Waters 液相色谱教程 - 360文档中心

waters高效液相色谱

Waters高效液相色谱操作说明一．简介本高效液相色谱实验包括：waters1525泵+waters2487双波长检测器+色谱柱+电脑（breeze 图谱处理软件）+流动相二．操作流程0.准备工作确定色谱实验方法，处理好流动相1，换好流动相，确定色谱柱选择无误1.开机打开泵开关，听到两声“嘀”的响声之后，再打开波长检测器。

检测器进入预热阶段（此时检测器面板进入5min倒计时）这期间打开电脑，进入英文windows操作系统2，待检测器自检完毕（整个自检过程约6~7min），打开电脑桌面的（Breeze软件）。

待程序完全启动，整个开机过程结束。

系统默认进入上次使用的方案。

2.建立新方法和新方案2.1新建方案方案主要用来储存你的各个实验方法，数据等内容，你可以把它理解为一个文件夹。

2.1.1创建步骤选择→单击→单击"next"→在"project name"中输入方案名称（如abc），"comments"中可填注释，也可不填。

→单击"finish"2.1.2打开创建的方案在界面下→单击→在"project"中找到你创建的方案（如abc）→点击"OK",即进入到我们自己的方案中了2.2新建方法在新建的方案中，需要建立不同的试验方法。

试验方法主要设定的包括洗脱方式，检测波长等参数。

2.2.1新建方法步骤单击→单击→单击（Flow选项卡）→在programmed flow中设定你的洗脱方式（此步在2.2.2详述）→单击→单击（channel 1选项卡）→在"wavelength"框内设定你的检测波长（如265nm,280nm,215nm等等）→（设定结束，保存）：单击→输入方法名称如（abc 1）→单击"save"32.2.2洗脱方式的设定（重要）在programmed flow中可看到。

waters_uplc_超高液相色谱仪使用方法_概述及解释说明

waters uplc 超高液相色谱仪使用方法概述及解释说明1. 引言1.1 概述本文旨在介绍和解释Waters UPLC超高液相色谱仪的使用方法。

超高液相色谱技术作为一种快速、高效、灵敏的分析方法，已广泛应用于生命科学、环境监测、药物研发等领域。

而Waters UPLC超高液相色谱仪则作为当前市场上领先的仪器之一，拥有先进的特点和优势。

1.2 文章结构本文将按照如下结构来进行介绍和说明：首先，在第2部分中，我们将对Waters UPLC超高液相色谱仪进行详细的介绍，包括其工作原理、构成和组件以及特点和优势。

然后，在第3部分中，我们将概述超高液相色谱分析方法的基本步骤，并重点讨论样品准备工作、色谱柱和流动相选择与优化以及仪器参数设置与调节等方面的内容。

接着，在第4部分中，我们将详细解释使用Waters UPLC超高液相色谱仪的具体步骤和操作说明，包括开机与准备工作、样品处理与注射操作以及方法运行与数据分析等方面。

最后，在第5部分中，我们将总结使用过程中的经验和解决技巧，并展望超高液相色谱在分析领域中的发展方向和应用前景。

1.3 目的本文旨在帮助读者全面了解Waters UPLC超高液相色谱仪的使用方法，包括仪器介绍、分析方法概述以及具体操作步骤。

通过阅读本文，读者将能够熟练运用该仪器进行高效、准确的样品分析，并对超高液相色谱技术在各个领域中的应用前景有更深入的了解。

同时，我们也希望通过分享使用经验和问题解决技巧，能够为相关科研人员提供一些实用的参考和指导。

2. Waters UPLC超高液相色谱仪介绍2.1 原理Waters UPLC（Ultra Performance Liquid Chromatography）超高液相色谱仪是一种高效的色谱分析技术。

其原理基于传统液相色谱，通过使用减小粒径和增强填充剂的方式，实现更高的分离效率和分辨率。

UPLC仪器利用高压泵将样品溶液加速通过色谱柱，在极短的时间内完成分离、富集和检测。

waters高效液相色谱系统操作规程(入门)

1.目的规范Waters 高效液相色谱系统的使用和维护。

2.范围本规程适用于Waters 高效液相色谱系统的使用和维护。

3.职责质检室仪器分析员负责Waters 高效液相色谱系统的日常使用和维护。

4. 系统组成本系统由Waters 600E 多溶剂输送系统（有梯度控制器的高压输液泵）、Waters 在线脱气机、Rheodyne 7725i 手动进样阀、Waters 2487 双通道紫外检测器、Millennium32 色谱工作站/ 电脑等组成，另外还包括打印机、断电保护器和通风柜等辅助设备。

