waters e2695高效液相色谱
反相高效液相色谱法测定盐酸普萘洛尔片中盐酸普萘洛尔的含量
天津药学 Tianjin Pharmacy 2021年 第33卷 第1期93 刘睿，段金廒,李友宾，等•水牛角主要药效学评价及解热活性物质 基础研究[J ].南京中医药大学学报,2007,23(5):297-301.4耿笑雁•犀角地黄汤加减治疗小儿过敏性紫瘢47例[J ].河北中医， 2002,24(3)：196.5韩世荣，张小琴，张玉梅•犀角地黄汤加味治疗过敏性紫瘢60例[J ].陕西中医,2002,23(11)： 996-997.6 康景华.犀角地黄汤加味治疗过敏性紫瘢35例[J ].天津中医，2001,17(3)：47.7王文兰•犀角地黄汤治疗顽固性皮肤瘙痒症[J ].四川中医,2002,20( 1) 67.7丛培华.犀角地黄汤加减治疗带状疱疹[J ].山东中医杂志,2002,21( 6): 370.9郑建本，王光富•加味犀角地黄汤治疗座疮70例[J ].实用中医药杂志，2004，20(1):17-19.10蔡之幸，王重卿•水牛角治头痛作用初探[J].上海中医药杂志,016,50( 9): 69-71.11吴飞，张继全，阮克锋，等.三七生粉入药灭菌工艺的选择[J ].中国医药导报,2016,13(19):35-37.反相高效液相色谱法测定盐酸普蔡洛尔片中盐酸普蔡洛尔的含量郑风敏，王繁华，李彬(鹤壁市食品药品检验检测中心，河南458030)摘要目的:建立反相高效液相色谱法测定盐酸普萘洛尔片中盐酸普萘洛尔的含量。
方法:Waters e2695高效液 相色谱仪,waters 2998二极管阵列检测器，Agilent 20Rbax C j 7色谱柱(250 mm x 4.6 mm,5 "m ),流动相为乙睛-水(含1%庚烷磺酸钠)(45 : 55),检测波长为290 nm ，进样体积:20 "1,流速：1.0ml/min ,柱温：35 $。
结果：盐酸普萘洛尔在5.84~246.47 "g/ml 浓度范围内线性关系较好(r = 0.999 9),平均回收率99.92%,RSD 为0.17%。
Waterse2695高效液相验证方案
Waters e2695高效液相色谱仪验证方案编码：TS-52-01有限责任公司验证立项申请表参加验证人员验证方案审批表有限责任公司目录1．目的2．范围3．责任4．验证4．1．公用系统检查4．2运行确认4．2．1目的4．2．2方式4．2．3内容4．2．3．1设备使用原理4．2．3．2确认标准操作规程的可行性4．2．3．3确认设备正常运行的项目4．3性能确认4．3．1输液系统4．3．1．1泵流量设定值误差与流量稳定性误差4．3．1．2定性、定量测量重复性误差4．3．1．3系统适用性试验4．3．2紫外检测器性能4．3．2．1基线漂移与基线噪声5．拟订验证周期6．验证结果评价与结论7．附件为确认Alliance e2695型高效液相色谱仪测试数据准确可靠，性能稳定，特制订本验证方案，对高效液相色谱仪进行验证。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案变更申请及批准书，报验证小组批准。
2 范围：适用于美国Waters 公司Alliance e2695型高效液相色谱仪系统的验证。
3 责任：3．1验证小组3．1．1负责验证方案的批准。
3．1．2负责验证的协调工作，以保证本验证方案规定项目的顺利实施。
3．1．3负责验证数据及结果的审核。
3．1．4负责验证报告的审批。
3．1．5负责发放验证证书。
3．1．6负责验证周期的确认。
3．2设备部。
3．2．1负责建立设备档案。
3．2．2负责仪器、仪表的校正。
3．3质量部3．3．1负责制定验证方案。
3．3．2负责验证的实施。
3．3．3负责拟定验证周期。
3．3．4负责收集各项验证、试验记录，起草验证报告，报验证小组。
4．1 公用系统检查4．2运行确认4．2．1目的试验并证明设备的各部分及整体，能在预期的及设计范围内准确的运行，并能完全达到规定的技术指标和使用要求。
4．2．2方式通过对输液系统、紫外检测器性能的检测，确认本机器运行正常。
4．2．3内容4．2．3．1设备概述4．2．3．1．1本仪器为Waters公司Alliance2695型高效液相色谱仪，包括四元梯度泵，e2695检测器和自动进样器、柱温箱、empower色谱管理工作站组成。
e2695高效液相色谱仪
仪器功能介绍：
Waters e2695可进行有机化合物的定性定量分析，尤其是沸点较高和热稳定性
较差的化合物的分析。
具有分离效能高、检测灵敏度高、选择性高、分析速度快的特点。
仪器主要技术参数：
四元梯度泵带脱气机：流速精度≤0.075％RSD ，流速准度±1％，梯度精度≤0.15％RSD，系统滞后体积＜650μl，不随后压变化
柱温箱：4 –60℃
控温自动进样器：4 –40℃
仪器使用注意事项：
1.使用本仪器需要预约，使用者请与仪器负责人联系，请不要擅自使用该仪器。
2.样品请标明样品名称、待测成分名称和结构、待测成分重要理化性能（溶解性、沸点、光谱特征）参数；
3.液体样品不少于1mL，0.45um膜过滤；固体样品不少于2mg。
Waters_e2695_Alliance_HPLC操作手册
1.0Review and Approval审核与批准Written By: ________________________________ Date: ____________________ 起草人日期Approved By: ________________________________ Date: ____________________ 批准人 Department Head or Designee 日期部门负责人或指定人员Approved By:________________________________ Date: ____________________ 批准人 Quality Assurance 日期质量保证部2.0Purpose目的2.1本标准规定了的Waters e2695型液相色谱仪的使用、维护保养和校验。
3.0Scope范围3.1本标准适用于位于XXXXXXXQC实验室的的使用、维护保养及校验。
4.0Responsibilities职责4.1QC人员对系统的维护以及本规程的使用负责。
5.0References/Associated Documents参考文件/相关文件5.1Waters e2695操作员指南5.2Waters2998操作员指南5.3Waters2489操作员指南5.4Empower工作站使用手册6.0Definitions定义N/A7.0Procedure规程7.1设备7.1.1四元泵，Waters e26957.1.2控温自动进样器7.1.3紫外可见光检测器，Waters24897.1.4二级阵列管检测器，Waters29987.1.5柱温箱7.1.6溶剂脱气机7.1.7装有Empower工作站的电脑7.2维护7.2.1灌装及清洗系统7.2.1.1当真空脱气机第一次使用或当真空管是空的，或当改变溶剂，且当前溶剂与真空管中溶剂不相溶时，应当灌装清洗系统7.2.1.2如果使用易挥发的混合溶剂或改变溶剂时，若系统长时间关机（比如，隔夜）灌装系统推荐将泵的流速控制在高水平（3-5ml/min）。
Waters e2695型高效液相色谱仪标准操作程序终稿
标题Waters e2695型高效液相色谱仪标准操作程序起草日期颁发部门：研发事业部页数审核日期分发部门：QA审核日期批准日期生效日期变更记载：原文件号批准日期生效日期变更原因及目的：文件系统修订。
1 目的：Waters e2695型高效液相色谱仪的一般标准操作程序。
2 范围：Waters e2695型高效液相色谱仪。
3 责任人：相关实验人员4 设备部件及名称4.1 Waters e2695分离单元．4.2 2998型二极管阵列检测器．4.3 Empower色谱工作站．各部件可独立操作或通过色谱工作站控制，色谱数据处理由色谱工作站完成，其操作系统为Windows XP Profesional SP3，工作站软件为色谱管理软件。
5 标准操作程序5.1 开机前准备5.1.1 检查桌面是否清洁、整齐。
5.1.2 检查设备是否清洁，连接管线是否正常，色谱柱是否需要更换。
5.1.3 检查电源线有无破损。
5.1.4 接通电源，检查插座上各插孔的指示灯是否显示正常。
5.1.5 准备好超声过的流动相和流路冲洗溶剂。
流动相和纯水应用微孔滤膜过滤（纯有机相或含一定比便例有机相的用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的用水系滤膜）。
一次制得的纯水或缓冲盐流动相应在连续24小时内使用完，如未使用完也应弃去不用，并重新配制新鲜的流动相。
如需使用，应重新过滤。
流动相的pH值应在色谱柱填料允许的范围内。
该泵带有真空脱气机，可不超声，但要在泵电源开启后，等脱气机停止工作后（约需5分钟）再进行泵的其它操作。
5.1.6 准备样品。
为延长层析柱使用寿命，建议使用流动相溶解样品，如果不是，一定要做预试验，确保样品在流动相溶液中不出现沉淀。
如果样品中成份复杂，特别含有强保留成分，建议过C18 小柱预处理。
样品在进样前必须经0.45μm的微孔滤膜滤过，根据溶剂性质选择合适的滤膜。
过滤完毕后，置于样品盘上，记录样品所放的位置号。
5.2 开机接通稳压电源，待电压稳定在220V时，依次打开下列仪器的电源：高压泵、柱箱、系统控制仪、色谱工作站。
Waters高效液相色谱系统操作
02
Alliance系统基本操作
开机流程
准备试剂
打开电脑
Alliance开机
检测器开机
电脑登陆软 件
注意事项： a.需先开电脑，再开Alliance系统，仪器，最后登录软 件。b.带制冷功能的柱温箱有单独电源开关，需将其打 开。
alliance
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高效液相色谱系统 如何工作？
流动相 泵
进样器 色谱柱 检测器 色谱数据系统
色谱柱
色谱图溶剂瓶 （流ຫໍສະໝຸດ 相）自动进样器样品
泵 溶剂输送系统
检测器
数据 系统
废液
仪器 介绍：
Alliance e2695 分
离单元
溶剂托盘及 容器
前面板显示 屏和键盘
样品室
泵-溶剂输 送单元
检测器 进样器
柱温箱
溶剂配比单 元
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起始点
流动相
流动相 X分钟后
色谱柱 固相
液相色谱法的分类：
按流动相和固定相的相对极性分 正相色谱（Normal Phase Chromatography） ＊固定相的极性大于流动相 反相色谱（Reversed Phase Chromatography） ＊固定相的极性小于流动相
极性 水 甲醇
异丙醇 乙腈 THF 乙酸乙酯 CH2Cl2 CHCl3 己烷
Waters高效液相色谱标准操作 Alliance 系列
目录
Contents
01 液相色谱原理及系统硬件介绍 02 Alliance系统基本操作 03 数据采集 04 数据处理 05 报告输出
01
液相色谱原理及系统硬件 介绍
液相色谱法原理：
是利用混合物中各组分在不同的两相中溶解、分配、吸附等化学作用性能的差异，当两相作相对运动时，使 各组分在两相中反复多次受到上述各作用力而达到相互分离。
Waters e2695高效液相色谱仪操作规程
