饲料防霉剂防霉效果的检测方法_平皿计数法

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三角烧瓶中，加灭菌后的生理盐水 #’’78，放置振荡 器 上振 荡 %’7=> 取 下 ， 置 电 炉 上 加温 至 !’5 左 右 使防霉剂的有效成分充分溶解。 %7=> 0 !7=>，
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饲 料 检 测
充分混匀后再 !" # 取带有防霉剂 （ !" !） 溶液 $%&（ 摇匀。 取） ， 放置于带有 $%& 霉菌孢子溶液的平皿中， 每一种防霉剂样品均做双皿。 !" ’ 将 灭 菌 后 凉 至 !#( 左 右 的 高 盐 察 氏 培 养 基 充分混匀， 待琼脂凝固后 $#%& ) *+%& 注入各平皿中， 倒置于 *#( ) *,( 的培养箱中，培养 -. 后开始观 察， 培养观察一周。 !" / !" , 每一批样品做两份含 $%& 霉菌不加防霉剂的空 计算 以加了各种防霉剂平皿的霉菌菌落数与 白试验。 不加防霉剂含 $%& 霉菌的平皿的霉菌菌落数相比较， 计算出各防霉剂的抑菌率。
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注意事项
培养基应煮沸后再分装、 灭菌。 饲料空白的霉菌孢子一定要充分打散，分布均
匀。
5 责任编辑
陈广鹏 6 $$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$$%
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适宜霉菌生长而不适宜细菌生长的培养基， 采用平皿 计数方法，在一定菌液中加入一定量的防霉剂，培养 后测定霉菌菌落总数。菌落总数越少， 表明其防霉抑 菌效果越佳， 并根据测的数据计算出各防霉剂的抑菌 率来准确表示。
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材料与设备 分析天平 （ 感量 ’3 ’’’ #4） 、 霉菌培养箱 （ #’5 6
周永红， 桂林万康添加剂厂， 广西桂林灵川定 !"#$#% ， & ’((% ) *!+’$,, 。 江三号经济开发区， 唐执文， 单位及通讯地址同第一作者。 收稿日期： $’’’ - ## - #!
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试剂及配制
高盐察氏培养基
%3 #3 # 成分 硝酸钠 $4、磷酸二氢钾 #4、硫酸镁 （ 氯化钾 ’3 !4、 硫酸亚铁 ’3 ’#4、 :4;/" ・(<$/） ’3 !4、 蔗糖 %’4、 琼脂 $’4、 蒸馏水 # ’’’78。 上述 氯化钠 *’4、 试剂， 琼脂为生化试剂， 其余为分析纯试剂。 %3 #3 $ %3 $ %3 $3 # %3 $3 $ %3 % 制法 稀释液 ’3 ,!? 生 理 盐 水 制法 称 取 分 析 纯 @A.8,3 ! 4 ， 用蒸馏水加温溶解以上成分， 分装后， 于 ##!5 高压灭菌 %’7=>。 必要时， 可酌量增加琼脂。
定容 # ’’’78。 #$#5 高温高压灭菌 %’7=>。 所 有玻 璃 器具 采 用 干 法灭 菌 在 #*’5 下 灭 菌
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操作步骤
称取有霉菌的饲料 $!4， 放入含有 $$!78 灭菌生 用 #’78 吸管吸取 #’78 #C #’ 的上述稀释液于
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原理
根据霉菌生理特性和防霉剂防霉作用机理， 选择
理盐水的 $!’78 三角瓶中， 置振荡器上振荡 %’7=>。 $!78 试管中，用洗耳球及 #78 吸管反复吹吸 !’ 次， 使霉菌孢子分散开。 取 #78 此稀释液加入 +78 生理盐 水， 充分混匀得 #C #’’ 稀释液。取 #C #’’ 稀释液 #78， 加到 #’’78 灭菌生理盐水中，充分混匀得 #C #’ ’’’ 带有霉菌的稀释液 （ 此稀释液每毫升含霉菌菌落数大 致 #’’ 个 ） 。 "3 % 取 #C #’ ’’’ 带菌液，用 #78 灭菌吸管吸取 #78 称取各防霉剂 ’3 $’’ ’4 分别置于 $!’78 灭菌的 于平皿中。
・政策法规・
农 业 部 对外贸易经济合作部 国家出入境检验检疫局
文件
农牧发 7 *+++ 8 *$ 号

关于加强肉骨粉等动物性饲料产品管理的通知
