PBS缓冲液的配制方法

PBS缓冲液配方
不管是免疫组化，还是细胞培养中，常用到PBS缓冲液，下面是我们实验室的配方，供大家参考。

我们实验室的配方：
A液：0.1mol/L磷酸二氢钾：
磷酸二氢钾（KH2PO4，MW136.09）1.361g，加双蒸水至100ml。

B液：0.1mol/L磷酸氢二钠：
酸酸氢二钠（Na2HPO4.2H2O，MW177.99）1.78g，加双蒸水至100ml。

或者酸酸氢二钠（Na2HPO4.12H2O，MW358.14）3.58g，加双蒸水至100ml。

pH －－A液（ml）－－B液（ml）
5.60 －－9.50 －－0.25
5.91 －－9.00 －－1.00
6.24 －－8.00 －－2.00
6.47 －－
7.00 －－3.00
6.64 －－6.00 －－4.00
6.81 －－5.00 －－5.00
6.98 －－4.00 －－6.00
7.17 －－3.00 －－7.00
7.38 －－2.00 －－8.00
7.73 －－1.00 －－9.00
8.04 －－0.50 －－9.50
一般免疫组化用PBS都只包含Na2HPO4•12H2O（磷酸氢二钠）NaH2PO4•2H2O（磷酸二氢钠）Nacl
用于细胞培养的PBS需含有氯化钾
称取8g NaCl、0.2g KCl、1.44g Na2HPO4和0.24g KH2PO4,溶于800ml 蒸馏水中，用HCl调节溶液的pH值至7.4，最后加蒸馏水定容至1L 即可0.01M
PBS缓冲液
称取NaCl 8g，KCl 0.2g，Na2HPO4•12H2O 3.63g, KH2PO4 0.24g，溶于900ml双蒸水中，用盐酸调pH值至7.4，加水定容至1L，常温保存备用。

PBS是最普遍不过的实验室缓冲液，但其配方各异。

以下是我的总结：
母液的配制：
0.2M Na2HPO4：称取 71.6g Na2HPO4-12H2O，溶于 1000ml 水
0.2M NaH2PO4：称取 31.2g NaH2PO4-2H2O，溶于1000ml 水
各种浓度PB(pH=7.4)的配制：
先配 0.2M PB (pH=7.4，100ml)：取19ml 0.2mol/L 的 NaH2PO4， 81ml 0.2mol/L 的 Na2HPO4, 即可。

然后只需将0.2M PB (pH=7.4)按相应比例适当稀释即可，如：
0.1M PB（PH=7.4）：取 500ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

0.01M PB （PH=7.4）：取50ml 0.2M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

0.02M PB （PH=7.4）：取100ml 0.2 M PB，加水稀释至 1000ml 即可。

若需要 NaCL 的话，加入 NaCL 至0.9%（g/100ml）即可。

另：其它各种另 PH值的 0.2M PB（100ml)配方：
pH 0.2M NaH2PO4（ml） 0.2M Na2HPO4（ml）
5.7 93.5
6.5
5.8 92 8
5.9 90 10
6.0 8
7.7 12.3
6.1 85 15
6.2 81.5 18.5
6.3 7
7.5 22.5
6.4 73.5 26.5
6.5 68.5 31.5
6.6 62.5 3
7.5
6.7 56.5 43.5
6.8 51 49
6.9 45 55
7.0 38 62
7.1 33 67
7.2 28 72
7.3 23 77
7.4 19ml 81ml
7.5 16 84
7.6 13 87
7.7 10.5 0.5
7.8 8.5 91.5
7.9 7 93
8.0 5.3 94.7
磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB），磷酸氢二钠和磷酸二氢钠缓冲液配方
磷酸盐缓冲液（Phosphate Buffer, PB）
试剂：NaH2PO4·2H2O Na2HPO4·12H2O
配制方法：配制时，常先配制0.2mol/L的NaH2PO4和0.2mol/L的Na2HPO4，两者按一定比例混合即成0.2mol/L的磷酸盐缓冲液（PB），根据需要可配制不同浓度的PB和PBS。

（1）0.2mol/L的Na2HPO4；称取Na2HPO4.12H2O 31.2g(或NaH2PO4·H2O 27.6g)加重蒸水至1000ml溶解。

（2）0.2mol/L的Na2HPO4：称取NaHPO4.·12H2O 71.632g（或Na2HPO4·7H2O 53.6g或Na2HPO4·2H2O 35.6g）加重蒸水至1000ml
溶解。