Waters e2695下效液相色谱仪支配规程之阳早格格创做1 手段指挥战典型Waters e 2695下效液相色谱仪的支配.2适用范畴该支配规程适用于Water e 2695下效液相色谱仪的支配.3工做考验员应按支配规程举止仪器支配，品量监督员控造监督该支配规程的粗确实止.4支配本仪器由Waters e 2695分散单元、Waters 2998两极管阵列检测器、Waters ELSD 2424挥收光集射检测器、Empower3色谱处事站战挨印机组成. Waters e2695分散单元包罗四元梯度洗脱的溶剂输支系统，四通道正在线实空脱气，可容纳120个样品瓶的自动分散单元，柱温箱，内置的柱塞杆稀启垫荡涤系统，溶剂瓶托盘；隐现器，键盘用户界里.4.1.2.1依次交通Waters e 2695分散单元、检测器、估计机战挨印机的电源.4.1.2.2交通Waters e2695分散单元后，约20s仪器开初自检，约3mn内各部件的初初化完成，待主屏幕上圆题目区出现“Idle”时，仪器加进待命状态.确认所有溶剂管路皆充谦溶剂，按[Menu／Status】，加进“Status(1)”屏幕，光标选“Degasser”，按[Enter】.当色谱仪流路不溶剂大概系统中有气氛时，需举止搞灌注(DryPrime)，注进震动相.可则，举止干灌注(Wet Prime)以驱除气泡.搞灌注：按主机里板上[Menu／Status】，加进“Status(1)”隐现，按[Direct Function】，采用“Dry Prime”，选溶剂通道，如Open A，选“DurationIIi按数字键输进5分钟，按”COntinue”，待规定时间中断后，沉复支配，使所需的溶剂通道注谦震动相.干灌注：加进“Status(1)”隐现，选溶剂通道，输进100％，按[DirectFunction]，选“Wet Prime”，按【OK】，根据里板提示树坐流速即时间(默认流速为7．5ml／min，普遍不必变动，时间可树坐为5min)，按【0K】.正在“status(1)”，屏幕下，光标选“Composition”，输进震动相的组成.按【Direct Function]，光标选“Purge Injector”，按【Enter]，隐现“Purge Injector”屏幕，输进“Sam ple Loop Volumes6．0”，光标下移“Compression Check”，按任性数字键，按【OK].正在主屏幕下，按【Diag]，隐现“Diagnostics”屏幕，按【Prime Ndl Wash】，隐现“Prime Needle Wash”屏幕，按[Start]，30s内应睹溶剂从兴液排搁心流出.按【Close】、【Exit】.正在主屏幕下，按【Diag]，隐现”Diagnostics”屏幕，按【Prime Seal Wash】，隐现“Prime Seal Wash”屏幕，按[Start]，30s内应睹溶剂从兴液排搁心流出.按【Close】、【Exit】.待排搁心有火流出，按【Half】、【Close】、【Exit】.挨开样品舱门，隐现"Door is Open"屏幕，将样品盘与出，把样品瓶拔出样品盘后，拆进样品盘，按【Next】直至所有样品盘拆毕，关好舱门.换上考验所需的色谱柱战震动相，加进"Status(1)”隐现，采用流路、设定流速、柱温，按【Enter】开初注进震动相，常常情况下约1 5～30分钟色谱柱可达到仄稳，不妨开初进样，支集数据.5 Empower 3硬件的应用5.1 建数据支集要领5.1.1单打电脑屏幕上的"Empower"快速图标，出现Empower登录界里，输进用户名战暗号.5.1.2单打下档键，采用用户典型战QuickStart界里.5.1.3采用QuickStart界里，面打“决定”，而后采用选定的支配名目以及色谱系统(仅查看数据可采用色谱系统中的“不系统”)，单打“决定”.5.1.4登录Empower的QuickStarlt界里.5.2 编写仪器要领战要领组（以e2695_2998为例）.5.2.1．支集栏单打“要领组编写背导”：5.2.2采用“新建”选项.5.2.3弹出仪器要领编写器.5.2.4单打“2695”，弹出2695编写界里.5.2.4.1 Aliance系统(包罗2695、2795战2695D)通用编写页里中，可采用“单次输支体积”，请针对于分歧的流速选定适合的单次输支体积，以保证最好的流速粗度与准度.5.2.4.2查看脱气选项，确认树坐粗确.5.2.4.3流量选项中树坐“泵模式”、“总流量”以及震动相配比.5.2.5单打2998，弹出2998编写界里.5.2.5.1 3D数据支集：正在通用栏中采用开用3D数据，输进检测波少的范畴；5.2.5.2支集2D数据，面打“2D通道”，最多可共时支集8个分歧波少的通道的数据.5.2.6面打“文献”，采用“另存为”：输进仪器要领称呼，面打“保存”；面打“文献”，采用“退出”.5.2.7正在被选项中采用所需的仪器要领称呼，面打“下一步(N)”.5.2.8正在下推菜单中采用所需的处理要领战报告要领（如果不符合的要领采用“无处理”、“无报告”)，面打下一步.5.2.9输进要领组称呼，单打“完成”.面打加进“仄稳系统／监视基线”界里，采用相映的仪器要领，面打“仄稳／监视器，正在监视窗心监视基线至系统仄稳，停止系统监视状态，面打“进样”.5.3.1．单进样：面打，加进“定义单进样参数”编写界里，输进样品名、功能、要领组等参数，面打“进样”.5.3.2使用背导建坐样品组战样品组要领.5.3.2.1采用“运止样品”，而后单打“样品行列”，加进样品列表.5.3.2.2单打“新建样品组背导”，建坐样品组.5.3.2.3采用创造样品组要领典型为“Lc大概PDA”，而后面打“定义样品板”.5.3.2.4正在“采用尺度进样正在何处开初”中采用符合的选项.查看开初加载样品瓶的位子是可粗确，面打“下一步”.5.3.2.5正在形貌标样中需要树坐一下实量：样品组中的标样数：×；每瓶标样进样次数：X；进样体积：x；运止时间：XX；要领组XXX；面打“选项”：输进下一进样延缓时间X；面打下一步.5.3.2.6样品数：X；每瓶样品进样次数：X；进样体积：X；运止时间：X；要领组X；面打选项：输进下一进样延缓时间X；面打下一步.5.3.2.7正在辨别尺度样界里中，输进标样称呼，删量后缀使用1．正在辨别样品界里中，输进样品称呼，删量后缀使用a.面打下一步.5.3.2.8运止模式选项中采用“只尝试”.查看纲要，面打下一步.【注：弹出组分编写器，输进标样中每个组分的称呼(内标不需要输进含量).不妨直交关关该窗心，正在处理数据的时间再增加】.5.3.2.9面打完成，正在菜单栏中采用文献.5.3.2.10为要领组命名并保存样品组要领.5.3.2.11单打“样品行列”，挨开运止样品窗心，面打运止目前样品组要领键，采用运止.5.3.2.11采用需运止的样品组称呼，面打运止.5.3.2.13样品组运止历程中，正在“正正在运止”栏中正正在运止以及运止完成的样品以红色隐现.(注：以背导建坐的样品组尾止功能普遍为扫除矫正，普遍正在运止样品前简略该止大概改为“仄稳”.)5.4.1 2D数据处理要领5.4.1.1单打“欣赏名目”键，正在“样品组”中采用目标样品组.5.4.1.2正在样品组上面打鼠标左键采用“查看相关→通道”，样品组正在单个通道中隐现.5.4.1.3采用定最矮浓度的标样，面打鼠标左键，采用下推菜单中的查看，会隐现已处理的色谱图形.5.4.1.4面打处理要领背导快速键，采用创造新处理要领，面打决定.5.4.1.5确认处理典型为LC，积分办法可采用为保守，再面打使用处理要领背导，采用决定.5.4.1.6常按鼠标左键，采用色谱图上最窄峰.(注：正在色谱图天区圆不妨搁大某个需要监测的峰.面打鼠标左键齐视图不妨还本色谱图.)5.4.1.7正在色谱图的积分界里采用一段典型基线动做积分的阈值，面打下一步.5.4.1.8常按鼠标左键，正在基线上采用积分的起止时间面.5.4.1.9提议采用最小峰下，采用所要积分的下度最小峰(大概键进相映数值).小于此峰下90％的峰将不被积分.面打下一步.5.4.1.10定量要领采用里积，组分疑息采用含量，矫正典型采用线性.面打下一步.5.4.1.11跨通道内标样界里面打可.5.4.1.12果为采用的是标样，面打峰1不妨瞅到一个下推菜单采用相映的组分称呼大概者键进运止样品相映的称呼.增加组分称呼相匹配的尺度含量，而后面打下一步.5.4.1.13如果是多面矫正样品，跳过增加含量的窗心直交面打下一步.(单面矫正可正在那里增加含量).5.4.1.14采用中标法：5.4.1.15采用简单内标样，需要正在下推菜单中采用大概键进内标相映的称呼，而后面打下一步.5.4.1.16采用多沉内标需要输进所有内目标称呼.5.4.1.17为处理要领命名，面打完成.色谱图界里会隐现该处理要领应用后的色谱结果，包罗积分.5.4.1.18如需为积分要领增加积分事变，鼠标左键面打色谱图窗心，采用增加积分事变.积分事变所示功能会坐刻应用于处理要领中.5.4.1.19编写处理要领的下档功能需要采用快速键.有所有变动均需再次保存处理圆法.5.4.1.20面打峰表底部可预览2D通道战峰.5.4.1.21面打“欣赏名目”键，采用“通道”大概“样品组”标签栏，左键面打目标样品组大概通道并采用处理.5.4.1.22正在处理界里，采用使用指定的处理要领，采用相映的处理要领称呼，面打浑除矫正，采用矫正并定量.5.4.1.23面打决定，数据处理，爆收截止.可正在截止栏中查看.5.4.2.1面打“欣赏名目”键，正在“样品组”中采用目标样品组.5.4.2.2正在样品组上面打鼠标左键采用查看相关通道，样品组中各个数据正在单个通道中隐现.5.4.2.3采用定量最矮浓度的标样，面打鼠标左键，采用下推菜单中的查看.5.4.2.4正在预览界里采用“表面线”标签栏，会隐现已处理的表面图.5.4.2.5从处理大概左键下推菜单中采用提与色谱选项.5.4.2.6键进所需要提与的波少，按回车键，得到该波少的色谱图.5.4.2.7面打处理要领快速键，采用创造新处理要领，确认处理典型为PDA，积分办法可采用为保守，再面打使用处理要领背导，面打决定.5.4.2.8常按鼠标左键，采用色谱图上最窄峰.(注：正在色谱图天区内不妨搁大某个需要监测的峰.面打鼠标左键采用齐视图不妨还本色谱图.)5.4.2.9正在色谱图的积分界里采用一段仄滑的基线动做积分的阈值，面打下一步.5.4.2.10常按鼠标左键，正在基线上采用积分的起止时间面.5.4.2.11提议采用最小峰下，采用所要积分的下度最小峰(大概键进相映数值).小于此峰下90％的峰将不被积分.面打下一步.5.4.2.12定量要领采用里积，组分疑息采用含量，矫正典型采用线性.面打下一步.5.4.2.13跨通道内标样界里面打可.5.4.2.14果为采用的是标样，面打峰1不妨瞅到一个下推菜单采用相映的组分称呼大概者键进运止样品相映的称呼.增加组分称呼相匹配的尺度含量，而后面打下一步.5.4.2.15如果是多浓度面的一组标样，跳过增加含量的窗心直交面打下一步.(简单浓度不妨正在那里增加含量).5.4.2.16采用中标法：5.4.2.17采用内标法简单内标样矫正，需要正在下推菜单中采用大概键进内标相映的称呼，而后面打下一步.5.4.2.18采用多沉内标需要输进所有内目标称呼.5.4.2.19 PDA杂化及匹配选项：5.4.2.20为处理要领命名，面打完成.色谱图界里会隐现该处理要领应用后的色谱结果，包罗积分.5.4.2.21正在“文献”下推菜单中采用“另存为”要领组，将该处理要领存进要领组.(注：3D数据必须用要领组处理.)5.4.2.22如需为积分要领增加积分事变，鼠标左键面打色谱图窗心，采用增加积分事件.积分事变所示功能会坐刻应用于处理要领中.5.4.2.23编写处理要领的下档功能需要采用快速键.5.4.2.24面打“欣赏名目”键，采用“通道”大概“样品组”标签栏，左键面打目标样品组大概通道并采用处理.5.4.2.25正在处理界里，采用使用指定的处理要领，采用相映的处理要领称呼，面打浑除矫正，采用矫正并定量.5.4.2.26面打决定，数据处理，爆收截止.