Waters高效液相色谱仪标准操作规程

1.目的描述 Waters 高效液相色谱仪标准操作规程。

2.适用范围化验室3.责任者化验员应严格遵照该操作规程 , QC 主管负责监督本规程的实施。

4.定义HPLC High Performance Liquid Chromatography , 高效液相色谱仪。

5.安全注意事项5.1有机溶媒有害健康，各溶剂瓶口应封严。

5.2注意检查废液桶中废液应避光，防止废液桶满外溢。

6.规程6.1.Waters HPLC的组成：贮液器输液泵自动进样器分离柱 (柱温箱 )紫外检测器控制及数据处理系统 (Millennium 32化学工作站 )。

6.2. HPLC系统的打开及关闭顺序6.2.1打开顺序对于分体式：请按泵、进样器、柱温箱、检测器的顺序打开开关，待各部分分别显示初始化完毕后，最后打开M i l l e nn i um32化学工作站。

泵与色谱工作站的连接：对于 510 泵，因为此泵与色谱工作站是单向联系，如要使泵在 Remote 状态下由工作站控制，首先要在泵的键盘上按 Menu 键，待显示屏切换至 Mode 状态下，其状态是Loca ，按 Edit/Enter 键，在 Local 的L 前有闪动的光标显示，按键，Local 转换成Rem，再按Edit/Enter 键，此命令已输入进去, 最后按Stop/Run 键，使泵处于Run 状态这时泵和工作站的连接即告成功。

泵的任何动作都可由工作站来控制。

还应注意这一步工作在每次开机时都要进行。

对于 Alliance 2690 系统：先打开 Alliance 2690 主机、检测器电源开关，待初始化完毕后，再进入 Millennium 32化学工作站。

对于流动相的要求：对于液体试剂应尽量采用色谱纯试剂；对于所用到的固体试剂应采用分析纯试剂；对于水，应采用经纯水机处理过的超纯水；流动相在使用前一定要经 0.45m 的滤膜（滤膜分为水相膜与有机相膜，确保使用正确的滤膜，参见附表 ) 过滤、超声真空脱气方可使用，严禁含盐的流动相未经过滤直接使用。

应养成良好操作习惯：规范操作，树立保护 HPLC 整套系统的概念，尤其对于输液泵、色谱柱、检测器，在使用后应及时冲洗，以免污染而使其寿命缩短或损坏，尤其如操作者使用了含盐的流动相，更应注意清洗的步骤：首先用脱过气的纯水在流速为1ml/min 左右冲洗 30～60 分钟，再用含 50％以上甲醇或乙腈的水溶液以相同的流速冲洗 20～30 分钟左右。

如要卸下柱子，在经过上述冲洗过程之后，再经纯甲醇或乙腈以1ml/min 的流速冲洗 20~ 30 分钟，柱子卸下后应马上拧紧柱堵。

流速的变化应采用阶梯式递增或递减的方式，启动泵时，应在 2 分钟之内由小流速慢慢增大到所需的流速，泵关闭时亦然( 流速递减)。

切忌流速的骤变。

6.2.2关闭顺序首先退出 Millennium 32化学工作站，再关闭系统的其他部分。

lennium 32化学工作站Millennium 32色谱管理系统是集数据采集、处理、 HPLC系统的控制、结果的管理、报告的打印为一体的综合系统。

下面就着重介绍该系统的基本操作知识。

6.3.1Millennium 32化学工作站的进入打开化学工作站，系统自动进入Program Manager界面，双击Millennium 肖像，这时进入Millennium界面，双击 Session Manager 图标，系统将自动初始化，以使工作站和 HPLC整套系统进行联接。

初始化后，按系统要求键入你的 User Name和 Password，这时你已进入该系统。

6.3.2Project的进入和建立∙P ro j e ct的进入：在S es s i o n M an a ger窗口下，击P r o j ec t肖像(或从Vi e w中选择P ro j e c t s),在其中有已建好的P r o j ec t，双击你所需的 P ro j e c t肖像，再进行你想做的工作。

∙P ro j e ct的建立从 File中选择 New，即显示 New Project的画面。

在 Project Name 中输入你的 Project 名称。

在 Initiallze Project 项目中选择 Copy 中的 filter and fields 或 Methods。

在 From Project 中选择要拷贝的现存 Project。

选择 Tablespace size。

选 OK，存贮并退出。

当 Millennium 软件在建立一个新的 Project 时，在屏幕上及时显示出完成建立新 Project 的百分比。

当达到 100% 时，在 SessionManager 画面即出现一个新的 Project 肖像。

6.3.3收集数据的一般过程使用 Millennuium32收集数据的一般过程如下：在 Project 窗口内建立收集数据所需仪器的仪器方法；建立包括此仪器方法的方法组；使用此方法组收集数据。

