细胞鞭毛染色法及活菌活动性观察_山东大学
山大微生物报告 芽孢染色
实验四：鞭毛染色法及活菌运动性观察姓名:戈奕文学号：20100514022系别：2010生物基地组别：周一下午第一组试验日期：2012年10月15日同组成员：孟亚平宋宁褚鹏程一、实验目的及意义1、学习并掌握细菌鞭毛染色法（AgNO3）;2、学习压滴法观察细菌运动性。
二、实验原理1、压滴法观察活菌运动的基本原理：鞭毛的功能相当于船的螺浆，在水中可以高速旋转从而推动菌体前行，因此水体环境才是鞭毛细菌自由驰骋的天地。
鞭毛的旋转速度是非常快的，每秒钟旋转两百到一千多转，比一般的电动机要快得多。
鞭毛的高速旋转是由其附着于菌体上的基体旋转带动的，基体实际上就是鞭毛的基部，它由一个中轴套上两个或四个环构成，镶嵌固定在细菌的体表（细胞膜和细胞壁）中，在科学家的眼中，基体简直就是一台精巧的纳米机械—分子马达，但这个马达并不是靠电流驱动，而是用伴随着细胞膜两侧质子梯度的消失产生的生物能量ATP来驱动，鞭毛马达还可以转向（从反时针旋转变为顺时针旋转）从而使菌体发生翻滚进而改变细菌的运动方向，事实上细菌在游动时也并不是单纯地一直朝前游，而是伴随着不时的随机翻滚转向，但从表观上看仍表现为细菌的前行。
细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。
若想观察的更加清晰，可以滴加稀释美兰等染液进行染色，注意不要染色过重，以免影响观察，有鞭毛的细菌运动活泼，且不同时向一个方向运动，而无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。
这样便可以在光学显微镜下观察到细菌的运动。
2、细菌鞭毛染色法的基本原理：简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。
鞭毛是细菌的纤细丝状的“运动器官”。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才可以直接观察到。
若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。
首先用媒染剂（如单宁酸和明矾钾）处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（Gray氏染色法）、碱性复品红（Leifson氏染色法）、硝酸银（West氏染色法）或结晶紫（Difco氏染色法）进行染色。
鞭毛的实验报告
1. 学习并掌握鞭毛染色法。
2. 观察鞭毛的形态和分布。
3. 了解鞭毛在细菌运动中的作用。
二、实验原理鞭毛是细菌的一种特殊细胞器，由鞭毛蛋白组成，具有运动功能。
鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，通过染色剂将鞭毛染色，使其在显微镜下清晰可见。
本实验采用鞭毛染色法观察细菌鞭毛的形态和分布，并探讨其与细菌运动的关系。
三、实验材料1. 细菌培养物：大肠杆菌、枯草杆菌、葡萄球菌等。
2. 染色剂：鞭毛染色液（如革兰氏染液、卡红染液等）。
3. 实验器材：显微镜、载玻片、盖玻片、镊子、滴管、酒精灯等。
四、实验步骤1. 取适量细菌培养物，用无菌生理盐水制成菌悬液。
2. 将菌悬液滴于载玻片上，用无菌镊子轻轻涂布均匀。
3. 待菌膜干燥后，用酒精灯轻微加热固定。
4. 将载玻片浸入鞭毛染色液中，染色时间为10-15分钟。
5. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的染色液。
6. 将载玻片浸入盐酸酒精溶液中，脱色时间为1-2分钟。
7. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的脱色液。
8. 将载玻片浸入复染液（如复红染液）中，复染时间为1-2分钟。
9. 用蒸馏水冲洗载玻片，去除多余的复染液。
10. 将载玻片用吸水纸吸干，盖上盖玻片。
11. 在显微镜下观察鞭毛的形态和分布。
1. 大肠杆菌：观察到细菌具有明显的鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体一端。
2. 枯草杆菌：观察到细菌具有鞭毛，鞭毛呈细长状，着生于菌体两端。
3. 葡萄球菌：观察到细菌无鞭毛。
六、实验分析1. 通过实验观察，大肠杆菌和枯草杆菌均具有鞭毛，且鞭毛形态和分布不同。
这表明鞭毛在细菌运动中具有重要作用。
2. 葡萄球菌无鞭毛，这可能是其运动能力较弱的原因之一。
3. 鞭毛染色法是一种常用的微生物学实验技术，能够清晰观察到鞭毛的形态和分布，为研究细菌的运动和分类提供重要依据。
七、实验总结本实验通过鞭毛染色法观察了细菌鞭毛的形态和分布，了解了鞭毛在细菌运动中的作用。
实验过程中，我们掌握了鞭毛染色法的操作步骤，提高了实验技能。
实验七 细菌鞭毛染色和运动性观察(半固体穿刺法)
精品课件
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
问题与建议
对实验内容不明确 多进行基本技能的训练及实验指导 启发式教学（荚膜/芽孢染色为例） 鼓励交流与分享（成功/失败） 按要求准确操作是实验成功的关键
精品课件
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
实验七、细菌鞭毛染色和运 动性观察（半固体 穿刺法）
精品课件
暗视野显微镜或相差显微镜观察
精品课件