可正在截止栏中查看.6查看截止战视图筛选6.1采用“截止”标签栏，使用视图筛选器从下推菜单中采用即日.6.2采用需查看的截止，左键面打采用查看.6.3查看截止面打快速键，查看每个组分的矫正直线.切换至主窗心面打.7预览截止并创造报告要领7.1面打“预览名目”切换回截止表隐现状态.7.2选中一个大概多个截止，面打鼠标左键采用预览.7.3若采用一个截止，正在预览窗心采用使用一下要领：使用缺省单个报告，单打决定.7.4预览报告并查看数据.面打“编写要领”键建改报告要领.7.5单打色谱图大概峰截止表编写报告属性.7.6面打文献，采用保存，为新建的报告要领命名.面打预览报告.7.7如需将报告保存为PDF要领，面打.8要领组的建坐以上道解了怎么样建坐仪器要领、处理要领战报告要领，推拢不妨得到一个要领组.8.1监视区单打要领组编写背导：8.2弹出新要领组：采用仪器要领界里.采用相映的仪器要领，面打下一步.8.3采用缺省要领界里采用相映的处理要领战报告要领，导出要领缺省.面打下一步.8.4命名要领组，面打完成.8.5正在运止样品时，要领组／报告要领中调用该要领组，不妨自动完成支集、处理、报告数据过程.9数据管造9.1.1正在QuickStart界里，采用菜单“管造一备份目前名目”.9.1.2出现“名目备份背导”，面打下一步.9.1.3出现“名目备份背导一采用手段天’’通过欣赏采用手段天，提议采用正在非支配系统拆置的硬盘分区内.采用完成，单打“决定”关关后，回到名目备份窗心，单打“下一步”.9.1.4出现“名目备份背导一备份隐现”.确认数据的复造已经乐成，再单打“下一步”.9.1.5出现备份数据背导一开初界里.面打完成，中断备份. 9.2.1正在QuickStart界里，采用菜单“管造”，下推菜单中采用“还本名目”.9.2.2出现“还本名目背导”.通过“欣赏”采用被还本的名目天圆的路径，单打“确定”.9.2.3单打下一步.9.2.4如出现类似以下实量的对于话框(名目名test已经被使用.请输进另一个名目名)，则需为还本的名目另起一个名字.9.2.5正在“输进磁盘空间配额’’页中，输进名目名，并注意此处的“表空间配额”应不得小于欲还本的名目本有的配额(数据文献大小)，而后单打“下一步”.9.2.6如果需要，不妨正在此页里中，采用该名目是可属于某个女名目.9.2.7正在“还本隐现’’中，如果出现如下对于话框(还本的名目需要被革新到下一个版本)，单打“决定”.(注：当还本由Millennium大概Empower的先前版本创造的名目时，需要为该名目采用时区.)9.2.8正在“还本隐现”中，等待数据还本中断后，单打“完成”.(注：提示：正在沉拆Empower硬件之后，不妨通过还本名目将相关的名目数据举止还本.) 10名目管造10.1.1加进到Empower3的QuickStart界里.正在菜单中采用“管造一创造新名目”.10.1.2出现“新名目背导”的对于话框，采用新建名手段女名目：10.1.3单打“下一步”，弹出“新建名目背导一表空间”，表空间50MB为默认树坐，可根据需要删减.10.1.4出现“新建名目背导一选项”页.采用用于本名手段选项，如果无法决定适合的树坐，请交受默认选项.单打“下一步”.10.1.5新建名目背导一考察统造：根据需要采用树坐对于您所创造的名目具备考察权力的用户战用户组，大概者交受缺省的选项，而后单打“下一步”.10.1.6新建名目背导一复造所选项：需要采用复造的名目，普遍采用Defaults名目.(注：此页的复造是指从另一个名目复造现有树坐，不妨复造名手段“视图筛选器”、“黑定义字段”、“要领”战“参数”.所以，普遍不允许变动大概使用Defaults名目中的所有数据.)正在建坐了新名目以去，不妨根据需要正在分歧的名目之间举止切换.10.2.1加进Empower3的Quick$tart界里，采用菜单“管造一改变系统／名目”.10.2.2改变系统／名目：根据需要举止采用名目大概者采用系统(如果存留两个大概者两个以上的系统).采用完成后，单打决定.如果采用了“正在该窗心切换名目／系统”，目前的名目／系统会被新选中的名目／系统所代替，如果采用了“为名目／系统挨开新窗心”，则会为选中的名目沉新挨开其余一个QuiekStart的界里.10.2.3正在新的名目／系统的QuickStart界里内即可举止下一步的支配.10.3.1正在QuickStart界里，采用菜单“视图一系统”，查看系统.10.3.2出现系统疑息窗心.正在该窗心中，不妨正在天面栏中查看隐现的天面是可与仪器的树坐相共.别的，可从“仪器”选项卡里的“仄常?”一栏中查看仪器状态，正在仄常状态下，应隐现“是”字样.如有仪器正在“仄常?”一栏出现“可”，可单打“扫描仪器”举止查看.如查看后隐现“是”，即回复仄常.(注：当仪器联机出现过失，大概者出现“仪器堕落”字样的时间，即可通过支集服务器属性去查看仪器状态，推断大概引起该问题的本果.)10.3.3.1正在QuickStart界里，选菜单“管造一新建系统”. 10.3.3.2出现“新建色谱系统背导一输进典型”页里，采用系统典型为“新建系统”.而后单打“下一步”.10.3.3.3出现“新建色谱系统背导一采用系统”页里，正在“可用仪器”组中，选中新系统的组件，而后用鼠标拖拽至左侧“新系统仪器”组中.采用完成，单打“下一步”.如有误选，则如法，将误选的新系统仪器，用鼠标拖拽回“可用仪器”组中.(注：可沉复使用已摆设系统中的仪器，但是一次只可有一个使用共享仪器的系统不妨正在线.)10.3.3.4出现“新建色谱系统背导一考察统造”页里.(注：您创造系统时，您即为系统的所有者.系统创造后，不妨建改系统的属性及变动所有者、考察权力战摆设等仔细疑息.) 11关机11.1使用完成，按确定用适合的溶剂浑洗色谱柱、系统管路、自动进样器、进样针战柱塞杆稀启垫，保证2695分散单元已实足浑洗搞洁后，关关电源开关.11.2数据支集完成后，关关所用检测器的电源开关.11.3数据处理并挨印报告后，关关估计机战挨印机电源开关.11.4考查中断，正在仪器使用记录表上备案，仪器管造人员考查签名.12仪器维护与调养12.1屡屡使用前后，查看分散单元上各溶剂瓶中溶剂的量，即时补充各瓶中相映的溶剂.12.2屡屡使用前后，挨开分散单元最底下的分散泵的舱门，查看各管路交心，有无慢冲盐析出的情况.如出现红色盐渍，应拆下其天圆的部件，先后用火战甲醇超声荡涤，并安拆好.12.3随时查看仪器的使用记录.12.4如万古间不使用该仪器，则需每半年依照《下效液相色谱仪功夫核查规程》查看一次，并搞好维护记录.。
Waters e2695高效液相色谱仪操作规程
Watｅrs e2６95高效液相色谱仪操作规程1 目得指导与规范Ｗaters e2６９5高效液相色谱仪得操作。
２适用范围该操作规程适用于Wａter e 26９5高效液相色谱仪得操作。
３职责检验员应按操作规程进行仪器操作,质量监督员负责监督该操作规程得正确执行。
4操作４、1仪器组成与开机4．1.1仪器组成本仪器由Watｅrs e 26９5分离单元、Waｔers2998二极管阵列检测器、Ｗaters ELＳD ２42４蒸发光散射检测器、Ｅｍpoｗeｒ3色谱工作站与打印机组成。
Wａtｅｒｓe269５分离单元包括四元梯度洗脱得溶剂输送系统,四通道在线真空脱气，可容纳120个样品瓶得自动分离单元,柱温箱,内置得柱塞杆密封垫清洗系统,溶剂瓶托盘;显示器,键盘用户界面。
４．1.2开机4.1.2、1依次接通Waters e 2695分离单元、检测器、计算机与打印机得电源。
4．1.２、2接通Waterｓe2695分离单元后,约２0s仪器开始自检,约3ｍn内各部件得初始化完成,待主屏幕上方标题区出现“Iｄle”时,仪器进入待命状态。
４、2溶剂管路系统得准备4.2.1流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂,按［Mｅnｕ/Stａtus】,进入“Ｓｔａｔｕｓ(1)”屏幕,光标选“Degassｅｒ”,按［Enteｒ】。
4.2.2灌注当色谱仪流路没有溶剂或系统中有空气时,需进行干灌注（DryPriｍe),注入流动相。
否则,进行湿灌注(WeｔＰｒiｍe)以驱除气泡。
干灌注:按主机面板上［Menu／Sｔａｔus】,进入“Ｓtatus（1）”显示,按[Direct Fuｎｃtion】,选择“Dry Prime”,选溶剂通道,如Ｏｐｅn A，选“DｕｒａｔionＩIi按数字键输入5分钟，按”ＣOntｉｎｕe”,待限定时间结束后,重复操作,使所需得溶剂通道注满流动相。
湿灌注:进入“Ｓｔaｔuｓ(１)”显示,选溶剂通道，输入100%，按[DirectFunction],选“Wｅt Ｐrｉme”，按【OK】,根据面板提示设置流速及时间(默认流速为7、5ml ／min,一般不用更改,时间可设置为5ｍin),按【０K】。
WATERS e2695 高效液相色谱仪使用说明书
WATERS e2695 高效液相色谱仪使用说明书（入门用前必读）青岛科技大学化工测试中心2015-12-22安全指南遵守安全指南可以防止对系统或设备造成损害。
注意：不要将设备置于阳光直射的地方或靠近空调通风口。
注意：在不确定的情况下，不要删除工作站中的任何文件。
注意：为了避免损坏检测器的流动池，不要触摸流动池窗口。
小心：为避免被灼伤，在拆下灯泡进行更换或调整前，请至少提前30 分钟关闭灯泡。
小心：为避免电击事故和人身伤害，请务必在执行维护工作前关闭高压泵、检测器并拔下电源下电源线。
小心：为避免化学或电气危险，在操作系统时，请务必遵守实验室的安全规定。
目录第一章 WATERS 600 简介 (1)第二章基本操作要领 (2)2.1 操作规程 (2)2.2 运行分析样品 (2)第三章数据的处理 (15)3.1 创建方法组定量分析 (15)外标法：单点校正 (15)未知样结果计算 (26)外标法：多点校正 (29)内标法校正 (32)3.2 定性结果 (39)3.3 打印报告 (42)第四章文件管理 (46)第一章 WATERS 600 简介该高效液相色谱系统是由Waters600高压泵及控制器、氦气脱气系统、Waters 2996二极管阵列检测器和Millennium324.02版本（中文版）工作站构成。
该系统所有的控制指令和数据处理都可以通过计算计完成。
该系统是分析实验室不可缺少的仪器设备，是有机物定量分析的最佳手段之一，另外的突出优点是可以对色谱峰的纯度进行判断。
建立色谱库后可以实现定性分析。
第二章基本操作要领2.1 操作规程2.1.1 制备标样和样品：配置合适浓度的标样；制备的样品进样前要过滤。
2.1.2使用HPLC级流动相，必要时自行制备；水为实验室2级水。
用前均需过0.45μm 滤膜。
2.1.3 流动相脱气：打开氦气(99.999%)钢瓶，调节减压阀输出压力0.3~0.6MPa。
确认流动相管线和相对应的脱气管线。
Waterse2695型高效液相色谱仪操作规程
Waterse2695型高效液相色谱仪操作规程Waters e2695型高效液相色谱仪操作规程仪器组成及开机1(1 仪器组成本仪器由waters2695分离单无、2489紫外可见光检测器、2424 蒸发光散射检测器、Empower色谱工作站和打印机组成。
2695分离单元包括四元梯度洗脱的溶剂输送系统，四通道在线真空脱气机，可容纳120个样品瓶的自动进样系统，柱温箱，内置的柱塞密封垫清洗系统，溶剂托盘，液晶显示器，键盘用户界面及软盘驱动器。
1(2 开机先打开电脑，再依次接通2695分离单元、检测器和打印机的电源(注:在打开2424蒸发光散射检测器电源之前，先开启气体供应)。
接通2695分离单元后，约20秒仪器自检，约1分钟后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化，待主屏幕上主标题区出现“Idle”仪器自检通过，进入待命状态。