本部分包括：建立仪器方法，建立方法组，收集样品。

∙建立/修改仪器方法从 Sessoin Manager窗口，打开所需的 Project。

选择 Method 按钮，现存的方法的肖像即出现在屏幕上。

从命令菜单中选择 File，然后选择其中的 New Instrument Method，即出现 System Open 对话框。

在目录中选择收集数据需要使用的色谱硬件系统的名称，如：System_1。

按 OK，这时 Instrument Method 窗口即显示出来。

窗口的上部分是该系统的所有仪器的肖像。

用鼠标器将需要设定仪器参数的仪器部件激活，然后在仪器肖像上双击两下，即出现Instrument Dialog Box 画面。

对各个部件设置操作条件，或通过输入新的参数来更改以前的参数。

例如：定义泵参数，先双击 SIM/PCM 的肖像。

填写泵参数，按 OK。

当所有参数设置完成后，按 OK。

即回到 Instrument Method 窗口。

选File 中的 Save As 存贮仪器方法文件，如有需要，起一文件名，按OK。

选择 File 中的 Exit，即回到 Project 窗口。

新的仪器方法肖像即出现在此窗口下。

∙建立方法组(M et h o d S et)仪器方法编好后，必须存于一方法组中，才能在 Quick Set Control 中调用。

在 Project 窗口下选方法肖像。

选 File 中的 New Method Set，即显示出 Method Set 对话框。

在此画面的 Instrument Method 一栏，选择已确定的仪器方法。

其他项目可空着不填。

然后选 File， Save As。

输入方法组名后，按 OK。

选 File， Exit。

即退回到 Project 窗口。

新设置的方法组肖像即出现在此窗口下。

∙收集样品：完成以上各步骤后，即可收集样品。

在 Project 窗口下选择 Quick Set Control 肖像。

出现 System Open 对话框。

选择建立仪器方法时确定的色谱硬件系统，按 OK。

即出现 Quick Set Control 窗口。

在此窗口下的Sample Loading Table 中用鼠标器按第一行，这时Millennium 软件会自动填充各项初始参数。

通过输入新值可更改表中的各项参数，表中的瓶号(对于高效液相色谱仪的进样表，除另有规定外，按括号法安排进样顺序。

即第一针为标准品 1作为系统适用性共进 6针，要求 RSD不大于 2%，随后为标准品 2，进样次数为 2针，然后为样品 1到样品 3，各进 2针。

样品 3 后为标准品 1，依次类推，直到将所有样品都安排在进样表中 ) 进样次数，进样体积，运行时间等项目对自动进样器有控制作用。

在 Method Set Report 一列中选择在前面刚刚建立的方法组。

在运行方式 ( mode )中选 Run Only。

选择进样方式：菜单mode 下选单个样品或样品组进样。

将 Sample Loading Table 中第一行点黑。

击 Setup Instrument 按钮，启动系统。

系统启动后可击baseline monitor 图标，即可观察基线。

待基线平稳后，击绿灯或样品盘肖像准备进样。

出现 Injector wait 提示信息，随即进样。

在样品测试过程中，系统会在 Quick Set 窗口下显示瓶号和进样次数及运行时间。

并可在此窗口下观察检测器的输出情况。

屏幕上显示的检测器输出是自动满量程方式 (即自动按最大信号满格输出 )。

当收集完色谱数据后，选择 File， Exit。

退出 Quick Set 窗口。

样品收集完成后， Millennuium32会自动存贮收集的数据。

6.3.4建立数据处理的方法在 Millennuium32中，完成不同的任务需编辑不同的方法，如仪器方法 (收集数据 )，处理方法 (定性定量分析 )，报告方法 (打印实验报告 )等。

本部分包括：*重新调出色谱峰进行观察。

*谱图积分及确定积分表中的参数。

*输入组分表资料。

*存贮数据处理方法。

∙调阅色谱图进入在其中收集样品的 Project，在此窗口下选 Channel 肖像。

在 Channel View Table 中选择欲进行色谱分析的文件行并使其变黑。

在 Tools 下选择 Review 肖像，这时在 Review Data窗口下即显示出你调入的色谱图。

选 File， New Method。

在 New Method 对话框中指定数据处理的类型，如 LC，选 OK。

∙色谱图的积分选 View， Integration Table。

在屏幕下部即出现 Integration Event Table。

在 Peak Width， Minimum Area， Minimum Height 方框中输入适宜的数值。

按 Integration 按钮，观察积分情况，并适当进行积分参数的调整。

∙输入组分资料选 View， Component Table。

即可见到空的组分表。

选 Options， Fill Table From Result，即可自动填充积分完毕的色谱图的组分表。

也可用手动方式修改表中的参数。

按Calibration/Quantitate 后，选View，Result Table。

即可看到积分的结果。

∙存贮数据处理方法在Review Data 窗口下，选 File， Save Method。

在 Processing Method Save As 对话框的窗口下输入数据处理方法名称。

按 OK，贮存 Processing Method。

在组分表的上方可看到新的 Processing Method 的名称。