生物：1.2《基因工程的基本操作程序》第一课时课件(新人教版选修3)
高中生物第3章基因工程第2节基因工程的基本操作程序第1课时获取目的基因与构建基因表达载体课件新人教版
(1)模板:均需要脱氧核苷酸单链作为模板
(2)原料:均为4种脱氧核苷酸
(3)酶:均需DNA聚合酶
(4)引物:都需要引物,使DNA聚合酶从引物开始进行互补链的
合成
2种引物的作用
【视角应用】
1.(2021山东聊城高二期中)下列有关PCR技术的叙述,错误的是( B ) A.PCR技术的原理是DNA半保留复制 B.变性过程中破坏的是磷酸二酯键 C.复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的 D.延伸过程中需要耐高温的DNA聚合酶、四种脱氧核苷酸等,无须添加ATP
(2)某同学设计的两组引物(只标注了部分碱基序列)都不合理(如下图),请 分别说明理由。
提示 第1组的引物Ⅰ和引物Ⅱ局部发生碱基互补配对而失效。第2组中引 物Ⅰ'自身折叠后会出现局部碱基互补配对而失效。 (3)如果PCR循环n次,则共需消耗多少对引物? 提示 共需消耗2n-1对引物。
【方法突破】
旁栏边角想一想 用PCR技术可以扩增mRNA吗? 提示 mRNA不可以直接扩增,需要将它逆转录成cDNA再进行扩增。
结论语句辨一辨 1.PCR反应中温度的周期性改变是为了DNA聚合酶催化不同的反应。
( ×) 2.用PCR方法扩增目的基因时不必知道基因的全部序列。( √ ) 3.PCR体系中一定要添加从受体细胞中提取的DNA聚合酶。( × ) 4.PCR过程中需要模板DNA和一个引物分子。( × )
3.下图1、2分别表示载体和目的基因及其上的限制酶的切割位点。
(1)据图分析,构建基因表达载体时,能否用限制酶SmaⅠ切割质粒?为什么? 提示 不能。因为SmaⅠ会破坏质粒的抗性基因。质粒上的抗性基因是标 记基因,便于重组DNA分子的筛选,若被破坏,无法进一步筛选。 (2)与只使用EcoRⅠ相比较,使用BamHⅠ和Hind Ⅲ两种限制酶同时处理质 粒、外源DNA的优点是什么? 提示 可以防止质粒和目的基因的自身环化以及目的基因与载体的反向连 接。
12e5本操作程序-课件新人教版选修3
使用的目的基因有： 苏云金杆菌抗虫基 因、植物抗病基因
（抗病毒、抗细菌)、
人胰岛素基因等。目的基因(一)从基因中获取目的基 因1.基因
将含有某种生物不同基因的许多DNA
片断，导入到受体菌的群体中，各个受体菌
分别含有这种生物的不（如:cDNA）编码区上游原核细胞
编码区下游
调控
RNA聚合 酶结合位点
RNA聚合 酶结合位点
编码 蛋白质
调控
真 核
真核细胞
目的基因的获取
即：将需要的基因从供体生物细胞内提取出来 目的基因主要是指__编__码__蛋__白__质__的__结__构__基__因__
供体生物细胞
目前被广泛提取
取出 D用N限A制酶剪
去多余部分
提示：有些蛋白质肽链上有共价结合的糖链 ，这些糖链是在内质网和高尔基复合体上加工完 成的，内质网和高尔基复合体存在于真核细胞中 ，大肠杆菌不存在这两种细胞器，因此，在大肠 杆菌中生产这种糖蛋白是不可能的。
4. β -珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分。当它的成 分异常时，动物有可能患某种疾病，如镰刀形细胞贫血症 。假如让你用基因工程的方法，使大肠杆菌生产出鼠的β 珠蛋白，想一想，应如何进行设计？ 提示：基本操作如下：
编码区上游
原核细胞
编码区下游
基因工程的基本操作程序 课件
限制性酶切割 DNA分子
限制片段 琼脂糖电泳
DNA
带有DNA片段的凝胶
分
用缓冲液转 转移至硝酸纤维素膜上
子
移DNA
杂
凝胶
交
滤膜
与放射性标记 DNA探针杂交
吸附有DNA片 段的膜
放射自显影
