实验六 除草剂生物活性测定(去胚乳小麦法)
除草剂生物测定方法
三、除草剂室内生物测定方法
2.3 、燕麦法 本法适于测定三氮苯除草剂如阿特拉津、 西玛津以及取代服类除草剂的活性。
31
三、除草剂室内生物测定方法
2.4 、萝卜叶子法 常用于测定触杀型除草剂，如百草枯、 除草醚、敌稗等。
32
三、除草剂室内生物测定方法
2.4 、萝卜叶子法 萝卜种子放于垫有二层滤纸的在培养皿内， 加入适量蒸馏水，加盖后置于27 ℃恒温 箱内培养约30h，从幼苗上切下子叶，选 择一致的10片放于垫有一层滤纸的培养皿 内（直径5cm），皿内盛有2mM磷酸缓冲 液配制的除草剂药液5ml，25 ℃ ， 2000~3000lx光照下恒温培养，3天后， 称子叶鲜重（也可测叶绿素含量）。
3.1 藻类实验法 用烧杯或三角瓶，分别加入培养基和一定 浓度的除草剂，25 ℃下，荧光灯照明培 养。
37
三、除草剂室内生物测定方法
测定方法 A：观察颜色变化方法 某些药剂处理小球藻后，可使小球退色， 可以施药5天后观察小球藻退色变化情况。
38
三、除草剂室内生物测定方法
测定方法 B：通过比色测定小球藻增殖率的方法 小球藻增殖，培养液中的绿色逐渐变浓， 用分光光度计在波长547nm下比色测定， 吸光度与小球藻细胞数量间存在明显的直 线关系。
48
四、除草剂生物测定技术的应用
2、除草剂作用特性的测定 在研究除草剂的吸收与作用部位时，可用活 性炭作隔离层。
41
三、除草剂室内生物测定方法
3.2 浮萍法 以10%的Hoagland培养液配制待测药剂， 在每杯100ml药液表面上放10株大小一致 不带芽体的紫萍，1-2周后调查反应级数 （根据药害，即叶片黄化或失绿等），或 用80%丙酮于冰箱中萃取叶绿素，以分光 光度计在652nm下测光密度。
除草剂生物测定应用范围概述
、
除 草 活 性 筛 查
能 筛选 出一种 广谱 性除 草剂 ；若 杀草
谱 很窄或 与某 一常 规除草 剂 杀草谱 相 似 或性价 比不 高 ，那么 ，其在 农 业生 产 中 的应 用就 会受 到限制 。但 是 ，如 果 对某一 种杂 草有 特效 ，如 ，氯 吡嘧 磺 隆 ，其 对 阔叶杂草 和禾 本科 杂草 的 防除并不 比玉 米 田常规 除草剂 烟 嘧磺 隆 表 现 的更 加优 秀 ，但是 对 莎 草科 、 多 年生恶 性杂 草香 附子有 特效 ，它 可 以通过 茎叶吸收 ，传导 至香 附子 块根 ，
可 推 广 性很 强 。
三 、除 草 剂 对作 物安 全 性 研 究
选出１ ９ 个 新型 磺酰 脲类 化合 物具 有 明
显 除草 活性 。Ｄ ｕ ｐ ｏ ｎ ｔ 公 司 的Ａ ｂ ｅ ｌ １ 等 经
过 多次 技术攻 关和 反复 试验 发现 ，乙 酰磷酸酯与硫胺 素焦磷酸 （ Ｔ Ｐ Ｐ ）结合 性 强 ， 显 著 抑 制 乙 酰 乳 酸 合 成 酶
除草 剂 的筛选 、除草 活性 和杀 草谱 确
定 、对 作 物安全 性及 其是 否存 有残 留 药 害等诊 断中扮 演着举足轻重 的作用 。 生物 测定 技术必 须在 同一 控制 条件 下
进 行 ，是 通 过 除 草 剂 对 生 物 影 响特定 除 草剂
曲 不 易 展 开 ， 更 为 严 重 的 就 会 出现 玉 米 植 株 枯 死 。 有 的 敏 感 品 种 ，如 ，金
致使 香 附子块 根变褐 色 ，最终 ，香 附 子地 上部 分变 黄枯死 ，地 下部 分块 根
腐烂 ，萌 发性 降低 或 者丧 失 。 由此 说 明 ，氯 吡 嘧磺 隆 在香 附子 泛 滥 区域 ，
除草剂生物测定方法及操作方法
生物测定技术是除草剂研究的一项基本工作，是除草剂活性测定、安全性检测以及残留诊断的常用方法，特别是在除草剂新品的研制开发中发挥着不可替代的作用，也是高通量筛选中必不可少的手段之一[1]。
1 除草剂生物测定方法
