冷诱导细菌蛋白表达载体是什么？

冷诱导细菌蛋白表达载体是什么？

pCS载体系统是用于在大肠杆菌中低温（通常15℃）高效表达重组蛋白的系统。该载体系统基于大肠杆菌冷休克基因cspA和部分lac 操纵子，是pET和pBAD系统（两者是在37℃表达）的补充。

温度与重组蛋白质的折叠有关，从而影响蛋白的溶解度和稳定性。因此，许多在37℃下溶解度和稳定性较差的蛋白，能在较低温度下有所改善。当重组蛋白37°C诱导表达的pET或pBAD载体系统中表达困难时，pCS系统可能是一种非常有用的替代方法。

将目的基因置于pCS载体中cspA启动子、lac操纵子（LacO）和cspA的5'UTR和短翻译增强元件（TEE）的下游。

由于在37℃下5'UTR非常不稳定，cspA启动子在此温度下的转录非常低效。但当将宿主菌转移至15℃时，5'UTR会形成高度稳定的二级结构。TEE序列可以通过核糖体的捕获来增强目的基因的翻译起始。

该质粒还携带有LacI天然启动子和编码序列，LacI蛋白作用于邻近cspA启动子的LacO序列以阻断目的基因的转录。在不存在IPTG 的情况下，这种抑制作用可以阻止下游基因的泄漏表达，而加入IPTG 则会阻断LacI的抑制作用。IPTG和低温可以有效地诱导目的基因的表达。