母种制种技术
母种分离技术
母种分离技术在自然界里，食用菌都不是单独存在的，而是和许多细菌、放射菌、霉菌等生活在一起的。
所谓菌种分离，就是把这些和食用菌一起生活的杂菌分离出来，通过培养，获得纯的优良菌种。
菌种分母种、原种、栽培种。
制种程序可参考图13。
(一）母种的分离培养食用菌母种的分离，可分为孢子分离法、组织分离法以及基内菌丝分离等。
1.孢子分离法孢子分离法，是用食用菌的有性孢子或无性孢子萌发成菌丝，培养成菌种的方法。
这种菌种生活力较强，但孢子个体之间有差异，且自然分化现象较严重，变异大，需经出菇试验才能在生产上应用。
（l）单孢分离法：是每次或每支试管只取一个担孢子，让它萌发成菌丝体来获得纯菌种的方法。
蘑菇和草菇用单孢分离得到的菌丝，有结实能力，可采用此法分离生产纯菌种。
单孢分离生产上较少采用，而且技术复杂，一般采用多孢分离法。
（2）多孢分离法：就是把许多孢子接种在同一培养基上，让它们萌发、自由交配来获得食用菌纯菌种的一种方法。
具体操作方法，有以下几种：①种菇孢子弹射法：选择个体健壮、朵形圆正，无病虫害、出菇均匀、高产稳产，适应性强的八九分成熟的种菇，切去大部分，菌柄用无菌水冲洗数遍后再用已灭菌的纱布或脱脂棉、滤纸吸干表面水分。
在接种箱或无菌室内，把种菇的菌褶朝下用铁丝倒挂在玻璃漏斗下面，漏斗倒盖在培养皿上面；上端小孔用棉花塞住。
培养皿放在一个铺有纱布的搪瓷盘上，静置12～20小时，菌褶上的孢子就会散落在培养皿内。
形成一层粉末状孢子印（平菇极淡紫色，蘑菇、草菇为褐色，香菇、金针菇孢子印白色）。
用接种针沾取少量孢子在试管中的琼脂外面或培养皿上划线接种。
待孢子萌发，生成菌落时，选孢子萌发早、长势好的菌落进行试管培养。
还可用孢子采集器收集孢子。
方法是选好种菇后，按上述程序，轻轻掀开玻璃钟罩，将种菇柄朝下插在孢子采收器的钢丝架上，放在培养皿正中央。
随即盖好玻璃罩，用纱布将钟掌周围塞好。
并在纱布上倒少许升汞或无菌水。
移入20℃左右恒温箱培养。
平菇母种配方及栽培技术
平菇的生长发育条件
1、营养：
平菇属木腐真菌。营养是平菇生命活动的物质基础，在生长发育过程中，所需的主要营养为碳源，如木质素、纤维素、半纤维素、淀粉、糖类等。这些物质主要来源于棉子壳、木屑、稻草、玉米芯以及其农作物秸杆等材料中。简单的碳源如葡萄糖、有机酸和醇类等小分子化合物可直接被菌丝细胞吸收，而纤维素、半纤维素、淀粉等大分子化合物则需要经酶分解成小分子化合物后才能被吸收利用。所以在培养料配制时需添加糖、夫子、玉米面等，因为它们都是食用菌易利用的碳源。
维生素类对平菇有促进生长的作用。如果缺少维生素菌丝生长迟缓、稀、弱。在配料时加入的夫子、玉米面、米糠作为间接加入维 生素 ，不需另外再添加。夫皮、米糠、玉米面越新鲜，其维生素含量越丰富，所以强调加入新鲜的夫子皮或米糠或玉米面。
2 。温度： 平菇属变温结实性菇类，也就是说营养生长和生殖生长所需温度不同。菌丝生长的温度范围为 5---32 度，最适宜的温度为 24---28 度。子实体形成的最适宜温度为 13---20 度，低于 10 度生长缓慢，高于 25 度不易出菇。平菇菌丝耐低温能力强，成品菌棒在零下 30 多度也不会被冻死，温度回升后菌丝可继续生长，并且不会影响后期子实体的形成和产量。在出菇温度范围内，温度越高，蘑菇生长得越快，但菌盖薄、质量差、颜色浅；温度低，蘑菇生长慢，但菌盖厚，质量好，颜色深。
氮源也是
平菇不可缺少的营养物质，平菇菌丝生长时适宜的碳氮比为 20 ： 1 ，子实体生长时适宜的碳氮比为 30---40 ： 1 。所以针对不同的栽培原料需添 加的氮源也不同，用量也不尽相同。
无机盐等微量元素也是平菇生长发育不可缺少的营养物质。如磷、钾、钙、镁、铁等。它们的主要功能是构成细胞成分和酶的组分，并调节体液的平衡。在无机盐中以镁、钙、磷、钾为最重要，尤其是镁，它能促进细胞酶的活性，使细胞的新陈代谢加快，进而促进菌丝的快速生长。同时更使菌丝洁白，更有生命力。出菇后菇质柔韧富有弹性，易于运输和存放。
天麻蜜环菌、萌发菌母种生产技术
菌种选育是利用生物技术手段对微生物进行筛选、培 育和改良的过程，以提高其产量、品质和抗逆性。在 选择蜜环菌和萌发菌的菌种时，应采用科学、合理的 选育方法和技术，以保证所获得的菌种具有优良的性 状和性能。
在进行菌种选育时，还需采用一系列技术手段对菌种 进行培育和改良。例如，可以采用诱变育种、基因工 程育种等方法对菌种的遗传物质进行改造，以提高其 产量、品质和抗逆性。
除了促萌发效果外，萌发菌对天 麻生长的促进效果也是选择时需 要考虑的因素。一些萌发菌能够 促进天麻的生长速度和生长量， 而另一些则对其生长没有明显促 进作用。应选择对天麻生长具有 明显促进效果的萌发菌种类，以 提高天麻的产量和品质。