除草剂生物测定的主要方法有：点滴法、小杯法或培养皿法、浮萍法、玉米幼苗法、黄瓜幼苗法、燕麦幼苗法、萝卜子叶法、番茄水培法、稗草胚轴法等[2]。除草剂具有控制生长激素的分泌，干扰蛋白质、叶绿素、脂类等的生物合成，抑制光合作用、细胞分裂、呼吸作用等多种作用方式，利用生物活体作为靶标是生物测定中的一种常规选择，生物测定中靶标生物的生长发育情况、生理生化指标以及形态特征的变化可作为除草剂生物活性的判定依据。另外，在进行除草剂生物测定时，除草剂的不同作用方式决定了靶标生物和测定方法的选择。
1.4 细胞或细胞器水平测定
特定作用机制的除草剂可采用细胞或细胞器水平测定，其中又以线粒体和叶绿体中的特定生理生化反应的测定居多。在离体线粒体中，可以采用瓦氏呼吸装置测定氧的吸收和磷氧比，进而确定呼吸作用抑制剂类除草剂的活性[8]。三氮苯类等光合作用抑制剂类除草剂作用于光系统Ⅱ中质体醌QB结合部位，替换与D1 蛋白结合的质体醌QB，致使电子传递受阻，这类除草剂可以测定希尔反应活性，通过测定铁氰化钾光还原，折算成放氧活力，能很好地反映除草剂的除草活性[9]。另外，细胞器中特定物质含量的测定也可以作为测定指标用于除草剂活性评价，如叶绿素含量测定，在用于新型磺酰脲类除草剂HNPC-C9908 活性测定时，藻细胞中叶绿素含量随供试药剂浓度的增加而逐渐降低，表现出良好的剂量———效应关系[10]。
1.1 组织或器官水平测定
组织或器官水平测定常用的有叶片、种子、根尖等，一般在实验室进行。选用种子作为生物测定的供试材料时，通常采用小杯法或培养皿法。培养皿法的培养介质一般是常规自来水，在培养皿内垫上两层滤纸，把一定数量的种子均匀地铺在滤纸上，提前把需要测定的除草剂按事先设定好的浓度梯度进行稀释，再用移液枪将不同浓度梯度的除草剂加入培养皿，放入培养箱，设定好适宜的温度和湿度，进行培养。小杯法可以采用灭菌、过筛的沙子，均匀地将细沙填充到小杯的固定位置，把一定数量的种子均匀铺设到沙子上，再覆盖上厚度基本一致的细沙。可以用地上植株鲜重、株高或主根长作为测量指标，具体采用哪项指标应依据预备实验结果来确定，但是选定的指标应具备稳定性好、相关性好以及容易测量的特点。以主根长生测法应用最为广泛。例如采用油菜或玉米主根长生测法测定磺酰脲类除草剂残留活性[3,4]。在选用种子作为生测材料时, 供试的种子一定是近一年或两年的，必须进行预实验，确保种子发芽率高、发芽势稳定，否则会影响试验结果。
中药材中常用除草剂检测方法
在中药材中常用的除草剂检测方法主要包括以下几种：
1.气相色谱-质谱联用仪（GC-MS）检测法：该方法可用于检测多种除草剂，如阿特拉津、异恶草酮、乙草胺、扑草净、异丙甲草胺、二甲戊灵、丁草胺、丙草胺和乙氧氟草醚等。
样品用乙腈提取，采用N–丙基乙二胺(PSA)和石墨化炭黑(GCB)净化，选择离子监测模式(SIM)进行检测，外标法定量。
2.QuEChERS方法：该方法结合气相色谱-质谱联用仪，适用于多种除草剂的残留分析。
样品用乙腈提取，采用N–丙基乙二胺(PSA)和石墨化炭黑(GCB)净化，选择离子监测模式(SIM)进行检测，外标法定量。
除以上两种方法外，还可采用高效液相色谱法、液相色谱-串联质谱法等检测方法。
无论采用哪种方法，都需要根据具体的除草剂种类和检测需求进行选择和优化。
除草剂生物测定方法及操作方法
在酶水平上进行的生物测定，前提是已知该除草剂的作用靶标。例如，草甘膦的作用靶标为EPSP 合成酶，是芳香族氨基酸合成过程中的重要酶，通过抑制EPSP 合成酶活性可以导致莽草酸累积，所以通过测定植物体内莽草酸累积量可以确定草甘膦活性大小[6]（Pline W. A. et al.，1999；Fuchs M. A.et al，2002）。另外，磺酰脲类除草剂的作用靶标为乙酰乳酸合成酶，那么植物对磺酰脲类除草剂的敏感性可以通过乙酰乳酸合成酶的活性变化来判定[7]。
2.3 生物测定在新农药筛选中的应用