5. 程序5.1. 准备5.1.1.使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用0.45 ym滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制），更换合适的色谱柱（柱进出口位置应与流动相流向一致）和定量环。

5.1.2.通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

5.2.开机和泵操作5.2.1.开机5.2.1.1.接通断电保护器的电源，依次打开断电保护器、脱气机、600E 泵、2487 检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。

5.2.1.2.打开Millennium32 软件，按「Login...」，输入用户名和密码，按「OK」注册进入系统主界面。

在Project 档内选择所需的项目，右击『Run Samples 』图标，选择色谱系统“600_2487” 后打开QuickSet 窗口。

5.2.2.更换溶剂5.2.2.1.打开600E 泵后，转动进口集合管阀手柄（以下简称手柄）至RUN 位置；5.2.2.2.将一塑料烧杯放在参照阀出口管下以收集分流的溶剂，向右打开参照阀（断开柱和进样器）；5.2.2.3.按］Direct ］键使其显示直接控制屏幕，设流速为1ml/min （梯度配比阀在0ml/min 时不工作）；5.2.2.4. 选择欲使用的某一溶剂通道，设其比例为100% ，其它为0% ；5.2.2.5.将输液管从原有溶剂瓶中取出，放入一干净的空瓶中；5.2.2.6. 逆时钟转动手柄至DRAW 位置，用启动注射器从进口集合管阀的接口抽出约2ml溶剂；5.2.2.7.再将输液管放入新溶剂瓶内，继续抽吸直到新溶剂出来并无气泡为止；5.2.2.8.转动手柄至RUN 位置，将启动注射器取下并排掉筒内的溶剂。

Waters高效液相色谱仪使用及维护

• 待系统平衡后，单击“中断” 监视基线。
，终止
单进样
• 待系统平衡好，在此页面输入进样信息，
点击
进样
序列进样
确认样品组名称正确，其他选项保持默认值，点击运行
• 跳出该窗口，点击确定，进行修改序列。
• 修改完毕点击
继续运行样品组。
•
图谱处理
•
图谱打印
图谱处理
• 选择所要处理的项目名称，点击确定
• 30%磷酸溶液，超声30分钟
一、每周一次，仪器面板操作。
• Purge Injector：面板操作: 打开状态 (Statas)画面→ →按右下角Direct Function功能键→ →选Purge Injector命令 → →选OK即可进行注射器的排气。
• Seal Wash：面板操作: 打开状态(Statas) 画面→ 按下面板上Menu/ Statas 键→按右下角Diiag功能键→ →选Prime Seal Wash 命令→ →选Start即可，默认运行10分钟。
出现如下窗口
• （2.）编辑仪器方法 • （3.）保存方法：
• （4.）关闭“仪器方法编辑器”窗口
• 6.创建方法组：①选中所要的仪器方法，单击“下一步” ②出现如下窗口选择处理方法、
报告方法以及导出方法，单击“下一步”
• ③命名
方法调用及平衡基线
•在
选择仪器方法，并点击
“监视器”，平衡系统监视基线
创建项目
• 在此对话框下需要确定项目根目录下还是项目层次结构的一部分（作为父项目的一个子项目）。这种层次结构允许将多个项目组织在一个公用项目结构中。
• 注：要将项目创建为新的顶级项目（父项目），单击“项目”文件夹；要将项目创建为现有项目的子项目，单击现有父项目的文件夹。

Waters高效液相色谱系统操作规程

Waters高效液相色谱系统操作规程一. 准备1. 使用前应根据待检样品的检验方法准备所需的流动相（应足够；流动相必须用滤膜过滤）、样品和标准溶液（也可在平衡系统时配制）。

2. 通电前应检查仪器设备之间的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

3. 接通电源，依次打开1525泵、2487检测器，待检测器自检结束显示测量状态时，打开打印机、电脑显示器、主机。

4. 打开Breeze软件，进入系统主界面。

二. 操作步骤1.更换流动相。

2.在主界面中点击“Manage Breeze”按钮，选择system选项，出现系统连接示意图，观察各个部件是否连接好。

若未连接好，则需点击“Diagnostics/Reconfigure”进行诊断。

3.回到主界面，选择“Manage Breeze”中的project选项，单击“Make a new project”，“Next”，在“Project Name”中输入名称，单击“Finish”。