菌种选育方法与技术
常规的菌种选育方法包括孢子分离法、组织分离法、 噬菌体分离法等。在选择蜜环菌和萌发菌的菌种时， 应根据其生长特性和生活习性，选择合适的分离方法 进行分离和筛选。
总结词
为了提高菌种的生产能力和质量，可以采取一系列措施对培养基进行优化。
详细描述
优化培养基的方法包括：通过添加适量的微量元素或有机成分，以满足菌种的营养需求；调节培养基的pH值和 温度等参数，以适应菌种的生长特性；采用不同的灭菌方法和保护剂，以保持培养基的无菌状态和提高菌种的抗 逆性。
03
菌种培养与繁殖
蜜环菌培养与繁殖
培养基质
培养温度
蜜环菌培养使用阔叶树锯木屑、麦麸、蔗 糖等为主要原料，添加适量的水和琼脂， 制成固体或半固体培养基。
最佳培养温度为25℃左右，温度范围为1530℃，避免高温和低温。
空气湿度
光照条件
蜜环菌对空气湿度要求不高，一般保持相 对湿度70%左右即可。
培养过程中需保持黑暗环境，避免光照对 菌丝生长的影响。
秀珍菇液体菌种制备技术
秀珍菇液体菌种制备技术一、工艺流程母种→原种（液体摇瓶）→生产种（罐体发酵）→料棒接种二、母种的制备1、母种培养基配方马铃薯（去皮）20％，葡萄糖2％，琼脂2％，水1000毫升，pH值5.5～6。
2、母种的制备及注意事项按配方准确称取原料，加热煮沸最后定容，分装试管，装入量约为试管长度的1／4～1／5，塞好棉塞。
使用高压灭菌锅灭菌，在温度121℃、压力0.11Mpa下灭菌半小时，注意一定要放净高压灭菌锅内的冷空气。
灭菌后，待培养基温度下降至60℃时，将成把的试管摆成斜面。
注意，不要让培养基粘湿棉塞。
要严格按照无菌操作规程进行接种，然后置于恒温箱中25℃左右恒温培养10～15天。
三、原种的制备1、原种培养基配方马铃薯（去皮）２０％、麦麸３％、葡萄糖２％、蛋白胨３‰、磷酸二氢钾２‰、硫酸镁１‰。
2、原种的制备及注意事项马铃薯去皮切片后与麦麸一起煮沸20分钟，过滤定容，加入其它原料，全部溶解后装入三角瓶。
三角瓶在使用前除清洗之外，还要进行空灭，灭菌方法与常规灭菌试管培养基相同。
每个瓶中放入5～10粒玻璃球（直径0.5cm），用棉塞塞紧瓶口，再用牛皮纸包裹后扎紧。
使用高压灭菌锅灭菌，在温度121℃、压力0.11Mpa下灭菌45分钟。
冷却后进行无菌接种，然后置于25℃恒温培养箱中静置培养72小时。
摇床培养时，温度25℃，转速140转/分钟，培养时间72～96小时。
四、生产种的制备1、生产种培养基配方马铃薯（去皮）２０％、麦麸２％、蛋白胨３‰、葡萄糖２％、磷酸二氢钾１‰、硫酸镁0.5‰、石膏0.5‰、琼脂２～３ｇ、酵母膏0.5‰、消泡剂１‰。
2、生产种的制备（1）清洗罐体发酵罐在每次使用后都必须进行彻底的清洗，去除罐内残存的菌球、菌块料液等杂物，保证罐内洁净。
（2）配制原料按照生产种培养基配方准确称取各种原料。
马铃薯去皮切片后与麦麸一起煮沸20分钟，过滤定容，再加入其它原料及消泡剂。
（3）灭菌将盛有培养基质的发酵罐推进灭菌仓，通入蒸汽进行灭菌，控制温度在121℃左右、压力为0.11Mpa，灭菌1个小时。
平菇菌种的生产技术
平菇菌种的生产技术一、母种的培养：母种的培育是制种工作中的关键，它的优劣直接影响到原种、栽培种的质量好坏。
母种可以由孢子萌发而成，也可以从子实体组织分离或用平菇斜面的菌丝体移接扩大转管制作。
1、培养基：平菇母种分离和菌种保存宜用普通培养基（PDA）。
平菇菌丝在此培养基上生长速度较慢。
PDA配方和制作方法是：将马铃薯200克去皮切成蚕豆大小的块加1000毫升蒸馏水，用文火煮沸20-30分钟过滤取汁，加葡萄糖20克，琼脂15克，置于铝锅中加热，待琼脂充分溶化后搅匀，定容至1000毫升，趁热分装于试管中，每管装约12毫升，1000毫升可分装80---100支试管。
分装时要用长管漏斗，不要使培养基沾到试管口上，以免沾湿棉塞污染杂菌。
塞棉塞要用普通棉花，塞入试管要松紧合适。
然后，每10支试管用皮套捆成一小捆，每5小捆再捆成一大捆，棉塞用牛皮纸包好灭菌。
取出试管倾斜排放在桌面上，试管斜面长度应为管长的2/3，冷却凝固后，取一些试管放入恒温箱中27--30度空白培养10天，经无菌观察，确认无杂菌，才能大量用于分离制种或转接生产母种。
2、接种：用无菌操作从平菇子实体组织中分离黄豆粒大小的一块，接入PDA培养基的试管斜面上，置恒温箱或培养室（25℃±2℃）培育，3天后菌丝生长洁白、健壮，7天后菌丝长满斜面。
接种要在严格的无菌条件下进行。
如果没有出现杂菌，分离培养就算成功。
但该菌株是否优良，生产价值如何，还需出菇栽培试验。
二、原种的制备：由试管母种初步扩大繁殖到固体种（原种）。
