黄芪多糖对人红白血病K562细胞凋亡的影响
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【关键词】黄芪多糖；人红白血病；K562 细胞；凋亡
白血病是一种常见的恶性肿瘤，此症 使人类健康受到严重的威胁，白血病细胞 在生长的过程中具有凋亡受阻、增殖失控 以及分化障碍等特点 [1]。而 APS 属于黄芪 的活性成分之一，其具有抗应激、降血压、 降血糖、强心以及抗病毒等功效，相关研 究表明 [2]APS 能够有效抑制多种恶性肿瘤， 为了研究 APS 对人红白血病 K562 细胞凋 亡的影响，本次研究通过试验检测对 APS 组 和 对 照 组 中 的 Bcl-XL、Bcl-2、IAP-1、 Bax、Smac mRNA 和蛋白进行表达，目的 旨在研究 APS 对白血病治疗的依据，现做 如下报道。
将 APS 组 和 对 照 组 中 的 K562 细 胞 总蛋白进行提取，并对其进行定量。然后 进行 Caspase-3 活性测定，测定方法需严 格 按 照 说 明 书 规 定 操 作， 并 将 相 应 试 剂 依次加入到 96 孔板中使反应混合物得以 制备完成。两组各设 3 个复孔，并设置空 白对照孔（不加蛋白）。然后向每孔加入 2μL 的 AC-DEVA-PNA 底物，避光培育， 温度设定为 37℃，时间设定为 4h，并对 405nm 位置的光密度值进行测定，同时将 各组的平均值进行计算，将各组所得平均 值检出空白对照平均值所形成的差值来对 Caspase-3 活性进行表示。 1.2.3 Western blot 及 RTpACETM Assay System 试 剂 盒： 美 国 Promega 公司生产。
1.2 实验检测
1.2.1 细胞凋亡检测 收 集 对 照 组（K562 细 胞） 及 APS 组
（通过 200mg/L 的 APS 进行 48h 诱导形成 的 K562 细胞）样本，并对细胞数量进行 计量。通过 195μL 的 Annexin V-FITC 结合 也将收集的细胞进行重悬，然后向其中加 入 5μL 的 Annexin V-FITC，进行 10min 的 避光孵育，离心 5min，1000r/min，去除上清。 并通过 190μL 的 Annexin V-FITC 再次对细 胞进行重悬，然后向其中加入 10μL 的染 色液（碘化丙啶），并于冰上对其进行避 光孵育，然后通过上流式细胞仪完成凋亡 细胞数量的计量。实验的过程中需要设置 3 个平行样本。 1.2.2 Caspase-3 活性测定
（1）FBS: 杭州四季青有限公司生产； （2）Trizol 试 剂、RPMI 培 养 基 以 及 100bp DNA Marker： 美 国 Invitrogen 公 司 生产； （3）Taq DNA 聚合酶、RT-PCR 试剂盒、 dNTPs：日本 TAKARA 公司生产； （4）Annexin V-FITC/PI: 碧 云 天 生 物 科技有限公司生产； （5） 化 学 发 光 试 剂 盒： 美 国 Santa Cruz 公司生产；
（1）Western blot 检测：将两组 K562 细胞总蛋白进行提取，同时进行定量，应
用 Western blot 法 进 行 检 测。 将 β-actin 当 做内参照。上样量设定为 100μg，Bcl-XL、 Bcl-2、Bax、IAP-1、Smac、β-actin 克隆抗 体的稀释度分别为 100 倍、150 倍、150 倍、 100 倍、150 倍。并通过软件对目的条带同 内参照条带之间的灰度比值进行分析。
1.4 统计学方法
此次研究在数据统计方面使用的软件 版本为 SPSS20.0，以（ ）表示计量资 料，采用 t 检验，以率（%）表示计数资料， 采用 X2 检验，当显性差异出现时，有统计 学意义，P<0.05。
（2）RT-PCR 检 测： 将 两 组 K562 细 胞总 RNA 进行提取，同时进行定量，完成 cDNA 第一条链的体外合成，并将 cDNA 当做模板来完成 PCR 反应，然后使用软件 对 PCR 扩增物的目的条带同内参照条带之 间的灰度比值进行分析。