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
➢了解细菌鞭毛染色的应用
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
单端鞭毛 端生丛毛
两端生鞭毛 精品课周件 生鞭毛
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
三、实验材料
1、菌种：枯草杆菌（Bacillus subtilis）（连续活
精品课件
实验七、细菌的鞭毛染色和运动性观察
（二）银染法
1、菌悬液的制备。沿试管壁流入直至快接近培养基 斜面的顶部，静置10min，同时可双手搓动试管。 2、制片：用移液枪取约100ul菌液于载玻片的一端， 顺着倾斜的玻片流下，自然干燥。 3、染色：滴加过滤的染液Ａ覆盖8分钟，用Ｂ液冲 洗去Ａ液，再用Ｂ液覆盖染色，缓缓加热至冒气， 维持约0．5秒(加热时注意勿使出现干涸面) 在菌体 多的部位可见深褐色至黑色(共约2分钟) ，停止加 热，用水冲净，干后镜检。 4、镜检，菌体及鞭毛为深褐色到黑色。
化3-4代，每10-12小时接种一次），金黄色葡萄
球菌（Staphyloccocus aureus）
2、材料与试剂：载玻片（非常洁净）等 清洗酸泡水洗蒸溜水泡酒精泡
染液A（单宁酸，FeCl3，福尔马林， NaOH）
染液B（AgNO3） 3、培养基：半固体培养基（0.5%琼脂）
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本文部分内容来自网络整理，本司不为其真实性负责，如有异议或侵权请及时联系，本司将立即删除！== 本文为word格式，下载后可方便编辑和修改！ ==鞭毛染色实验报告篇一：鞭毛染色实验报告年月日山东大学实验报告 201X 年10月26 日姓名：年级同组科目微生物题目观察鞭毛染色和运动201X01140018一．实验目的??? 学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征巩固显微镜操作技术及无菌操作技术学习压滴法观察细菌运动性（活细胞）二．实验原理? 细菌鞭毛染色法的基本原理简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。
鞭毛是细菌的纤细丝状的运动器。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才可以直接观察到。
若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。
首先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（Gray氏染色法）、碱性复品红（Leifson氏染色法）、硝酸银（West氏染色法）或结晶紫（Difco氏染色法）进行染色。
? 压滴法观察活菌运动的基本原理鞭毛的功能相当于船的螺浆，在水中可以高速旋转从而推动菌体前行，因此水体环境才是鞭毛细菌自由驰骋的天地。
鞭毛的旋转速度是非常快的，每秒钟旋转两百到一千多转，比一般的电动机要快得多。
鞭毛的高速旋转是由其附着于菌体上的基体旋转带动的，基体实际上就是鞭毛的基部，它由一个中轴套上两个或四个环构成，镶嵌固定在细菌的体表（细胞膜和细胞壁）中，在科学家的眼中，基体简直就是一台精巧的纳米机械—分子马达，但这个马达并不是靠电流驱动，而是用伴随着细胞膜两侧质子梯度的消失产生的生物能量ATP来驱动，鞭毛马达还可以转向（从反时针旋转变为顺时针旋转）从而使菌体发生翻滚进而改变细菌的运动方向，事实上细菌在游动时也并不是单纯地一直朝前游，而是伴随着不时的随机翻滚转向，但从表观上看仍表现为细菌的前行。
细菌鞭毛染色及运动性鉴定
细菌鞭毛染色及运动性鉴定摘要：用稀释美蓝对菌体进行染色后在油镜下对菌体的运动性进行观察、鉴定和描述。
鞭毛是细菌的运动器官，用硝酸银染液A液B液对菌体的鞭毛进行染色，并在光学显微镜下对菌体鞭毛的形态特征和着生部位进行观察。
关键词硝酸银染色法压滴法微生物制片镜检前言鞭毛是细菌的运动器官，具有鞭毛的不同的细菌其鞭毛的粗细、长短、着生部位不同，是微生物的一项重要形态特征。
除了少数细菌的鞭毛能够较轻易的观察出来外，一般其他的细菌由于鞭毛微小且透明，一般不能在光学显微镜直接观察到。
故要用光学显微镜对细菌的鞭毛进行观察时，要对细菌的鞭毛进行染色处理使鞭毛直径加粗并与背景色形成对比。
通过硝酸银法对细菌鞭毛进行染色观察，能区分细菌的类型，对细菌的结构进行初步了解，在细菌的分类及鉴定上具有一定的重要意义。
材料与方法1.1 材料1.1.1标准菌株枯草芽孢杆菌铜绿假单胞菌1.1．2溶液和试剂蒸馏水 95%乙醇香柏油 0.01%美蓝硝酸银染液A液B液1.1.3仪器及其他用品载玻片盖玻片镊子光学显微镜胶头滴管酒精灯接种环1.2方法1.2.1压滴法观察细菌的运动性1）涂片1．将载玻片用自然水洗干净后，用纸吸除多余水分。
2．在载玻片滴取半滴蒸馏水到载玻片上。
3．在酒精灯形成的无菌区域内用接种环在铜绿假单胞菌的琼脂斜面上小心地（防止因动作过大而使鞭毛从菌体上脱落）挑取适量的菌苔。
4．将沾有菌苔的接种环置于载玻片中的滴有蒸馏水的区域进行涂抹，使菌悬浮在蒸馏水中。
2）染色在涂有菌体的部分滴加一滴稀释美蓝使其覆盖整个悬浮液。
3）盖盖玻片1．用镊子取出一片盖玻片并将盖玻片放在菌体悬浮液的左侧使盖玻片恰好与悬浮液相接触。
2．将盖玻片用镊子轻轻向左侧移动同时慢慢地盖上盖玻片（注意不要让空气进入片中）。