由原种再扩大繁殖应用于生产，叫生产种或栽培种。
母种菌丝数量太少，在实际生产中必须把一级种扩大繁殖成二级种（即原种）才能满足生产种的需要。
好的原种菌丝密集、洁白、长势均匀、粗壮、呈棉毛状，有爬壁现象。
原种长满瓶之后，应立即扩大为栽培种，否则一旦营养耗尽，菌丝就会衰老甚至死亡。
原种的制作过程是：拌料（含水量60%左右）、装瓶、压实、打洞、洗瓶、用塑料膜包扎瓶口、灭菌、冷却、接种、培养。
实验7 食用菌母种的制作与转管技术
实验注意事项
（1）组织块分离法对于胶质的耳类及菇体较小较薄的菇类，如金 针菇等不太适宜。 （2） 此法应严格遵循无菌操作。 （3）纯化菌丝长至斜面1/2时，挑尖丝转管，培养成再生母种。 （4）控制菌龄菌丝即将长满斜面（一般7～10天）终止培养。分 别用于菌种保藏或繁衍原种。 （5）出菇试验将再生母种扩成原种、栽培种，使其出菇。看产量、 质量、形态、长势、抗性如何，鉴定为优质菌种后，才可供生产 使用。
应用：此法适宜多数食用菌，是野外工作者和种菇专 业户必须掌握的一种方法。
实验原理
2.钩悬法 是一种特别适用于耳类，也适用于伞菌类的多孢分离
法。
实验原理
3.孢子印分离法 取成熟子实体经表面消毒
后，切去菌柄，在20～ 24℃静置一天，大量孢子 落下形成孢子印。 接种环沾少量孢子在试管 培养基上划线培养。
（0.3～0.4立方厘米）大组织，放入斜面培养基上。迅速 塞上棉塞。
如已开伞的种菇、则选菌盖与菌柄交界处的菌肉。 如种菇已受雨淋，吸水较多，应取菌褶作为接种材料。
母种分离视频
实 验 步骤
5. 培养 取接组织的斜面试管放置于
25℃的培养箱中培养。 6. 转管
在菌丝长满斜面之前，菌丝生 长最旺盛时，挑取菌丝进行转管扩 繁。
结果与思考题
1.如何避免因污染而造成的组织分离的失败？ 2.判断你所分离的母钟是否标准？ 3.孢子分离的母种为何一定要做出菇试验？
实验材料
材料：平菇、香菇、杏鲍菇较成熟的子实体 用具：培养皿；试管斜面培养基；酒精灯，接种刀，
75%酒精，消毒液；冰箱；培养箱等。 培养基：PDA斜面培养基
实 验 步骤
1. PDA培养基的配置 配方： 马铃薯浸粉； 5.0g /L；葡萄糖20.0g /L；琼脂 20.0g /L ；
黑木耳菌种母种的生产技术
●食用菌栽培●黑木耳菌种母种的生产技术1母种培养基配方母种培养基用试管作培养容器，装入培养液并经过高压灭菌后摆成斜面，所以又称试管斜面培养基，常用于母种扩大培养及菌种保存。
1.1生产母种配方1.1.1马铃薯葡萄糖琼脂培养基（PDA ）：马铃薯200克，葡萄糖20克，琼脂18~20克，水1000毫升。
1.1.2马铃薯葡萄糖蛋白胨琼脂培养基：马铃薯200克，蛋白胨10克，葡萄糖20克，琼脂20克，水1000毫升。
1.1.3洋葱酱油琼脂培养基：洋葱煎汁100毫升，酱油50毫升，琼脂20克，水1000毫升。
1.1.4木汁麸皮琼脂培养基：阔叶树木片500克，硫酸铵1克，麸皮或米糠100克，蔗糖20克，琼脂20克，水1000毫升。
1.1.5木屑煮汁培养基：阔叶硬杂木屑40克，马铃薯200克，蔗糖20克，琼脂18~20克，水1000毫升。
1.2保藏菌种配方1.2.1玉米粉琼脂培养基：玉米粉30克，琼脂20克，水1000毫升。
1.2.2玉米粉酵母膏葡萄糖琼脂培养基：玉米粉50克，酵母膏10克，葡萄糖10克，琼脂15~18克，蒸馏水1000毫升。
1.2.3完全培养基：葡萄糖20克，蛋白胨2克，硫酸镁0.5克，磷酸氢二钾1克，磷酸二氢钾0.5克，琼脂15克，蒸馏水1000毫升。
2培养基制作2.1称量和配制先按配方准确称取易溶物质，置于烧杯或搪瓷杯等容器内（不用铜、铁器皿，以免铜、铁锈混入培养基），加入总量1/4~1/3的清水搅成糊状。
难溶物质按配方称取后加适量清水，加热并不断搅拌使其溶解；微量元素和生长素因需要量少难以准确称取，可称取一定量先溶解调成高浓度母液，再按比例换算后从中取出需要的用量。
去皮挖芽眼切块的马铃薯、阔叶树木片、阔叶硬杂木屑及洋葱等物质，按配方称后放入容器内，加清水1000毫升，文火煮沸20~30分钟，然后用4~6层湿纱布过滤取汁。
玉米粉称后加1000毫升清水搅拌均匀，并加热至70℃保持60分钟，再用湿纱布过滤取汁，最后补足水量至1000毫升。
实验7食用菌母种的制作与转管技术
结果讨论
本实验成功制作出食用菌母种，为后 续的栽培和生产提供了优质的种源。
本实验中严格的无菌操作对于防止杂 菌污染起到了关键作用，在实际生产 中也需要高度重视无菌操作，以确保 食用菌的纯度和质量。
在实验过程中，我们发现适宜的温度 和湿度条件对母种菌丝的生长具有重 要影响，这为实际生产中控制食用菌 生长环境提供了理论依据。