单击“Change a project/User”，在“Project”中选择输入的名称，单击“OK”。

4.单击“View Method”按钮，点击“Pump”图标，设置泵的参数。

点击“UV Det”图标，设置紫外检测器的波长。

单击“Save Method”按钮保存设置方法。

5. 打开泵的抽液阀，使用灌注注射器抽取一定量的洗脱剂。

单击Purge图标，出现“Purge Wizard”对话框，选中“Purge Pump”选项，点击“Next”“Next”，调节A、B泵的流量分别为约3ml/min。

打开泵的参考阀，点击“Next”。

Purge结束后关闭参考阀。

6.点击主界面中的“press to equilibrate system/ monitor baseline”按钮，平衡系统0.5－1h，直至基线稳定。

7.点击“press to make a single injection”按钮，进入“Specify Single Inject Parameters”对话框，设置参数，点击“inject”。

WATERS液相色谱教程三四七(最全)

©2004 Waters Corporation
反压与流速的关系
流速对反压的影响是线性关系流速增加，反压亦增大下图的实验条件： –2.1×30mm Symmetry C18柱,20℃
Pressure vs. Flow Rate at 20?C 5000 4500 4000 3500 3000
有机滤膜(≤0.5 µ m)/水溶性滤膜(≤0.45 µ m) 膜片可更换
– 一次性使用的膜“Cartridge”
使用方便简单，交叉污染小有更小内径，可用于微量样品的处理
高速离心
大于：10,000rpm
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超滤
机理
– 超滤是一种基于分子量分离的技术

排气后的色谱泵即可用于实验运行
– 注意∶
排气后，先设流速为 0 恢复排气时断开的部分，如:进样器、色谱柱如需要，恢复排气时断开的控制线

根据色谱柱的不同，逐渐提高流速到设定值
若使用缓冲盐流动相,用前和用后均需用水过渡 (包括排气操作)
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样品预处理常用的方法
高速离心取上清液过滤、超滤选择性沉淀衍生反应液-液萃取固相提取(Solid Phase Extract,SPE )
– Oasis和Sep-Pak固相提取小柱
其它
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去除微粒的方法
过滤
– 过滤膜/过滤装置
Pressure vs. Temperature 5000 4500 4000 3500 3000
50% MeOH 50 % ACN 100% H2O 100% MeOH 100% ACN

Waters液相色谱教程

色谱柱的连接
各种锥箍和管路接头长epth长度不合适造成柱前死体积
色谱柱的连接
锥箍锥度不合适造成渗漏
Waters色谱柱的连接
测柱效-良好的色谱实验习惯
测柱效的方法
色谱柱的正确使用及操作
正确使用色谱柱(一)
正确使用色谱（二）
色谱柱的在线保护装置
保护柱
色谱柱的存放
启动液相色谱仪器的流程
流动相的脱气
流动相脱气的方法
流动相的保存
保存于聚乙烯瓶中的超纯水
保存于棕色玻璃瓶中的超纯水
色谱泵的排气操作
色谱泵的运行

waters液相色谱仪操作规程

液相色谱仪操作规程仪器名称：液相色谱仪Waters2695型（带光电二极管阵列PDA 2998、蒸发光散射ELS 2424检测器）光电二极管阵列一般可用5mg/L来试条件。