溶剂管理系统的准备2(1 流动相的脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按[Menu/Status]，进入“Status(1)”屏幕，光标选“Degasser”按[Enter]显示选项屏幕，Mode为“on”。
2(2 启动溶剂管理系统2(2(1干启动当溶剂的管路是干的或是需要更换溶剂时，在“Status(1)”屏幕下，按[Direct Function]，光标选中“Dry Prime”，按[Enter]，显示“Dry Prime”屏幕，按欲启动的溶剂管路的屏幕键，如[Open A]，光标选“Duration”，按数字键输入时间(一般为5分钟)，按[Continue]，待限定时间结束后，重复操作，使实验所需的各溶剂管路均启动、排气并充满流动相。
2(2(2 湿启动在“Status(1)”屏幕下，光标选“Composition”中欲使用的流动相，输入100%，按[Direct Function]，光标选“Wet prime”，按“Enter”，显示Wet prime”屏幕，输入流速和时间(5ml/min和5min)按[OK]。
waterse2695高效液相色谱
定义与特点
定义
waterse2695高效液相色谱（HPLC） 是一种分离和分析复杂样品中各种成 分的实验技术。
特点
具有高分离效能、高灵敏度、高选择 性等优点，广泛应用于化学、生物、 医药等领域。
工作原理
01
02
03
流动相
在高压下，流动相通过固 定相，将待测组分分离。
参数。
峰分离不完全
可能是由于流动相组成或梯度设置不 当引起的，需要调整流动相或梯度条
件。
拖尾峰
可能是由于色谱柱污染或损坏引起的， 需要更换色谱柱或清洗色谱柱。
基线漂移
可能是由于流动相不纯或仪器长时间 未校准引起的，需要检查并更换流动 相或进行仪器校准。
05
waterse2695高效液相 色谱的发展趋势与展望
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数据处理系统
用于采集和处理检测器输出的 信号，记录色谱图并计算各组 分的含量。
操作流程
准备工作
检查仪器各部件是否正常，准备好流动相、样 品及色谱柱等。
流动相处理
根据实验要求，配置合适的流动相，并进行过 滤和脱气处理。
安装色谱柱
将色谱柱安装到仪器上，确保密封良好，无泄漏。
操作流程
平衡色谱柱
在流动相通过色谱柱后，使色谱柱达到平衡 状态。
的检测技术，如化学发光检测器、质谱检测器和生物传感器等。
02
优化样品预处理方法
简化样品预处理过程，提高预处理的效率和效果，以减少分析时间和误
差。
03
开发智能化的仪器控制系统
实现仪器控制系统的智能化和自动化，提高分析的稳定性和可靠性。
高效液相色谱法测定复方氨酚美沙糖浆中抑菌剂含量
·334·药品评价 Drug Evaluation 2021,18（06）高效液相色谱法测定复方氨酚美沙糖浆中抑菌剂含量蔡锦雄，庞赛，梁爱仙，刘敏，李玉兰，王铁杰深圳市药品检验研究院，深圳药品质量标准研究重点实验室，广东 深圳 518057［摘要］目的：建立高效液相色谱法测定复方氨酚美沙糖浆中苯甲酸钠和羟苯甲酯的含量。
方法：色谱柱为AgilentZorbax SB C18柱（250 mm ×4.6 mm ，5 μm ），流动相为磷酸盐缓冲液（pH 2.3）-乙腈（梯度洗脱），流速为1.0 mL/min ，检测波长215 nm ，柱温为30 ℃，进样量为20 μL 。
结果：2种抑菌剂与相邻色谱峰的分离度良好，阴性无干扰；苯甲酸钠和羟苯甲酯的检测质量浓度线性范围分别为0.025~0.492 mg/mL 和0.025~0.495 mg/mL （r ≥0.999 8）；平均回收率分别为99.5%和99.9%，RSD 分别为0.6%和0.8%（n =9）；重复性RSD 分别为0.3%和0.2%；精密度、稳定性、耐用性等结果良好。
结论：该方法操作简单、专属性强、准确度高，可用于复方氨酚美沙糖浆中种抑菌剂的含量测定。
［关键词］抑菌剂；高效液相色谱法；复方氨酚美沙糖浆；苯甲酸钠；羟苯甲酯；含量测定DOI: 10.19939/ki.1672-2809.2021.06.05Determination of Preservatives in Compound Paracetamol and Dextromethorphan Syrup by HPLCCAI Jinxiong, PANG Sai, LIANG Aixian, LIU Min, LI Yulan, WANG TiejieShenzhen Institute for Drug Control, Shenzhen Key Laboratory of Drug Quality Standard Research, ShenZhen Guangdong 518057, China.[Abstract] Objective: To establish an HPLC method for the determination of sodium benzoate and methylparabenin compound Paracetamol and Dextromethorphan Syrup. Methods: The determination was performed on Agilent Zorbax SB C18 column (250 mm×4.6 mm, 5 μm) with mobile phase consisted of phosphate buffer solution (pH2.3)-acetonitrile (gradient elution) at the flow rate of 1.0 mL/min. The detection wavelength was set at 215 nm. The column temperature was 30 ℃, and sample size was 20 μL. Results: Two preservatives were separated well from other adjacent peaks without interference from negative controls. The liner range of sodium benzoate and methylparaben were 0.025-0.492 mg/mL and 0.025-0.495 mg/mL with r ≥0.999 8. The average recovery were 99.5% and 99.9%, and the RSD were 0.6% and 0.8% (n =9). The RSD of repeatability were 0.3% and 0.2%, and the results of precision, stability and ruggedness were good. Conclusion: The method is simple, specific and accurate, which can be applied to the determination of five active pharmaceutical ingredient and two preservatives in compound paracetamol and dextromethorphan syrup.[Key Words] Preservative ; HPLC; Compound paracetamol and dextromethorphan syrup; Sodium benzoate; Methylparaben; Content determination作者简介：蔡锦雄，学士，主管药师。
Waters e2695高效液相色谱仪维护操作培训
实验室
正确的实验步骤
• 选择适当的洗针溶剂（绿管溶剂）和Seal Wash溶剂 • 清洗进样针（Needle Wash） • 清洗柱塞杆密封（Seal Wash） • 平衡系统 • Purge 进样器 • 实验操作 • 清洗系统 • Purge 进样器 • 清洗进样针（Needle Wash） • 清洗柱塞杆密封（Seal Wash）
shift—1—shift—1
检 查 检 测 器 灯 的 能 量 ( 检查检测器灯的使用时 手动关检测器灯
灯的亮度)
间
单/双波长， 自动调零
方法调用， A/B通道切换
设置及诊断
运行/停止 键 选项移动键
分屏显示键
监视色谱图 第二功能键
屏幕对比度 回车键
溶剂过
滤头堵
不锈钢滤头应先用纯化水超声 清洗。若不行，则可用100%的 异丙醇超声波清洗20分钟，之 后再用纯化水超声清洗。
注射器中出现的气 泡会导致系统抽取 的样品量不准确， 进而影响峰面积的 重现性。
进样前检查注射器 内流动相是否存在 气泡。
Inject Samples
样品进样
➢操作步骤： 选择Inject Samples（样品进样）选项，Enter，出现 Inject Samples （样品进样）对话框，如上图： Vial Range： 样品瓶位置 Injects per vial： 进样次数（5~10次） Run time： 运行时间（一般0.5min） Inject volume： 进样量（设置要比检测时的进样量 大，一般为40μl或80μl）
安装在线过滤器滤 芯时需注意滤芯方 向，且需放平后再 上紧。
灌注流动相时压力变高
Inline filter（在线过滤器） Parts No. WAT088084
Alliance 中文操作说明[e2695_2489_2424]
![Alliance 中文操作说明[e2695_2489_2424]](https://img.taocdn.com/s3/m/754da63d0b4c2e3f57276358.png)
Alliance e2695 系统系统操作规程操作规程操作规程（（草本草本））使用Waters Alliance e2695高效液相色谱仪前，请认真阅读仪器操作指南，了解仪器原理，熟悉仪器的使用方法。
Waters e2695是一个集成的溶剂和样品管理平台。
简易操作规程1、制备流动相制备流动相：：每次使用Alliance 前，最好重新配置流动相，有机溶剂要求使用色谱纯(进口名牌最好)，水或缓冲盐流动相要使用超纯水(18.2MΩ)，使用0.45um 水性滤膜过滤，并超声后置于清洁的溶剂瓶内，将溶剂过滤头浸没入溶剂瓶中。
洗针溶剂溶剂（（Needle Wash ）推荐列表推荐列表：：色谱条件色谱条件针头清洗溶剂针头清洗溶剂缓冲含水，反相 80%有机相，20%水相 非水，反相 100%甲醇 正相系统 流动相 GPC 流动相 离子交换超纯水柱塞杆清洗液柱塞杆清洗液（（Seal Wash ）要求要求：：反相系统建议使用80%水/20%甲醇（或乙腈）。
2、样品溶液样品溶液：：待测样品要求澄清、透明，如有固体悬浮物或微粒，需以0.45um 微孔滤膜过滤或高速离心方式除去。
*注意：针对不同样品溶液适当选择滤膜，分清水系或是有机系滤膜。
3、开机顺序开机顺序：：首先打开控制仪器电脑，待电脑完全加载完毕后，再开启e2695、2489、2424【打开2424电源之前，一定要打开空气压缩机或氮气阀门】，等待所有仪器自检通过后，方可启动仪器控制软件Empower 。
注意：系统默认用户名为system 、密码为manager ，可新建用户名，至少4个字母。
4、仪器准备仪器准备：：4.1.1、、e2695e2695初时画面初时画面初时画面：：E2695开机自检完成后，将进入Idle 模式，真空脱气机自动开启，所以最好在开启e2695前把所需要的溶剂准备好，暂时不使用的流路建议保存于有机相中【A 路-黄、B 路-蓝、C 路-红、D 路-绿】。