无菌操作
在实验过程中，要始终保持无 菌操作，避免杂菌污染。
温度控制
不同食用菌对温度的要求不同 ，要保持恒定的温度以利于菌
丝生长。
湿度控制
保持适宜的湿度，避免培养基 过度干燥或湿度过高导致杂菌
滋生。
定期检查
在培养过程中要定期检查菌丝 生长情况，发现异常及时处理
。
04
实验结果与分析
实验结果
实验成功制作出食用菌母种，菌 丝洁白、浓密、健壮，生长旺盛。
05
结论与建议
结论
实验7成功地展示了食用菌母种的制作和转管技术，确保了菌种的纯度和活性。
在实验过程中，我们观察到菌种的生长速度和形态特征，为后续的实验和研究提供 了基础数据。
通过实验，我们验证了母种培养基的配方和制备方法，为食用菌的规模化生产提供 了技术支持。
建议
01
为了进一步提高菌种的产量和质量，建议优化母种培养基的配 方，添加适量的营养成分或生长因子。
保障食品安全
培养创新型人才
实验能够培养学生的创新思维和实践 能力，为培养具备创新精神和实践能 力的人才提供有力支持。
通过实验，学生将了解食用菌母种的 质量控制和安全管理，这对于保障食 品安全和消费者权益具有积极作用。
02
实验材料与设备
实验材料
01
羊肚菌母种的制作技术
羊肚菌母种的制作技术
羊肚菌是一种珍贵的野生菌种，在中国西南地区的云南、四川、贵州等地均有分布。
其味道鲜美，营养丰富，是美食界备受推崇的食材之一。
而要在商业上大规模种植羊肚菌，必须掌握羊肚菌母种的制作技术。
下面就是羊肚菌母种的制作技术的详细步骤：
材料准备
1.羊肚菌采摘的新鲜子囊体
2.菌种基质：大米粉，胡萝卜、土豆等蔬菜类基质都可以
3.滤纸或布
制作步骤
1.取适量的菌种基质，添加适量的水，混合均匀，使其成为一种像糊状
的状态。
2.将菌种基质煮沸15分钟，然后用清水冲洗干净。
3.把粉状的基质倒入一个宽口的玻璃瓶里，大约填充一半的高度，然后
用锡纸封好瓶口，加入适量生长盐和水，混合均匀。
4.把瓶子倒置，让基质混合物均匀涂在玻璃瓶的内壁上，然后用滤纸或
布蒸汽殓下来。
5.把殓好的瓶子放在25-28℃的环境里，等待发酵。
6.当瓶里出现白色霉丝时，就说明羊肚菌已经成功培养了。
注意事项
1.制作羊肚菌母种的过程要做好无菌操作，防止污染。
2.环境温度要在25-28℃之间，温度过高或过低都会影响发酵效果。
3.发酵过程中不要让瓶内基质过于湿润，否则会影响发酵效果。
4.瓶子应该存放在干燥、阴暗的地方，避免阳光直射，否则也会影响发
酵结果。
以上就是羊肚菌母种的制作技术的详细步骤和注意事项。
这种菇类是一种高贵的食材，价格昂贵，因此要想在商业上更好地种植羊肚菌，掌握羊肚菌母种制作技术是非常重要的。
天麻蜜环菌、萌发菌母种生产技术
天麻蜜环菌、萌发菌母种生产技术菌种培养是微生物工程领域的重要课题。
本文将介绍天麻蜜环菌和萌发菌母种的生产技术。
天麻蜜环菌的生产技术天麻蜜环菌的概述天麻蜜环菌（Ophiocordyceps sinensis）是寄生于青藏高原特有的天麻上的真菌，是一种重要的药用菌。
天麻蜜环菌具有滋补强身、亢进元气、活血止痛等功效。
因其生长在青藏高原上，种植难度大，市场价格高昂。
天麻蜜环菌的生产技术目前，国内的天麻蜜环菌生产主要依靠菌株保藏和菌丝体发酵的方式。
因为菌体繁殖周期长，生长条件较苛刻，中间环节多，所以天麻蜜环菌的制备工艺比较复杂。
菌株的保藏为了确保天麻蜜环菌的品种质量，要进行菌丝株的保藏。
保藏分为以下两类：1.把天麻蜜环菌菌丝体保存在深冷存储箱中：将培养出的天麻蜜环菌菌丝体经过特殊处理之后，放入深冷存储箱中保存。
这种方法适用于长期保存。
2.把天麻蜜环菌直接保藏在天麻上：将天麻收获后，用纱布包裹好，将培养好的天麻蜜环菌菌丝体涂抹在天麻上。
这种方法适用于短期保存。
菌丝体发酵生产在这个过程中，需要按照固态培养的方式来进行，主要步骤如下：1.选择营养和含水量适宜的基质：天麻蜜环菌具备较好的耐受性，可以在多种质地的基质上生长发酵，如：大豆糖蜜/麸皮、食用菌庚二酸盐、玉米棒芯、稻草粉等。
2.检查基质水分含量：盐度过高，水分过少都会对菌丝体的生长发酵产生不利影响，因此在进行发酵之前一定要检查基质含水量的状态，并根据实际情况进行调整。
3.中种菌丝体：此处使用的是固体素、甘油、自来水组成的液态培养基，在选择好基质材料后，使用液态培养漿的方法进行预处理。
将微生物发酵完的发酵漿液挖出来，与基质材料混合在一起，又使之均匀铺开。
4.发酵过程：将芽胞菌杂菌加入；约在18℃附近为最佳生长温度下。
待繁殖至一定程度后，取出菌丝体，进行后续处理。
5.活性炭喷涂处理：为了去除细菌杂质以及其他的污染物，去掉附着物表面上的细菌、外物等杂质。
在菌丝体发酵完成后的表面，喷涂一定量的活性炭。
