高危型HPV—临床应用最新进展相关检验
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2000年： 47.1万新发病例/全世界，13.15万新 发病例/中国
HR-HPV的持续感染是宫颈癌的首要致病因
素
“没有HR-HPV感染，就不会有宫颈癌”
通过筛查HR-HPV，筛查宫颈癌
7
2. 临床应用 宫颈癌与HPV
HR HPV持续感染
遗传因素
其他因素
宫颈癌
免疫因素
环境因素
行为因素
• 130种
临床分型：致病性的不同 宫颈上皮内瘤样变
• 高危型 high risk, HR • 低危型 low risk, LR 生殖道的尖锐湿疣
3
1. 简要概述 分型
70
30 13
与人类致病相关
生殖道感染：低危+高危
最常见、研究最多的高危型 13+3 16.18.31.33.35.39.45.51.52.56.58.59. 68/67.70.73 低危型 11 6.11.30.40.42.43.44.54.MM4.MM8.MM9
高效、广谱：
• 致病的 HPV种类很多，目前已分离出高危型 HPV三十多种； • HPV的种属特异性，因此目前已有的无论是二价还是四价疫苗 都不能抵挡所有型别的 HPV感染； • 有研究表明 L2可以诱导交叉性中和抗体的产生。
合理评估其价值：从感染HR HPV到宫颈癌需要十余年
14
3. 最新研究进展 生物感染状态
妊娠期感染HPV的处理
18
3. 最新研究进展 男性与HPV
HPV的主要传播方式：
直接接触 性播
男性感染／携带
寄居部位 如何取材 如何检测
19
4. HPV的相关检验
检验方法
核酸扩增：如PCR等
• 灵敏度高 • 基因分型 • 特异性有待验证
基因芯片 理论上先进，发展的方向 杂交法：多种，分型 部分分型
• HC-II （Hybrid capture） 目前国内外应用最广的方法
– – – – 特异性好：500个碱基对的RNA探针 应用广，结果可以比对 灵敏度低 1.03 pg / ml 不能分型
20
4. HPV的相关检验 HC-II
HC-II试验操作的注意事项
一般酶免试验的注意事项 特殊的方面：
应用较多的是：
• 酵母菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞表达系统。
13
3. 最新研究进展
HPV 疫苗
亟待解决的问题
技术和价格： 80%的宫颈癌发生在发展中国家和较贫 困地区； 全效：治疗和预防
• 每年全球大约有 47万例新发宫颈癌病例； • 到目前为止尚无逆转已经发生的感染和已经存在的病灶得以消 除的有效办法。
11
4
1. 简要概述 分型
HPV18 14% HPV16 50% Others HPV 23% HPV13 5% HPV45 8%
64% 77%
5
1. 简要概述 致病性
HPV感染
生殖器- 粘膜型
CIN CA
非生殖器- 粘膜型
喉 乳头瘤
疣状表皮发育不 良型
疣
6
2. 临床应用
宫颈癌与HPV
乳腺癌 宫颈癌
17
3. 最新研究进展 妊娠与HPV
妊娠期（非典型）宫颈上皮内瘤样变的比率明显
高于非妊娠期。 因素：
妊娠期处于免疫“抑制状态” 妊娠激素的变化 E2
HPV感染对妊娠及胎儿、婴幼儿的影响
母婴垂直传播，血液经胎盘、羊水等感染胎儿； 新生儿肛门及生殖器部位的先天性尖锐湿疣； 婴儿期的喉乳头状瘤等。
过度检测，过度干预？
单次检测HPV阳性者发生宫颈癌的风险较小； 缺乏对HPV感染自然过程的完整认识，多数女性对HPV感染似乎 过于焦虑，临床上也存在对HPV感染的过度干预； 增加了宫颈癌筛查的经济消耗，
正确区分，制定合理的应用方案和个体诊疗方案。
15
3. 最新研究进展 生物感染状态
HR-HPV持续感染与自然清除的相关因素
亚型 kulmala的研究
• 高危与低危 • 16(18.1M). 31(16.2). 18 39(12.4)
基因变异与整合 16 病毒负荷量 多重感染 多重 > 单一 宿主因素