4）快速镜检在观察时应先用高倍镜观察，看不清楚时再用低倍镜观察。
在观察时应采用暗视野，并要以较快的速度对菌体进行观察以免菌体过早死亡。
主要介绍油镜的使用方法：1．将染色好的载玻片置于显微镜下的载物台上，将对准载物台油镜，调节粗调将载物台合适的高度。
实验四_细菌的鞭毛染色
鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义
鞭毛的结构及其运动机制
基体
L环
P环
S环 M环ຫໍສະໝຸດ 鞭毛钩 鞭毛丝观察和判断细菌鞭毛的方法 电子显微镜直接观察
鞭毛长度：15～20μm；直径：0.01～0.02μm
光学显微镜下观察：鞭毛染色和暗视野显微镜
根据培养特征判断：半固体穿刺、菌落（菌苔）形态
实验要求和步骤
细菌的鞭毛染色实验要求了解细菌鞭毛染色的应用鞭毛的有无和着生方式具有十分重要的分类学意义单端鞭毛周生鞭毛鞭毛的结构及其运动机制基体鞭毛钩鞭毛丝观察和判断细菌鞭毛的方法电子显微镜直接观察鞭毛长度
细菌的鞭毛染色
实验要求
• 掌握细菌鞭毛染色的一般过程 • 了解细菌鞭毛染色的应用
单端鞭毛
端生丛毛
两 端 生 鞭 毛 周生鞭毛
细菌的运动性观察
细菌的运动性观察（一）实验原理细菌是否具有鞭毛是细菌分类鉴定的重要特征之一。
采用鞭毛染色法虽能观察到鞭毛的形态、着生位置和数目，但此法既费时又麻烦。
如果仅须了解某菌是否有鞭毛，可采用悬滴法或水封片法（即压滴法）直接在光学显微镜下检查活细菌是否具有运动能力，以此来判断细菌是否有鞭毛。
此法较快速、简便。
悬滴法就是将菌液滴加在洁净的盖玻片中央，在其周边涂上凡士林，然后将它倒盖在有凹槽的载玻片中央，即可放置在普通光学显微镜下观察。
水封片法是将菌液滴在普通的载玻片上，然后盖上盖玻片，置显微镜下观察。
大多数球菌不生鞭毛，杆菌中有的有鞭毛有的无鞭毛，弧菌和螺菌几乎都有鞭毛。
有鞭毛的细菌在幼龄时具有较强的运动力，衰老的细胞鞭毛易脱落，故观察时宜选用幼龄菌体。
1.制备菌液：在幼龄菌斜面上，滴加3-4mL无菌水，制成轻度混浊的菌悬液。
2.涂凡士林：取洁净无油的盖玻片1块，在其四周涂少量的凡士林。
3.滴加菌液：加1滴菌液于盖玻片的中央，并用记号笔在菌液的边缘做一记号，以便在显微镜观察时，易于寻找菌液的位置。
4.盖凹玻片将凹玻片的凹槽对准盖玻片中央的菌液，并轻轻地盖在盖玻片上，使两者粘在一起，然后翻转凹玻片，使菌液正好悬在凹槽的中央，再用铅笔或火柴棒轻压盖玻片，使玻片四周边缘闭合，以防菌液干燥。
若制水封片，在载玻片上滴加一滴菌液，盖上盖玻片后即可置显微镜下观察。
5.镜检先用低倍镜找到标记，再稍微移动凹玻片即可找到菌滴的边缘，然后将菌液移到视野中央换高倍镜观察。
由于菌体是透明的，镜检时可适当缩小光圈或降低聚光器以增大反差，便于观察。
镜检时要仔细辨别是细菌的运动还是分子运动（即布朗运动），前者在视野下可见细菌自一处游动至他处，而后者仅在原处左右摆动。
细菌的运动速度依菌种不同而异，应仔细观察。
结果：有鞭毛的枯草杆菌和假单胞菌可看到活跃的运动，而无鞭毛的金黄色葡萄球菌不运动。
文案编辑词条B 添加义项?文案，原指放书的桌子，后来指在桌子上写字的人。
2013实验四细菌鞭毛观察法及细菌运动性观察 (2)
四、操作步骤
1、鞭毛染色：
1）制片：在新制载玻片上抹一薄薄的水层，在菌 苔边缘取菌，轻轻在水层中轻轻点几下；待其自然 干燥； 2）A液染色：3--5分钟； 3）缓流水洗：让水流平缓流下，浸洗多次，将残 留的A液洗尽； 4）B液染色：30--60秒、微热 5）缓流水洗，自然干燥； 6）镜检（油镜）：菌体深褐色，鞭毛淡褐色。
染色原理是在染色前先用媒染剂处理，使它沉积在鞭毛上， 使鞭毛直径加粗，然后再用硝酸银染色，因而可以在显微镜下 观察。 在显微镜下观察细菌的运动性，也可以初步判断细菌是否 有鞭毛。常用压滴法和悬滴法。
三、实验材料及用品
1、菌种：苏云金芽孢杆菌（半固体培养基平 板）、白色葡萄球菌（斜面） 2、染色剂：A液（媒染剂）、 B液（硝酸银鞭毛染色液）。 3、其他：载玻片、盖玻片、无菌水、 显微镜、双层瓶、镜头纸、接种环等。
2、运动性的观察 （1）、压滴法 a 、制片：滴无菌水，取菌，盖上盖玻片； b 、镜检（高倍） （2）、悬滴法 a 、加菌液于盖玻片，盖于凹玻片上； b 、镜检（高倍）
五、实验报告
1、结果：你所观察的2种细菌是否都具有鞭毛？ 是否都能 运动？鞭毛----运动有无相关性？绘图 表示有鞭毛细菌的形态特征 2、思考题：用鞭毛染色法准确鉴定一株细菌是 否具有鞭毛， 要注意那些环节？
实验四、细菌鞭毛染色法 及运动性观察
一、目的要求：
1、学习并初步掌握鞭毛染色法，观察 细菌鞭毛的形态特征。 2、学习用压滴法和悬滴法观察细菌的 运动性。
二、基本原理
鞭毛毛 着生的位置和数目是细菌的一项重要的形态特征。细菌的鞭毛 直径通常为0.01-0.02微米，为超显微结构，不能用光学显微 镜直接观察，必须对鞭毛染色。
微生物实验手册
微生物降解污染物
微生物降解污染物
生物质利用
目前，世界各国都在致力于开发高效、无污染的生物质能 源利用技术，预计到2020年，全球总能耗将有40％以上来 自生物质能源。我国已颁发《可再生能源法》，生物质能 源是其中最重要的可再生能源之一。所获取的能源之表现 形式有热能、电能以及各种生物燃料如生物柴油、生物乙 醇、沼气、生物氢等。 纤维素降解菌相关研究。
基本知识学习与基本技能训练 ——培养基制备
根据微生物的种类和实验目的不同，培养基的类 别如下：