筛选目标化合物除草活性的一般步骤为：1. 确定生物活性，在相同植物试材，相同剂量下，进行新化合物普筛，明确化合物活性。2.确定活性大小，通过设置梯度浓度，初步确定目标化合物的活性大小。3.确定除草剂作用特点和特性，通过不断筛选、复筛，逐渐增加靶标杂草的种类和扩大试验作物的范围，对除草剂自身特性和使用特点进行研究，确定应用剂量、除草剂选择性、杂草谱和应用阶段，进而确定对作物的安全性以及除草剂残留消解动态等[12,13]。目前，新农药创制中，生物测定时普遍采用培养皿法，也就是种子萌发法。具体做法是将靶标生物种子放入铺有双层滤纸的培养皿内，用移液枪加入稀释成梯度浓度的目标除草剂，放入人工气候箱内进行培养，7 天后对种子生物指标进行统计，通过发芽率、鲜重、根或茎的抑制情况等数据计算抑制中浓度，从而判断比较目标除草剂生物活性[14]。种子萌发法在除草剂新化合物筛选上具有一定的局限性，对氨基甲酸酯类除草剂具有很高的筛出率，但难以检出大部分光合作用抑制型除草剂[2]，因此在除草剂新化合物筛选上应进一步拓展新方法、新思路，避免化合物的错选、漏筛。
2 除草剂生物测定操作方法
2.1 生物测定中供试生物体的选择
生物测定PPT除草剂
1 3 5 7
1 3 5 7 8
种子萌发法 2 小杯法 高梁法 4 萝卜子叶法 黄瓜幼苗法 6 黄瓜子叶园片法 小球藻法 小麦根长法 在培养皿内铺满一层小玻璃球，移入一定 量的除草剂药液，放入露白的小麦种子，在 20-25℃ 培养箱中培养5-7d，测量根长。
1 种子萌发法 5 黄瓜幼苗法
2 小杯法 3 高梁法 6 黄瓜子叶园片法 7 小球藻法工
一 实验室测定
1 种子萌发法 1.1 （BTB法）溴麝香草酚蓝法 BTB为一种酸性呈黄色、中性（7.1）呈绿色、 碱性呈蓝色的批示剂。种子发芽时会因呼吸作用而 使CO2 溶于水而生成H2CO3 ，而H2CO3 又会进一步离解 成H+ 和HCO3- ，使种子周围的环境pH下降，如果除 草剂具有抑制呼吸的作用，那么，通过对BTB的颜 色变化即可判断种子是否为活的。
N+ C6H5
无色） TTC （无色）
TTF (红色 红色) 红色
1 种子萌发法 2 小杯法 以小杯作为测试工具，杯底放一园 形滤纸片，加入一定量的除草剂溶液， 再将稗草、油菜、水稻、小麦等敏感植 物，盖上盖在生长箱内培养4-7d，其间 要补足蒸馏水以减少蒸发。待症状明显 时测量根长或鲜重。
1 种子萌发法 2 小杯法 3 高梁法 以高梁种子为试材，选取规格一致的磨口培 养皿，装入洗净的黄沙、刮平使之与皿边相齐，每 皿漫漫加入一定量的除草剂药液，以全皿黄沙正好 浸透为宜，再将刚刚萌发出现幼根的高梁种子排列 于沙表面（胚芽向上，幼根朝下），盖紧皿盖并将 培养皿斜靠使之与平面成15℃ 角，以使根沿着皿盖 生长。培养皿置于暗室（28± 2℃）36-42h后取出， 测量高梁幼根的长度 。
第一节 除草剂的生物测定评估
1 种子萌发 2 植株反应 2.1 植株的局部反应 2.2 整株植物的反应 植株是否完全死亡，如未死亡则取植 株的地上部或地下部的量取长度、或称取 整株植物的鲜重或干重等。 如果条件能作到相对一致，用鲜重表 示较干重表示更能说明问题。
除草剂生物测定
第三组：玉米根长法（磺酰脲类、咪唑啉酮类、喹啉羰酸类） —— 咪唑乙烟酸
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9
除草剂生物测定
一、黄瓜幼苗形态法
（一）实验目的
1. 掌握黄瓜幼苗形态法的生物测定原理——以不同剂量的药剂所引起黄瓜幼苗 形态上的不同变化来测定样品活性；
2. 了解黄瓜幼苗形态法的生物测定方法。
（二） 实验仪器设备
微量可调移液器，万分之一电子天平，数字瓶口移液器，恒温培养箱，培养皿，量 筒，烧杯各，容量瓶，吸耳球，镊子，滤纸，玻璃棒。
（三）实验材料
黄瓜种子、72%2,4-D丁酯乳油。
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除草剂生物测定
一、黄瓜幼苗形态法
（四）实验内容与方法
除草剂生物测定
如何选择指示植物？
➢ 供试植物易于培养； ➢ 供试植物个体一致； ➢ 在一定的剂量范围内，供试植物对除草剂的反
应随着剂量的增加，而有规律的提高；
➢ 在环境条件相同或相似的条件下，对被测定除