食用菌母种制作技术
食用菌母种制作技术母种是从子实体中提纯，复壮获得母种，人工栽培蘑菇成功的关键是菌种，只有优良的菌种才能达到优质高产，这是种植蘑菇高产的第一个要素。
母种制作：母种培养基配制：母种培养基的原料是马铃薯，葡萄糖，蛋白胨，水，琼脂粉，以配制一千毫升的母种培养基为例，将马铃薯去皮后称重200克，葡萄糖20克，琼脂粉20克，蛋白胨10克，用量杯量取1000毫升的水倒入锅中，用刀将马铃薯切成片加入锅中，用文火煮沸，煮至用筷子轻轻一插既可插入，这时可以用四层的纱布过滤煮好的马铃薯汁，然后倒在量桶里，看一下，如果不足一千毫升可加水补足一千毫升，在倒入锅中煮，最后加入称好的葡萄糖、琼脂粉、蛋白胨，为了防止锅底烧焦要边加热边搅拌，煮至完全溶化，母种培养基就配制好了。
母种培养基的分装：母种培养基配制好后要分装以试管中，这里用到的试管规格为18毫米X200毫米，每7根试管扎成一捆，分装培养基时用漏斗下面接一根塑料管，在通塑料管接装到试管内，分装量为试管高度的五分之一左右，分装完后及时用棉塞装试管口塞住，防止其它杂菌侵蚀。
要注意，母种培养基的温度降到45度以下时凝固，所以分装过程要在母种培养基凝固之前完成。
母种培养基的灭菌：用白纸包裹试管口，在用绳子将白纸扎紧，将试管放入高压来菌锅中高压来菌，盖上锅盖，压紧螺帽，在压力为0.5MPa条件下持续来菌30分钟，来菌完后在让其在锅内自然冷却一小时，待压力为零时就可以打开锅将试管取出来，这样母种的培养基就制作好了。
制作母种：母种接种：母种的接种也是在无菌工作室的无菌箱中进行的，另外要选取品质优，长势好的蘑菇来提取菌丝，分别用酒精棉球擦拭双手和蘑菇表面进行消毒，点燃酒精灯然后把长柄小刀放在酒精灯火焰上消毒2至3秒钟，用消毒后的小刀割开新鲜蘑菇的菌柄，在菌柄与菌盖连接处用小刀切割一小块蘑菇组织，打开母种培养基试管瓶塞，为了避免杂菌感染，要将试管口靠近酒精灯火焰，用长柄钩针钩取切割好的蘑菇组织带到试管中，放在试管培养基斜面的中部，退出长柄钩针，将棉塞在火焰上消毒，塞住试管口，母种的接种工作就完成了。
食用菌母种制作-实验一
实验一食用菌母种制作一、目的要求：1、了解母种培养基制作过程，理解灭菌原理；2、掌握母种培养基的制备方法；3、了解无菌操作基本原理，掌握母种的无菌接种培养方法。
4、了解和掌握食用菌组织分离法的方法步骤；5、熟练分离出栽培用菌种。
二、主要仪器设备及药品材料：灭菌锅、超净工作台、酒精灯、电炉、铝锅、漏斗、纱布、菜刀、砧板、烧杯、捆扎绳、硅胶试管塞、试管（18x180mm）、手术刀、镊子、75%酒精、马铃薯、葡萄糖、琼脂、平菇子实体。
三、实验步骤与方法:①培养基的制作1 PDA培养基配方马铃薯200克,葡萄糖20克,琼脂20克,水1000毫升.2. 母种培养基的配制(1)熬制。
马铃薯洗净，挖芽去皮。
称取200克，切成玉米大小颗粒或薄片。
量筒量取1000毫升水，铝锅中煮沸后记时30分钟。
四层纱布过滤于量杯中。
滤液倒入锅中文火加热，加入葡萄糖和琼脂，不断搅拌，直到琼脂溶化。
补足水量至1000毫升。
(2)分装试管。
将熬制的培养基用小漏斗趁热分装。
培养基高度为试管长度的1/5左右，注意避免培养基沾于试管口外。
分装完成后，盖紧硅胶塞。
（3）捆把。
7支试管为一捆，用牛皮纸包裹试管口，用捆扎绳扎紧。
贴上标签，准备灭菌。
（4）灭菌。
注意加足水量和排气，灭菌完成后降压不能太快。
（5）摆斜面，培养基长度约为试管长度的1/2。
斜面试管上覆盖洁净的厚毛巾或几层纱布，防止试管内产生过多的冷凝水。
①菌种分离与培养（1）种菇选择。
选取无杂菌感染，无病虫害，出菇均匀，适应性强的子实体，要求个体健壮，朵大肉厚，外形规整，出菇早，约七八成熟的新鲜子实体。
子实体采收后切去大部分菌柄，放入干净器皿内备用。
（2）母种分离（组织分离法）。
在分离前用75%的酒精棉球擦菇体进行表面消毒，在超净工作台内将子实体撕开，用消毒刀片在菌盖与菌柄交接处的组织上取一小块（绿豆大小）移至试管斜面培养基的适当位置，迅速塞上硅胶塞。
将分离的试管放在室内避光培养7-8天，检查菌丝生长情况。
香菇母种繁育技术
香菇母种繁育技术用香菇的组织、孢子或菇木的菌丝经分离、纯化和转管培养出来，再用于繁殖原种或保存用的菌种，称为母种。
但具体如何繁育？有以下几项要点。
一、菌种分离1、组织分离要培养出优良的菌种，必须要有好的母种，好的母种又来源于健壮的香菇个体，因此，首先必须选择发育正常、个体健壮、没有虫咬的新鲜菇蕾作为分离的材料。
菇蕾采回后，不需用水洗，也不需用药水消毒。
放入干净的培养皿内，用消毒过的手或解剖刀将香菇从中剖开，在盖与柄接触的部分切取黄豆大小的菌肉，放在已准备好的培养基上，塞上棉花即可。