按成分的不同：天然培养基 、合成培养基和半合 成培养基 。 按培养基的物理状态分：固体培养基、半固体培 养基和液体培养基。
按培养基的用途分：基础培养基 、营养培养基 （加富培养基）、鉴别培养基和选择培养基 。
沙土管保藏法：是载体保藏法的一种。将培养好的微生物细胞或孢子用无
菌水制成悬浮液，注入灭菌的沙土管中混合均匀，或直接将成熟孢子刮下接种 于灭菌的沙土管中，使微生物细胞或孢子吸附在沙土载体上，将管中水分抽干 后熔封管口或置干燥器中于4～6℃或室温进行保存的一种菌种保藏方法。
冷冻干燥：将微生物冷冻，在减压下利用升华作用除去水分，使细胞的生理
基本知识学习与基本技能训练
——划线分离与纯培养技术
基本知识学习与基本技能训练
——划线分离与纯培养技术
平板划线分离的方法 1.斜线法 2.曲线法 3.方格法 4.放射法 5.四格法
基本知识学习与基本技能训练
——菌落形态特征认识及分类
基本知识学习与基本技能训练
——菌种保藏（P266）
定期移植法：又称传代培养保藏法，包括斜面培养、穿刺培养、液体培养
2022年山东大学生物技术专业《微生物学》期末试卷B(有答案)
2022年山东大学生物技术专业《微生物学》期末试卷B(有答案）一、填空题1、支原体因缺乏细胞壁，故出现一系列其他特征，包括______、______、______和______等。
2、病毒的非增殖性感染有______、______和______3种类型。
3、在豆血红蛋白分子中，其蛋白质部分由______所触发，再由______ 的基因进行编码和合成；而血红素部分则由______所触发，再由______ 基因进行编码和合成。
4、化能有机营养型微生物的能源是______，氢供体是______，基本碳源是______，其代表性微生物是______和______等。
5、霉菌产有性孢子、结构复杂的子实体称为______，其外形有______、______和______三种。
6、人类对微生物的发现和认识，比对动、植物晚得多，其原因是微生物具有______、______、______和______四个特点。
7、为获得微生物的高密度生长，常可采用以下几个措施：① ______，② ______，③______，④ ______等。
8、在自然界中存在许多极端环境，并进化出与这类环境相适应的各种极端微生物，如______、______、______、______、______、______和______等。
9、Avery和他的合作者分别用降解DNA、RNA和蛋白质的酶作用于有毒的S型细胞抽提物，然后分别与______混合，结果发现，只有DNA被酶解而遭到破坏的抽提物无转化活性，说明DNA是转化所必须的转化因子。
10、巨噬细胞在非特异性和特异性免疫中主要有以下四个作用： ______，______，______和______。
二、判断题11、革兰氏染色法是细胞质染色，而不是细胞壁染色。
（）12、氨基酸在碳源缺乏时可被微生物用作碳源物质，但不能提供能源。
（）13、在微生物代谢调控中存在着两种主要的机制，其一为“粗调”，借以调节现成酶分子的催化能力，另一为“细调”，借以调节酶合成量的多寡。
细菌的两种鞭毛染色法
细菌的两种鞭毛染色法（一）实验目的：学习细菌的鞭毛染色法（二）实验原理：细菌的鞭毛极细，直径一般为10—20nm，只有用电子显微镜才能观察到。
但是，如采用特殊的染色法，则在普通光学显微镜下也能看到它。
鞭毛染色方法很多，但其基本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理，让它沉积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。
常用的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
现推荐以下两种染色法。
（三）实验器材1.活材料：培养12-16h的水稻黄单胞菌（Xanthomonas oryzae），粘质赛氏杆菌（Serratia marcescens）或假单细胞菌（Pseudomonas sp.）斜面菌种。
2.染色液和试剂：硝酸银染色液、Leifson染色液、香柏油、二甲苯。
3.器材：载玻片、擦镜纸、吸水纸、记号笔、玻片搁架、镊子、接种环，显微镜。
（四）实验方法1.镀银法染色（1）清洗玻片选择光滑无裂痕的玻片，最好选用新的。
为了避免玻片相互重叠，应将玻片插在专用金属架上，然后将玻片置洗衣粉过滤液中（洗衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒），煮沸20min。
取出稍冷后用自来水冲洗、晾干，再放入浓洗液中浸泡5—6天，使用前取出玻片，用自来水冲去残酸，再用蒸馏水洗。
将水沥干后，放入95%乙醇中脱水。
（2）菌液的制备及制片：菌龄较老的细菌容易失落鞭毛，所以在染色前应将待染细菌在新配制的牛肉膏蛋白胨培养基斜面上（培养基表面湿润，斜面基部含有冷凝水）连续移接3-5代，以增强细菌的运动力。
最后一代菌种放恒温箱中培养12—16h。
然后，用接种环挑取斜面与冷凝水交接处的菌液数环，移至盛有1—2mL无菌水的试管中，使菌液呈轻度混浊。
将该试管放在37℃恒温箱中静置10min（放置时间不宜太长，否则鞭毛会脱落），让幼龄菌的鞭毛松展开。
然后，吸取少量菌液滴在洁净玻片的一端，立即将玻片倾斜，使菌液缓慢地流向另一端，用吸水纸吸去多余的菌液。
涂片放空气中自然干燥。
实验三 鞭毛染色法及活细菌运动性的观察
一、实验目的：
1.学习细菌的鞭毛染色法,观察细菌鞭毛的 形态特征; 2.学习用悬滴法观察细菌的运动性.