抗原-抗体杂交
重组体
转化到 E.Coli
细菌启动子 插入的真核 DNA片段
解析：DNA 分子杂交就是不同来源的 DNA 分子的单 链按碱基互补配对原则结合在一起，形成杂合双链的过 程。B 项利用了分子杂交技术(DNA 与 mRNA 之间杂交)。 检测目的基因是否翻译合成蛋白质依据的是抗原—抗体 杂交原理，未用到 DNA 分子杂交原理。
答案：C
生物 种类
植物细胞
动物细胞
微生物细胞
转化 过程
将目的基因插入Ti质 粒的T-DNA上→Ca2+ 处理导入农杆菌细胞 →侵染植物细胞→目 的基因整合到受体细 胞的染色体上DNA上 →植物组织培养→试 管苗表达目的基因→
产生相应性状。
将含有目的基因
的表达载体提纯 →取受精卵→显 微注射→获得导 入目的基因的受 体细胞→早期胚 胎培养→胚胎移 植→获得新性状
第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation） 3、将目的基因导入微生物细胞 （1）微生物作为受体的优势
①繁殖速度快，可大量生产 ②生产成本低
（2）导入方法 Ca2+处理
第三步：将目的基因导入受体细胞（转化 transformation） 3、将目的基因导入微生物细胞 （3）原核生物作为受体细胞产生的蛋白质没有空间结构， 需要在体外加工。
生物：专题1《基因工程》课件(1)(新人教版选修3)
区分下列DNA末端是黏性末端还是平 末端，并回答哪些能用DNA连接酶连 接起来？
（3）运载体
①作用：将外源基因送入受体细胞。
为什么 要具备 这些条件
②具备的条件： 能在宿主细胞内复制，并稳定地保存 有多个限制酶切点，与外源基因连接。 具有某些标记基因， 便于进行筛选 对受体细胞无害
③举例：质粒（常用）、噬菌体 和动植物病毒。
获取目的基因的方法：1.从基因中获取目的基因。2.利用PCR技术合成DNA
PCR:聚合酶链式反应.是以DNA变性、复制的某
些特性为原理设计的. 前提条件是必须对目的基因有一定的了解，需 要设计引物。
3. mRNA差异显示法获得目的基因 （反转录）
4. 根据已知的氨基生物不同基因的许多 DNA片段,导入受体菌的群体中储存,各个受体 菌因可以
2.利用PCR技术合成DNA
（1）以DNA 片段作模板，在 90℃ 高温下，分开成 为单链DNA。
高温的作用是？
（2）以DNA 小段寡聚核苷酸做引物，在 50℃ 的温度 下，找到可以配对的正链和负链，形成互补结合。 （3）在 70℃ 高温下，合成一条与模板 DNA 单链（正 链或负链）互补结合的DNA新链。
质粒是独立于细菌拟核之外的双链 环状DNA分子，具有以下主要特点： 1、能自我复制并在受体细胞中稳定存在 2、有一个或多个限制酶切点 3、有特殊的遗传标记基因 注意：真正用作运载体的质粒都 是人工改造过的。
大肠杆菌及质粒载体结构模式图
有标记基因的存 在，将来可用含 青霉素的培养基 鉴别。
有切割位点
1、原核细胞的基因与真核细胞的基因相比， 主要的区别有 ①所含核苷酸的数目 ②基本组成单位 ③基本功能 ④非编码区的结构 ⑤编码 区的结构 A．①⑤ B．②③ C．④⑤ D．①③ 2、大肠杆菌和酵母菌细胞内各有一种蛋白质 都是由10个氨基酸组成，那么控制蛋白质白 质合成的基因，其组成的脱氧核苷酸数是 A．大肠杆菌的多 B．酵母菌的多 C．两者一样多 D．无法确定
高中生物 1 基因工程 1.2 基因工程的基本操作程序课后习题 新人教版选修3
1.2基因工程的基本操作程序1.下列获取目的基因的方法中需要模板的是( )①从基因文库中获取目的基因②利用PCR技术扩增目的基因③反转录法④通过DNA 合成仪利用化学方法直接人工合成DNAA.①②③④B.①②③C.②③④D.②③解析:PCR技术利用的是DNA双链复制原理。
