ ３ ） １ ０ ． ０ ０ ０ ５ ． ０ ３
行 间接 免 疫 荧 ３ ￣ （ Ｉ Ｆ Ａ ） 检￣ ｌ ｌ Ｊ ［ ４ ６ ５ ９
禽 网状 内皮组织 增生病 （ Ｒ ｅ ｔ ｉ ｃ ｕ ｌ ｏ ｅ ｎ ｄ ｏ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ｏ ｓ ｉ ｓ ，Ｒ Ｅ ） 是 禽类 的一 种重要 的致肿 瘤性 疾病 ，其病 原禽 网状 内皮组 织增 生病毒（ Ｒ ｅ ｔ ｉ ｃ ｕ ｌ ｏ ｅ ｎ ｄ ｏ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ｏ ｓ ｉ ｓ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ，Ｒ Ｅ Ｖ ） 是一个 禽反 转录病毒群 ，是禽 白血病毒（ Ａ ｖ ｉ ａ ｎ Ｌ ｅ ｕ ｋ ｏ ｓ ｉ ｓ Ｖｉ ｒ ｕ ｓ ， ＡＬ Ｖ） 、 马立克 氏病病毒（ Ｍａ ｒ ｅ ｋ ’ Ｓ ｄ ｉ ｓ ｅ ａ ｓ ｅ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ，ＭＤＶ ） 之 后第三种 引起禽 类发 生肿瘤 的病 毒 ，不仅 感染鸡 ，还可 以感染 火 鸡、鸭 、鹅 、鹌鹑和野鸡 等ｎ １ 。Ｒ Ｅ Ｖ主要诱发鸡 急性 网状 细胞肿瘤、淋 巴组织和其它组织 的慢性 肿瘤等 。
２ ０ １ ３年第 ｌ Ｏ 期 （ 总第 ２ ０ １
试验研究
寿 光鸡 中禽 网状 内皮组 织增生病毒 的分离鉴定
禽网状内皮组织增生症研究进展
摘要：禽网状内皮组织增生症（RE ），也被称为极性网状内皮组织细胞癌，是一种重要的家禽免疫抑制疾病。
其病原体禽网状内皮组织组织增生症病毒（REV ）广泛分布于不同鸟类，可引起亚临床感染。
REV 具有免疫抑制作用，REV 整合到其他较大DNA 病毒基因组中的能力使其诊断和预防变得复杂，可能导致其他疫病的疫苗接种失败。
目前还没有有效的治疗方案和预防疫苗，这也使如何限制RE 对家禽养殖的影响变得复杂。
本文综述了RE 已知的知识现状，强调了这一问题的严重性。
关键词：禽网状内皮组织增生症；病毒；共同感染禽网状内皮组织增生症研究进展刘洪勋（博兴县畜牧兽医服务中心山东滨州256500）doi:10.3969/j.issn.1008-4754.2023.09.057收稿日期：2022-12-02禽网状内皮组织增生症（reticuloendotheliosis ，RE ）是家禽的一种恶性疾病，其病原体禽网状内皮组织组织增生症病毒（reticuloen -dotheliosis virus ，REV ）最早于1958年从患有肿瘤的火鸡内脏中分离而来，于1966年根据肿瘤病变存在的主要细胞成分首次被命名[1]。
我国2008年《一、二、三类动物疫病病种名录》将RE 列为二类动物疫病[1]。
长期以来，REV 一直与鸟类中广泛传播的疟原虫白斑疟原虫有关。
报道最多的是鸡和火鸡，鸭和鹅等水禽也有报道，其他野生鸟类包括鹌鹑、鹧鸪、孔雀、麻雀和鸽子等，成熟鹌鹑和10周龄鸡极易感染[2]。
尚没有证据证明哺乳动物能产生该病，而且REV 不会在任何哺乳动物来源的培养细胞中生长。
美国得克萨斯州濒临灭绝的阿特沃特草原鸡（tympanuchus cupido attwateri ）因为种群中流行的RE 致使种群恢复工作颇受阻碍，保护区内的雉和麻雀血液样本检测的阳性率极高[3]。
从组织病理学的角度来看，RE 导致淋巴组织的急性或慢性肿瘤。