• • • • • 孕产史 经产 < 未产 妊娠期 年龄 负相关 免疫因素 行为因素 ，生活方式：吸烟、避孕工具、性行为等
16
3. 最新研究进展 妊娠与HPV
妊娠与HR-HPV感染
妊娠期HPV感染率明显高于非妊娠期，但妊娠期后的感 染率无明显差别。
• Lu等研究：妊娠期妇女感染高危型HPV最多，其次是高危低危 病毒混合感染； • 52型(31.2％)、16型(15.1％)、39型(11.8％)、53型(10.8％)、 18型和58型(均为9.7％)； • 多种类型的混合感染占到此次研究人群的43.0％； • 国内的研究：妊娠期妇女以感染高危型HPV病毒居多，主要类 型为HPVl6、18型； • Nobbenhuis等研究：妊娠妇女早、中、晚及产后感染率分别为 （50／44／45／31）%； • 妊娠期HPV病毒含量高于非妊娠期，低于宫颈癌病例。
8
2. 临床应用 宫颈癌的发病过程
1（27/29）
CIN-III
自然清除—持续感染
78.7%（37/47）
CIN-II
HR HPV感染
53.7%（66/123）
CIN-I
什么是CIN？ Cervical intraepithelial neoplasia
32.3%（223/693） 正常宫颈上皮细胞
• • • • 注意颜色的变化 无色 蓝色 黄色 红色 绿色 棕褐色 孵育后，揭开膜要迅速，以防冷凝和污染； 冲洗不可过度——临界值结果增多 判断被污染的可能
21
4. HPV的相关检验 HC-II HC-II试验不成功，但又不完全失败的处理
• NCX3 <90 60~90 / PCX3 >90 110~330 2.5<PC/NC<15 CV 15% 25% • QC 2~8 4 • 0.08
高危型HPV —临床应用、最新进展、相关检验
安宏亮
目录
1. 简要概述
2. 临床应用 3. 最新进展
4. 相关检验
2
1. 简要概述
HPV:
人乳头瘤状病毒 human papillomavirus 乳多孔病毒科，多瘤病毒亚科 DNA病毒，8000个碱基对 嗜黏膜和皮肤上皮 E6 、E7 癌蛋白，P53 、Rb抑癌蛋白 生物分型：根据DNA的同源性分
HC-II试验结果的解释
• • • • 报告的是RLU/CO值，不是绝对定量g／mL 临界值0.8～1.2 60% 40% 结果的高低，不表示病情的轻重 筛查HR-HPV，是为了筛查高危人群，提示必须做进 一步的检查（病理），后期要加强监控 • 结合临床，具体分析
22
宫颈上皮内瘤样变
9
2. 临床应用 方案
制定”宫颈癌及癌前病变”的筛查、诊治方案
筛查宫颈癌前癌前病变CIN 指导CIN的处理原则：
• • • • 首诊 Leep疗效的评估 预后、转归 指导未明确诊断意义的病理结果：
指导意义不明的基底细胞异常BAUS的处理
• 不典型鳞状上皮细胞增生ASCUS • 不典型腺状上皮细胞增生AGUS
优生优育
10
3. 最新研究进展
HPV 疫苗的研制和应用 自然清除与持续感染 妊娠与HPV感染 男性HR-HPV感染
11
3. 最新研究进展
HPV 疫苗
预防性疫苗 L1 L2蛋白
HPV病毒样颗粒 (VLP) 2006年 Merck公司 HPV16 /6 /11 /18四价疫 苗和 GSK公司的 HPV16 /18二价疫苗 短暂及持续感染的疗效达到 93%
治疗性疫苗 E6 E7蛋白
基因重组疫苗
12
3. 最新研究进展
HPV 疫苗
载体表达系统的研究
选择适宜的载体表达系统：
• 研制 HPV疫苗的重要环节； • 影响表达水平及蛋白活性的关键步骤。
理想的载体：
• 应具有稳定的无毒表型,不与宿主染色体发生整合； • 能有效表达具有免疫原性的外源基因序列； • 接种后不会在宿主体内长期留存的特点；
如何判断“持续感染”与“一过性感染” HR-HPV的持续感染是宫颈癌发生的必要条件； 目前，HPV检测已被广泛应用于宫颈癌高危人群的筛查； 高HPV感染率，低持续感染率
2002年，山西襄垣县的调查研究：32~50岁妇女，HR-HPV感染率 27．5； 全球范围内的一项统计：宫颈细胞学筛查正常，HPV感染率高达 10．4％，但仅少数感染持续存在；