即将DNA双链之间的氢键打开,变成单链DNA,需要以每条单链DNA作为模板。
反转录法是以目的基因转录成的信使RNA为模板,在逆转录酶的作用下,先反转录形成互补的单链DNA,再合成双链DNA。
①④则均不需要模板。
答案:D2.下列关于基因文库的说法,错误的是( )A.可分为基因组文库和部分基因文库B.cDNA文库属于部分基因文库C.基因组文库的基因在不同物种之间均可进行基因交流D.同种生物的cDNA文库基因数量较基因组文库基因数量少解析:基因组文库只有部分基因能够在不同物种之间进行交流。
答案:C3.聚合酶链式反应(PCR)是一种体外迅速扩增DNA片段的技术。
PCR过程一般经历下述30多次循环:90~95 ℃使模板DNA变性、解链→55~60 ℃复性(引物与DNA模板链结合)→70~75 ℃引物链延伸(形成新的脱氧核苷酸链)。
下列有关PCR过程的叙述,不正确的是( )A.变性过程中破坏的是DNA分子内碱基对之间的氢键,也可利用解旋酶实现B.复性过程中引物与DNA模板链的结合是依靠碱基互补配对原则完成的C.延伸过程中需要热稳定DNA聚合酶催化不同核糖核苷酸之间形成磷酸二酯键D.PCR与细胞内DNA复制相比所需酶的最适温度较高解析:延伸过程需要四种脱氧核苷酸为原料,因此会在脱氧核苷酸之间形成磷酸二酯键。
答案:C4.下列有关PCR技术的说法,不正确的是( )A.PCR技术是一项在生物体外复制特定DNA的核酸合成技术B.PCR技术的原理与DNA复制的原理不同C.PCR技术的前提是有一段已知目的基因的核苷酸序列D.PCR技术除需特定的温度、原料、目的基因、热稳定DNA聚合酶等条件外,还需要根据已知核苷酸序列设计相应的引物解析:PCR体外扩增与细胞内DNA复制过程原理相同,都是DNA双链复制。
人教版高中生物选修三1.2 基因工程的基本操作程序
1．2 基因工程的基本操作程序阐明基因工程的基本操作程序主要包括目的基因的获取、基因表达载体的构建、目的基因导入受体细胞和目的基因及其表达产物的检测和鉴定等步骤。
知识点一 目的基因的获取1.目的基因：主要是指编码蛋白质的基因，也可以是一些具有调控作用的因子。
2.目的基因的获取方法 (1)从基因文库中获取①基因文库：将含有某种生物不同基因的许多DNA 片段，导入受体菌的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。
②种类⎩⎪⎨⎪⎧基因组文库：包含一种生物所有的基因部分基因文库：包含一种生物的一部分基因③提取依据：基因的核苷酸序列、基因的功能、基因在染色体上的位置、基因的转录产物mRNA ，以及基因的表达产物蛋白质等特性。
(2)利用PCR 技术扩增目的基因①PCR 的含义：是一项在生物体外复制特定DNA 片段的核酸合成技术。
②目的：短时间内大量扩增目的基因。
③原理：DNA 双链复制。
④过程第一步：加热至90～95 ℃，DNA 解链；第二步：冷却至55～60 ℃，引物结合到互补DNA 链；第三步：加热至70～75 ℃，热稳定DNA 聚合酶(Taq 酶)从引物起始进行互补链的合成。
如此重复循环多次。
⑤特点：指数形式扩增。
(3)人工合成如果目的基因较小，核苷酸序列又已知，可通过DNA 合成仪用化学方法人工合成。
1．cDNA 文库与基因组文库的区别2.PCR过程优点操作简单专一性强可在短时间内大量扩增目的基因专一性强，可产生自然界中不存在的新基因缺点工作量大、盲目性大、专一性差操作过程较麻烦，技术要求过高需要严格控制温度、技术要求高适用范围小1．下列有关获取目的基因的方法的叙述，错误的是()A．直接分离目的基因的方法的优点是操作简便，缺点是工作量大，具有一定的盲目性B．由于真核细胞的基因含有不表达的DNA片段，一般使用人工合成的方法C．目前人工合成基因的方法主要有两种，分别是反转录法和化学合成法D．PCR技术的原理是DNA复制，需要RNA聚合酶催化DNA合成[解析]选D。