2、孢子分离选择个体强壮，八分成熟的香菇，除去菌柄，菌褶朝下挂在玻璃漏斗上一条特制的铁丝钩上，漏斗盖住培养皿(培养皿放在一只垫有纱布的搪瓷盆中)，静放12-20小时，菌褶上的孢子(种子)便大部分落在培养皿内，形成一层白色粉末状物，即可作为分离培养使用。
孢子接种时，用接种针取出少量孢子，用无菌水配制成孢子悬浮液。
再用接种针，取出少量悬浮液，用划线的方法接种于培养皿内的培养基上，待孢子萌发，生成菌落后，选择孢子最先萌发并生长最好的菌落进行纯化转管繁殖。
3、菇木菌丝分离选取未出过菇或刚出过菇不久、但已恢复菌丝生长的菇木(肉眼看不见杂菌)一小段，拿回室内，不需表面消毒，用皮带冲在要分离的部分，将树皮取掉，然后用酒精消毒皮带冲，冲口在酒精灯火焰上灭菌，灭菌后，即时打入菇木已取皮的部分，迅速取出皮带冲，用灭过菌的小剪刀在冲口菇木块中间，剪下黄豆粒大小的一块，接入培养基上即可。
以上三种分离法，整个过程均应在无菌室内进行，一切用具均应经过严格消毒，以防杂菌污染。
无菌室事前要用5%的石炭酸喷射，有条件的再经过紫外线灯照射20-30分钟。
接种台上最好铺上一块用2%的来苏尔消毒过的湿纱布。
二、培养菌种分离接种后，放在25℃左右条件下培养，两三天即可看见白色棉花状的菌丝从菇肉或木块上长出，三、四天便可看见从孢子萌发出的白色菌丝，十多天整个试管长满菌丝。
平菇菌种制种的关键技术
平菇菌种制种的关键技术1、母种的生产平菇是用孢子分离和组织分离法获得菌丝体后扩大转试管制作母种。
1.1培养基：平菇母种分离和菌种保存宜用普通培养基。
平菇菌丝在此培养基上生长速度较慢。
扩大转管适宜用高粱粉培养基，配方和制作方法是：高粱粉30克，加1000毫升蒸馏水，加1%琼脂，置于铝锅中加热，待琼脂充分溶化后搅匀，分装于试管，灭菌接种。
平菇在高粱培养基上生长最快，长势均匀，菌丝旺盛。
高粱培养基适合于生产平菇母种。
菌种培养：分离后的平菇菌丝应放在最适宜的温度（25℃±2℃）培养并经过提纯、转管，一般培养7－10天菌丝可长满试管。
如果没有出现杂菌，分离培养就算成功。
但该菌株是否优良，生产价值如何，还需出菇栽培试验。
1.2母种扩繁：可以用碎玉米粒、稻子碎粒、高粱及其他一些谷物碎粒，在水中浸 12 小时后，捞出沥干水分，装入试管，一般装试管总长的 1/3，在料面上稍压一些，以防止料散开。
然后，擦净试管，塞上棉塞，用报纸包好棉塞，以7支试管为一捆，扎好后放入高压锅中，上汽至0.5Kg/cm2，放汽至 0，加热至1.5Kg/cm2时，保持压力1小时。
取出放凉后按常规方法在接种箱中转接，一般一支 1代母种扩繁 30管母种。
将接种后的母种放入室内，避光，尽量保持恒温 25℃，菌丝发满后 3天，即可使用。
2、原种的生产2.1母种菌丝数量太少，在实际生产中必须把一级种扩大繁殖成二级种（即原种）才能满足生产种的需要。
平菇原种培养基的配制和生产参照《制种技术》中的木腐菌制种的内容。
平菇菌丝在木屑培养基上一般原种20—25天可以满瓶。
在麦粒培养基上15—20天可以长满使用。
好的原种菌丝密集、洁白、长势均匀、粗壮、呈棉毛状，有爬壁现象。
原种长满瓶之后，应立即扩大为栽培种，否则一旦营养耗尽，菌丝就会衰老甚至死亡。
麦粒种更要及时使用。
2.2 原种制作：用玉米、稻子、高粱都可以，先将原料放入水中浸12小时，冬季用温水浸24小时，然后放入锅中加热煮30分钟，至谷物表皮胀开小缝而未开花烂开时捞出，凉干表面水分后，拌入2%, 的石膏或滑石粉或钙镁磷肥都可以。
天麻蜜环菌、萌发菌母种生产技术
天麻蜜环菌、萌发菌母种生产技术人工栽培天麻，在有性繁殖过程中，需要萌发菌和蜜环菌两种共生菌。
笔者在生产实践中，摸索出两种共生菌都能生长的培养基及生产技术。
具体做法如下。
1 培养基配制1.1 液体培养基马铃薯（挖去芽眼、去皮、切片）100g，硬杂木屑、麦麸、玉米面各50g，自来水或天然水1300mL，在双重锅内煮沸30分钟后用双层纱布过滤。
取滤液补水至1000mL，加葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、蛋白胨0.5%、10mLVB1。
全部溶解摇均后，分装于500mL 的三角瓶或罐头瓶内，每瓶装150mL左右，也可装于试管内，装入量为试管容积的1/4。
三角瓶和试管用棉花塞口，罐头瓶用2层牛皮纸或4层报纸上盖一层塑料布封口后，用皮筋扎口。
特点：技术含量高，繁殖快，长好即可应用，但不能长期保存。
1.2 固体斜面培养基是食用菌生产中常用的培养基，按照“1.1”的操作程序制取滤液，在滤液中加入琼脂18g，加热溶化并补水至1000mL，趁热加入葡萄糖20g、磷酸二氢钾2g、硫酸镁1g、蛋白胨5g、10mgVB1，全部溶解摇均，分装于试管内，装量为试管容量的1/4，然后用棉花塞口。