第一步：准备工作（1）把水和有机相分别加入各瓶中。

(纯水一周一换，换溶剂时需小心，不要用手触摸管道)。

有机相必须为进口色谱级纯度。

（2）开机顺序：电脑→泵→检测器→工作站1）泵的开启，在2695主机界面上直接操作。

待仪器自检完毕，显示Idle后，选择Menu status进行各项操作：a.仪器长久不用，管路干了，应使用Dry prime功能。

b.每次开机，都要用Wet prime功能，将要用的各个通道冲洗一遍（A为甲醇，C为乙腈，D为纯水），排除气泡。

此过程流动相不通过柱子。

具体操作为：用方向键选择一个通道，比例调成100%，其余通道为0%，在direct function 中选择wet prime，按默认值进行。

冲洗完成后，进行下一个通道的冲洗，直到完成。

仪器使用过程中，如果哪个通道更换或增加了溶剂，都要用Wet prime将此通道冲洗一遍。

c.温度设置：直接将柱温设置成所需温度，一般为30℃。

d.Purge injection：在direct function中选择Purge injection，按默认值进行。

e.Equilibrium：将流量从0调至1mL/min，如果长久不用，不能直接调，而应逐渐将流速调至1mL/min。

将通道比例调成所需比例，注意此过程流动相通过柱子，所以切记不能出现纯水通道100%的情况，纯水比例最大为95%。

在direct function中选择Equilibrium，按默认值进行。

注意：每一步操作都应在仪器显示Idle状态后再进行。

2）检测器的开启绿灯状态为自检；灯为黄色、不闪并听见提示音，为启动完成。

3）工作站的开启Empower登陆：用户名为system，密码为manager窗口左边选择项目，窗口右边选择系统（检测器）。

Waters液相色谱教程4

紫外-可见光检测器原理基于样品池(S)中的样品对光产生吸收,与参比池(R)有信号差如是可变波长检测器,还有分光系统(光栅) 流动池灯R S样品入口光电二极管2004 Waters CorporationBeer's Law – 比尔定律光能量: – P0 = 透过溶剂的光能量 – P = 透过样品的光能量光通量(透过率%):T=P/P0A吸光度: A = -log(T)= log(P0/P)B吸光度 = 单位吸光度×流动池长度×溶液浓度 – 即: A = abc** * * ** * *透过率 %吸光度 AU ** 浓度浓度2004 Waters Corporation影响紫外检测器灵敏度的因素信号强度(S) – 从比尔定律可看出 1AU 样品的种类样品浓度及进样的体积检测池的长度 – 所使用的波长,检测器的时间常数噪音 10% 1%.25AU噪音(N) – 流动相 – 所使用的波长,灯的能量 – 检测器的时间常数 – 非检测器因素电噪音,泵脉动等S/N = 1/0.1=10 S/N = 0.25/0.01 = 252004 Waters Corporation示差折光效应的影响示差折光效应的危害 – 产生假的紫外吸收变化: 定量误差,光谱图不准确梯度时严重的基线漂移梯形狭缝设计 – 用于2487的最新专利设计 – 消除示差折光效应影响的同时,提高灵敏度及线性范围梯形池设计 – 最初的专利设计这是示差折光效应的一个例子,光从一个介质到另一个介质发生折射现象2004 Waters Corporation溶剂对紫外检测器的影响乙腈 190nm不同种类溶剂有其特定的止波长溶剂的质量好坏对其截止长有影响为何溶剂质量不好? – 含紫外吸收的杂质 – 溶解在其中的氧气 – 缓冲液溶质的紫外吸收截止波长 – 又称溶剂吸收波长的上限甲醇 210nm200 220 240 260或溶剂透过波长的下限2004 Waters Corporation流动相背景吸收的影响理想状态背景吸收会减小线性范围21实际情形Absorbance1许多溶剂产生背景吸收0背景吸收0Concentration2004 Waters CorporationWaters 2487 检测器2004 Waters Corporation2487检测器的特点专利的梯形狭缝池设计 –消除示差折光效应的影响其它特点– – – – – –波长范围: 190 - 700 nm 光源: 氘弧灯双通道,高灵敏度,检测范围:±2AU 仪器内集成比色皿位置,可做光谱扫描灯开/关定时器: 时间编程多种功能,胜任更复杂的工作 MaxPlot,RatioPlot,灯优化软件等注: AU(Absorbance Unit) 吸光度单位2004 Waters Corporation2487检测器的光路filter wheellamp housing window slitspherical mirrorbeam splittergratingcuvettesample diode flow cell photo diodes reference diode2004 Waters Corporation梯形狭缝流动池的比较进口出口圆柱形池进口出口梯形池进口出口梯形狭缝池2004 Waters Corporation光电二极管矩阵检测器原理Shutter Holographic Grating CellD2 LampDiode Array 512 Diodes 190 - 800 nm2004 Waters CorporationPDA检测器的三维(3D)图2AUY1AU吸光度0190波长Z450051015X时间2004 Waters Corporation几种不同的分辨率定义二极管分辨率: 每个二极管的分辨率 – 检测器的波长范围是190 到 800nm 而二极管矩阵中有 512个二极管.因此, 610nm除以512 大约等于 1.2 nm/ 每个二极管光学分辨率: – 狭缝宽度决定光学分辨率,2996的光学分辨率是1.2nm– 光学分辨率影响光谱分辨率光谱分辨率: – 光谱分辨率是指在采集光谱数据时数据点之间的波长间隔(nm), 2996的光谱分辨率最高是1.2 nm.2004 Waters Corporation光学分辨率及数字分辨率高分辨率的光学单元应是:一束光照在一个光电二极管上光学分辨率及数字分辨率相同但是带来的问题是:1nm 的二极管及1nm分辨率–光通量下降导致噪音光电二极管加大 –光学分辨率和噪音是一对矛盾狭缝2004 Waters Corporation光学分辨率及数字分辨率加大光通量– 增加狭缝宽度1nm的二极管及3nm的分辨率牺牲分辨率狭缝光电二极管– 通过狭缝的光要照到彼此相邻的光电二极管上,三相邻光电二极管的光谱信息是一样的 – 如左图所示,虽然数字分率是1nm,实际的光学分辨率只有 3nm2004 Waters Corporation"苯"的不同分辨率光谱图1.2 nmAbsorbanceAbsorbance2.4 nm230.00250.00nm270.00230.00250.00nm270.003.6 nmAbsorbance4.8 nmAbsorbance230.00250.00nm270.00230.00250.00nm270.002004 Waters CorporationWaters 2996 PDA 检测器PDA(PhotoDiode Array):光电二极管矩阵2004 Waters Corporation2996 检测器的光路全新的光路设计– 不用聚光镜及各种消色差镜以减少光路能量损失 – 反相梯形光束流动池用以消除示差折光效应影响同时提高灵敏度及分辨率– 分辨率:1.2nm – 噪音:±1.5×10-5AU2004 Waters Corporation专利技术:反相梯形光束检测池2004 Waters Corporation2996 检测器的特点兼顾紫外检测器及可见分光光度计的信息 – 在收集色谱图的同时,得到光谱图: 三维(3D) 数据 – 亦可采集单波长色谱图: 二维(2D)数据色谱峰的纯度鉴定,色谱峰的确认任意波长的再处理所有的操作皆通过Empower软件控制完成2004 Waters Corporation。