讲课基因工程的基本操作程序课件
基因工程的历史与发展
01
基因工程的起源可以追溯到20世 纪70年代，当时科学家开始探索 DNA重组技术，奠定了基因工程 的基础。
02
随着技术的不断发展和完善，基 因工程在医学、农业、工业和生 物技术等领域得到了广泛应用。
基因工程的应用领域
安全性和伦理规范。
行业自律
03
相关行业和组织也制定了自律准则和规范，以促进基因工程的
健康发展。
05 基因工程未来展望
基因治疗的发展前景
基因治疗是一种通过修改人类基因来治疗遗传性疾病和获得性病症的方 法。随着基因编辑技术的不断进步，基因治疗在未来的发展前景广阔。
基因治疗将有望治愈一些目前无法根治的遗传性疾病，如囊性纤维化、 镰状细胞贫血等。同时，基因治疗也为一些常见疾病的治疗提供了新的
聚合酶链式反应（PCR）
利用特异性引物扩增目的基因片段，实现目的基因的快速获取。
化学体构建
载体的选择
目的基因与载体的连接
根据目的基因的特点和基因工程的需 要，选择合适的载体，如质粒、病毒 载体等。
利用限制性内切酶和DNA连接酶，将 目的基因与载体连接成重组DNA分子。
基因歧视
基因工程可能导致基于基因信息 的歧视，影响社会公平。
基因资源保护
基因资源是人类的共同财富，应 避免基因资源被滥用或垄断。
基因工程的法规与监管
国际法规
01
国际社会已经制定了一些关于基因工程的法规和公约，如《联
合国生物多样性公约》和《人类基因组计划宣言》。
国家法规
02
各国政府也制定了相应的法规和监管措施，以确保基因工程的
基因扩增与鉴定
生物：专题1《基因工程》课件(新人教版选修3)
提取目的基因的方法
人工基因合成法
1. 逆转录法：以信使RNA 逆转录法： 信使RNA 为模板， 为模板，在逆转录酶的 作用下将脱氧核苷酸合 成合成DNA(基因) DNA(基因 成合成DNA(基因)。 2. 直接合成法：根据蛋白 直接合成法：根据蛋白 质的氨基酸顺序推算出 质的氨基酸顺序推算出 信使RNA核苷酸顺序， RNA核苷酸顺序 信使RNA核苷酸顺序， 再据此推算出基因DNA 再据此推算出基因DNA 的脱氧核苷酸顺序。 的脱氧核苷酸顺序。用 游离脱氧核苷酸直接合 成相应的基因。 成相应的基因。
PCR扩增仪
IMN
6 过程： 变性、退火、延伸三步曲 过程组DNA分子 DNA
2.过程: 2.过程: 过程 质粒 DNA分子 DNA分子 同一种限制酶处理 一个切口 两个黏性末端 两个切口 获得目的基因 DNA连接酶 DNA连接酶 重组DNA分子（重组质粒） 重组DNA分子（重组质粒） DNA分子
基因工程
衢州三中
吴志明
20110520
步骤一 获得目的基因
已知序列： 已知序列：人工用PCR技术扩增 利用PCR技术扩增 PCR 聚合酶链式反应(Polymerase 聚合酶链式反应(Polymerase Chain Reaction)
无表达产物
无表达产物
有表达产物
无表达产物
检测菌落中是否有目的基因的表达产物。 检测菌落中是否有目的基因的表达产物。 转基因大肠杆菌是否产生了－－ －－胰岛素原 如：转基因大肠杆菌是否产生了－－胰岛素原
转 基 因 抗 虫 棉
多细胞生物的检测，将每个受体细胞培养成个体， 多细胞生物的检测，将每个受体细胞培养成个体， 检测是否表现出特定的性状。 检测是否表现出特定的性状。 例：用棉花叶片喂棉 铃虫， 铃虫，如虫吃后不出现中 毒症状，说明未摄入目的 毒症状， 基因或摄入目的基因未表 如虫吃后中毒死亡， 达。如虫吃后中毒死亡， 则说明摄入了抗虫基因并 得到表达。 得到表达。
人教版高中生物选修3专题1第2节基因工程的基本操作程序(共42张PPT)
目前被广泛提取使用的目的基因有：苏云金杆菌 抗虫基因、植物抗病基因（抗病毒、抗细菌)、人胰 岛素基因等。
（一）获取目的基因的常用方法有哪些?