各省、 自治区、 直辖市畜牧 （ 农业、 农牧 ） 厅（ 局、 办） ， 外经贸委 （ 厅、 局） ， 各直属检验检疫局： 为了加强肉骨粉等动物性饲料产品 （ 包括肉骨粉、 骨粉、 肉粉、 血粉、 血浆粉、 动物下脚料、 动物脂肪、 干血浆及其他血 液产品、 脱水蛋白、 蹄粉、 角粉、 鸡杂碎粉、 羽毛粉、 油渣、 鱼粉、 磷酸氢钙、 骨胶， 以及用上述原料加工制作的各类饲料， 下 称动物性饲料产品 ） 的管理， 防止使用禁用的动物性饲料产品， 保护我国畜牧业生产安全和人民身体健康， 现将有关问题 通知如下： （ ） （ 饲料和饲料添加剂管理条例 》 简称 《 条例 》 和《 进口饲料和饲料添加剂登记管理办法 》 农业部 -, 号令， 简 $ 根据 《 ） 称《 办法 》 的规定， 外国企业生产的饲料首次向中华人民共和国境内销售的， 应当向中华人民共和国农业部申请登记， 取 得产品登记证； 未取得产品登记证的饲料不得在中国境内销售、 使用。上述动物性饲料产品属于 《 条例 》 调整的 “ 单一饲 料” 范畴， 必须按照 《 办法 》 的规定办理登记。 严防 “ 疯牛病 ” 等疫病传入。 要严格遵守国务院有关部门自 $44+ 年以来陆 * 要高度重视对动物性饲料产品的管理， 续发布的有关防止 “ 疯牛病 ” 和“ 痒病 ” 传入的规定。 使用情况进行一次全面检查。凡擅自经营和使用禁 - 各省级饲料管理部门要对本辖区的动物性饲料产品的经营、 止使用的动物性饲料产品， 要立即就地销毁， 并依法追究当事人的责任； 凡未取得登记证的非疫病国家的动物性饲料产 品要立即予以查封， 限期补办有关手续， 并依据 《 条例 》 实施处罚； 省级饲料行政管理部门要加强对该类产品经营、 使用的 监控。 须事先向出入境检验检疫部门提出申请， 办理检疫审批手续。从现在起， 出入境检验检疫 ! 输入动物性饲料产品， 部门凭农业部颁发的产品登记证受理进境动植物检疫许可证申请。 对已办理有关进境检疫审批手续的动物性饲料产品， 必须有出口国官方出具的符合进境检疫许可证要求的检疫证书， 证明其来源的动物品种。 凡不符合规定的或没有办理有 关进境检疫审批手续的动物性饲料产品， 一律做退回处理。 各出入境检验检疫部门要依法严格对允许进口的动物性饲料 产品实施检验检疫。 加强对动物性饲料产品的监督检 # 省级饲料质量监测机构应依据同类动物不得饲用同类动物性饲料产品的原则， 测。要组织一次专项检测， 防止该类产品扩大应用范围， 并将检测结果报送当地省级饲料行政管理部门。 禁止从欧盟国家进口动物性饲料产品， 各有关单位要认真严格执行。今后， 农业部、 国家 ’ 自 *++$ 年 $ 月 $ 日起， 出入境检验检疫局和对外贸易经济合作部将根据我国禁止进口发生重大疫情国家动物及其产品的有关规定对该类产品 的的管理作相应调整。
、 高压灭菌器 （ 电热式蒸汽消毒器 ） 、 #5 0 !’5 6 #5 ） 干燥箱 （ 、水浴锅 （ !’5 6 #5 0 $!’5 6 #5 ） %’5 6 、 振荡器 （ 往复式 ） 、 电炉、 试管架、 玻 #5 0 ,’5 6 #5 ） 、 试管 （ 、 平皿 （ 、 吸管 璃三角瓶 （ $!’78） $!78） !+97） （ 、 量筒 （ 、 洗耳球、 无菌 #78、 #’78、 #’’78） $!78、 #’’78）
《 饲料工业 》 ・!""# 年第 !! 卷第 ! 期
饲 料 检 测
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—— — 平皿计数法 平皿计数法 饲料防霉剂防霉效果的检测方法—— — 饲料防霉剂防霉效果的检测方法
周永红
盲目挑选和使用饲料防霉剂，往往不仅事与愿
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唐执文
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违， 更会危害饲料企业的经济利益及品牌声誉。 所以， 掌握并采用科学、 正确、 有效的检测方法， 自我判别防 霉剂产品之优劣是各饲料企业维护自身利益的当务 之急。 目前用于饲料防霉剂防霉效果的检测对比之方 法有： 杯碟法、 最低抑菌浓度法、 二氧化碳释放法、 温 度测定法、 饲料常规试验、 高温高湿法等。 杯碟法测定 最大抑菌圈直径，用其大小来定量测定其防霉效果， 试验要求选配一种理想溶剂， 要求较高、 操作复杂； 最 低抑菌浓度法需将各种防霉剂配成浓度梯度液， 工作 量大， 与杯碟法一样仅适于作初选、 速选之用； 二氧化 需把握临界 碳释放法较难掌握急剧释放 ./$ 的时间， 时段，而且所需仪器昂贵；温度测定法利用饲料异常 发热是饲料霉变的前兆这一特点， 它同饲料常规试验 高温高湿法着重凭 一样检测耗时很长， 需 $ 0 % 个月； 借肉眼观察外观， 准确性不理想。 本检测方法是将现行的 12#%’+$—+#《 饲料中霉 菌检测方法 》 具体应用于饲料防霉剂防霉效果的对比 检测， 经多年实践验证， 此方法操作简便、 结果准确； 在多家饲料生产厂家应用， 认为切实可行。 工作台。
周永红等： 饲料防霉剂防霉效果的检测方法—— — 平皿计数法
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在稀释、 取样过程中， 每稀释 $ 次， 每取样 $ 次， 抑菌率的大小与霉菌空白数紧密相关，各防霉
均应更换另一支干净的灭菌吸管。 剂的抑菌率在同一次实验条件下才能公平比较。 每皿 菌落数控制在 -+ ) $#+， 代表性比较好。 #" # #" ’ 检样从开始稀释到倾注最后一个平皿所用时间 各步操作切记无菌操作 此方法除用于检测对比饲料防霉剂防霉效果以 外，也可用于检测饲料各原材料的带菌程度，根据饲 料卫生标准 23$-+/, — 4$ 准确判定原材料的新鲜程 度， 从而达到准确监控各原材料品质之目的。同时可 将加有防霉剂的培养物与未加防霉剂的饲料空白培 养物做对比，结合低倍活物镜检，初步确定各防霉剂 有效抑制霉菌的种属， 可看出各防霉剂对各种霉菌杀 菌作用力。 不宜超过 *+%01。