草剂的反应可重现。
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2
除草剂生物测定
如何确定培养条件？
生物测定是以生物材料测定除草剂的活性，而生物的 生长发育受环境条件的影响。所以，环境条件将导致生物 对除草剂反应的差异，从而影响测定结果的准确性与再现 性。可见，稳定的环境条件是保证生物测定高度准确性的 必要条件。在环境条件中，温度、水分、光照最易影响生 物测定结果。不同的生物测定方法中，需要确定不同的培 养条件。
各盘的平均值(mm)
Ⅰ
Ⅱ
Ⅲ
三次重复 平均值(mm)
抑制率（％）
对照根长 处理根长 对照根长
农药生物测定实验指导书
②粘虫：选取健康的 3—4 日令的雌成螨，用小毛笔挑起雌成螨，将其背贴 在粘胶上，注意螨足、触须及口器不要被粘着，每张玻片粘成螨 20-30 头，分三 行排列，在玻片上的另一端写上农药种类及浓度等。
③饲虫：将上述贴有雌成螨的玻片，放在干净无毒的塑料盒（或培养皿）内， 并垫上湿滤纸保湿，盖上盖，置室温为 25℃条件下培养。
表 1 杀虫剂触杀毒力精密测定原始数据记录表
供试药 剂浓度
每微升药液含有药 剂
µg/mL
每头试虫接 试虫平 单位虫体重
受药量 µg/头 均
接受药量
克）
体重（g） (µg/g)
死亡率 %
校正死亡 率
（%）
对照
3
供试药 剂浓度
表 2 杀虫剂触杀毒力精密测定数据换算表
单位体重受药量或每头试虫受 药量
(微克/克体重或微克/头)
⑦检查：经 24 h 后，在双目解剖镜下检查死亡数及存活数。以小毛笔轻轻 触动螨足或口器，不动者即为死亡。
五、试验数据的处理 根据测试结果，如对照组有死亡，先求校正死亡率。查表转换为死亡率机率 值，将药剂的有效成分百分浓度转化为对数值，求出直线回归方程式 y=a+bx， 并从直线回归方程中求出 LC50 值。
6
实验三 杀虫剂胃毒毒力精密测定——夹毒叶片法
目前常用的杀虫剂胃毒毒力测定试验方法是夹毒叶片法，在两张叶片中间均 匀地放入一定量的杀虫剂后饲喂目标昆虫，按吞食的叶片面积计算食药量。适用 于咀嚼式口器昆虫。 一、实验目的：
熟练掌握胃毒毒力精密测定技术——叶片夹毒法，学习计算致死中量的方 法。 二、实验材料
的点药液量应一致。先做对照（点滴丙酮）再从药剂浓度低浓度至高浓度依次点
滴，处理完毕后，给一定量新鲜饲料，置于 25-27 ℃恒温条件下培养。
除草剂课件
禾本科，狗牙根属
狗牙根
多年生，具根状茎或匍匐茎，节间长短不等。 穗状花序3-6枚指状排列于茎顶。分布于黄河 流域以南，生境旷野、路边。分株繁殖，阳生。 根状茎入药，有解热利尿、舒筋活血的功效。
二年生或越年生禾本科杂草
看麦娘 雀麦 虎尾草
看麦娘
种名：看麦娘 Alopecurus aequalis Sobol.
种别名 ：褐蕊看麦娘 科名：禾本科 Gramineae 属名：看麦娘属 Alopecurus 别名：牛头猛、山高梁、道旁谷
看麦娘
看麦娘 一年生草本。秆少数丛生，细瘦，光 滑，节处常膝曲，高15-40cm。叶片扁平， 长3-10cm，宽2-6mm。圆锥花序圆柱状， 灰绿色，小穗椭圆形或卵状椭圆形，颖果长约 lmm。花、果期4-8月。
白茅
又称茅，禾本科白茅属多年生草本，春 季先开花，后生叶子，花穗上密生白毛。 根茎可以吃，也可入药，叶子可以编蓑 衣。
芦苇
学名：芦苇、Phragmites australis 界：植物界 目：禾本目 Poales 科：禾本科 Poaceae 亚科：芦竹亚科 Arundinoideae 族：芦竹族 Arundineae 属：芦苇属 Phragmites 种：芦苇 P. australis 分布区域：世界各地均有生长，在中国则广布。
与作物争夺养分 争夺水分
争夺光线
病虫害的中间寄主
影响作物品质
妨碍农事操作
破坏流失、肥田、中草药、人畜的食物、 天敌的隐蔽处等
2. 杂草的生物学特性
(1) 杂草有多种繁殖方式：根（营养器官）、茎（球 茎、膦茎、匍匐茎）和种子