初始目的基因的来源 1. 从生物中直接获取 2. 人工合成
注意：要保持基因的完整性
目的基因的核苷酸序列未知）含有某种生物不同基因的许多DNA片断， 导入到受体菌的群体中，各个受体菌分别含有 这种生物的不同基因，称为基因。基因基因组
部分基因 （如:cDNA）•9、要学生做的事，教职员躬亲共做；要学生学的知识，教职员躬亲共学；要学生守的规则，教职员躬亲共守。2021/8/122021/8/12Thursday, August 12, 2021 •10、阅读一切好书如同和过去最杰出的人谈话。2021/8/122021/8/122021/8/128/12/2021 9:54:53 PM •11、只有让学生不把全部时间都用在学习上，而留下许多自由支配的时间，他才能顺利地学习……（这）是教育过程的逻辑。2021/8/122021/8/122021/8/12Aug-2112-Aug-21 •12、要记住，你不仅是教课的教师，也是学生的教育者，生活的导师和道德的引路人。2021/8/122021/8/122021/8/12Thursday, August 12, 2021
PCR技术扩增与DNA复制的比较
碱基互补配对 四种脱氧核苷酸
模板、能量、酶
DNA在高温下 变性解旋
体外复制
解旋酶催化 细胞核内
热稳定的DNA聚合酶 细胞内的DNA聚合酶
大量的DNA片段 形成整个DNA分子
3.人工合成
——根据已知的氨基酸序列合成DNA 蛋白质的氨基酸序列
【高中生物】基因工程的基本操作程序(第1课时) 高二生物同步精品课堂(人教版2019选择性必修3)
成 单链DNA
。
b、复性（下降到50℃）：系统温度降低，引物与DNA模板通过碱 基互补配对，形成局部 双链 。
c、延伸（上升到72℃）：在TaqDNA聚合酶的作用下，溶液中的 的 4种脱氧核苷酸 在 耐高温的DNA聚合酶 的作用下，根据碱基 互补配对原则，合成与模板互补的 5′端→3′端 的新的DNA链。
5’
3’
3’
3’
5’
3’ 5’
A.变性
B.复性
C.延伸
5’
3’ 5’ 3’
5’
3’
3’
5’ 3’
5’当温3度’上升到72℃左右时，溶 5’
当温度上升到90℃以上 时，双链DNA解聚为单 链
当温度下降到50℃左右时， 两种引物通过碱基互补配对 与两条单链DNA结合
液中的4种脱氧核苷酸在耐高温 的DNA聚合酶的作用下，根据 碱基互补配对原则合成新的 DNA链
第一步：目的基因的筛选与获取 PCR反应过程
第一轮循环的产 物作为第二轮反 应的模板，经过 变性、复性和延 伸三步产生第二 轮循环的产物；
第二轮循环的 产物作为第三 轮反应的模板， 经过变性、复 性和延伸三步 产生第三轮的 产物；
完成以 后，常 采用琼 脂糖凝 胶电泳 来鉴定 PCR的产 物
第二轮循环的产物
(2)实例：与生物抗逆性、优良品质、生产药物、毒物降解和工业用酶等相关 的基因。
资料：苏云金杆菌通过产生苏云金杆菌伴胞晶体蛋白（Bt抗虫蛋白）， 破坏鳞翅目昆虫的消化系统来杀死棉铃虫。 科学家将“杀虫基因”转入棉花中，棉花产生Bt 抗虫蛋白抵抗虫害。
目的基因 那么，如何筛选目的基因呢？
第一步：目的基因的筛选与获取
体内DNA复制
高中生物同步课件：1.2 基因工程的基本操作程序(新人教版选修3)
程需要DNA聚合酶催化。
栏目 导引
专题1
基因工程
⑤属于双链DNA复制的过程，需要DNA聚合 酶催化。⑤过程在70～75 ℃环境下进行，所
需要的酶能够耐高温。
【答案】 RNA (2)稳定 (3)DNA聚合酶 (4)60
栏目 导引
(1)反转录酶(或逆转录酶)
分解
催化⑤过程的酶耐高温
专题1
基因工程
互动探究
基因工程
(2)化学合成法，即依照某一蛋白质的氨基酸 序列，通过密码子推算出其基因序列，然后 直接合成目的基因，其过程如下：
栏目 导引
专题1
基因工程
例1
(2012· 青岛市高二期末)1970年，科
学家证实了RNA病毒能依赖RNA合成DNA 的过程，并发现了催化此过程的酶。下面为 形成cDNA的过程和PCR扩增过程示意图。 请根据图解回答下列问题：
栏目 导引
专题1
基因工程
要点二
基因表达载体的构建
1.构建基因表达载体的目的：使目的基因在
受体细胞中稳定存在，并且可以遗传给下一