1.3 观察指标
本次研究选择的观察指标为 Caspase-3、Bcl-XL、Bcl-2、IAP-1、Bax、 Smac mRNA 和蛋白。
1 一般资料以及主要方法
1.1 一般资料
1.1.1 细胞来源和培养 K562 细胞主要来源于本地细胞库，通
过使用 10%（体积分数）的胎牛血清（简 称 FBS）、100mg/L 链 霉 素 以 及 100U/ mL 青霉素所形成的 RPMI 培养基参与细 胞培养，并置于 5%（体积分数）的 CO2 培养箱之中进行细胞培养，培养箱温度为 37℃。 1.1.2 试剂
论著·论述
黄芪多糖对人红白血病 K562 细胞凋亡的影响
赵淑敏 菏泽医学专科学校 山东省菏泽市 274000
【摘 要】目的：探讨黄芪多糖（简称 APS）对人红白血病 K562 细胞凋亡产生的影响。方法：经流式细胞术来研究 APS 对人红白血病 K562 细胞凋亡产生的影响，而 APS 在 K562 细胞之中对 Caspase-3 产生的影响可通过 Caspase-3 活性 测定法进行检测；经 Western blot 以及 RT-PCR 对对照组（K562 细胞）及 APS 组（通过 200mg/L 的 APS 进行 48h 诱导 形成的 K562 细胞）之中的 Bcl-XL、Bcl-2、IAP-1、Bax、Smac mRNA 和蛋白进行表达。结果：APS 组细胞凋亡数量相较 于对照组更高，两组有显性差异，有统计学意义，P<0.05；APS 组 K562 细胞中的 Caspase-3 相较于对照组明显增加，但 IAP-1 及 Bcl-2 的 mRNA 和蛋白的表达都显示降低，而 Smac 以及 Bax 的 mRNA 和蛋白的表达均明显增加，两组有显性差异， 有统计学意义，P<0.05；两组在 Bcl-XL 的 mRNA 和蛋白方面的表达无显性差异，无统计学意义，P>0.05。结论：APS 对人 红白血病 K562 细胞进行诱导凋亡可能是通过对 Smac、Bax 上调以及对 IAP-1、Bcl-2 下调来实现的。
白血病是一种常见的恶性肿瘤，此症 使人类健康受到严重的威胁，白血病细胞 在生长的过程中具有凋亡受阻、增殖失控 以及分化障碍等特点 [1]。而 APS 属于黄芪 的活性成分之一，其具有抗应激、降血压、 降血糖、强心以及抗病毒等功效，相关研 究表明 [2]APS 能够有效抑制多种恶性肿瘤， 为了研究 APS 对人红白血病 K562 细胞凋 亡的影响，本次研究通过试验检测对 APS 组 和 对 照 组 中 的 Bcl-XL、Bcl-2、IAP-1、 Bax、Smac mRNA 和蛋白进行表达，目的 旨在研究 APS 对白血病治疗的依据，现做 如下报道。
将 APS 组 和 对 照 组 中 的 K562 细 胞 总蛋白进行提取，并对其进行定量。然后 进行 Caspase-3 活性测定，测定方法需严 格 按 照 说 明 书 规 定 操 作， 并 将 相 应 试 剂 依次加入到 96 孔板中使反应混合物得以 制备完成。两组各设 3 个复孔，并设置空 白对照孔（不加蛋白）。然后向每孔加入 2μL 的 AC-DEVA-PNA 底物，避光培育， 温度设定为 37℃，时间设定为 4h，并对 405nm 位置的光密度值进行测定，同时将 各组的平均值进行计算，将各组所得平均 值检出空白对照平均值所形成的差值来对 Caspase-3 活性进行表示。 1.2.3 Western blot 及 RTpACETM Assay System 试 剂 盒： 美 国 Promega 公司生产。
1.2 实验检测
1.2.1 细胞凋亡检测 收 集 对 照 组（K562 细 胞） 及 APS 组