二、实验原理：
细菌的鞭毛极细，直径一般为10—20nm，只有用电子 显微镜才能观察到。但是，如采用特殊的染色法，则在 普通光学显微镜下也能看到它。鞭毛染色方法很多，但 其基本原理相同，即在染色前先用媒染剂处理，让它沉 积在鞭毛上，使鞭毛直径加粗，然后再进行染色。常用 的媒染剂由丹宁酸和氯化高铁或钾明矾等配制而成。
三、实验器材
1. 菌种：培养12-16h小时的普通变形杆菌。 2. 标本片：周鞭毛（伤寒杆菌） 3. 试剂：硝酸银鞭毛染色液、生理盐水、蒸馏水、 香柏油、二甲苯。 4. 器材：凹载玻片、盖玻片、镊子、擦镜纸、吸 水纸、接种环，显微镜等。
四、实验方法
（一）鞭毛染色 硝酸银染色法：
1.清洗玻片：选择光滑无裂痕的玻片，最好选用 新的。然后将玻片置洗衣粉过滤液中 （洗衣粉煮沸后用滤纸过滤，以除去粗颗粒）， 煮沸20min。取出稍冷后用自来水冲洗、晾 干，再放入浓洗液中浸泡5—6天，使用前取出 玻片，用自来水冲去残酸，再用蒸馏水洗。将 水沥干后，放入95%乙醇中脱水。
下周实验
四大类微生物菌落及个体形态观察
本次实验课结束
请确保油镜头擦拭干净！ 请第三组同学留下值日
注意事项
①取菌要取菌落边缘的幼龄菌体。 ②取菌后的接种环在载片上的蒸馏水中轻轻沾几下即可， 不要用力太猛，更不能用接种环大幅度涂开；否则鞭毛 易脱落，造成染色失败。 ③鞭毛染色的玻片只能自然干燥，不能用热风吹干，不 能热固定，这是由于加热后菌体易变形，鞭毛易脱落， 影响观察。 ④A、 B染液染完后用蒸馏水（自来水效果差）冲洗时 一定要充分，背景很脏，鞭毛不易被观察到，影响实验 效果。 ⑤加B染液后，将玻片稍加热（但不能太热，更不能沸 腾或蒸干）使其微冒蒸汽，染色效果较不加热为好。 染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。
鞭毛
细菌鞭毛染色及活菌运动观察一、目的要求：1、学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征2、巩固显微镜操作技术及无菌操作技术3、学习压滴法观察细菌（活细胞）运动性二、实验器材：1.菌种来源枯草芽孢杆菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物，铜绿假单胞菌1-2d牛肉膏蛋白胨琼脂斜面培养物2.溶液和试剂稀释美蓝溶液，质量分数为95%的乙醇水溶液，蒸馏水，硝酸银染液A液和B液3.仪器和其它用品酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，小试管，烧杯，试管架，载玻片夹子，滴管和滤纸三、基本原理：1.压滴法观察活菌运动鞭毛是细菌的运动器官，在水中可以高速旋转推动菌体前行，细菌的游动不是单纯地一直朝前游，而是伴随着不时的随机翻滚转向，但从表观上看仍表现为细菌的前行。
细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。
若想观察的更加清晰，可以滴加稀释美蓝等染液进行染色，注意不要染色过重，以免影响观察，有鞭毛的细菌运动活泼，且不同时向一个方向运动，而无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。
这样便可以在光学显微镜下观察到细菌的运动。
2.细菌鞭毛染色法简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛、芽孢和荚膜，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。
鞭毛是细菌的纤细丝状的“器官”。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10-30nm，只有用电镜才可以直接观察到。
若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。
首先用媒染剂（如单宁酸或明矾钾）处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（Gray氏染色法）、碱性复品红（Leifson氏染色法）、硝酸银（West氏染色法）或结晶紫（Difco氏染色法）进行染色。
四、实验步骤：（一）压滴法观察活细菌1.洗片用自来水和去污粉将载玻片清洗干净，然后用蒸馏水冲洗2.涂片在载玻片上滴加少量蒸馏水，采用无菌操作将所要观察的菌种接种到水滴中蒸馏水稍显浑浊即可。
细菌鞭毛染色的方法
细菌鞭毛染色的方法细菌鞭毛染色是一种常用的细菌形态鉴定方法，可以帮助微生物学家观察和描述细菌鞭毛结构，从而推测其遗传特性和功能。
下面将详细介绍三种常用的细菌鞭毛染色方法：简单抗酸杆菌染色法、尾鞭毛染色法和菲尔维改良法。
一、简单抗酸杆菌染色法简单抗酸杆菌染色法是一种鉴别分枝杆菌（Mycobacterium）属中患者血液、尿液、痰、脓液等标本中的分枝杆菌。
这种染色方法利用酸性染料石蜡红，可以使抗酸杆菌的鞭毛显色，增强观察的准确性。
步骤：1.取血液、尿液、痰等标本制备涂片，将标本涂抹在玻璃片上，晾干。
2.用火焰消毒的钳子将玻璃片的涂片轻轻通火，将染料石蜡红涂滴于涂片上，让其覆盖标本。
3.将玻璃片先静止1-2分钟，然后用水冲洗掉过多的染料。