代，使目的基因能够表达和发挥作用。 2.基因表达载体的构建 (1)启动子：一段有特殊结构的DNA片段，位 于基因的首端。它是RNA聚合酶识别和结合 的部位，可驱动基因转录。
栏目 导引
专题1
基因工程
四、目的基因的检测与鉴定
1..首先要检测转基因生物的DNA上是否插
DNA分子杂交 目的基因 入了_________,方法是采用______________
技术。 2. 其 次 还 要 检 测 目 的 基 因 是 否 转 录 出 了 mRNA 分子杂交 ________,方法是采用__________技术。
高中生物基因工程1.2基因工程的基本操作程序素材1新人教版选修3(new)
1。
2 基因工程的基本操作程序一览众山小三维目标1.列举基因工程的实例,结合其具体过程了解基因工程的四个操作步骤，认同基因工程的应用可促进生产力的发展。
2。
深刻理解基因文库、基因组文库的概念，找出基因、基因文库和目的基因的区别与联系.3.结合实际，分析基因工程四个步骤的原理、工具及具体的操作程序。
尝试运用基因工程原理，提出解决某一实际问题的方案，从而锻炼自己分析问题、解决问题的能力。
学法指导本节学习的基因工程的基本操作程序和方法是对转基因植物、动物和微生物的概括。
本节学习的重点就是基因工程的基本操作过程，在学习过程中，应结合设计某一转基因生物的具体过程，将基因工程的操作程序有机地串联起来,从而加深对这一程序的认识.例如,烟草是人类健康的“杀手"。
如果让它生产出人类需要的药物蛋白，应如何操作?通过这一实例要分析目的基因从何而来，表达载体如何构建，如何导入烟草，如何检测药物蛋白产生与否等问题并加以设计。
可加深对基因工程原理的理解.学习时还要注意合作学习，资源共享,不同的人会有不同的方法,大家通过相互比较，相互借鉴，达到相互学习的目的.在课余时间,大家还可查阅《科学》杂志等参考读物,了解科学家成功的做法。
在各个操作程序中都有一些技术和方法层面上的难点不好理解，在学习中，可结合图片和影像资料，将抽象的知识形象化.诱学导入材料：β珠蛋白是动物血红蛋白的重要组成成分.当它的成分异常时，动物有可能患某种疾病，如镰刀型细胞贫血症。
问题：假如让你用基因工程的方法，使大肠杆菌生产出鼠的β珠蛋白,想一想，应如何进行设计？导入：通过基因工程方法，结合基因操作工具，具体过程如下：(1）从小鼠中克隆出β珠蛋白基因的编码序列（cDNA)。
（2）将cDNA前连接上在大肠杆菌中可以适用的启动子，另外加上抗四环素的基因，构建成一个表达载体。
(3）将表达载体导入无四环素抗性的大肠杆菌中，然后在含有四环素的培养基上培养大肠杆菌。
人教版高中生物选修三学案：1.2 基因工程的基本操作程序
1。
2 基因工程的基本操作程序【导学目标】1。
简述基因工程原理及基本操作程序。
2.尝试设计某一转基因生物的研制过程.【自主学习】基因工程的基本操作程序1。
的获取。
2．的构建.3．将目的基因导入。
4．目的基因的与鉴定.一、目的基因的获取1。
目的基因：主要是指编码蛋白质的，也可以是一些具有。
2．基因文库(1）基因文库的含义：将含有某种生物不同基因的许多，导入的群体中储存，各个受体菌分别含有这种生物的不同的基因，称为基因文库。
（2）基因文库的种类①基因组文库：含有一种生物的基因。
②部分基因文库：含有一种生物的基因。
3．获取目的基因的方法(1)从基因文库中获取目的基因（2)利用PCR技术扩增目的基因①PCR的含义：是一项在生物体外特定DNA片段的核酸合成技术.②过程：目的基因受热形成，与引物结合,在的作用下延伸形成DNA.③方式：指数扩增＝2n(n为扩增循环的次数).(3）人工合成法:若较小，序列已知,可以人工合成。
二、基因表达载体的构建1。
基因表达载体的组成2．基因表达载体的功能（1)使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以给下一代。
(2）使目的基因和发挥作用。
三、将目的基因导入受体细胞1.转化：进入受体细胞内，并且在受体细胞内维持稳定和表达的过程。
2．导入植物细胞（1）方法：、基因枪法、花粉管通道法等。
（2）农杆菌的特点①易感染和裸子植物。
②Ti质粒上的可转移至受体细胞，并且整合到受体细胞上。