1.3 木屑培养基硬杂木屑50%、玉米芯（粉碎成小颗粒状）25%、麦麸15%、玉米面10%，外加葡萄糖0.5%、蔗糖0.5%、石膏1%、石灰0.5%、磷酸二氢钾0.2%、硫酸镁0.1%、2%VB1。
将原料和石膏、石灰等干料拌均，再将上述可溶解的所有辅料溶于水中并拌入原料中，使之含水量为70%，充分拌均后装入试管，并适当压实。
装入量为试管容积的1/2，然后用棉花塞口。
特点：耐贮藏，便于邮寄。
2 灭菌用手提式高压灭菌锅，也可用民用高压锅代替。
2.1 液体和斜面固体培养基灭菌时，蒸汽压力为1.4kg/平方厘米时稳定保持30分钟，待锅内温度降到50～70℃时出锅。
液体培养基出锅后直接放入接种箱中，待温度降到25℃以下时接种；斜面固体培养基需趁液体状态时倾斜成斜面（斜面长度约占试管长的3/5），待培养基自然凝固后移入接种箱。
菌种繁育—母种制作(食用菌生产技术课件)
目录
一、 采集种源 二、 培养基配制琼脂培养基 三、 分离与适温培养 四、 一级种转接 五、 注意事项
母种主要采用人工选择、诱 变育种、杂交育种和原生质 融合等手段获得。作为一般 制种专业户，可以采用人工 选择方式分离培育母种。
菌种
野生 担孢子或子囊孢子或组织体 栽培 扩大繁殖后的纯次生菌丝体
①选择种菇：前已述及。 ②种菇消毒：在种菇中部取最大的3-4张菇片，
用70%的酒精轻擦表面后置于接种箱内消毒；
③菇肉接种：将菇片纵向撕开，在每个裂面靠近菇片边缘处取一 米粒大小的菇肉组织接于PDA培养基上。每张菇片共撕10个裂面 ，接10支试管，一次分离共接30～40支试管；
④培养：将试管置于15～30℃下培养； ⑤纯化 ： 培养期间每天都要检查发菌情况，从中选择菌丝浓白粗
孢子的特点：菌龄小、生命力强、变异率高。
孢子 分离法
单孢分离 多孢分离
难度较大 较简易
单孢分离
多孢分离
概念 步骤
使许多孢子在同一培养基上， 萌发后自由交配成次生菌丝的方法
种菇消毒 采收孢子 接种孢子 出菇试验
整菇插种法 钩悬法 孢子印法
（1） 种菇消毒
菌柄去2/3
苞被
有：75%酒精棉球擦试
➢ 一般操作流程
野生菌驯化 原菌株改良 生物技术创新
优良 菌株
扩大 繁殖Leabharlann 实行纯培养基要 本求
不含任何杂菌
用于 生产
一、采集种源
从野生或人工栽培群体中，选择有代表性的优良菇体作为种源 。在菇床、菌墙中选择出菇早、无杂菌侵染、株型紧凑、圆整 肉厚、色泽美观、七八成熟的第一潮菇的肥壮菇体作种菇(茯苓 类选择菌核或菌索)；
母种制作的主要方法和一般流程
母种（也称为酵种）是面包师傅在制作面包和面团时所使用的一种发酵剂。
它起着至关重要的作用，能够赋予面包绵软的口感、香气扑鼻的味道以及松软的口感。
在面包师傅的工作中，母种的制作是非常重要的一环。
接下来，我将深入探讨母种的制作方法和一般流程。
一、主要方法1. 自然发酵法自然发酵法是一种利用空气中的天然酵母和细菌来进行发酵的方法。
面包师傅会在面粉中掺入一部分水，然后让其自然发酵，促进面团的酵母发酵。
这种方法对于制作出口感绵软的面包非常有效。
2. 酵母发酵法酵母发酵法是一种利用酵母粉或者酵母汁来进行发酵的方法。
面包师傅会将适量的酵母粉或者酵母汁混入面粉中，然后加入适量的水，让其进行发酵。
这种方法适用于大规模生产面包，可以控制发酵的速度和效果。
二、一般流程1. 准备原料在制作母种之前，面包师傅需要准备好面粉、水和酵母等原料。
面包师傅在选择原料时会注重品质和新鲜度，以保证母种的品质和稳定性。
2. 混合原料面包师傅会根据配方要求，将面粉、水和酵母等原料混合在一起，制成面团。
在混合的过程中，需要注意温度和比例的控制，以确保面团的质地和发酵效果。
3. 发酵过程制作好的面团需要经过一定的发酵时间，这个过程中，面包师傅需要控制好温度和湿度，以促进酵母的发酵作用。
这个过程通常需要几个小时甚至一天以上的时间。
4. 浸种保存面包师傅通常会将制作好的母种保存在一个特定的环境中，这个环境通常是一个温暖、湿润的地方。
在保存的过程中，需要定期地给母种进行喂养，以保持它的活力和稳定性。
5. 使用母种一旦母种制作好了并且保持稳定，面包师傅就可以使用它来进行面包或面团的制作。
这个过程中需要注意母种的用量和发酵的控制，以确保最终制作出的面包口感和味道的一致性。
三、个人观点和理解母种的制作是面包制作中非常重要的一环，它直接关系到最终面包的口感和品质。
我个人认为，在制作母种的过程中，控制好原料的质量、发酵的时间和温度等因素非常重要，这些都会直接影响到母种的效果和最终面包的品质。
绣球菌菌种制备技术