4.用20%硝酸酒精对涂片进行脱色，可观察到分枝杆菌的鞭毛呈红色。
5.再用水冲洗涂片，使其完全清洁。
6.取一滴一滴草绿染料滴在涂片上，均匀涂抹。
7.用水冲洗后晾干，用油镜覆盖玻璃片，镜检。
二、尾鞭毛染色法尾鞭毛染色法用于显示一些有机质，如细菌鞭毛、纤毛，尤其是真细菌和螺旋菌的表面鞭毛。
这种染色方法使用了特定的染料，其中一种叫做尾鞭毛染料，可以与细菌鞭毛发生特异性的染色反应。
步骤：1.取细菌液滴制备涂片，晾干。
2.用尾鞭毛染料滴于涂片表面，使其充分渗透，静置几分钟。
3.用水冲洗涂片，除去未与鞭毛结合的染料。
4.用光学显微镜观察涂片，即可看到染色的细菌鞭毛。
三、菲尔维改良法菲尔维改良法是细菌鞭毛染色中的一种较新的方法，其主要优点是能够清晰地显示出细菌鞭毛的细节结构，对细菌鞭毛的分类和鉴定非常有帮助。
步骤：1.取细菌液滴制备涂片，晾干。
2.用菲尔维液滴于涂片表面，使其充分渗透，静置5-10分钟。
3.用水冲洗涂片，除去未结合的染料。
4.将菲尔维溶液滴于涂片上，再用菲尔维JL染色液（主要成分是菲尔维色素）滴于涂片上，使其充分渗透，静置15-20分钟。
5.用70%酒精脱色1-2秒钟，去除多余的染料。
2022年西南科技大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案)
2022年西南科技大学微生物学专业《微生物学》期末试卷A(有答案）一、填空题1、我国古代劳动人民在微生物应用方面的主要贡献是发明用______独特工艺加工______原料以生产______。
2、鞭毛是细菌的运动器官，观察细菌是否生鞭毛可通过______或______在光学显微镜下观察。
3、基因突变一般有七个共同特点：① ______，② ______，③ ______，④ ______，⑤______，⑥ ______和⑦ ______。
4、评价化学杀菌剂或治疗剂的药效和毒性的关系时，最重要的三个指标是______、______和______。
5、真菌菌丝有两种类型，低等真菌的菌丝是______，高等真菌的菌丝是______。
6、最大的病毒是直径为200nm的______；最小病毒之一是______，其直径仅为28nm。
7、沼气发酵的过程可分三个阶段，即______、______和______，其中第三阶段的主要菌种是______。
8、铵盐、硝酸盐和N2等。
@17、生长因子自养型微生物有______、______和______等种类。
9、在真核生物中，TCA循环的酶反应在______内进行，在原核生物中，则在______内进行，但______酶是一例外，它在真核生物的线粒体或原核生物细胞中都是结合在______上的。
10、在产抗体细胞的激活和抗体的形成过程中，需要有三种免疫活性细胞发挥作用：______，______，______。
二、判断题11、草食动物大部分都能分泌纤维素酶来消化所食用的纤维素。
（）12、微生物营养就是微生物获得和利用营养物质的过程。
（）13、在微生物细胞中，其诱导酶的种类要大大超过组成酶。
（）14、在微生物的形态特征十分丰富的条件下，菌种鉴定就可完全依据这些特征来进行，例如真菌、放线菌和酵母菌等。
（）15、因支原体的细胞大小接近病毒，故具有滤过性。
（）16、酵母菌无性繁殖方式通常为裂殖，少数为芽殖。
教学大纲-山东大学课程中心
山东大学微生物学教学大纲第1章绪论1. 本章节的教学目的与要求：为学生打开微生物学世界的大门，激发他们学习微生物学课程的热情和积极性！1. 引导学生走进微生物世界，了解微生物是什么？做什么？以及与人类的特殊关系（历史、现在与未来）。
2. 明确微生物学作为一门独立学科在生命科学发展中的重要作用和地位－学习微生物学课程的重要性。
3. 展望微生物学的未来－激发学生的学习兴趣和明确肩负的重任。
2. 授课主要内容：1.1 微生物一. 微生物与人类二. 微生物及其共性三. 微生物在自然界的位置1.2 微生物学（微生物的发现和微生物学的建立与发展）一. 微生物的发现二. 微生物学发生、发展和展望3. 重点、难点及对学生的要求（掌握、熟悉、了解、自学）第2章纯培养技术和显微技术1. 本单元或章节的教学目的与要求：通过本章的教学，向学生介绍进行微生物学研究的基本技术，即无菌技术、纯种分离技术、培养技术和显微技术，使他们了解微生物学在基本研究方法和研究手段上与动植物学研究的不同，为后面介绍其他微生物学相关知识打下基础。
2. 授课主要内容：2.1微生物的分离和纯培养一、无菌技术：1. 微生物培养的常用器具及其灭菌； 2. 接种操作二、用固体培养基分离纯培养：1.稀释倒平板； 2.涂布平板； 3.平板划线； 4.厌氧微生物的分离三、用液体培养基分离纯培养四、单细胞（孢子）分离五、选择培养分离；1. 利用选择平板进行直接分离；2. 富集培养六、微生物的保藏技术（调整到微生物生长控制讲授之后）七、二元培养物2.2 显微镜和显微技术一、显微镜的种类及原理1. 普通光学显微镜；2. 暗视野显微镜；3. 相差显微镜；4. 荧光显微镜；5. 透射电子显微镜；6. 扫描电子显微镜；7. 扫描隧道显微镜8.原子力显微镜二，显微观察样品的制备1. 光镜制样（染色观察；活体观察）；2. 电镜样品制备（不讲，学生可自学）。