Waters2695高效液相色谱仪操作规程

Waters2695高效液相色谱仪操作规程使用Waters2695高效液相色谱仪前，请认真阅读使用说明，熟悉仪器的使用方法。

一、自检开主机和二极管阵列检测器（PADA）（或荧光检测器FD），仪器进入自检阶段。

约2分钟后PADA两个灯都亮，正常；主机自检所需时间较长，自检完后显示idle。

二、配置系统1．项目管理数据（相当于新建文件夹）名（设定后将出现在运行样品中）。

2．系统三、运行样品在采集数据项目栏中选定项目（即将此次实验数据选择存放位置）→确定出现运行样品表：分为单一与样品组进样。

1．单一进样品瓶，进样体积，运行时间）如没有可直接选用的方法组，可以在左栏通过“创建方法组”来设定使用的仪器方法（即对配置系统一步选定的主机和检测器进行参数设置）：创建方法组→选择仪器方法（新建→编辑仪器方法，包括主机和选定的检测器的参数的设置→设置好选另存为保存此仪器方法→关闭）此时上述编辑的仪器方法出现在列表中→下一步→出现“缺省方法项”对话框，点下一步→出现“命名方法组”，设置方法名（与刚才的仪器方法名相同）对话框→完成。

返回“运行样品”对话框，选方法组和仪器方法。

Notice:主机W2695的参数配置主要是针头深度设置，脱气设置，流量(4000psi)，泵模式（等度和梯度），柱温（划√）。

检测器W2699的参数配置主要是输入开始波长和结束波长（200-700nm）。

检测器W2475的参数配置：设定发射波长（λem）、激发波长（λex），增益（默认值为10太大，改为1即可）。

PADA能看到光谱图和色谱图；但是对于FD没有光谱图，在“运行样品”的右栏只出现一个图谱。

FD回零不好时按面板上的“auto zero”（FD 的其余操作可以通过软件调节）与样品组进样界面相比，多了一个进样按钮（等监视基线平稳后，按中断按钮，再按此按钮即进样分析）。

2．样品组进样左栏可以设置有关样品的信息（每一栏的设置为下拉式菜单），右栏出图，左下栏给出仪器信息，最下栏显示仪器状态。

Waters600高效液相色谱仪操作规程

1 目的：为了规范waters高效液相色谱仪的使用，确保测量结果的准确性，特制定此规程。

2 范围：本规程适用于waters高效液相色谱仪的使用。

3 责任者：化验员4 程序：4.1 开机4.1.1 插上市电，打开稳压电源。

4.1.2 等待3-5分钟之后打开电脑，输入用户名和密码，进入Expower界面。

4.1.3 打开泵电源，脱气机电源。

4.1.4 准备流动相，A相接甲醇，乙腈；C相接盐；D相接水；绿色洗针，黄色排废液。

4.1.5：按一下泵面板上面Direct键，设置仪器温度为35度，流速设定为0.1ml/min,分别将A相，D相，C相分别用针筒抽至少20毫升。

4.1.6：抽完液后设定流速，设定流动相的百分比，平衡色谱柱子。

4.2数据的采集4.2.1：在进样前30-40分钟打开进样器和相应检测器4.2.2：打开运行界面，如果要改变检测器，在配制系统里面更改，先将原来的检测器离线后再将所需要使用的检测器启用。