HR-HPV的持续感染是宫颈癌的首要致病因
素
“没有HR-HPV感染，就不会有宫颈癌”
通过筛查HR-HPV，筛查宫颈癌
7
2. 临床应用 宫颈癌与HPV
HR HPV持续感染
遗传因素
其他因素
宫颈癌
免疫因素
环境因素
行为因素
• 130种
临床分型：致病性的不同 宫颈上皮内瘤样变
• 高危型 high risk, HR • 低危型 low risk, LR 生殖道的尖锐湿疣
3
1. 简要概述 分型
70
30 13
与人类致病相关
生殖道感染：低危+高危
最常见、研究最多的高危型 13+3 16.18.31.33.35.39.45.51.52.56.58.59. 68/67.70.73 低危型 11 6.11.30.40.42.43.44.54.MM4.MM8.MM9
高效、广谱：
• 致病的 HPV种类很多，目前已分离出高危型 HPV三十多种； • HPV的种属特异性，因此目前已有的无论是二价还是四价疫苗 都不能抵挡所有型别的 HPV感染； • 有研究表明 L2可以诱导交叉性中和抗体的产生。
合理评估其价值：从感染HR HPV到宫颈癌需要十余年
14
3. 最新研究进展 生物感染状态
妊娠期感染HPV的处理
18
3. 最新研究进展 男性与HPV
HPV的主要传播方式：
直接接触 性播
男性感染／携带
寄居部位 如何取材 如何检测
19
4. HPV的相关检验
检验方法
核酸扩增：如PCR等
• 灵敏度高 • 基因分型 • 特异性有待验证
基因芯片 理论上先进，发展的方向 杂交法：多种，分型 部分分型
• HC-II （Hybrid capture） 目前国内外应用最广的方法
– – – – 特异性好：500个碱基对的RNA探针 应用广，结果可以比对 灵敏度低 1.03 pg / ml 不能分型
20
4. HPV的相关检验 HC-II
HC-II试验操作的注意事项
一般酶免试验的注意事项 特殊的方面：
应用较多的是：
• 酵母菌、昆虫细胞、哺乳动物细胞表达系统。
13
3. 最新研究进展
HPV 疫苗
亟待解决的问题
技术和价格： 80%的宫颈癌发生在发展中国家和较贫 困地区； 全效：治疗和预防
• 每年全球大约有 47万例新发宫颈癌病例； • 到目前为止尚无逆转已经发生的感染和已经存在的病灶得以消 除的有效办法。
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1. 简要概述 分型
HPV18 14% HPV16 50% Others HPV 23% HPV13 5% HPV45 8%
64% 77%
5
1. 简要概述 致病性
HPV感染
生殖器- 粘膜型
CIN CA
非生殖器- 粘膜型
喉 乳头瘤
疣状表皮发育不 良型
疣
6
2. 临床应用
宫颈癌与HPV
乳腺癌 宫颈癌
17
3. 最新研究进展 妊娠与HPV
妊娠期（非典型）宫颈上皮内瘤样变的比率明显
高于非妊娠期。 因素：
妊娠期处于免疫“抑制状态” 妊娠激素的变化 E2
HPV感染对妊娠及胎儿、婴幼儿的影响
母婴垂直传播，血液经胎盘、羊水等感染胎儿； 新生儿肛门及生殖器部位的先天性尖锐湿疣； 婴儿期的喉乳头状瘤等。
过度检测，过度干预？
单次检测HPV阳性者发生宫颈癌的风险较小； 缺乏对HPV感染自然过程的完整认识，多数女性对HPV感染似乎 过于焦虑，临床上也存在对HPV感染的过度干预； 增加了宫颈癌筛查的经济消耗，
正确区分，制定合理的应用方案和个体诊疗方案。
15
3. 最新研究进展 生物感染状态
HR-HPV持续感染与自然清除的相关因素
亚型 kulmala的研究
• 高危与低危 • 16(18.1M). 31(16.2). 18 39(12.4)
基因变异与整合 16 病毒负荷量 多重感染 多重 > 单一 宿主因素
• • • • • 孕产史 经产 < 未产 妊娠期 年龄 负相关 免疫因素 行为因素 ，生活方式：吸烟、避孕工具、性行为等
16
3. 最新研究进展 妊娠与HPV
妊娠与HR-HPV感染
