实验六 植物组织基因组DNA的提取与分析(SDS法)

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五、实验结果与分析
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将凝胶图片打印出 来，需要说明： 1、小组点样孔号； 2、DNA质量分析。
图1 植物组织基因组DNA提取结果
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六、注意事项
（1）叶片磨得越细越好。
（2）移液器的使用。
（3）由于植物细胞中含有大量的DNA酶，因此， 除在抽提液中加入EDTA抑制酶的活性外，第一 步（研磨）的操作应迅速。
实验六 植物组织中DNA的提取与分析 （SDS法）
温馨提示：实验中-20℃冰浴时，请将样品放
入6309室冰箱冷冻层。
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一、实验目的
（1）掌握植物组织中DNA提取的原理和方法。 （2）掌握DNA的琼脂糖凝胶电泳检测方法
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二、实验原理
高浓度的SDS在EDTA存在下裂解细胞，使染色体离析
，蛋白质变性，释放出核酸，PVP与多酚类物质结合形成复
加入600ul氯仿:异戊醇，、DNA电泳检测
（1）1%琼脂糖凝胶：称取0.3g琼脂糖，加入30mL 1×TAE
缓冲液，在微波炉中加热，反复加热、振荡 2-3 次，使琼 脂糖充分融化。待凝胶冷却至60℃左右，倒入插入梳子的
凝胶板中（避免产生气泡），让凝胶自然凝固。
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四、实验步骤
1、DNA的提取
称取30mg植物幼苗放入研钵中 加入300ul抽提缓冲液+75ul无水乙醇 +20ulβ巯基乙醇，充分研磨 匀浆液全部转入1.5ml离 心管中 用200ul抽提缓冲液冲洗研钵 ，然后倒入离心管中 12000r/min离心10min 上层水相移入另一新离心管 加600ul预冷的异丙醇，混 匀后-20℃静止30min 12000r/min离心10min 弃上清，沉淀用600ul 70%乙醇漂洗 12000r/min离心10min 弃上清，加20μLTE溶解 沉淀，即得DNA溶液
（ 2）待凝胶凝固后，小心拔出梳子，避免前后左右摇晃， 以免破坏胶面及加样孔，小心将凝胶和胶床放入电泳槽中， 加样孔靠近阴极的一端。
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四、实验步骤
2、DNA电泳检测
（ 3）上样电泳：将 20μLDNA 样品溶液和 5μL上样缓冲液混 匀后，上样，100V稳压电泳检查，根据指示剂迁移的位置， 判断是否中止电泳。切断电源后，再取出凝胶。 （4）照胶、拍照：将凝胶泡在EB溶液（注意：EB溶液为剧 毒物，需带上一次性手套拿取凝胶）中10min左右，进入暗 室，使用凝胶成像系统照胶并拍照。
合物，离心除去沉淀后，上清液中的 DNA用氯仿等抽提， 反复抽提后用异丙醇沉淀水相中的DNA。
三、仪器和试剂
1、仪器： 高速离心机、水平电泳槽、电泳仪。
2、试剂：
抽提缓冲液（50mM Tris-HCl pH8.0、0.25M NaCl、20mM EDTA、0.5%SDS、2%PVP）、β-巯基 乙醇、无水乙醇、氯仿:异戊醇（24:1）、异丙醇、 70%乙醇、TE缓冲液、上样缓冲液（0.5%溴酚蓝 +40%蔗糖）、1×TAE电泳缓冲液。
七、思考题
1、在DNA抽提过程中造成DNA分子断裂的主 要因素有哪些？
2、本实验中所用到下列试剂（SDS、氯仿、异
丙醇、70%乙醇）的作用各是什么?
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