3. 重点、难点及对学生的要求（掌握、熟悉、了解、自学）第3章~第4章微生物细胞的形态、结构与功能1. 本单元或章节的教学目的与要求：第三章：微生物的类群及其细胞的形态、结构和功能——包括原核和真核微生物生物为了授课的系统性，本部分汇总了课本上不同章节的的内容并按照类群-形态-结构-功能的脉络进行了系统化。
鞭毛染色实验报告
篇一：鞭毛染色实验报告年月日山东大学实验报告2011 年10月26 日姓名：年级同组科目微生物题目观察鞭毛染色和运动201001140018一．实验目的学习并掌握鞭毛染色法并了解鞭毛的形态特征巩固显微镜操作技术及无菌操作技术学习压滴法观察细菌运动性（活细胞）二．实验原理细菌鞭毛染色法的基本原理简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。
鞭毛是细菌的纤细丝状的运动器。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才可以直接观察到。
若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。
首先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用碱性复红（gray氏染色法）、碱性复品红（leifson氏染色法）、硝酸银（west氏染色法）或结晶紫（difco 氏染色法）进行染色。
压滴法观察活菌运动的基本原理鞭毛的功能相当于船的螺浆，在水中可以高速旋转从而推动菌体前行，因此水体环境才是鞭毛细菌自由驰骋的天地。
鞭毛的旋转速度是非常快的，每秒钟旋转两百到一千多转，比一般的电动机要快得多。
鞭毛的高速旋转是由其附着于菌体上的基体旋转带动的，基体实际上就是鞭毛的基部，它由一个中轴套上两个或四个环构成，镶嵌固定在细菌的体表（细胞膜和细胞壁）中，在科学家的眼中，基体简直就是一台精巧的纳米机械—分子马达，但这个马达并不是靠电流驱动，而是用伴随着细胞膜两侧质子梯度的消失产生的生物能量atp来驱动，鞭毛马达还可以转向（从反时针旋转变为顺时针旋转）从而使菌体发生翻滚进而改变细菌的运动方向，事实上细菌在游动时也并不是单纯地一直朝前游，而是伴随着不时的随机翻滚转向，但从表观上看仍表现为细菌的前行。
细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。
若想观察的更加清晰，可以滴加稀释美兰等染液进行染色，注意不要染色过重，以免影响观察，有鞭毛的细菌运动活泼，且不同时向一个方向运动，而无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。
鞭毛染色
3. 实验设备及器材：恒温培养箱；恒温干燥箱； 高压蒸汽灭菌锅；显微镜；酒精灯；接种环；滴 瓶；试剂瓶；双层瓶；镊子；载玻片；φ90mm培 养皿；500ml标本缸；15×150试管；火柴（或打 火机）；吸水纸；镜头纸；棉花；
版权所有 未经作者同意 请勿使用
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实验七 鞭毛染色技术、活细菌的运动性 菌落形态
影响鞭毛染色的因素较多。主要有： 1.菌种的活化程度：实验前，应将菌种用斜
面底部有少量冷凝水的新鲜培养基斜面转接 2～3次，以使菌种活化，处于良好的生理状 态，其鞭毛的生长才正常； 2.染色液的新鲜程度：用于鞭毛染色的染色 液，应随用随配。搁置一段时间的染色液的 染色效果较差； 3.载玻片的洁净程度：用于鞭毛染色的载玻 片应无油污、无划痕，洁净干燥。
实验前应将菌种用斜面底部有少量冷凝水的新鲜培养基斜面转接23次以使菌种活化处于良好的生理状态其鞭毛的生长才正常
实验七 鞭毛染色技术、活细菌的运动性 菌落形态
一、实验背景及目的：
鞭毛是某些细菌生长在细胞外的长丝状蛋白质 附属物。
通过鞭毛的高速旋转，可使有鞭毛的细菌呈现 运动性，是鞭毛的主要功能。鞭毛也是有鞭毛 的细菌实现其趋性的最有效方式。
实验七 鞭毛染色技术、活细菌的运动性 菌落形态
5.染色处理： ①滴加鞭毛染色A液于载玻片上，染色处理
4～6分钟，蒸馏水充分洗净A液； ②用B液冲去残留的水，再加B液于玻片上，
微火加热至微冒汽，保持0.5～1分钟，注意 勿使B液干涸，应随时补加B液，蒸馏水清 洗，自然干燥； 6.镜检：油镜。菌体深褐色，鞭毛很纤细， 呈浅褐色；可多调整几个视野，仔细观察。
实验七 鞭毛染色技术、活细菌的运动性 菌落形态
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姓名马俊才班级生科二班学号201200140073 同组者：马龙义聂成
科目微生物学实验题目细胞鞭毛染色法及活菌活动性观察组别3
细胞鞭毛染色法及活菌活动性观察
【实验目的】
1.学习压滴法观察细菌活细胞的运动性；
2.了解细菌鞭毛染色的原理，掌握鞭毛染色的方法，并了解鞭毛的形态特征；
3.巩固显微镜操作技术及无菌操作技术。
【实验原理】
1.压滴法观察活菌运动的基本原理
压滴法是将菌液滴在普通的载玻片上，然后盖上盖玻片，置于显微镜下观察。
细菌未染色时无色透明，在显微镜下主要靠细菌的折光率与周围环境的不同来进行观察。
若想观察的更加清晰，可以滴加稀释美兰等染液进行染色，但稀释美兰的滴加对活菌的生长产生较大的影响，因此一般通常选用不进行染色直接观察的方法。
有鞭毛的细菌运动活泼，且不同时向一个方向运动，而无鞭毛的细菌则呈不规则布朗运动。