4.2.3：在仪器方法中选择所需要的仪器方法，点编辑，设定泵600流量上限为4000，泵模式为等度，温度35度，流动相比例，所需流速，点击保存。

4.2.4：点击监视器，若要停止点红色按扭。

4.2.5：设置样品瓶号，样品名，进样体积，进样时间，仪器所保存的方法，待基线压力均稳定，色谱柱子平衡好后，点击绿色运按扭进样,进行数据采集。

4.3 数据分析方法编辑:4.3.1：在通道里面，点击所需要处理的标准样品，点击铅笔图标，修改样品，输入样品的名称，含量，单位，确定后保存，重复其他的标样。

4.3.2：双击所需要的标准品，在光谱窗口里面右击提取色谱，提取光谱，输入所需要的波长，点击处理方法向导-新建处理方法向导-新建处理方法-确定-处理方法的类型-峰宽-阈值-选定峰起点终点-设定最小峰面积10000-下一步-下一步-否-峰名-下一步-下一步-下一步-外标法-所要保存的方法名-完成-保存-点击yes.4.3.3:点击处理方法-适应性-计算适应性结果里空体积时间设为1，点击文件保存-处理方法。

Waters高效液相色谱仪

海德氨基酸工业有限公司标准操作规程1 目的规范Waters高效液相色谱仪使用操作。

2 适用范围 Waters高效液相色谱仪的使用操作。

3 责任者质管部QC检验人员。

4 内容4.1 系统进入4.1.1 依次开UPS电源、检测器、泵、打印机、电脑主机电源。

4.1.2 电脑进入自检，自检完成后，进入“Program Manager”窗口。

4.1.3 在“Program Manager”窗口，双击“Millennium”图标，进入相应窗口。

4.1.4 在“Millennium”窗口，双击“Session Manager”图标，进入“Millennium V2.10”窗口，进行内存自检。

4.1.5 内存自检完成后，进入“Millennium Login－Version2.10”窗口，在“User Name”输入“system”，在“Password”输入“manager”，按“Login”进入“Millinniam Version2.10－Session Manager－User System”窗口，双击所选“Project”图标，即进入“Project”窗口。

4.2 进样4.2.1 在“Project”窗口下，按“Tools”图标群中“Quickset”图标进入“System-open”窗口，选择“PCM－410”。

4.2.2 按“OK”加以确认，该窗口自动退出，进入自检。

4.2.3 自检完毕，进入“Quick Set”窗口，按“Mode”选择“Quick Start”进入“Method Set”窗口，选择“Using Exiting Method”自动进入“Quick Set Acquisition”窗口，按“Set Up Instrument”，进入仪器安装状态。

4.2.4 安装完毕，按“Cancel”，退出“Quick Set Acquisition”窗口，在样品登药业有限公司标准操作规程题目Waters高效液相色谱仪操作规程编号版本号共 6 页SOP-EM-319A第 2 页记表上填写样品名、类别、进样体积、运行时间。

Waters液相色谱教程3

©2004 Waters Corporation
液相色谱检测模式
响应类型
RI 折射率
通用型
UV/VIS FLUOR 紫外/可见荧光
选择性选择性
ECD 电化学
选择性
COND ELSD 电导蒸发光散射
选择性半通用
灵敏度
µg
ng
pg
pg
pg
ng
线性范围 104
105
103
106
105
103
流速敏感 Yes
– 两个压力传感器感应并调整柱塞内压力，柱塞间交换平稳
– 没有出口阀，减少故障率
©2004 Waters Corporation
2695溶剂输送系统的特点
独立的柱塞杆驱动马达
– 双压力传感器，监视系统及柱塞腔压力 – 软件根据传感器的反馈，控制所有功能 – 完全没有压力的脉动 – 只有两个进口阀，没有出口阀，可靠性极高
的工作
©2004 Waters Corporation
2695 样品管理系统:特点
全电子设计,除电源外,
不需其它任何动力
极佳的线性范围及进样
重现性
交差污染极小（全自动
进样针内、外清洗装置）
低维护成本
©2004 Waters Corporation
2695:样品管理系统
样品瓶数目: 120, 分装于5个样品盘(24瓶/盘) 进样次数: 每瓶可进1 到99次标准样品瓶: 2 mL 样品室温控: 4 到40℃ ,增量 1℃ 进样体积: 标准配置:0.1 到100 uL 定量环选件: 0.1到2000 uL 最小样品量: 10 uL, 用低体积的内插式小瓶 (Insert) 最小进样量: 0.1 uL