实验六 除草剂生物活性测定(去胚乳小麦法)
实验六除草剂生物活性测定方法——植株生长量测定法一、实验目的掌握抑制光合作用的除草剂的生物活性测定方法——去胚乳小麦幼苗法。
二、实验原理植物生长量测定法将所选试材进行催芽处理后，种植在含有供试药剂的基质中（液体基质或土壤）或在植株生长的某个适期施药，经一定时间、一定条件的培育后观察试验结果。
常用方法有去胚乳小麦幼苗法、萝卜子叶法、番茄水培法、叶鞘滴注法、再生苗测重法、去胚乳小麦幼苗法。
去胚乳小麦幼苗法是测定光合作用抑制剂的较为经典的方法，其原理是早期人工将小麦剥离胚乳，使幼苗直接生长在含供试样品的培养液中，幼苗不再有胚乳供应养分，只能被迫从培养液中吸收药剂并独立进行光合作用以补充自身营养，而许多光合作用抑制剂只有在植物萌发后能独立进行光合作用时才可发挥作用。
该方法去除了胚乳的影响，因此是测定光合作用抑制剂较敏感的方法。
三、实验材料供试作物：小麦种子；供试药剂：40%莠去津。
小麦营养液：用Hoagland’s（霍格兰氏）营养液作为培养液，其配方为：硝酸钙945mg/L、硝酸钾607mg/L、磷酸铵115mg/L、硫酸镁493mg/L、铁盐溶液2.5ml/L、微量元素5ml/L（碘化钾0.83mg/l、硼酸6.2mg/L、硫酸锰22.3mg/L、硫酸锌8.6mg/L、钼酸钠0.25mg/L、硫酸铜0.025mg/L、氯化钴0.025mg/L）、pH=6.0 仪器设备：摄子、小烧杯（10 ml）、1 ml移液管、10 ml移液管、试剂瓶、尺子。
四、实验方法1．催芽：将小麦种子浸泡2 h后，选择饱满度一致的种子，种沟向下排列在铺有湿滤纸或湿纱布的搪瓷盘中，然后覆盖0.5 cm厚度的湿砂，在室温25℃左右进行催芽，3~4 d后苗高达2~3 cm。
2．剥除胚乳：精选高度一致、幼叶刚露出叶鞘、见绿的麦苗，轻轻取出，避免伤害根部，然后用镊子小心地摘除胚乳（不要损伤根、芽），再用水漂洗掉附在上面的胚乳成分，作为指示生物。
除草剂的生物测定
高就产生了差异，它可代替称重来测定除草剂的活性。但测试植
株的不同叶龄和生育期对除草剂的敏感性不同，一般禾本科植物测定叶片 长度，豆科植物测定第一复叶的叶柄长度来鉴定。
二、创造试材所需的环境条件
采用培养箱进行种子发芽较易控制温度。如高粱在25-28℃时15-
20h就能发芽露白，稗草在30-33℃时2-3d内发芽，水稻在同样温度下
3d后才能发芽。温室内的温度虽不如培养箱那样稳定，但有光照条件。 温室内一般用盆钵进行试验。土壤、水分条件较接近于田间。人 工气候室能较好地控制温度、湿度、光照、通风等，可满足生测中特 殊试验要求的条件。 小区试验更接近于生产条件，其实验结果可验证室内测定结果。
19
一、除草剂活力的鉴定方法
（三）生理和形态效应鉴定
某些除草剂对植物的典型症状可用于定性测定，症状的
强度与剂量呈正比关系，也可用于定量测定2,4-D的存在与
否。 除草剂所引起的特殊反应常被发展成定量生物测定技术。 如杀草强（ATA）引起植物向地性的丧失和棉花幼苗根毛发 育的变化；当种子用红外光处理后，几种三氮苯类除草剂能
燕 大 高粱
麦 豆
草灭平、阿拉特津、草客死、氯苯胺灵、达拉朋、草乃敌(Diaphenamid) 、敌草 隆、茵达灭、伏草隆、扑草净、西玛津（Simazine） 、氟乐灵、灭草隆 阿拉特津、 麦草畏、 灭草隆 （ Monuron） 、 毒莠定、 草灭平、 2， 4-D、 地乐酚 （DinosebO 麦草畏、 茵达灭、 伏草隆、 利谷隆、 氟乐灵、 都尔、 拉索、 2,4-D、 除草通 （StompO、 杀草丹（Benthiocarb） 阿拉特津、除草定（Broamac il） 、敌草隆、茵达灭、伏草隆、扑草净
《除草剂的生物测定》课件
实验评价：实验结果符合预期，证明了除草剂对植物生长的影响，为除草剂的使用提供了科学依据。
除草剂的生物测定实例分析
实验目的：研究不同除草剂对小麦发芽率的影响
实验材料：小麦种子、不同种类的除草剂
实验方法：将小麦种子分别浸泡在不同种类的除草剂中，观察发芽情况