WATERS-2695-2487-2414-2998高效液相色谱仪操作规程
WATERS 2695/2487/2414/2998高效液相色谱仪操作规程1. 目的：为使对WATERS 2695/2487/2414高效液相色谱仪的使用规范化，特制定本规程。
2. 范围：涉及对WATERS 2695/2487/2414高效液相色谱仪的使用。
3. 职责：QC检验员应严格遵守本规程。
4. 内容：4.1开机4.1.1接通电源，打开电脑主机、显示器的开关，进入Windows画面。
4.1.2 打开Alliance 2695系统的电源，仪器进行自检，“Idle”状态表示开机测试正常。
4.1.3 Wet Prime冲洗：少量气泡，执行Wet Prime。
A利用方向键将光标移至“composition”字段，将欲Wet Prime的溶剂输入100%。
B按“Direct Function”功能键，选择Wet Prime，按“OK”。
C选择流速和冲洗时间，按“OK”。
D重复上述步骤直至所有溶剂做完Wet Prime。
4.1.4 Dry Prime冲洗：大量气泡或者通道走空，执行Dry Prime。
A按“Direct Function”功能键，选择Dry Prime，按Enter。
B利用方向键将光标移至各通道，选择待Dry Prime的通道。
B同时打开阀门，用注射器帮助排液D重复上述步骤直至所有溶剂做完Dry Prime。
4.1.5设定溶剂：在Status(1)画面，利用方向键将光标移至“composition”字段，将所需溶剂输入适当的百分比。
4.1.6设定流速：在Status(1)画面，利用方向键将光标移至“Flow”字段，输入所需流速。
4.1.7脱气：在Status(1)画面，利用方向键将光标移至“Degasser”位置，按Enter，利用上下键选择所需要的模式（On:除气装置开启；Off：除气装置关闭）4.1.8置入转盘A打开样品转盘舱门，屏幕会显示A、B、C、D、E五个转盘，按A可取出A盘（每个转盘上可放置24个样品瓶，共计120个）。
Waters2695使用维护PPT参考课件
主屏幕界面 Status（1）界面
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系统前处理
• 灌注针头清洗泵（Prime Needle Wash）： 在屏幕下按“Diag”,显示“Diagnosties”屏幕， 按“Start”，应见溶剂从废液排放口流出， 运行结束后按“Close”；若想多洗几次时， 按“Start Again”。
HPLC流程原理图
2020/1/21
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开机前的准备工作
• 检查设备电源、电路、信号连接是否完好。 • 连接好需要的色谱柱。 • 流动相：根据待检样品的检测方法配制相应的流动相，必须用
0.45um微孔滤膜抽真空过滤。使用色谱纯的溶剂。水和缓冲液都 需要用超纯水；盛放溶剂和流动相所用的玻璃容器必须用超纯水 清洗。
2020/1/21
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建立项目、编辑仪器方法和方法组
• 编辑仪器方法：点击Empower界面中的“Browse Projects”选择需要 打开的项目点击“OK”，进入到“Run Sample”，选择需要进入的系 统点击“OK”，进入到“Run Sample”界面后，点击“Edit→New Method Set→Yes”进入“New Method Set”界面，点击“Create New”, 此时出现“Instrument Method Editor”界面，按相关要求填写各参 数，编辑完毕后点击“Save”保存，在对话框“Name”中输入此方法 名称保存。
• 湿“M灌en注u/（StaWtuest”P键rim进e入）“：St按atu面s（板1右）下”界方面， 在“Composition”页面中选择将用到的溶 剂通道改为“100%”，按液晶屏幕右下角 “Direct Function”键，移动光标选择“Wet Prime”，点击“OK”。流速及时间可使用 默认值，也可自行设定（如： 5ml/min,3ml/min）,设定完成点击“OK” 即可。将每一个会用到的溶剂通道按照 上述操作一次（也可各通道选25%进行 灌注）。
高效液相色谱法测定染发剂中对苯二胺等32种染料组分
高效液相色谱法测定染发剂中对苯二胺等32种染料组分倪琳;欧阳晓玫;李若绮;武悦;徐勤科;杜兴【摘要】采用高效液相色谱法对甘肃27个市、州、县地区抽样的50批次染发剂类化妆品进行检验,分析染发类化妆品中使用的染料组分种类、含量情况.试验结果发现对苯二胺、间苯二酚、间氨基苯酚、对氨基苯酚等4种染料组分的使用频率较高.50批染发类化妆品不合格率为50％,其中包括未超规定限量,但产品的批件配方信息与包装标签标识存在问题的染发剂22批次,二批次检出禁用组分,一批次检出苯基甲基吡唑啉酮超规定限量.说明染发类化妆品产品包装标签应进行规范,产品的批件配方信息与包装标签标识的一致性应加强监管.【期刊名称】《分析测试技术与仪器》【年(卷),期】2019(025)003【总页数】8页(P196-203)【关键词】染发类化妆品;染料组分;高效液相色谱法;标签标识;产品批件【作者】倪琳;欧阳晓玫;李若绮;武悦;徐勤科;杜兴【作者单位】甘肃省药品检验研究院,甘肃兰州 73000;甘肃省药品检验研究院,甘肃兰州 73000;甘肃省药品检验研究院,甘肃兰州 73000;甘肃省药品检验研究院,甘肃兰州 73000;甘肃省药品检验研究院,甘肃兰州 73000;甘肃省药品检验研究院,甘肃兰州 73000【正文语种】中文【中图分类】O657.7+2染发类化妆品具有改变头发颜色的作用 [1]. 染发剂依据染发效果可分为三类：暂时性、半持久性和持久性. 其中以氧化型染发剂最为流行，属于永久性染发剂，染料中间体主要成分多为苯胺类化合物，使用后可能引起不良反应[2]. 2017年国家化妆品不良反应监测系统中共收到染发类化妆品不良反应/事件报告2 688份，占收集到全部特殊类化妆品不良反应报告的21.02%. 染发类化妆品不良反应主要表现为皮损红斑、丘疹等症状，使用者自觉症状以瘙痒为主，其次为灼热感、疼痛、紧绷感、干燥、头晕、头痛等. 频繁使用染发产品可能带来的安全性问题一直受到广泛关注，染发产品也一直是化妆品管理和研究的重点之一[3-7]. 在我国染发类产品属于具有特殊用途的化妆品，为加强对染发剂使用安全和质量的管理,《化妆品安全技术规范》(2015 年版)中规定了化妆品的 75 种准用染发剂和在使用时的最大允许浓度, 并将邻苯二胺、邻氨基苯酚、对苯二胺、 2-硝基对苯二胺、甲苯-3,4-二胺、间苯二胺、氢醌、N,N-二乙基对苯二胺硫酸盐、N,N-二乙基甲苯-2,5-二胺盐酸盐等多种染料组分列为禁用组分. 目前，对染料组分的测定主要采用高效液相色谱法、高效液相色谱-串联质谱法、气相色谱-质谱法、毛细管电泳-间接化学发光法 [8-13]. 其中高效液相色谱法因仪器普及率较高、灵敏度高以及分析速度快等特点而被广泛应用于染发剂染料组分的分析测定. 同时, 规范中也推荐了适用于染发类化妆品中对苯二胺等 8 种氧化型组分的含量测定方法和适用于染发类化妆品中对苯二胺等 32 种组分含量的测定方法[14-15]. 但在实际工作中发现,按照规范中检测32种染料组分的方法测定，有3个组分未达到基线分离. 并且由于染发剂的基质较复杂，按照规范方法制备的供试品溶液无法过滤. 本研究优化了《化妆品安全技术规范》(2015年版)中高效液相色谱法测定染发剂中对苯二胺等 32 种组分含量的方法,随机抽取了50 批市售染发剂进行检测, 并根据检验结果对染料组分的种类、用量等使用情况进行统计分析.1 试验部分1.1 仪器与试剂Waters Alliancee2695高效液相色谱仪(美国Waters公司)；LC-20A高效液相色谱仪(日本岛津公司)；KQ-250DB数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)；ME204电子天平(瑞士梅特勒公司)；XS205DU电子天平(瑞士梅特勒公司).随机抽取甘肃地区27个市、州、县地区专卖店、商场、超市、美容美发场所、集散市场等出售的染发剂共计50批次.32种染发剂标准品的信息如表1所列.1.2 标准溶液的制备取各染料标准品0.1 g，精密称定，加入2 g/L亚硫酸氢钠水溶液-无水乙醇(体积比为1:1)的混合溶液，制成质量浓度为10 g/L的各染料标准储备溶液. 分别用2 g/L亚硫酸氢钠水溶液溶解甲苯-2,5-二胺硫酸盐和2-氯对苯二胺硫酸盐并定容，甲苯-3,4-二胺使用无水乙醇定容. 精密称定2-硝基对苯二胺和4-硝基邻苯二胺25 mg，使用无水乙醇定容，配成质量浓度为2.5 g/L的溶液. 2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐、对甲基氨基苯酚硫酸盐、2,6-二氨基吡啶、N,N-二乙基对苯二胺硫酸盐使用流动相(磷酸盐混合溶液) 溶解. 2～4 ℃保存，2天内使用.1.3 标准曲线的绘制对32种标准品依照组分进行分组，并根据分组情况，分别精密量取标准储备溶液适量于10 mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，配成质量浓度为500 mg/L的混合标准溶液. 取混合标准溶液适量，用无水乙醇稀释，配制成浓度分别为50、100、250、500、600、700、800 mg/L的混合标准系列溶液，标准系列溶液应于使用前配制. 取各标准系列溶液5 μL注入高效液相色谱仪，分别采用3种流动相进行分析，记录各色谱峰面积，以浓度(X)为横坐标，峰面积(Y)为纵坐标，绘制标准曲线.1.4 供试品溶液的制备取样品0.5 g，准确称量至0.000 1 g，置25 mL具塞比色管中，加入无水乙醇-水(体积比为1∶1)的混合溶液至刻度，涡旋1 min，冰浴超声提取15 min，低温离心(5 000 r/min)5 min，取上清液经0.22 μm微孔滤膜过滤，滤液作为供试品溶液.1.5 色谱条件[16]第一组：仪器型号：Waters Alliancee2695高效液相色谱仪；二极管阵列检测器；色谱柱：SUPELCO Solutions within C16(4.6 mm×250 mm,5 μm),柱温:25 ℃,流动相：乙腈-磷酸盐混合溶液(称取十二水合磷酸氢二钠1.8 g，磷酸二氢钾2.8 g 和庚烷磺酸钠1.0 g，用水稀释至1 L，用磷酸调pH至6，体积比为10∶90)；检测波长：280 nm；运行时间：35 min,进样量：标准品5 μL，样品10 μL，流速：1.0 mL/min.第二组：仪器型号、色谱柱、柱温、检测波长、进样体积及流速同第一组. 流动相：甲醇-磷酸盐混合溶液(配制方法同第一组，体积比为10∶90)；运行时间：40 min. 第三组：仪器型号：LC-20A高效液相色谱仪；二极管阵列检测器；色谱柱、柱温、检测波长、进样体积及流速同第一组；流动相：乙腈-磷酸盐混合溶液(配制方法同第一组，体积比为40∶60)；运行时间：35 min.