液相色谱教程WATERS

4 3 2 1 2 3
Conventional C18
T
Modern C18 Ideal
4
5 Buffer pH
6
7
8
©2004 Waters Corporation
色谱图常见问题分析(二)
色谱图多峰少峰问题: –色谱图中未出峰: 进样问题:未进样或样品分解流动相问题:泵未输液或流动相不正确检测器设置不正确,或检测器有问题
色谱图常见问题分析(一)
色谱峰峰形异常问题: –双峰或肩峰进样量或样品浓度过大保护柱或色谱柱进口堵塞保护柱或色谱柱污染或失效 –前伸峰进样量或样品浓度过大溶样的溶剂相对于流动相太强保护柱或色谱柱污染或失效
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色谱图常见问题分析(一)
色谱峰峰形异常问题: –平头峰检测器设置不正确进样体积太大或样品浓度太高 –拖尾峰保护柱或色谱柱问题:污染或失效进样问题检测器时间常数不正确
色谱图常见问题分析(一)
色谱峰峰形异常问题:
– 所有的峰均为负峰: 信号电缆接反或检测器输出极性设置颠倒光学装置尚未达到平衡 – 一个或几个峰是负峰流动相吸收本底高进样过程中进了空气离子对分离中的系统峰样品组分的吸收(RI或UV)低于流动相
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HPLC常见问题分析
• 流路基线噪音问题
–基线漂移系统不稳或未化学平衡温度波动流动相未正确脱气流动相被污染;流动相中有稳定剂或稳定剂变化检测器流动池漏;系统中有渗漏色谱柱污染;固定相渗漏选用不正确的检测波长(相对于溶剂) 有迟流出的组分

沃特世液相色谱仪操作流程

沃特世液相色谱仪操作流程1.打开沃特世液相色谱仪电源开关。

Turn on the power switch of the Waters liquid chromatography system.2.启动色谱软件，并进行系统自检。

Start the chromatography software and perform systemself-checks.3.检查色谱柱和连接管路是否安装正确并紧固。

Check if the chromatographic column and connecting tubing are installed correctly and tightened.4.调节废液瓶和溶剂瓶的位置，确保连接管路畅通。

Adjust the position of the waste bottle and solventbottle to ensure smooth connection of the tubing.5.打开废液瓶和溶剂瓶的盖子，检查液位是否充足。

Open the lids of the waste bottle and solvent bottle to check if the liquid levels are sufficient.6.设置色谱条件，包括流速、温度、检测波长等参数。

Set chromatographic conditions, including flow rate, temperature, detection wavelength, and other parameters.7.进行系统平衡，使溶剂流动稳定。

Perform system equilibration to stabilize solvent flow.8.进行样品前处理，如进样、样品预处理等步骤。

Prepare samples, such as injection, sample pretreatment, and other steps.9.开始色谱分离实验，记录实时数据。

Waters1525-2489高效液相色谱仪操作规程

编写：审核：批准：日期：日期：日期：生效日期：1.目的：规范Waters1525型高效液相色谱仪的操作，确保检测设备安全稳定的运行。

2.范围：适用于Waters1525型高效液相色谱仪的操作使用。

3.职责：检验员负责本规程的执行。

4.操作步骤4.1开机前检查流动相对应泵单元放置，检查电源线接口连接完好4.2色谱柱的安装安装待测样品所需的色谱柱，注意色谱柱方向。

打开柱温箱电源开关，设置柱温箱温度。

4.3开机4.3.1泵单元打开泵电源，待自检通过后排气泡。

（注：上泵是B泵，一般放置水系流动相；下泵是A泵，一般放置有机系流动相。

）拧开上泵排液（空）阀螺旋，用注射器抽去管道及泵头内气泡，然后立即拧紧排液（空）阀螺旋。

下泵排气泡操作与上泵相同。

4.3.2打开检测器电源等待自检通过，大约5min。

4.3.3打开色谱工作站打开计算机电源，点击桌面图标，进入Breeze2 色谱工作站，用户名输入breeze，点击确定按钮，操作的项目选择“hd”，色谱系统选择“1525/2489”，点击确定。

4.4建立分析方法点击（调用方法组编辑器向导）图标，点击对话框中的“新建”，在电脑下方任务栏中出现（仪器方法编辑器），点开，设置波长等条件，再点击，设置A、B两泵的流速，然后点击保存图标，在对话框中输入此方法的名称，比如“亚麻酸方法”，再点击保存。