3．导入动物细胞（1)常用方法: 技术. （2）常用受体细胞: .4．导入微生物细胞（1）原核生物特点:繁殖快、多为、遗传物质相对等。
（2)对受体细胞的常用处理方法：用处理细胞,使细胞处于一种能吸收周围环境中DNA分子的生理状态（这种细胞称为）。
四、目的基因的检测与鉴定1。
检测方法(1) 技术:①检测转基因生物的上的目的基因；②检测目的基因是否转录出 .（2）抗原—抗体杂交技术:用于检测目的基因是否翻译成 .2．鉴定：鉴定、抗性鉴定等.思考交流1．利用PCR技术扩增目的基因时，需要提供哪些物质和条件?2．一般情况下，基因工程操作获得成功的标志是什么？正误判断1．基因工程操作程序中的核心步骤是基因表达载体的构建。
高中生物新教材选择性必修三 基因工程的基操作程序(第一课时)
终止子 复制 原点
（4）目的基因： 如Bt基因,能控制表达所需要的特殊性状。 注意：目的基因必须插入到 启动子 与 终止子 之间。
（5）复制原点： DNA复制的起始位点。
3.基因表达载体的构建过程
限制酶切割位点 启动子 终止子
标记 基因
质粒
复制 原点
限制酶
目的基因 限制酶切割位点 限制酶
获取目的基因 DNA连接酶
（1）启动子：（启动子≠起始密码）
目的基因
①本质：一段有特殊序列结_，紧挨_转_录__的__起_始__位__点_。
③功能：RNA聚合酶识别和结合的部位，驱动基因
转录出mRNA。
诱导型启动子：当诱导物存在时，可以 激活或抑制目的基因的表达。
标记 基因
抗虫基因 与运载体DNA拼接 棉花细胞(含抗虫基因) 法确定哪些基因导
导入
入了受体细胞。
棉花植株(有抗虫特性)
基因表达载体是由 哪些部分组成的呢？
二、基因表达载体的构建——核心步骤
1.构建原因 ① 使目的基因在受体细胞中稳定存在,并且可以遗传给下一代 ;
② 使目的基因能够表达和发挥作用
。
2.基因表达载体的组成
同种限制酶或 能产生相同末 端的限制酶
基因表达载体构建模式图
重组DNA分子
3.基因表达载体的构建过程 ①单酶切法
思考：单酶切的方法缺陷 是什么？
目的基因
单酶切缺点: A. 质粒重新环化 B. 目的基因自身环化 C. 质粒与目的基因反向连接
(后果)
如何避免上述问题？
②双酶切法
双酶切的优点: A. 防止质粒重新环化 B. 防止质粒与目的基因反向连接 C. 防止目的基因自身环化
基因表 达载体
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二、基因表达载体的构建 1、基因工程的核心：基因表达载体的构建
2、目的：使目的基因在受体细胞中稳定存在
并且可以遗传给下一代，并能表达和发挥作用。 3、标出下图各部分名称并说出其作用
1、 目的基因 2、 终止子 3、 标记基因 4、 启动子 5、 复制原点
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结 论
对照组 实验组1 预期一 预期二 预期三 预期四 + + + + + + — —
既含有抗四环素基因也 含有抗氨苄青霉素基因 只含有抗四环素基因 只含有抗氨苄青霉素基因
既不含有抗四环素基因也 不含有抗氨苄青霉素基因
基因工程的基本操作程序
(第一课时）
问题引领
1、基因工程的具体操作分哪四步？
2、目的基因的定义？获取的途径有信息来获取 4、PCR技术 原理：DNA双链复制的原理 前提：有一段已知目的基因的核苷酸序列 过程：变性（升）→复性（降）→延伸（升） 结果：DNA数量呈指数形式扩增
背诵内容
1、基因工程的三种工具名称
2、限制酶的来源、种类、作用、结果
3、DNA连接酶的种类、作用 4、标记基因的作用
5、载体必备的5个条件
6、常用的载体种类
1、下图为DNA分子的切割和连接过程。 (1)EcoRI是一种 酶， 其识别序列是______， 切割位点是___与___ 之间的__________键。 切割结果产生的DNA片 段末端形式为_____。 (2)不同来源DNA片段 结合，需要_______ 连接酶，其作用是在___与___之间形成____键。 还有一种连接平末端的连接酶是____。
2、已知标记基因有抗四环素和抗氨苄青霉素,现探 讨某质粒中有无标记基因或标记基因是什么?根据实 验结果得出相应的结论。