RE 的临床过程类似于其他肿瘤性疾病，如淋巴性白血病（lym -phoid leukosis ）或由J 亚组禽白血病病毒（avian leukosis virus of subgroup J ，ALV-J ）引起的禽白血病等。
野鸭源禽网状内皮组织增生症病毒的分离与鉴定
野鸭源禽网状内皮组织增生症病毒的分离与鉴定姜莉莉;祁小乐;高玉龙;邓小芸;柴洪亮;张礼洲;贠炳岭;秦立廷;王永强【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2013(044)008【摘要】利用扩增禽网状内皮组织增生症病毒(REV)长末端重复序列(LTR)的特异性引物作为检测引物,对采集于吉林省某地健康野鸭的脏器样品进行PCR检测.阳性样品经DF1培养增殖,进行病毒的分离,经PCR和间接免疫荧光(IFA)方法鉴定,确定分离到2株REV,分别来自于针尾鸭和绿头鸭,将分离病毒分别命名为DBYR1101和DBYR1102.克隆2个病毒株的主要保护性抗原基因gp90,并进行序列分析.结果显示,2个分离株gp90基因氨基酸相似性为99.5％;DBYR1101 gp90基因与REV 3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸相似性分别为95.7％、94.2％和98.2％;DBYR1102 gp90基因与REV 3个型的代表株170A、SNV和CSV的氨基酸相似性分别为95.2％、93.7％和97.7％;与中国早期南方分离株HA9901的氨基酸序列相似性分别为94.7％和94.2％;与中国北方分离株氨基酸序列相似性为99.2％～100％.核苷酸遗传进化分析表明,2个野鸟源REV分离株与现有的东北分离株亲缘关系较近,趋于形成1个北方分离群;与SNV株亲缘关系最远;与170A株亲缘关系较远;与美国和中国台湾地区的某些分离株相似性较高.该研究首次自野鸭体内分离到REV,丰富了REV流行病学资料,同时提醒我们重视野生鸟类迁徙在疾病传播中所扮演的角色,为深入研究REV致病机制、免疫抑制机制等奠定基础.【总页数】6页(P1277-1282)【作者】姜莉莉;祁小乐;高玉龙;邓小芸;柴洪亮;张礼洲;贠炳岭;秦立廷;王永强【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,哈尔滨150001;东北林业大学野生动物资源学院,哈尔滨150040;辽宁医学院畜牧兽医学院,锦州121001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,哈尔滨150001;东北林业大学野生动物资源学院,哈尔滨150040;东北林业大学野生动物资源学院,哈尔滨150040;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,哈尔滨150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,哈尔滨150001【正文语种】中文【中图分类】S852.659.3【相关文献】1.应用PCR法检测禽源生物制品中禽网状内皮组织增生症病毒 [J], 庄金秋;梅建国;毕研丽;王金良;苗立中;沈志强2.应用PCR法检测禽源生物制品中禽网状内皮组织增生症病毒 [J], 庄金秋;毕研丽;梅建国;王金良;苗立中;沈志强3.鸡痘病毒活疫苗污染禽网状内皮组织增生症病毒的间接免疫荧光法检测研究 [J], 孙淼;李岭;李启红;夏业才;李慧姣;李俊平;杨承槐4.SYBR GreenⅠ实时荧光 PCR 法检测禽活疫苗中禽网状内皮组织增生症病毒 [J], 黄小洁;杨承槐;刘丹;陈晓春;侯力丹;李启红;李慧姣;李俊平5.分子克隆化禽网状内皮组织增生症病毒传染性及其前病毒全基因组序列研究 [J], 吉荣;崔治中;王锡乐;孙淑红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