妊娠期HPV感染率明显高于非妊娠期，但妊娠期后的感 染率无明显差别。
• Lu等研究：妊娠期妇女感染高危型HPV最多，其次是高危低危 病毒混合感染； • 52型(31.2％)、16型(15.1％)、39型(11.8％)、53型(10.8％)、 18型和58型(均为9.7％)； • 多种类型的混合感染占到此次研究人群的43.0％； • 国内的研究：妊娠期妇女以感染高危型HPV病毒居多，主要类 型为HPVl6、18型； • Nobbenhuis等研究：妊娠妇女早、中、晚及产后感染率分别为 （50／44／45／31）%； • 妊娠期HPV病毒含量高于非妊娠期，低于宫颈癌病例。
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2. 临床应用 宫颈癌的发病过程
1（27/29）
CIN-III
自然清除—持续感染
78.7%（37/47）
CIN-II
HR HPV感染
53.7%（66/123）
CIN-I
什么是CIN？ Cervical intraepithelial neoplasia
32.3%（223/693） 正常宫颈上皮细胞
• • • • 注意颜色的变化 无色 蓝色 黄色 红色 绿色 棕褐色 孵育后，揭开膜要迅速，以防冷凝和污染； 冲洗不可过度——临界值结果增多 判断被污染的可能
21
4. HPV的相关检验 HC-II HC-II试验不成功，但又不完全失败的处理
• NCX3 <90 60~90 / PCX3 >90 110~330 2.5<PC/NC<15 CV 15% 25% • QC 2~8 4 • 0.08
高危型HPV —临床应用、最新进展、相关检验
安宏亮
目录
1. 简要概述
2. 临床应用 3. 最新进展
4. 相关检验
2
1. 简要概述
HPV:
人乳头瘤状病毒 human papillomavirus 乳多孔病毒科，多瘤病毒亚科 DNA病毒，8000个碱基对 嗜黏膜和皮肤上皮 E6 、E7 癌蛋白，P53 、Rb抑癌蛋白 生物分型：根据DNA的同源性分
HC-II试验结果的解释
• • • • 报告的是RLU/CO值，不是绝对定量g／mL 临界值0.8～1.2 60% 40% 结果的高低，不表示病情的轻重 筛查HR-HPV，是为了筛查高危人群，提示必须做进 一步的检查（病理），后期要加强监控 • 结合临床，具体分析
22
宫颈上皮内瘤样变
9
2. 临床应用 方案
制定”宫颈癌及癌前病变”的筛查、诊治方案
筛查宫颈癌前癌前病变CIN 指导CIN的处理原则：
• • • • 首诊 Leep疗效的评估 预后、转归 指导未明确诊断意义的病理结果：
指导意义不明的基底细胞异常BAUS的处理
• 不典型鳞状上皮细胞增生ASCUS • 不典型腺状上皮细胞增生AGUS
优生优育
10
3. 最新研究进展
HPV 疫苗的研制和应用 自然清除与持续感染 妊娠与HPV感染 男性HR-HPV感染
11
3. 最新研究进展
HPV 疫苗
预防性疫苗 L1 L2蛋白
HPV病毒样颗粒 (VLP) 2006年 Merck公司 HPV16 /6 /11 /18四价疫 苗和 GSK公司的 HPV16 /18二价疫苗 短暂及持续感染的疗效达到 93%
治疗性疫苗 E6 E7蛋白
基因重组疫苗
12
3. 最新研究进展
HPV 疫苗
载体表达系统的研究
选择适宜的载体表达系统：
• 研制 HPV疫苗的重要环节； • 影响表达水平及蛋白活性的关键步骤。
理想的载体：
• 应具有稳定的无毒表型,不与宿主染色体发生整合； • 能有效表达具有免疫原性的外源基因序列； • 接种后不会在宿主体内长期留存的特点；
如何判断“持续感染”与“一过性感染” HR-HPV的持续感染是宫颈癌发生的必要条件； 目前，HPV检测已被广泛应用于宫颈癌高危人群的筛查； 高HPV感染率，低持续感染率
2002年，山西襄垣县的调查研究：32~50岁妇女，HR-HPV感染率 27．5； 全球范围内的一项统计：宫颈细胞学筛查正常，HPV感染率高达 10．4％，但仅少数感染持续存在；