实验组2： 实验组3： 加四环素和 加氨苄 氨苄青霉素 青霉素 实验组2 实验组3 + — + — + — — —
对照组： 不加抗 生素
实验组1： 加四环素
“+”“-”分别 表示 有”“无” 质粒
条？常用方法有哪三种？3、基因的定义、种类、如何从基因中得到目的基因？
4、PCR技术原理、前提、过程、结果
5、基因表达载体作用
一、目的基因的获取
目的基因：主要是指编码蛋白质的结构基因 1、两条途径： 从自然界中已有物种中分离 用因 用化学方法直接人工合成
咯，最擅长の乐器被否定掉，只能退而求其次，琵琶。那是水清第壹次来到园子，来之前两眼壹摸黑，根本别晓得那里是啥啊状况，随身所带物品少之又少，书倒是带咯别少， 可是琵琶根本没什么连想都没什么想过，在园子里还会需要用得上琵琶！此时面对排字琦关切の询问，水清心中别禁壹暖，但情况紧急，来别及感谢，只能是急匆匆地立即开 口请求道：“姐姐，妹妹今天本想给皇上弹奏壹支琵琶曲，可是妹妹来园子匆忙，自己の琵琶没什么带过来，别晓得那园子里啥啊地方能找到壹把琵琶借妹妹壹用。”第壹卷 第688章 借琴排字琦壹听天仙妹妹要借琵琶，心中别禁咯噔壹沉：连琴都没什么随身携带，壹会儿向皇上献曲能弹成啥啊样子？妹妹の琴艺水平可真是让人提心吊胆，要晓得 淑清の琴艺是她们当中最高超の，那可是她日日研习の结果，那年妹妹？时间紧急，排字琦也顾别得多想，既然天仙妹妹自己提出来要弹琵琶，她那各当姐姐也别好说啥啊， 只能是尽自己最大の努力帮着年妹妹，至于妹妹在皇上面前の表现，那只能是看她自己の造化咯。而那园子里也只有李淑清那里有琵琶，她能够独享二十年别衰の独房专宠， 能识得百十来各字是主要原因，但是那琵琶也是发挥咯至关重要の作用。别过现在别是想那些事情の时候，当务之急是尽快将琵琶拿到手，让水清尽快完成向皇上献曲の任务。 给皇上留下好印象，就是给爷长咯脸，别管是谁给皇上留下咯好印象，那金子可全都是贴在爷の脸上呢，那各时候可别是争风吃醋の时候，而是要同舟共济、齐心协力、共度 难关。于是排字琦赶快开口说道：“李姐姐最擅长琵琶，她那里壹定有。”说完别待水清说话，她赶快转向咯淑清：“姐姐，水清妹妹现在需要借您の琵琶壹用，以解燃眉之 急呢。”那两各人刚刚の对话淑清全都听到，当听到水清妹妹居然连琴都没什么，心中の鄙夷之情即刻升起，连琴都别会弹，真别晓得爷喜欢上她啥啊咯！再壹听排字琦开口 向她借琴，于是慢条斯理地说道；“妹妹她自己没什么琵琶吗？”“姐姐，妹妹の琵琶在府里，没什么带过园子来。”水清赶快接咯话，排字琦已经替她张咯口，她也别能全 指望着福晋为她出头露面。那两各人壹唱壹和地向她借琵琶，淑清の心中极为别满！您在外面出风头，拍皇上の马屁，讨爷の欢心，别理睬您就罢咯，居然还要向我来借琵琶， 现在就那么嚣张，将来还别是要骑在自己の头上咯吗？可是，假设淑别借给水清，众目睽睽之下，她实在是没什么别借の道理，而且王爷晓得咯肯定是要怪罪下来，她也没法 子交代。万般无奈之下，淑清只得开口说道：“妹妹の忙，姐姐当然要帮咯。菊香您去院子里取壹下，别过，妹妹，您好歹也派各丫环搭把手吧。”水清壹听淑清那么痛快地 答应咯，心中非常感激，于是赶快说道：“多谢姐姐鼎力相助，妹妹感恩别尽。竹墨，您就赶快跟菊香走壹趟吧。”落实咯借琴の事情，眼见着那里已经没什么大碍，排字琦 紧赶慢赶地追赶上咯皇上和王爷の脚步。王爷见排字琦悄然赶过来，对于福晋办事，他从来都是壹万各放心，于是也没什么多问，心中更是踏实咯许多。淑清见排字琦朝前追 去，反正需要准备の人是水清，又别是她李淑清，于是她又追上排字琦の脚步，也朝湖心岛走去，留水清壹各人焦急地等待。第壹卷 第689章 心焦虽然竹墨和菊香两各人飞 奔着将琵琶取咯回来，但是园子很大，往返壹趟仍是费时别少，水清壹各人在浴砚书屋等待得格外焦急，最后索性站到咯书院の大门外去直接迎接她们。好别容易见到那两各 丫环出现在视野里，水清壹秒钟都别敢耽搁，带着两各丫环脚底生风般地奔向咯湖心岛，壹边急急地奔跑起来，壹边手中忙别迭地戴上义甲，以便节约时间。当然，那义甲也 是从李淑清那里壹并借来の。王爷在湖心岛也是早已经等得心急如焚咯。皇上并没什么按照他の预期那样，感觉到累咯乏咯而摆驾回畅春园，相反别但被美景所吸引，更是对 即将到来の水清の献曲充满咯无限の期待，所以更加兴致盎然地边走边逛边聊，神采