在“新方法组”的对话框中点击图标，选择“亚麻酸方法”，点击两次下一步，再点击完成。

4.5平衡仪器点击(平衡系统/监视基线图标)，在对话框中，选择方法如“亚麻酸方法”，点击设置。

等待仪器设置反应，再次点击（平衡系统/监视基线）。

等待基线平衡（一般约30-40min）。

4.6进样与数据采集：基线平衡后（30-40min），点击（中断正在运行的样品组或单进样）图标，结束平衡。

点击（单进样）图标，编辑样品名称、进样体积和运行时间，选择方法组，点击进样即可开始进样。

4.7谱图处理：点击图标，点，再点，双击所要查看的谱图。

waters高效液相色谱操作规程

Waters高效液相色谱操作规程1、用途：进行样品纯度和杂质的分析，可以满足双波长采集数据。

2、系统组成：本系统由2个Waters 515 HPLC Pump溶剂输送泵, 7725i手动进样阀、Waters2489紫外-可见检测器、Waters原装色谱数据工作站和电脑等组成，柱温箱、不间断电源等辅助设备。

3、准备3.1 准备所需的流动相，用合适的0.45μm滤膜过滤（水相用水膜，含有机相用有机膜），超声脱气20min。

3.2根据待检样品的需要更换合适的色谱柱（注意方向，顺序是从进样器流经色谱柱进入检测器方向，色谱柱箭头方向为流速方向）。

3.3倒掉废液瓶中的废液。

3.4检查仪器各部件的电源线、数据线和输液管道是否连接正常。

4、操作规程4.1启动仪器：4.1.1首先打开柱温箱并设置柱温箱温度为40℃按柱温箱控制界面上的ready键启动柱温箱。

4.1.2依次开启电脑、检测器和泵控开关。

4.1.3将泵1、泵2吸滤器相应的放入到准备好的流动相中。

4.1.4泵的排气：逆时针方向将泵前置阀门旋转180。

并用烧杯进行收集，按MENU键进入到PURGE状态，点击EDIT ENTER键进行脱气排空处理(约3-5分钟)，排空结束后再按RUN/STOP键关闭，顺时针方向将泵前置阀门旋转180。

拧紧。

4.1.5五分钟后打开电脑桌面上的Empower工作站，进行仪器与电脑的连接。

本机用户名：system 密码：manager。

4.2参数设置：4.2.1建立新的分析方法（详情见Waters原装色谱工作站操作规程）。

若为已有方法的分析项目，直接调用即可（详情见Waters原装色谱工作站操作规程）。

4.2.2泵的设置4.2.2.1等度洗脱：将泵1的吸滤器放入准备好的流动相的储液瓶中，设置流速，按RUN/STOP键开启流速。

4.2.2.2梯度洗脱：1、分别按照工作站设置将泵1、泵2的吸虑器放入到相应的准备好的流动相储液瓶中。

2、将两个泵的流速分别设置到初始流速相应的数值。

waters 2695 型高效液相色谱仪操作方法

Waters 2695 型高效液相色谱仪操作方法1 仪器组成及开机1.1 仪器组成本仪器由Waters 2695 分离单元、2996型二极管阵列检测器、2420蒸发光散射检测器、色谱管理工作站和打印机组成。

2695 分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机（或氦气脱气机），可容纳120 个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞杆密封垫清洗系统，溶剂瓶托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。

1.2 开机依次接通2695 分离单元、检测器、计算机和打印机的电源。

接通 2695 分离单元后，约 20s 仪器开始自检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上方标题区出现“ Idle ”时，仪器进入待命状态。

2 溶剂管理系统的准备2.1 流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按【 Menu/Status 】，进入“ Status （ 1 ）”屏幕，光标选“ Degasser ”，按【 Enter 】，显示选项屏幕，光标下移选“ Continuous ”，按【 Enter 】。

2.2 启动溶剂管理系统2.2.1 干启动当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“ Status （ 1）”屏幕下，按【 Direct Function 】，光标选“ Dry Prime ”，按【 Enter 】，显示“ Dry Prime ”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如【OpenA 】，光标选“ Duration ”，按数字键输入5min ，按【Continue 】，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。

2.2.2 湿启动在“ Status （ 1 ）”屏幕下，光标选“ Compomtion ”中欲使用的流动相，输入10 0％，按【Direct Function 】，光标选“ Wet Prime ”，按【Enter 】，显示“ Wet Prime ”屏幕，输入7.5Ml/min 和6min ，按【 OK 】，待限定时间结束后，对每种流动相重复操作。