绣球菌菌种制备技术绣球菌菌种制作跟其他食用菌一样，包括母种、原种、栽培种三级，下面我们先来看一下母种的制作。
1.母种制备母种是指经规范方法选育后而获得的、具有结性的菌丝体纯培养物及其继代培养物，以玻璃试管为培养容器和使用单位，通常又称为一级种或者试管种。
关于绣球菌原始母种的来源，在有条件的地方可以从子实体上自行提取，但是由于制作过程要求严谨难度较高，所以一般的生产单位都是从国家认可研究单位购买而来的，买回后直接进行母种的扩繁就可以。
首先先来看一下母种培养基的制作。
2.母种培养基制作制作母种培养基时所采用的配方为：复合糖蛋白30克，蛋白1克，大豆粉1克，KH2PO4(磷酸二氢钾)1克，琼脂粉20克，水1000毫升。
上面的料都准备好以后就可以制作了，将准备好的培养基配方依次倒入锅内，琼脂粉先不要放入，边加热边搅拌，等沸腾后再加入琼脂粉，并不断搅拌，直到琼脂粉完全融化，然后再将煮好的培养基倒入塑料杯内，这时需要注意的是，如果体积不足1000毫升还要加水。
3.试管分装整理好以后，要趁热将培养基倒入固定在铁架台上的漏斗内，用量筒量取10毫升的蒸馏水，倒入一支空试管内，做分装试管的对照。
将漏斗软管下的玻璃管插入试管口约3厘米深处，用右手捏紧橡胶软管的止水夹，使培养基缓缓流入空试管内，直到液面与蒸馏水的液面持平为止，然后，松开止水夹让培养基停止流入，并将试管下移离开软管。
接下来，依次重复，直到将培养基全部分装到试管内，分装试管时需要注意的是，动作要迅速连贯，以防止培养基在漏斗内凝固。
分装完成后，每支试管都要用硅胶塞住，接下来还要将试管进行扎捆。
4.试管包扎一般情况下，每7支试管作为一扎，先用橡皮筋将试管下端扎紧，再用牛皮纸将试管口处进行包裹，并用橡皮筋进行困扎。
下面就要进行灭菌的工作了。
5.培养基灭菌将包扎好的培养基试管垂直放入灭菌框内，再将菌框放入灭菌锅内，在120摄氏度的高温下进行灭菌30分钟。
待灭菌锅温度降至60摄氏度左右时，要及时取出试管，并将它们摆放成斜面。
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孢子分离法(有性繁殖） 菌龄小 孢子 生命力强 特点 变异率高
孢 子 分离法
单孢分离 多孢分离
难度较大
较简易
单孢分离 的菌落
多孢分离 使许多孢子在同一培养基上， 概念 萌发后自由交配成次生菌丝的方法 种菇选择消毒
步骤
采收孢子 整菇插种法 钩悬法 孢子印法 接种孢子
选择：菇形圆整，实体。 1.种菇选择 消毒 有菌膜：剪去菌柄2/3—清水中清 洗—0.1%升汞浸泡1-2分—无菌水 消毒 冲洗—无菌纱布吸干水分 剪去菌柄2/3，只能用75%的酒精 无菌膜 擦拭菌盖和菌柄—用无菌水冲洗 --无菌纱布吸干水分
2.采收孢子 整菇 插种法 种菇插在孢子收集器中 使孢子散落于培养皿内的方法
用 前 灭 菌
25℃、24h现孢子粉 取出分离材料 培养皿盖严
钩悬法
25℃、24h现孢子粉 取出分离材料
孢子印法
3.接种孢子
用接种环 蘸孢子液或孢子粉 涂布于平板上
组织分离法 组织 培养
PDA
次生菌丝
特点
简便，易成功 保持原菌种性状 重复多易退化 不适于耳类
学习情境2-2
母种制种技术
一、母种培养基制作及灭菌 二、菌种分离技术 三、菌种转管技术---再生母种
母种制种技术
母种培养基 的制作及灭菌
菌种分离
母种培养
母种转管
孢子分离法
组织分离法
基物分离法
一、母种培养基的制作及灭菌
• （一）母种培养基的制作 注：马铃薯、胡萝卜、子实体、黄豆芽、 棉籽壳等能去皮去皮，能切块切块，然后 加水煮沸30分左右，过滤取汁；玉米粉或 高粱粉加水后，一般加热至70℃左右，并 保持60分钟，过滤取汁；麦芽则要加热至 60-62℃，保持60分钟，过滤取汁。
步骤 外观典型、大小适中、无病虫害、 选种菇 八九成熟、第1~2茬的子实体
种菇 消毒 取接 组织
用酒精棉球擦拭
纵剖（撕）菇体 尖头镊取盖柄交界处绿豆—黄豆粒大 的组织 放入新斜面中部
母种培养
1.培养条件 场所清洁 空气清新 空气湿度 60%~70%
光线暗
温度约25℃
2.技术环节
母种 培养 及时挑拣污染管 分离的母种要纯化→出菇试验 →使用 控制菌龄（即将长满斜面） 培养时间5~10天
野 生 食 用 菌 如 何 制 得 母 种
从别的 制种基地 购买来的 菌种如何 制得生产 和保藏用 足够量的 母种？
母种转管
将母种移入新的母种培养基的过程 概念 过程 注意 接种环取绿豆粒大母种 移入新斜面中部 种块勿太大 原老种块勿再接入
传代次数勿太多
转管
假设同学们现在是一 名食用菌技术人员，你 在生产中发现一性状良 好的平菇品种，你怎样 制得这一品种的母种？ 要求同学们以组为单 位，进行讨论，拿出制 种方案。