流式细胞术补偿原理

流式细胞术补偿原理
在流式细胞术中，常用的染料是荧光染料，它们可以结合到细胞表面
的分子上或者进入细胞内部。

然后，荧光标记的细胞通过流式细胞仪连续
流过一个细胞流，被激光器激发后发出荧光。

流式细胞仪可以同时检测多
个不同波长的荧光信号，从而可以对不同荧光标记的细胞进行鉴定和分析。

然而，由于不同荧光染料的荧光光谱有重叠的部分，比如激发光源和
发射波长之间的重叠，会使得信号之间相互干扰，从而给正确的结果带来
困难。

为了消除这种干扰效应，需要进行补偿。

补偿的目的是将所有的荧光信号重新调整到正确的波长，以使得不同
波长的信号不会干扰或者叠加在一起。

补偿的原理可以通过以下步骤进行
解释：
1. 确定细胞表达的荧光标记物及其荧光信号波长，如使用荧光标记
的抗体来表达并鉴定特定细胞表面分子。

每个荧光染料都会有一个特定的
波长范围，例如激发波长（excitation wavelength）和发射波长（emission wavelength）。

2.测定每个荧光染料的单独标记细胞的荧光，即只用一个荧光染料来
标记细胞样品，并分别进行流式细胞术测定。

这样可以确定每个染料在不
同波长下的荧光强度。

3.检测由多种荧光染料标记的细胞样品的各种荧光信号重叠情况。

将
不同荧光染料标记的细胞样品混合在一起，并同时进行流式细胞术测定。

观察各个荧光信号的强度，并发现是否存在信号之间的重叠。

4.补偿的步骤是根据单独标记的细胞样品的荧光信号和混合标记的细胞样品的荧光信号重叠情况，进行计算和调整。

根据细胞样品混合的实验结果，可以利用计算公式或者自动化计算软件来进行补偿。

补偿的结果是通过调整各个荧光信号的权重，重新分配各个波长信号的荧光强度。

补偿会根据标记的染料之间的特异性重叠情况和强度差异而不同。

一些情况下，可以通过选择不同的染料来避免重叠或者使用荧光免疫组化等方法。

如果无法避免荧光重叠，补偿是不可或缺的步骤。

总而言之，流式细胞术补偿原理是通过对单独标记和混合标记的细胞样品的荧光信号进行测定和比较，采用计算或者计算软件进行调整，以消除不同荧光染料之间的重叠效应。

补偿有效地提高了流式细胞术的准确性和可靠性，为细胞分析提供了更多的信息。