（3）0.2mol/L pH7.4的PB的配制：取19ml 0.2mol/L的NaH2PO4和81ml 0.2mol/L的Na2HPO4·12H2O,充分混合即为0.2mol/L的PB （pH约为7.4～7.5）。

若pH偏高或偏低，可通过改变二者的比例来加以调整，室温保存即可。

0.2mol/L磷酸盐缓冲液（pH5.7～8.0）
pH 0.2mol/L NaH2PO4(ml) 0.2mol/L Na2HPO4(ml)
5.7 93.5
6.5
5.8 92.0 8.0
5.9 90.0 10.0
6.0 8
7.7 12.3
6.1 85.0 15.0
6.2 81.5 18.5
6.3 7
7.5 22.5
6.4 73.5 26.5
6.5 68.5 31.5
6.6 62.5 3
7.5
6.7 56.5 43.5
6.8 51.0 49.0
6.9 45.0 55.0
7.0 39.0 61.0
7.1 33.0 67.0
7.2 28.0 72.0
7.3 23.0 67.0
7.4 19.0 81.0
7.5 16.0 84.0
7.6 13.0 87.0
7.7 10.5 89.5
7.8 8.5 91.5
7.9 7.0 93.0
8.0 5.3 94.7
关于磷酸缓冲溶液的知识，我在网上搜索了好多帖子，但是还是不能确定正确的答案。

现在把他们链接过来，希望有高手们参与讨论，我会把最终的正确解答整理出来，提供给大家。

PBS可以为三种溶液的英文缩写，分别是
1.磷酸盐缓冲溶液（phosphate buffered solution）、
2.磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered saline）及
3.磷酸盐缓冲钠（phosphate buffered sodium），
其配制方法不同，pH值不同，发挥的生物学作用亦不完全相同。

如无特殊说明，生物学上常用的PBS是中性磷酸盐缓冲溶液（phosp hate buffered solution）。

无钙镁离子磷酸缓冲盐水（PBS）
（0.15Mol/L PH 7.2）
NaCl 8.0g
KCl 0.2g
Na2HPO4 1.15g
（如为Na2HPO4·12H2O，则为2.89g）
KH2PO4 0.2g
将上述试剂依次溶于1 000ml去离子水中，完全溶解后，115℃高压灭菌10min~15min，存在4℃冰箱中备用。

此液可用于配制和稀释细胞分散剂以及洗涤细胞培养物。

我们用的都是第二种
问题1：磷酸盐缓冲盐水（phosphate buffered sodium），为什么用第三种或第一种呢:
这么多年以来我都以为PBS就是磷酸盐缓冲溶液，其他两种说法的英语名称常见到，不过我一直都以为他们是差不多的东西。

不同的汉语翻译倒是第一次听说。

我们公司用的PBS有很多种，抗体组用的中和PBS配方就比较简单，没有K+离子，只起到缓冲PH的作用；Na2HPO4+ KH2PO4按照不同比例混匀，可以得到不同PH的缓冲液，用于不同目的，这个在分子生物学中用得很多；用于活细胞或者细菌处理的，为了保持渗透压，会加入其他的溶液，最常见的就是NaCl 和KCl调节
离子浓度。

以上是个人的理解，欢迎批评。

:
问题2：既然抗体组的PBS是起到缓冲PH的作用，那加入80G的N ACL作用是什么？需要平衡渗透压吗？还有加入K离子的是不是因为细胞上NA-K泵的原因啊，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？
我觉得之所以这么配，其实就是对血清中缓冲环境的一种模拟罢了，血清里面又没有细胞，何来NA-K泵一说啊？我没说血清撒。

我们用的又没加K，我是说加了K的的
问题3：不加NACL会怎么样啊？多省钱啊
在中和磷酸盐缓冲液中，NaCl的主要作用应当是保持一定的离子浓度，以维持抗体的活性。

在离子浓度过高或过低的情况下，蛋白质都会变性，抗体当然不例外。

ps:哺乳类需用生理盐水浓度是0.9%。

称取0.9克氯化钠，溶解在少量蒸馏水中，稀释到100毫升。

鸟类需用的生理盐水浓度是0.75%。

称取0.75克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。

两栖类需用的生理盐水浓度是0.65%。

称取0.65克氯化钠，溶解后用蒸馏水稀释到100毫升。

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