表1 32种染发剂标准品信息Table 1 Information of 32 reference substancesin dye序号名称批号百分含量/%来源1对苯二胺G1*******.9Dr.Ehrenstorfer GmbH2对氨基苯酚20131 99.9Dr.Ehrenstorfer GmbH3甲苯-2,5-二胺硫酸盐B0001842 99.3 MANHAGE4间氨基苯酚G132135 99.6Dr.Ehrenstorfer GmbH5邻苯二胺 G125822 97.2Dr.Ehrenstorfer GmbH62-氯对苯二胺硫酸盐B0001835 99.8 MANHAGE7邻氨基苯酚G150167 98.9Dr.Ehrenstorfer GmbH8间苯二酚 G146101 99.4Dr.Ehrenstorfer GmbH92-硝基对苯二胺G147300 98.5Dr.Ehrenstorfer GmbH10甲苯-3,4-二胺G15915399.3Dr.Ehrenstorfer GmbH114-氨基-2-羟基甲苯 B0002006 99.1 MANHAGE 122-甲基间苯二酚 B0001839 99.7 MANHAGE136-氨基间甲酚171030 99.7 MANHAGE144-氨基-3-硝基苯酚 161008 99.8Dr.Ehrenstorfer GmbH15间苯二胺 158127 99.2Dr.Ehrenstorfer GmbH162,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐B0002378 98.3 MANHAGE 17氢醌G130187 99.9Dr.Ehrenstorfer GmbH184-氨基间甲酚126030 99Dr.Ehrenstorfer GmbH192-氨基-3-羟基吡啶 B0001582 99.9 MANHAGE20N,N-双(2-羟乙基) 对苯二胺硫酸盐B0000099 99.5 MANHAGE21对甲基氨基苯酚硫酸盐 150925 99.7 MANHAGE224-硝基邻苯二胺 161103 98.3 MANHAGE232,6-二氨基吡啶 155653 99.6Dr.Ehrenstorfer GmbH24N,N-二乙基对苯二胺硫酸盐130****7699.2MANHAGE25N,N-二乙基甲苯-2,5-二胺盐酸盐 161015 99.3 MANHAGE26苯基甲基吡唑啉酮B0000105 99 MANHAGE276-羟基吲哚171031 99.2 MANHAGE284-氯间苯二酚B0001616 99.3 MANHAGE292,7-萘二酚170929 99.3 MANHAGE30N-苯基对苯二胺 B0001793 97 MANHAGE311,5-萘二酚171130 99.5 MANHAGE321-萘酚 20827 99.8Dr.Ehrenstorfer GmbH2 结果与讨论2.1 色谱柱的选择取同一批号样品，按照供试品及混合标准品溶液的方法制备，使用 CAPCELLPAK C18 色谱柱、Diamonsil C18 色谱柱、Phenomenex C18 色谱柱和SUPELCO Solutions within C16 4 个不同品牌色谱柱进行测定,试验结果表明SUPELCO Solutions within C16色谱柱能实现所有染料的基线分离,且重现性较好，故选用该色谱柱.2.2 流动相的选择因流动相中加入离子对试剂，对色谱柱的使用寿命影响较大，故试验了流动相中不加离子对试剂(庚烷磺酸钠)，结果样品和混合标准品中部分染料组分在色谱柱上无保留，因此，流动相中需要加离子对试剂.2.3 染发剂中32种染料组分分组情况分组依据：将同分异构体、结构相似的组分重新分组，不易分离的物质分到不同组中进行检测. 试验中发现《化妆品安全技术规范》(2015年版)方法中第一组的间苯二酚、苯基甲基吡唑啉酮、N,N-二乙基甲苯-2,5-二胺盐酸盐未达到基线分离，将上述三种组分分到第三组，分离效果较好(如表2所列、图1～3所示).表2 32种染料组分分组情况Table 2 Distribution of 32 constituents in dye第一组(如图1所示)第二组 (如图2所示)第三组(如图3所示)对苯二胺间苯二胺间苯二酚对氨基苯酚氢醌N,N-二乙基甲苯-2,5-二胺盐酸盐甲苯-2,5-二胺硫酸盐4-氨基间甲酚苯基甲基吡唑啉酮间氨基苯酚2-氨基-3-羟基吡啶6-羟基吲哚邻苯二胺2,6-二氨基吡啶4-氯间苯二酚2-氯对苯二胺硫酸盐4-硝基邻苯二胺 2,7-萘二酚邻氨基苯酚对甲基氨基苯酚硫酸盐N-苯基对苯二胺2-硝基对苯二胺N,N-二乙基对苯二胺硫酸盐1,5-萘二酚甲苯-3,4-二胺2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐1-萘酚6-氨基间甲酚 N,N-双(2-羟乙基)对苯二胺硫酸盐4-氨基-2-羟基甲苯2-甲基间苯二酚4-氨基-3-硝基苯酚图1 第一组混合标准品高效液相色谱图Fig. 1 HPLC of group Ⅰof mixed standard products图2 第二组混合标准品高效液相色谱图Fig. 2 HPLC of group Ⅱ of mixed standard products图3 第三组混合标准品高效液相色谱图Fig. 3 HPLC of group Ⅲ of mixed standard products2.4 线性关系、检出限和定量限线性范围、相关系数(R2)、检出限和定量限结果如表3所列. 由表3可知，在相应的浓度范围内，各染料组分峰面积和对应的浓度具有良好的线性关系，R2均高于0.99. 对标准溶液进行逐级稀释，以S/N=3确定检出限(LOD)，以S/N=10确定定量限[LOQ,参照《化妆品安全技术规范》(2015年版)]中染发剂的使用限度，该方法的检出限低于规范规定的限度，满足实际样品的分析要求.2.5 精密度和准确度试验对高、中、低3个浓度水平的混合标准溶液进行平行测定6次，计算32种染料组分峰面积的RSD，均小于4%. 故精密度满足分析要求.由于染发剂空白样品较难得到，故制备不含氧化型染料的空白样品，均加入高、中、低3个浓度水平的混合标准溶液进行加标回收，每个浓度水平重复测定2次，结果各染料组分低浓度水平的加标回收率为74%～114%，中浓度水平的加标回收率为79%～110%，高浓度水平的加标回收率为83%～104%.2.6 稳定性试验将高、中、低3个浓度水平的混合标准溶液置于室温下，每个浓度水平的标准溶液于0,2,4,6,8,10 h各测定1次，计算各组分峰面积的RSD均小于3%，结果32种染料组分在10 h内稳定.2.7 染发剂中32种染料组分的含量测定结果对50批染发剂中32种组分的含量进行测定，其中有2批次检出禁用组分邻氨基苯酚,有1批次的苯基甲基吡唑啉酮超出规定的限量. 对50批次染发剂中32种组分的检测中检出的各组分进行统计，结果表明：染发剂使用染料组分频率最高的是对苯二胺、间苯二酚、间氨基苯酚和对氨基苯酚，其次是2,4-二氨基苯氧基乙醇盐酸盐、甲苯-2,5-二胺硫酸盐、苯基甲基吡唑啉酮、2-甲基间苯二酚、4-氨基-2-羟基甲苯、2-氨基-3-羟基吡啶、4-氨基间甲酚、6-羟基吲哚、N,N-双(2-羟乙基) 对苯二胺硫酸盐、1-萘酚和4-氯间苯二酚等.表3 32种染料组分的回归方程、线性范围、相关系数、检出限和定量限Table 3 Regression equations,linearity ranges,correlation coefficients,detetion limits and limits of quantification of 32 dye components组分序号线性范围/(mg/L) 线性回归方程R2 LOD/(mg/kg) LOQ/(mg/kg)1 168.72～843.60y=1.45×103x+1.70×1040.999 9 10.5435.892163.05～815.26y=1.43×103x+4.92×1020.999 810.1939.573154.25～771.25y=7.70×102x+2.28×1040.999 99.6430.924164.29～821.47y=5.07×106x+2.67×1040.999 710.2735.865172.85～864.23y=5.92×106x-1.51×1040.999 810.8036.476185.80～929.02y=8.78×105x+7.15×1030.999 111.6236.827165.95～829.75y=6.90×106x+1.67×1040.999 910.3735.418159.83～799.13y=4.00×106x+9.33×1030.999 8 9.9933.68941.56～207.82y=1.02×107x+3.70×1040.999 72.608.9510170.37～851.87y=4.34×106x-3.90×1040.999 710.6536.9611162.98～814.92y=4.98×106x+1.70×1040.999 810.1932.8612170.23～851.15y=1.26×106x+2.49×1030.999 310.64 34.8513177.29～868.39y=5.15×106x-8.10×1030.999 610.50 18.7614179.08～886.40y=9.01×106x+3.20×1040.999 611.0118.5715 165.28～785.21y=4.00×106x-2.23×1030.997 59.78 32.581685.86～428.19y=1.55×106x-8.80×1030.999 75.16 16.7817 184.25～791.69y=4.27×106x+1.00×1040.999 69.9931.5618124.18～741.23y=3.08×106x-5.51×1030.999 08.6226.9719196.85～967.21y=7.25×106x-2.34×1040.999 413.36 41.8520189.45～945.19y=1.75×106x-3.42×1040.998 612.05 38.1421 78.59～419.24y=1.62×106x-1.80×1040.999 04.15 13.842240.14～198.43y=5.84×106x-3.08×1020.999 42.578.632389.98～468.25y=1.86×106x+6.05×1030.999 95.50 18.472490.54～487.63y=5.07×105x+1.03×1030.998 15.5818.4225163.93～849.66y=2.50×106x-7.10×1030.999 910.2534.6226 167.86～839.28y=2.00×103x-2.32×1040.999 610.4932.5427161.04～805.20y=7.91×106x+9.97×1030.999 910.0632.7828216.80～1084.02y=4.20×106x+7.94×1030.999 913.5542.7129153.97～769.85y=6.02×106x+9.07×1030.999 99.6229.8230186.77～933.85y=2.54×107x-5.61×1030.999 911.6836.4831139.13～695.65y=8.36×106x+8.21×1030.999 98.7028.2132163.77～818.84y=8.24×106x+7.15×1030.999 910.24 32.452.8 染发剂质量评价[17]50批次染发剂中有25批次不合格，其中，未超过规定限量但存在问题的样品有22批次，其使用频率较高的间氨基苯酚不合格率高达42%，对苯二胺不合格率高达26%. 50批染发剂中有12批次产品标签标识与批件配方信息虽然一致，但存在以下问题：(1)检出批件及标签未标识的染发剂.(2)未检出批件及标签标识的染发剂.