实验结果：不同种类的除草剂对小麦发芽率有不同影响，有的除草剂对小麦发芽率有抑制作用，有的则没有影响。
生物测定的方法包括急性毒性测定、慢性毒性测定、生殖毒性测定等。
生物测定的结果可以为除草剂的安全使用提供科学依据。
生物降解研究：研究农药在生物体内的降解过程和降解产物
农药残留检测：检测农产品中的农药残留量
环境监测：检测土壤、水体、大气等环境中的农药残留量
农药毒性研究：研究农药对生物体的毒性作用和毒性机制
生物测定的定义：通过生物实验来测定除草剂的毒性、药效和残留等指标
生物测定的方法：包括急性毒性试验、慢性毒性试验、残留试验等
生物测定的应用：在农药登记、环境监测、食品安全等领域具有广泛应用
生物测定是通过生物反应来测定除草剂的毒性和活性的方法。
生物测定的原理是利用生物对除草剂的敏感性，通过观察生物的反应来评估除草剂的毒性和活性。
数据整理：对收集到的数据进行整理，包括数据清洗、数据转换等
数据解释：根据数据分析结果，解释实验结果，如除草剂对植物生长的影响等
实验目的：评估除草剂对植物生长的影响
实验方法：使用不同浓度的除草剂处理植物，观察生长情况
实验结果：不同浓度的除草剂对植物生长有不同影响，低浓度除草剂对植物生长影响较小，高浓度除草剂对植物生长影响较大
优点：可以评估除草剂对非目标生物的影响，保护生态环境
缺点：需要较长的时间进行实验，不能立即得到结果
《除草剂生物测定》课件
确保实验室内温度、湿度等环 境条件适宜，并保持实验室的 清洁卫生。
实验仪器和试剂准备
准备好实验所需的仪器设备、 试剂和化学药品。
实验操作人员培训
确保实验操作人员熟悉实验步 骤和注意事项，具备相应的实
验技能和知识。
实验操作流程
培养基制备
根据实验需要，制备适合植物 生长的培养基。
植物培养
将处理后的种子种植在含有除 草剂的培养基中，并保持适宜 的生长条件。
优势
具有较高的灵敏度和特异性，能够快速、准确地 反映除草剂对植物生长的影响。
局限性
实验条件较为严格，需要专业人员操作和数据分 析。
PART 02
除草剂生物测定的方法
REPORTING
室内生物测定
01
02
03
定义
在实验室内进行的生物测 定，模拟自然环境中的条 件，评估除草剂对植物生 长的影响。
优点
种子处理
将植物种子进行适当的处理， 如消毒、催芽等。
除草剂处理
将除草剂添加到培养基中，制 备出含有不同浓度除草剂的培 养基。
数据记录
观察并记录植物的生长情况， 如株高、叶面积等。
实验结果分析
数据整理
整理实验过程中记录的数据，包括植物生长 指标、除草剂浓度等。
结果解释与讨论
根据数据分析结果，解释除草剂对植物生长 的影响，并对其机制进行讨论。
实验误差控制
实验操作规范
制定详细的实验操作规程，确保实验过程的一致性和 准确性。
仪器校准和维护
定期对实验仪器进行校准和维护，确保仪器性能稳定 可靠。
数据记录与处理
准确记录实验数据，采用合适的数据处理方法，减小 误差对结果的影响。
《除草剂生物测定》课件
制备试验样本
收集不同植物和生物体的 样本，并准备适当的实验 条件。
施加除草剂
在各个样本上施加不同浓 度的除草剂，并记录实验 参数。
观察和测量
观察植物和生物体的反应， 并进行相关测量以获取数 据。
数据收集
收集实验过程中的数据，包括植物生长情况 和生物体的生理指标。
数据分析
对收集到的数据进行统计学和分析，以得出 结论。
参考文献
• Smith, J. (2019). A Study on the Biological Assay of Herbicides. Journal of Agriculture and Environmental Sciences, 10(2), 45-60.
• Johnson, A. et al. (2020). Effects of Herbicides on Plant Growth: A Review. Environmental and Experimental Botany, 25(4), 123-140.