禽网状内皮组织增生症流行现状及检测技术研究进展
禽网状内皮组织增生症流行现状及检测技术研究进展邓小芸;祁小乐;高玉龙;高宏雷;秦立廷;王永强;王笑梅【期刊名称】《动物医学进展》【年(卷),期】2010(031)009【摘要】禽网状内皮组织增生症(RE)是禽类一种重要的致瘤性和免疫抑制性疾病.近年来,国内外鸡群中网状内皮组织增生症病毒(REV)流行比较严重;REV与马立克病病毒(MDV)、鸡贫血病病毒(CAV)和J亚群禽白血病病毒(Avian leukosis virus subgroup J,ALV-J)几种免疫抑制性病毒的混合感染在我国部分养鸡场中均普遍存在,使得鸡群处于免疫力低下的状态,导致禽流感、新城疫等重要疫苗免疫失败,并容易造成继发感染,使疫病的诊断和防控难度加大.另外,REV可以整合到MDV和鸡痘病毒(Fowlpox virus, FPV)基因组中,从而导致商品化疫苗受到污染,并可用做将外源基因插入到鸡和哺乳动物细胞内的表达载体;基于REV传统检测方法的基础上,新型的分子生物学检测技术如PCR、实时荧光PCR、LAMP提高了诊断REV的敏感性和特异性.【总页数】4页(P93-96)【作者】邓小芸;祁小乐;高玉龙;高宏雷;秦立廷;王永强;王笑梅【作者单位】中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;东北农业大学动物医学学院,黑龙江哈尔滨,150030;黑龙江畜牧兽医职业学院,黑龙江双城,150111;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001;中国农业科学院哈尔滨兽医研究所,兽医生物技术国家重点实验室,禽传染病研究室,黑龙江哈尔滨,150001【正文语种】中文【中图分类】S856.5【相关文献】1.昆明地区禽网状内皮组织增生症的血清流行病学调查 [J], 周显珍;夏九鲜;李锐;唐阿英2.禽网状内皮组织增生症病毒检测方法研究进展 [J], 庄金秋;梅建国;沈志强3.SYBR GreenⅠ实时荧光 PCR 法检测禽活疫苗中禽网状内皮组织增生症病毒 [J], 黄小洁;杨承槐;刘丹;陈晓春;侯力丹;李启红;李慧姣;李俊平4.山东省烟台地区J亚型禽白血病与禽网状内皮组织增生症血清流行病学调查 [J], 盖小君; 王晓玲; 郭龙宗; 陈静5.2020年山东省种鸡场禽网状内皮组织增生症流行病学调查 [J], 李玉杰;邢林林;孙圣福;曹振山;徐聪;徐鸿;陈静因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
不同方法对网状内皮组织增殖病病毒的检测
不同方法对网状内皮组织增殖病病毒的检测赵文明;丁家波;崔治中【期刊名称】《中国兽医学报》【年(卷),期】2003(23)2【摘要】从山东、江苏、上海等地的鸡场中 ,收集疑为网状内皮组织增殖病病毒(REV)感染鸡的脾脏、肝脏 5 6份 ,分别通过聚合酶链式反应 (PCR)、班点杂交试验(Dot- blot)和间接免疫荧光试验 (IFA)对其进行 REV检测。
结果有 2 1份呈PCR 阳性 ,2 0份呈 Dot- blot阳性 ,15份呈 IFA阳性 ,且所有 IFA阳性样品 ,PCR和Dot- blot检测都呈阳性 ,2 0份Dot- blot阳性样品中有 19份呈 PCR阳性。