这样便可以在光学显微镜下观察到细菌的运动。
2.细菌鞭毛染色法的基本原理
鞭毛在某些细菌菌体上具有细长而弯曲的丝状物，称为鞭毛。
鞭毛的长度常超过菌体若干倍。
在某些菌体上附有细长并呈波状弯曲的丝状物，少则1-2根，多则可达数百根。
这些丝状物称为鞭毛，是细菌的运动器官。
简单染色法适用于一般的微生物菌体的染色，而某些微生物具有一些特殊结构，如鞭毛，对它们进行观察之前需要进行有针对性的染色。
鞭毛是细菌的纤细丝状的运动器。
鞭毛的有无、数量及着生方式也是细菌分类的重要指标。
鞭毛直径一般为10~30nm，只有用电镜才可以直接观察到。
若要用普通光学显微镜观察，必须使用鞭毛染色法。
首先用媒染剂处理，使媒染剂附着在鞭毛上使其加粗，然后用硝酸银进行染色。
染色完成后可在光学显微镜下观察到细菌的鞭毛。
【实验器材】
1、菌种：
枯草芽孢杆菌（周生鞭毛），铜绿假单胞菌（端生鞭毛）
2、溶液和试剂：
质量分数为95%的乙醇溶液，蒸馏水，硝酸银染液A液和B液等
3、仪器及其它用品：
酒精灯，载玻片，盖玻片，显微镜，双层瓶（内装香柏油和二甲苯），擦镜纸，接种环，小试管，烧杯，试管架，载玻片夹子，滴管和滤纸等。
【操作步骤】
A.压滴法观察活菌运动
简单流程图：
姓名马俊才班级生科二班学号201200140073 同组者：马龙义聂成
科目微生物学实验题目细胞鞭毛染色法及活菌活动性观察组别3
详细过程：
1)洗片
用自来水和去污粉将载玻片清洗干净（注意：不要用刷子刷，以免划载玻片），最后用蒸馏水冲洗，后放入盛有95%的乙醇中浸泡5min，用夹子夹持载玻片在火上烤，使酒精烧掉，载玻片干燥；
2)涂片
在载玻片的一端滴加一滴蒸馏水，采用无菌操作将所要观察的菌种接种到水滴中少许（稍显浑浊即可），涂片完成；
3)加盖玻片
加盖玻片时首先使盖玻片的一端接触载玻片上的液滴的一端，然后再将另一端缓缓放下，目的是防止气泡的产生，以免影响观察；
4)迅速镜检（暗光）
由于菌体是放在蒸馏水中的，所以装片做好后要迅速镜检，以取得最佳的观察效果。
镜检的过程与前一实验相似，先用低倍镜找到合适的视野范围，然后再换用高倍镜观察，注意在观察运动时要观察有相对运动的细菌，通常应该选取暗光，以增加细菌与水的对比度。
B.细菌鞭毛染色
简单流程图：
姓名马俊才班级生科二班学号201200140073 同组者：马龙义聂成
科目微生物学实验题目细胞鞭毛染色法及活菌活动性观察组别3
详细过程：
a)洗片
用自来水和去污粉将载玻片清洗干净，然后用蒸馏水冲洗，接着将洗好的载玻片放入盛有95%的乙醇溶液的培养皿中，浸泡5min后取出，用火烤干。
其目的是将载玻片上的油污等洗掉；
b)涂片
在载玻片的一端中央滴加一滴，采用无菌操作将所要观察的菌种移动到水滴中少许（注意：不可搅拌，以免将鞭毛折断），将载玻片倾斜使液滴从载玻片的一端流到另一端，然后用吸水纸吸取多余的液滴，涂片完成；
c)自然干燥
干燥前先对载玻片正反面进行标记；
d)滴加硝酸银A液
姓名 马俊才 班级 生科二班 学号 201200140073 同组者：马龙义 聂成
科目 微生物学实验 题目 细胞鞭毛染色法及活菌活动性观察 组别 3
向涂片上滴加适量的硝酸银A 液，覆盖约5分钟； e)
水洗 将上一步中所滴加的硝酸银A 液洗掉，注意冲载玻片背面，防止将涂片中的菌种冲掉； f)
硝酸银B 液冲洗 用硝酸银B 液冲洗涂片，覆盖1分钟左右，且用酒精灯稍稍加热； g)
水洗 h)
自然干燥 i) 镜检
将做好的涂片放到显微镜下，由多到少观察细菌，以方便找到鞭毛，观察时应不断移动视野范围，先找到细菌，再仔细观察细菌周围经过染色的鞭毛（注：枯草杆菌的菌体较大，为周生鞭毛，较难观察，也可能会出现侧生鞭毛的现象，这是因为鞭毛断掉；铜绿假单胞菌菌体较小，为端生鞭毛，较容易观察）。
【实验结果与分析】
A. 实验图示
枯草芽孢杆菌 铜绿假单胞菌
B. 实验结果分析
通过本次鞭毛染色实验，我认识到，以下几个方面决定了鞭毛染色是否成功。
1．染色用玻片干净无油污是鞭毛染色成功的先决条件。
2． 菌种的菌龄。
老龄的菌种的鞭毛极易脱落，因此染色后很难看见有鞭毛。
可以选择菌落边缘的幼龄菌落。
3． 在盖玻片上接种的时候，只需要在水中轻轻地沾几下即可，不要用里过猛，更不能用接种环大幅涂开。
若动作太重太大，菌种的鞭毛就会被刮落。
4． 银染剂的使用方式和时间很重要。
若时间过短或方式不当，就很难在媒染剂上着色，那么，我们也就没有办法在显微镜下观察到鞭毛了。
5．
鞭毛染色的玻片最好是自然晾干。
加热后菌种易变形，鞭毛易脱落，影响观察。
【思考题】
姓名马俊才班级生科二班学号201200140073 同组者：马龙义聂成
科目微生物学实验题目细胞鞭毛染色法及活菌活动性观察组别3
1．除鞭毛染色法外，还有什么方法能观察到鞭毛？
答：用电子显微镜直接观察。
2．是否对自己所做的鞭毛染色结果满意？如果不满意，有哪些方面需要改进？如果满意，你的成功经验是什么？
答：不太满意。
染色时间要充足，制备载玻片时要保证载玻片已洗净；涂片时注意不要过于用力涂抹，以免鞭毛脱落；作过程中注意动作要轻，防止鞭毛因受到震荡而脱落；选菌时，不要选取老龄菌，否则会导致效果不好；另外，镜检时要耐心仔细寻找。
3．若发现鞭毛已与菌体脱离，请解释原因。
答：所选菌菌龄过老，鞭毛自然脱落；操作时玻片受到震荡，或者接种环在载玻片上反复涂抹，使鞭毛脱落。