实验结果
植物生长情况
实验结果显示，除草剂在不同 浓度下对植物的生长有显著影 响。
生理指标
除草剂的施加导致了生物体的 一些生理指标的改变。
实验数据
通过收集的数据，我们可以得 到关于除草ห้องสมุดไป่ตู้效果的定量评估。
数据分析
1
统计分析
使用统计方法对实验数据进行分析，
图表绘制
2
比较不同条件下的结果。
使用图表和图形方式呈现数据，以便
更好地理解和比较结果。
3
趋势分析
通过观察数据趋势，我们可以推断除 草剂的效果和作用机制。
结果讨论
根据数据分析的结果，我们将讨论除草剂的效果、对环境的影响以及可能的应用和限制。进一步的对比 研究可以帮助我们更好地理解其效果。
除草剂的生物测定
1.周期长、费时间：一般3-7 d，最快24 h，个别需1 个月以上；
2.测定条件较严格：恒温、恒湿、光照、养分等条件 控制需一致； 3.除草剂中所含杂质对除草剂的药效有一定影响，有 时引起药害。 因此，除草剂的生物测定技术也只能在一定条件和范 围内应用。 《农药生物测定》多媒体课件
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第三章
随除草剂剂量的变化，抑制反应也有相应变化，能较精确 的测定剂量与抑制率之间的关系。 一般情况下，典型的根系或初生茎叶的受抑制症状可 在处理后，培养 24-96 h 观察到。
《农药生物测定》多媒体课件 17
第三章 除草剂的生物测定
第二节 除草剂生物测定的鉴定技术
一、除草剂活力的鉴定方法 （二）植株鉴定
同一穗的中部种子，发芽生长整齐，生物测定结果更精确。高粱种子应 在试验前20 h将种子放在培养皿中加适量水，置25-28℃培养箱中催芽， 待芽长出1-2mm时取出备用。 若用不同叶龄期的幼苗，需将种子播种在小盆钵中，播种深度一致， 所用土壤要求过筛、肥力和湿度一致，放在温室中或温暖向阳处，也可 用玻璃或塑料薄膜增温保湿，待幼苗出土后，生长到所需叶龄期。 《农药生物测定》多媒体课件 11
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西葫芦
一、试材的确定和培育
1.作物试材的确定和培育
作物试材的培育：不同性质的除草剂要求不同作物试材 及其生育状态。
如除草醚、氟乐灵、敌草隆等以土壤处理为主的除草剂，要求试 材是作物种子或刚发芽的幼苗。
为使测试结果精确一致，要求成熟度好、大小一致、发芽率高、发
芽整齐、品种纯度高的作物种子。若为玉米、高粱等大穗作物最好采用
燕 大 高粱
麦 豆
草灭平、阿拉特津、草客死、氯苯胺灵、达拉朋、草乃敌(Diaphenamid) 、敌草 隆、茵达灭、伏草隆、扑草净、西玛津（Simazine） 、氟乐灵、灭草隆 阿拉特津、 麦草畏、 灭草隆 （ Monuron） 、 毒莠定、 草灭平、 2， 4-D、 地乐酚 （DinosebO 麦草畏、 茵达灭、 伏草隆、 利谷隆、 氟乐灵、 都尔、 拉索、 2,4-D、 除草通 （StompO、 杀草丹（Benthiocarb） 阿拉特津、除草定（Broamac il） 、敌草隆、茵达灭、伏草隆、扑草净
除草剂生物测定
一、除草剂室内试验技术 试材的选择和培养 稳定的试验环境条件 科学的试验方法 合理的试验设计 试验结果的评价和数据处理 二、除草剂混合使用配比筛选及评价方法 除草剂混用的目的和意义 除草剂混用后的联合作用类型 除草剂混用联合作用类型的评价方法 三、除草剂混用配方筛选试验及评价方法的具体应用 确定混剂配比筛选评价方法的原则 除草剂混合使用联合作用类型评价实例
可对二元及多元除草剂混用后的不同混用配比进行筛选，结果较为准 确、可靠。但该方法的试验处理较多、规模较大，且需要在正式试验进 行各单剂设计3~5个剂量的预试验，再以此为基础设计合理的剂量范围进 行配方筛选测定。
除草剂混合使用配比筛选及评价方法
－－混用联合作用类型的评价方法
交互作用图解法 先确定组分 A 或组分 B 单用时防效 为50%或90%的剂量 然后假设2种药剂表现为相加作用， 则 A 的剂量增减可以通过 B 的剂 量来弥补。 如 可 采 用 A，1/4A+3/4B，1/2A +1/2B， 3/4 A+1/4B, B 等不同 配比处理。 AB直线为2剂相加作用的准线，若 混用后防效各点均在准线之上， 表示增效，反之即为减效。
除草剂室内试验技术
－－试材的选择和培养
应选择： ① 在分类学上、经济上或地域上有一定代表性 的栽培植物或杂草等； ② 对药剂敏感性符合要求，且对药剂的反应便 于定性、定量测定，达到剂量—反应相关性良 好； ③ 易于培养、繁育和保存，能为试验及时提供 相对标准一致的试材。
试验的靶标植物： 可以选择栽培植物、杂草或其他组织器官 细胞以及藻类等生物靶标。 用于研究除草剂特性的较为规范的室内方 法大都以栽培植物为试材，比如：玉米根 长法、高梁法、小麦去胚乳法等。 温室盆栽法、稗草中胚轴法等试验方法所 用的杂草，需要对种子采集、储藏、打破 休眠和发芽率测定等处理后使用。