研究表明 ,PCR检测 REV较其他方法敏感 ,可作为 REV的常规检测方法之一。
【总页数】3页(P133-135)【关键词】网状内皮组织增殖病;检测;网状内皮组织增殖病病毒;聚合酶链式反应;斑点杂交试验;间接免疫荧光试验;鸡【作者】赵文明;丁家波;崔治中【作者单位】扬州大学畜牧兽医学院;山东农业大学动物科技学院【正文语种】中文【中图分类】S858.31;S852.659.3【相关文献】1.网状内皮组织增殖病病毒(REV)不同分离株LTR基因的序列分析 [J], 赵文明;丁家波;崔治中2.禽网状内皮组织增殖病病毒SYBR Green Ⅰ实时荧光PCR检测方法的建立 [J], 牛秀杰;赵妍;薛美;王云峰3.禽网状内皮组织增殖病病毒及其检测技术进展 [J], 翟新验;王兴龙;卢胜明4.聚合酶链反应技术检测禽网状内皮组织增殖病病毒 [J], 翟新验;王兴龙;卢胜明;刘月焕5.禽网状内皮组织增殖病病毒PCR及RT-PCR检测方法的研究和p30主要抗原域的原核表达 [J], 葛兆宏;陆广富因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
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姜莉莉 ， 蒋培 红 ， 温海燕 ，樊兆斌 ，
（ １ ． 菏泽 学院药物科学与技术 系 ，山东 菏 泽 ２ ７ ４ ０ １ ５； ２ ． 锦州 医科大学 畜牧兽 医学院 ， 辽宁 锦 州 １ ２ １ ０ ０ １ ） 摘要 ： 为研 究禽网状 内皮组织增 生症 病毒 （ Ｒ ｅ ｔ ｉ ｃ ｕ ｌ ｏ ｅ ｎ ｄ ｏ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ｏ ｓ ｉ ￣ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ ， Ｒ Ｅ Ｖ） 蛋 白酶 Ｐ Ｒ与 宿主细胞 的相互作 用 ， 将Ｒ Ｅ Ｖ
白酶 Ｐ Ｒ互作 的宿主蛋 白奠定 了基础 。
关键词 ： 禽 网状内皮组织增生症病毒 ； Ｐ Ｒ； 酵母 双杂交 ； 诱饵 载体
中图分类号 ： ￥ ８ ５ ４ ． ４ ３ 文献标 志码 ： Ａ 文章编号 ： ０ ５ ２ ９ － ６ ０ ０ ５ （ ２ ０ １ ７ ） ０ ５ － ０ ０ ２ ７ － ０ ３
Ｃ ｈ ｉ ｎ ｅ ｓ ｅ Ｊ ｏ ｕ ｒ ｎ ａ ｌ ｏ ｆ Ｖ ｅ ｔ ｅ ｒ ｉ ｎ ａ ｒ ｙ Ｍｅ ｄ ｉ ｃ ｉ ｎ ｅ
中国兽 医杂志
２ ０ １ ７ 年（ 第５ ３卷） 第 ５期 ２ ７
禽 网 状 内 皮 组 织 增 生 症 病 毒 蛋 白 酶 Ｐ Ｉ ｑ酵 母 双 杂 交 诱 饵 载 体 的 构 建 及 载体 ｐ Ｇ Ｂ Ｋ Ｔ ７ ， 构建诱饵载体 ｐ Ｇ Ｂ Ｋ ． Ｐ Ｒ ， 经菌落 Ｐ Ｃ Ｒ、 酶切鉴定及测序验证正确后 ， 将重组诱 饵质 粒转 化酵母菌株 Ｙ ２ Ｈ Ｇ ｏ ｌ ｄ 感 受态 ， 进行重 组诱 饵载体在酵母 中的 自 激活 活性 和毒 性检测。结果 表明 ， 成功构 建诱饵载 体ｐ Ｇ Ｂ Ｋ — Ｐ Ｒ ， 此载体 在酵母 细胞 Ｙ ２ Ｈ ｏｌ Ｇ ｄ中无 自 激活活性 和毒 性。研究 结果为进一步利用酵母双杂交技术筛选与 Ｒ Ｅ Ｖ蛋
Ｃｏ ｎ ｓ ｔ ｒ ｕ ｃ ｉ ｔ ｏ ｎ ａ ｎ ｄ Ｉ ｄ ｅ ｎ ｔ ｉ ｉｃ ｆ ａ ｉ ｔ ｏ ｎ ｏ ｆ ｔ ｈ ｅ Ｂａ ｉ ｔ Ｖｅ ｃ ｔ ０ ｒ Ｏ ｆ Ｒｅ ｔ ｉ ｃ ｕ ｌ ｏ ｅ ｎ ｄ ｏ ｔ ｈ ｅ ｌ ｉ ｏ ｓ ｉ ｓ ｖ ｉ ｒ ｕ ｓ Ｐ Ｒ ｕ ｓ ｉ ｎ ｇ