(3)同时存在检出和未检出的情况.此类产品虽然未超过规定限量，依然视为有问题的样品，即不合格. 还有13批次产品标签标识与批件配方信息不一致，存在未检出批件标识的染发剂、未检出标签标识的染发剂、检出批件未标识的染发剂、检出标签未标识的染发剂以及同时存在检出和未检出等情况，即使未超规定限量，也为有问题的样品，即不合格.2.9 染发剂采样地点情况分析因甘肃没有染发剂生产厂家，生产环节没有采集到样品. 采样来自集散市场、商店、商场、药店、超市和美容美发场所. 除专卖店外，其他采样点均有不合格样品. 因采集到的样品有限，可能不具备代表性. 采集到的50批次样品，其中国产样品44批次，进口样品6批次. 经检验，进口样品全部合格，因抽样批数较少，只能做参考数据. 44批国产样品中25批不合格，合格率仅为43%，说明国产染发类化妆品质量有待进一步提高. 不合格样品中产地来自广东22批次，浙江2批次，上海1批次. 本次抽样中自广东的染发类产品共25批次，不合格样品占76%，需引起监管部门的重视.3 结论对《化妆品安全技术规范》(2015年版)染发类产品的检测方法进行改进，同时对50批染发类化妆品的检验结果进行分析，可以看出存在以下问题：(1)生产企业在产品包装上随意标识信息，误导欺骗消费者. (2)染发类化妆品不按照批件规定的配方生产，生产企业对《化妆品卫生规范》(2007年版)和《化妆品安全技术规范》(2015年版)规定允许使用的染料组分及禁用组分不明确.建议有关部门应规范染发类化妆品的包装标签标识，加强产品批件配方信息与包装标签识的一致性监管，进一步完善染发类化妆品的质量和规范销售市场.参考文献:【相关文献】[1] 陈宇津.天然植物染发剂与化学合成染发剂染发后稳定性的对比研究[J].香料香精化妆品，2017，7(1)：46-48.[Chen Yu-jing. Comparative study on hair stability of natural plant hair dye and chemical synthetic hair dye [J]. Spicy Cosmetics，2017，(1)：46-48.][2] 陈梦，周明昊.染发剂中禁限用染料检测方法的研究现状[J].日用化学工业,2015,45(8)：462-467. [Chen meng, Zhou Ming-hao. Research status on the detection method of restricted dyes in hair dyes [J]. Daily Chemical Industry, 2015,45(8)：462-467.][3] 杨建召.染发剂的研究进展[C].中国香料香精化妆品工业协会,第九届中国化妆品学术研讨会论文集(下)，2012:5.[Yang jian-zhao. Research Progress on Hair Dye[C]. China Fragrant Incense Cosmetic Industry Association, Proceedings of the 9th China Cosmetic Symposium(below), 2012:5.][4] 杨艳伟，刘思然，张卓娜.染发类产品中染发剂使用现状调查[J].中国卫生检验杂志,2017,27(6)：899-901.[Yang Yan-wei, Liu Si-ran, Zhang zhuo-na. Nvestigation on the application status of hair dye in hair dye products[J]. China Health Inspection Magazine, 2017,27(6)：899-901.][5] 刘溪，胡玉莉，王海成，等.染发剂的研究进展及天然植物染发剂的前景展望[J].中南药学,2018,16(2)：195-201.[Liu Xi, Hu Wang-li, Wang Hai-cheng, et al. Research progress of hair dye and prospect of natural plant hair dye[J].Central South Pharmacy, 2018,16(2):195-201.][6] 金丽君，陆翊平.长期使用和接触染发剂对人体健康的影响[J].医学动物防治,2011,27(10)：917-918. [Jin Li-jun, Lu Yu-pin. Effects of long-term use and exposure to hair dye on human health[J]. Medical Animal Control,2011,27(10)：917-918.][7] 刘广仁，韩永智，黄更史，等.化妆品变应性接触性皮炎93例临床分析[J].中国皮肤性病学杂志，2013,27(4)：361-363.[Liu Guang-ren, Han Yong-zhi, Huang Geng-shi, et al. Clinical analysis of 93 cases of allergic contact dermatitis of cosmetics[J].Chinese Journal of Dermatology, 2013,27(4)：361-363.][8] 毛希琴，李春玲，任国杰，等.高效液相色谱法同时检测化妆品中 38 种限用着色剂[J].色谱，2015,33(3)：282-290.[Mao Xiqin, Li Chun-ling, Ren Guo-jie, et al. Simultaneous determination of 38 restricted colouring agents in cosmetic products by HPLC[J]. Chromatography, 2015,33(3)：282-290.][9] 吕春华，刘海山，楼成杰，等.高效液相色谱法测定氧化型染发剂中11种染料[J].理化检验(化学分册)，2012,48(11)：1347-1349.[Lv Chun-hua, Liu Hai-shan, Lou Cheng-jie, et al. Determination of 11 dyes in oxidizing hair dyes by HPLC[J]. Physical and ChemicalTests(chemical Fascicles), 2012,48(11)：1347-1349.][10] 戴明.超高效液相色谱-串联质谱法测定染发剂中9种染料[J].日用化学工业，2017,47(5)：297-300.[Dai Ming. Determination of 9 dyes in hair dye by ultra-high performance liquid chromatography-tandem mass spectrometry[J].Daily Chemical Industry, 2017,47(5)：297-300.][11] 朱会卷，杨艳伟，张卫强，等.高效液相色谱法测定染发剂中22种染料成分[J].色谱，2008,26(5)：554-558.[Zhu Hui-juan, Yang Yan-wei, Zhang Wei-qiang, et al. Determination of 22 dye components in hair dye by HPLC[J]. Chromatography, 2008,26(5)：554-558.] [12] 朱英，杨艳伟，李静.气相色谱-质谱法同时测定氧化型染发剂中得多种染料中间体[J].色谱，2005,23(5)：566.[Zhu ying, Yang Yan-wei, Li Jing. Simultaneous determination of dye intremediates in oxidative hair dye by gas chromatography-mass spectrometry[J]. Chromatography, 2005,23(5)：566.][13] 徐向东，胡涌刚，李欣欣.毛细管电泳-间接化学发光法检测染发剂中苯二酚异构体和苯酚[J].分析化学，2006,34(S1)：151-154.[Xu Xiang-dong, Hu Yong-gang,Li Xin-xin. Capillary electrophoresis-indirect chemiluminescence detection of phenolic isomers and phenols in hair dyes[J]. Analytical Chemistry, 2006,34(S1)：151-154.][14] 中华人民共和国卫生部.化妆品卫生监督条例(卫生部第3号令)[S].1989-11-13.[Ministry of Health. Regulation on the Supervision of Cosmetic Hygiene(Order No. 3 of the Ministry of Health) [S].1989-11-13.][15] 中华人民共和国卫生部.化妆品卫生监督条例实施细则(卫生部第13号令)[S].1991-03-27.[Ministry of Health. Implementing Rules of the Regulations on Sanitary Supervision of Cosmetic Products(Decree No. 13 of the Ministry of Health) [S].1991-03-27.][16] 中华人民共和国国家食品药品监督管理总局.化妆品安全技术规范(2015年版)[S].[ State Administration of Food and Drug Administration of the People's Republic of China. Safety Technical Specification for Cosmetic Products(2015 Edition) [S].][17] 国家药品监督管理局数据查询网站[OL]. http://http/.。
高效液相色谱仪标准操作规程
高效液相色谱仪标准操作规程1目的建立高效液相色谱仪(Waters2695-2996Allianee)标准操作规程，为了使操作者操作高效液相色谱仪(Waters2695-2996Allianee)更规范，保证结果更精确。
2范围适用于高效液相色谱仪(Waters2695-2996Allianee)标准操作规程。
3职责操作者。
4程序4.1开机4.1.1打开Allianee电源开关，仪器进入自检状态。
4.1.2打开检测器，“STATUS”闪烁，4分钟后“LAMP”亮，仪器正常。
4.1.3点击menu/Status进入“STATUS”界面，按direactfunction，选择dryprime后，选择“A/B/C/D”四个泵，点击“Enter”，管道快速充满液体。
4.1.4打开电脑，点击“Empower”登陆，输入帐户“system”，密码“manage”，进入“EmpowerPro”。
4.1.5在配置系统中新建一项目。
4.1.6点击“运行样品”，选择“项目”，3分钟后仪器进入运行界面。
4.2样品检测4.2.1点击“编辑”，编辑仪器方法并保存方法名。
4.2.2点击“新建方法组”，编辑方法组名。
(要求方法组与仪器方法同名)4.2.3标识样品名、进样品/进标准品、样品位置、进样体积、运行时间后，于“file”中保存参数4.2.4点击“准备”，仪器显示“准备进样”后，点击进样。