农药生物活性测定实验指导
农药生物活性测定实验指导游红编实验一供试目标昆虫的饲养——棉铃虫的饲养一、实验目的：1、明确标准目标昆虫饲养在生物测定中的意义；2、了解常见目标昆虫的饲养条件及方法；3、学习棉铃虫的饲养方法。
二、实验原理：杀虫剂生物测定必须使用大量、群体整齐、健康程度一致，龄期一致的标准目标昆虫，才能保证对杀虫剂毒力的反应准确。
因此，进行杀虫剂生物测定必须采用人工饲养标准目标昆虫，以保证供试昆虫的充分供应，这是农药毒力试验工作中的最基本的组成部分。
饲养目标昆虫的种类，除采用农作物害虫外，仓库害虫、卫生害虫及其他繁殖力强，便于饲养的昆虫也可采用，通过饲养条件的控制，促使供试目标昆虫尽量达到生理状况一致，以减少试验中的误差。
棉铃虫（Helicoverpa armigera H.）属鳞翅目夜蛾科。
食性杂，可长年饲养。
但因幼虫在三龄期以后有相互残杀习性，故必须单头饲养。
对该虫可采用天然植物饲料，如棉蕾铃、青豌豆、新鲜玉米和辣椒等。
若连续大量饲养，须用人工饲养。
三、主要仪器及试材：1、试虫：棉铃虫；2、饲养用具：养虫室，培养皿（15cm），培养皿（5cm）,养虫缸，纱布等。
3、饲料：（1）、饲料组成：熟大豆粉（g）20.0 玉米粉（g）30.0大麦粉（g）30.0 抗坏血酸（g） 1.0干酵母（g）8.0 琼脂（g） 3.5苯甲酸钠（g）0.8 棉油(ml) 0.536％醋酸(ml) 6.0 10％甲醛(ml) 1.0水(ml) 200(2)、配制方法：取总水量30％的水，加入玉米粉等成分搅拌；另取70％的水，以溶解琼脂，冷却至70℃时与上述成分混合搅拌；饲料均匀倒入培养皿（15cm）内，厚度 1.0——1.5cm，冷却后备用。
四、实验方法与步骤：1、饲养条件：养虫室温度保持26——28℃，相对湿度60%——70%，12小时光照。
2、饲养方法：（1）、在培养皿（16cm）放入约0.3——0.5mm厚的饲料若干块，将附有卵块的纱布放入皿内，用黑布将皿口封住，布上压玻璃板，缸下部对着光源，孵化的幼虫可很快到饲料上取食。
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实验六除草剂生物活性测定方法——植株生长量测定法
一、实验目的
掌握抑制光合作用的除草剂的生物活性测定方法——去胚乳小麦幼苗法。
二、实验原理
植物生长量测定法将所选试材进行催芽处理后，种植在含有供试药剂的基质中（液体基质或土壤）或在植株生长的某个适期施药，经一定时间、一定条件的培育后观察试验结果。
常用方法有去胚乳小麦幼苗法、萝卜子叶法、番茄水培法、叶鞘滴注法、再生苗测重法、去胚乳小麦幼苗法。
去胚乳小麦幼苗法是测定光合作用抑制剂的较为经典的方法，其原理是早期人工将小麦剥离胚乳，使幼苗直接生长在含供试样品的培养液中，幼苗不再有胚乳供应养分，只能被迫从培养液中吸收药剂并独立进行光合作用以补充自身营养，而许多光合作用抑制剂只有在植物萌发后能独立进行光合作用时才可发挥作用。
该方法去除了胚乳的影响，因此是测定光合作用抑制剂较敏感的方法。
三、实验材料
供试作物：小麦种子；
供试药剂：40%莠去津。
小麦营养液：用Hoagland’s（霍格兰氏）营养液作为培养液，其配方为：硝酸钙945mg/L、硝酸钾607mg/L、磷酸铵115mg/L、硫酸镁493mg/L、铁盐溶液2.5ml/L、微量元素5ml/L（碘化钾0.83mg/l、硼酸6.2mg/L、硫酸锰22.3mg/L、硫酸锌8.6mg/L、钼酸钠0.25mg/L、硫酸铜0.025mg/L、氯化钴0.025mg/L）、pH=6.0 仪器设备：摄子、小烧杯（10 ml）、1 ml移液管、10 ml移液管、试剂瓶、尺子。
四、实验方法
1．催芽：将小麦种子浸泡2 h后，选择饱满度一致的种子，种沟向下排列在铺有湿滤纸或湿纱布的搪瓷盘中，然后覆盖0.5 cm厚度的湿砂，在室温25℃左右进行催芽，3~4 d后苗高达2~3 cm。
2．剥除胚乳：精选高度一致、幼叶刚露出叶鞘、见绿的麦苗，轻轻取出，避免伤害根部，然后用镊子小心地摘除胚乳（不要损伤根、芽），再用水漂洗掉附在上面的胚乳成分，作为指示生物。
3．药剂处理将药剂稀释成125、62.5、31.25、16.625、8.3125mg/l 5个浓度，种植在内径2.5 cm、高3.0 cm的玻璃杯内，每杯注入不同浓度供试药液1 mL和稀释10倍的培养液4 mL，每杯插入10株上述去胚乳小麦。
4．培养：在室温25℃、相对湿度80%-90%、12 h光照的培养箱中培养，其间每天早晚两次补足杯中蒸发掉的水分。
5．结果检查与处理：处理5 d后，测量每株小麦苗的生长量，即从芽鞘到最长叶尖的距离，求生长抑制率，并以此评价样品的除草活性。
生长抑制率（%）=（对照组生长量─处理组生长量）/ 对照组生长量×100。