（通过 200mg/L 的 APS 进行 48h 诱导形成 的 K562 细胞）样本，并对细胞数量进行 计量。通过 195μL 的 Annexin V-FITC 结合 也将收集的细胞进行重悬，然后向其中加 入 5μL 的 Annexin V-FITC，进行 10min 的 避光孵育，离心 5min，1000r/min，去除上清。 并通过 190μL 的 Annexin V-FITC 再次对细 胞进行重悬，然后向其中加入 10μL 的染 色液（碘化丙啶），并于冰上对其进行避 光孵育，然后通过上流式细胞仪完成凋亡 细胞数量的计量。实验的过程中需要设置 3 个平行样本。 1.2.2 Caspase-3 活性测定
（1）FBS: 杭州四季青有限公司生产； （2）Trizol 试 剂、RPMI 培 养 基 以 及 100bp DNA Marker： 美 国 Invitrogen 公 司 生产； （3）Taq DNA 聚合酶、RT-PCR 试剂盒、 dNTPs：日本 TAKARA 公司生产； （4）Annexin V-FITC/PI: 碧 云 天 生 物 科技有限公司生产； （5） 化 学 发 光 试 剂 盒： 美 国 Santa Cruz 公司生产；
（1）Western blot 检测：将两组 K562 细胞总蛋白进行提取，同时进行定量，应
用 Western blot 法 进 行 检 测。 将 β-actin 当 做内参照。上样量设定为 100μg，Bcl-XL、 Bcl-2、Bax、IAP-1、Smac、β-actin 克隆抗 体的稀释度分别为 100 倍、150 倍、150 倍、 100 倍、150 倍。并通过软件对目的条带同 内参照条带之间的灰度比值进行分析。
1.4 统计学方法
此次研究在数据统计方面使用的软件 版本为 SPSS20.0，以（ ）表示计量资 料，采用 t 检验，以率（%）表示计数资料， 采用 X2 检验，当显性差异出现时，有统计 学意义，P<0.05。
（2）RT-PCR 检 测： 将 两 组 K562 细 胞总 RNA 进行提取，同时进行定量，完成 cDNA 第一条链的体外合成，并将 cDNA 当做模板来完成 PCR 反应，然后使用软件 对 PCR 扩增物的目的条带同内参照条带之 间的灰度比值进行分析。
1.3 观察指标
本次研究选择的观察指标为 Caspase-3、Bcl-XL、Bcl-2、IAP-1、Bax、 Smac mRNA 和蛋白。
1 一般资料以及主要方法
1.1 一般资料
1.1.1 细胞来源和培养 K562 细胞主要来源于本地细胞库，通
过使用 10%（体积分数）的胎牛血清（简 称 FBS）、100mg/L 链 霉 素 以 及 100U/ mL 青霉素所形成的 RPMI 培养基参与细 胞培养，并置于 5%（体积分数）的 CO2 培养箱之中进行细胞培养，培养箱温度为 37℃。 1.1.2 试剂
论著·论述
黄芪多糖对人红白血病 K562 细胞凋亡的影响
赵淑敏 菏泽医学专科学校 山东省菏泽市 274000
【摘 要】目的：探讨黄芪多糖（简称 APS）对人红白血病 K562 细胞凋亡产生的影响。方法：经流式细胞术来研究 APS 对人红白血病 K562 细胞凋亡产生的影响，而 APS 在 K562 细胞之中对 Caspase-3 产生的影响可通过 Caspase-3 活性 测定法进行检测；经 Western blot 以及 RT-PCR 对对照组（K562 细胞）及 APS 组（通过 200mg/L 的 APS 进行 48h 诱导 形成的 K562 细胞）之中的 Bcl-XL、Bcl-2、IAP-1、Bax、Smac mRNA 和蛋白进行表达。结果：APS 组细胞凋亡数量相较 于对照组更高，两组有显性差异，有统计学意义，P<0.05；APS 组 K562 细胞中的 Caspase-3 相较于对照组明显增加，但 IAP-1 及 Bcl-2 的 mRNA 和蛋白的表达都显示降低，而 Smac 以及 Bax 的 mRNA 和蛋白的表达均明显增加，两组有显性差异， 有统计学意义，P<0.05；两组在 Bcl-XL 的 mRNA 和蛋白方面的表达无显性差异，无统计学意义，P>0.05。结论：APS 对人 红白血病 K562 细胞进行诱导凋亡可能是通过对 Smac、Bax 上调以及对 IAP-1、Bcl-2 下调来实现的。