4.2.5点击鼠标右键，选择“波长”和“正好运行时间”，保存参数4.3数据处理4.3.1点击“浏览项目”，于“进样”栏中双击所选的样品名，进入“通道”栏，双击所选的样品名，进入样品数据主窗口4.3.2选择波长，点击“提取色谱”后，积分或以处理方法向导处理数据，保存处理方法后，于“file”“保存”中保存“全部”。
4.4打印报告4.4.1于所选“浏览项目”结果栏中，选择已处理好的数据（如果没有，点击更新），点击右键，选择预览报告。
4.4.2选择报告方法，确定后，进入报告预览状态。
waters-2695-高效液相色谱仪操作规程(汇编)
Waters Alliance 高效液相色谱仪操作规程一、概述1.设备使用范围：主要用于样品中食品添加剂、农药残留、兽药残留、毒素、污染物、非法添加物测定。
2.设备主要技术/性能指标：四元溶剂混合支持等度和梯度应用，具有11个独特的梯度曲线。
自动混合持术能够以任何比例混合四种溶剂。
先进的溶剂分配功能。
串联流路具有无脉冲溶剂分配，无需使用湿润器。
在线溶剂脱气和溶剂自动压缩实现准确的流路。
集成的密封清洗实现稳定操作，并且所有溶剂类型均符合规格。
检测器包括光电二极管阵列、示差折光检测器。
二、使用要求1.存放环境温度10～30℃，湿度≤80%，电压220V。
2.流动相和纯水应用微孔滤膜过滤（纯有机相或含一定比例有机相的用有机系的滤膜，水相或缓冲盐的用水系滤膜）。
一次制得的纯水或缓冲盐流动相应在连续24小时内使用完，如未使用完也应弃去不用，并重新配制新鲜的流动相。
如需使用，应重新过滤。
流动相的pH值应在色谱柱填料允许的范围内。
该泵带有真空脱气机，可不超声，但要在泵电源开启后，等脱气机停止工作后（约需5分钟）再进行泵的其它操作。
3.流动相禁止使用氯仿、三氯（代）苯、亚甲基氯、四氢呋喃、甲苯等；慎重使用四氯化碳、乙醚、异丙醚、酮、甲基环己胺等，以免造成对柱塞密封圈的腐蚀。
三、操作程序A：开机步骤1.打开计算机，进入Windows界面。
2.打开仪器电源，待仪器各部分自检完成。
3.将2695泵密封垫清洗管路、洗针管路以及ABCD管路分别放入适当的溶剂。
4.Prime seal wash：按2695面板Diag键，选择Prime SealWash，清洗泵头，直至出口管有液滴流出，按Halt，停止Prime，再按close关闭界面。
5.Prime needle wash：再选择Prime NdlWash，清洗进样针1-2次,直至黄管有液体喷出。
Close并Exit，退出Diag界面。
6.Dry Prime：按2695面板Menu/Status键,再按Direct Function键做Dry Prime (注:此操作仅在管路中没有液体时执行,否则直接进入步骤6)。
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Waters e2695 型高效液相色谱仪操作方法
仪器组成及开机 溶剂管理系统的准备 样品管理系统的准备 运行样品 数据采集 报告打印 关机
Waters e2695 型高效液相色谱仪操作方法
仪器组成及开机 1 仪器组成
Waters e2695 分离单元 2498型紫外检测器 色谱管理工作站
打开真空脱气机（degasser）
Wet prime（执行湿灌注）
流动相平衡色谱柱
同理温度、流速都可在此控制面板设定！
流动相特性
（1）液相色谱的流动相又称为：淋洗液，洗脱剂。流动相组成改变， 极性改变，可显著改变组分分离状况； （2）亲水性固定液常采用疏水性流动相，即流动相的极性小于固定 相的极性，称为正相液液色谱法，极性柱也称正相柱。 （3）若流动相的极性大于固定液的极性，则称为反相液液色谱，非 极性柱也称为反相柱。组分在两种类型分离柱上的出峰顺序相反。 常用溶剂的极性顺序： 水(最大) > 甲酰胺> 乙腈> 甲醇> 乙醇> 丙醇> 丙酮> 二氧六环 > 四氢呋喃> 甲乙酮> 正丁醇> 乙酸乙酯> 乙醚> 异丙醚> 二氯甲烷> 氯仿>溴乙烷>苯>四氯化碳>二硫化碳>环己烷>己烷>煤油(最小)
色谱图 参数基本概念
峰面积 － Peak Area 峰与峰底之间的面积,又称响应值 标准偏差；σ － Standard Error 0.607倍峰高处所对应峰宽的一半 拖尾峰 － Tailing Pea
前伸峰 － Leading Peak 前沿较后沿平缓的不对称峰
溶剂管理系统的准备
流动相脱气确认所有溶剂管路都充满溶剂，按 【 Menu/Status 】，进入“ Status （ 1 ）”屏幕
溶剂管理系统的准备
必须用色谱纯有机溶剂，水或缓冲盐要用超纯水；
水相流动相需要每48h重新配制，特别是100%含水流 动相；
检查6根管子是否均在液面下，必须保证6根管子全部 插到溶剂瓶底部。
打印机
四元梯度洗脱的溶剂输送系统 四通道在线真空脱气机 可容纳 120 个样品瓶的自动进样系统
柱温箱
液晶显示器
内置的柱塞杆密封垫清洗系统 溶剂瓶托盘
键盘用户界面及软盘驱动器
2 开机
打开电源至on位置，开机依次接通 2695 分离单元、检测 器、计算机和打印机的电源。接通后，约 20s 仪器开始自 检，约 1min 后，显示主屏幕，此时继续各部件的初始化。
高效液相色谱如何工作
检测器连接计算机数据站，高效液相色谱系统单元先记录电信号，再 将电信号转换为色谱图，在显示屏上展现出来。
定性和定量样品内溶物浓度。
由于样品中化合物性质差异很大，几种类型的检测器被开发出来。 如果一个化合物能吸收紫外光，可使用紫外吸收检测器。 如果这个化合物发荧光，可使用荧光检测器。 如果该化合物没有上述性质之一，可使用更广泛的检测器，如蒸发光 散射检测器[ELSD]。 最强大的方式是顺序使用多个检测器。例如，紫外和/或蒸发光检测器 可和质谱仪[MS]联用来分析色谱分离的组分。这样，从一次进样，可 得到分析物的更多综合的信息。将质谱与高效液相色谱系统耦合称之 为液质联用.
色谱柱的使用及操作
流动相的转换要缓慢 流速(压力)的变化幅度较小，比较稳定 温度的变化幅度 专用色谱柱∶样品及溶剂的要求
记 住 ∶ 拿 到 一 根 从 未 用 过 的 色 谱 柱 时 一 定 要 先 看 其 使 用 说 明 ！
样品管理系统的准备
装载样品盘（loading carousels）： 装入样品与转盘将样品瓶插到样品盘合适的位置，打 开样品仓门，显示“ Door is Open ”屏幕，装入样品 盘，按【 Next 】，直至所有样品盘装毕，关仓门。
高效液相色谱如何工作
一个储液瓶装有溶剂[称为流动相，因为溶剂是流动的]。 一个高压泵[溶剂传输系统或称溶剂管理器]用来产生和计量流动相的 流速，一般是毫升/分钟。 一个进样器[样品管理器或自动进样器]可以将样品导入[注射]连续的流 动相 ，并由流动相携带样品进入高效液相色谱柱。 色谱柱装有能获得分离效果的填料。这种填料称为固定相因为它被柱 硬件包围住。 检测器用来查看化合物流出色谱柱时被分开的谱带[大多数化合物没有 颜色，所以人眼观察不到]。 流动相流出检测器可被送至废液瓶，或按需被收集。 当流动相含有一个分开的化合物谱带，高效液相色谱可以收集含有纯 化的化合物的该洗脱组分，用于进一步分析。 注意高压管路和附件用来连接泵、进样器、色谱柱和检测器单元，形 成流动相、样品和化合物分离谱带的通路。
色谱图 参数基本概念
死时间，t0 － Dead time 不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的时间
保留时间，tR － Retention time
组分从进样到出现峰最大值所需的时间 死体积，V0 － Dead volume
不被固定相滞留的组分，从进样到出现峰最大值所需的流动相体积
Waters e2695 型
高效液相色谱仪 操作方法
主讲人：马贵红 日期：2010-07-17
什么是高效液相色谱法
High Performance Liquid Chromatography
高效液相色谱法，简称：HPLC
是一种基于仪器方法的高效能分离手段：
高性能的色谱柱，高精度、耐高压的输液泵以及高灵 敏度的检测器……
定的检测器的参数的设置→设置好选另存为保存此仪器方法
→关闭）此时上述编辑的仪器方法出现在列表中
运行样品
在浏览项目中打开你的项目，通过“新建方法组” 来设定具体仪器方法、处理方法、报告方法→另 存为“方法组”，设置方法名（与刚才的仪器方法 名相统一）→完成。
在“运行样品”中打开设定的仪器方法， 并在设针时选定设定的方法组来对样品进 行分析。
峰底 － Peak Base
峰的起点与终点之间连接的直线 峰高 － Peak Height 峰最大值到峰底的距离 峰宽 － Peak Width 在峰两侧拐点处所作切线与峰底相交两点之间的距离 半（高）峰宽 － Peak Width at Half Height
通过峰高的中点作平行于峰底的直线，其与峰两侧相交两点之间的距离
鬼峰 － Ghost Peak
并非由试样所产生的峰；亦称假峰
色谱图 参数基本概念
基线 － Baseline 在正常操作条件下，仅由流动相所产生的响应信号的曲线 基线飘移 － Baseline Drift 基线随时间定向的缓慢变化 基线噪声；N － Baseline Noise 由各种因素所引起的基线波动 谱带扩展 － Band Broadening 由于纵向扩散,传质阻力等因素的影响,使组分在色谱柱内移动过程中 谱带宽度增加的现象
广泛应用于各个领域：
医药 / 环保 / 石化 / 生命科学 / 食品及农业……
在技术，理论及应用上仍处于发展阶段
什么是高效液相色谱法
定量分析主要基于与标准品的比较
是其最大应用领域
定性分析；不是色谱的强项
基于样品的保留时间比较 借助于和其联用的紫外、质谱或其他检测器
对定量及定性分析的要求
灵敏度、精度及准确度的要求 样品量的要求；复杂样品的分析能力 容易使用
样品方面要求
溶剂和样品过滤非常重要，它会对色谱柱、仪器起到保护作用，消除 由于污染对分析结果的影响。 色谱柱：由于填料颗粒很细，色谱柱内腔很小，溶剂和样品中的细小 颗粒会使色谱柱和毛细管容易堵塞。 仪器：溶剂和样品中的细小颗粒会增加进样阀的堵塞和磨损，同时也 会增加泵头内的蓝宝石活塞杆和活塞的磨损。 除去微粒及杂质 了解样品在流动相中的溶解度,如样品的溶剂不是流动相，一定要确 保样品在流动相中不析出。 了解样品与色谱柱的基质/填料是否相互作用。
标，选好后点“文件”下的“另存为”→“方法组”，设定即可。
至此选好处理方法。
结果处理：选好数据，右键选处理→选好方法组（上面设定好的）
点结果即可给出处理好的数据
注：通道无论什么时候给出的都是未处理数据。
FD数据处理： 点“处理方法向导”图标→新建处理方法→在新方法 （方法类型中选LC）→新建处理方法→峰1、峰2→积分区域（选定 要积分的峰）→给出条件剔除不要的峰→→→……→处理方法名→完 成（然后又出现主窗口，处理结果自动给出） →至此选好处理方法。
流动相方面要求
除去微粒 纯度的要求
超纯水，梯度实验时水中有机杂质含量要低（建议走空白 检验） 缓冲液的pH值，在填料的允许范围内 缓冲液（盐）的浓度 溶剂：色谱纯，并与填料相匹配 溶剂中的杂质含量 注意溶剂的相容性，避免使用不相容的溶剂 有机溶剂或水的比例
流动相对样品的溶解度
保留体积，VR － Retention volume 组分从进样到出现峰最大值所需的流动相体积
报告打印
在结果中，选择图谱点打印，报告打印时，选择 设定好的报告模式，或者选择 “缺醒单个报告”模式 打印，在待打印的模式下可以编辑报告显示的信息， 比如表头，色谱图的显示范围，表格中所需内容等。
关机
色谱图：HPLC图形结果（Chromatogram）
色谱图即色谱柱流出物通过检测器时所产生的响应信 号对时间的曲线图，其纵坐标为信号强度，横坐标为保留 时间。
← 色谱峰 峰高
峰宽
基线 ↓ 保留时间（分）