盘古基因DNA连接酶
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T4 DNA Ligase
使用说明
产品货号： DT4050H 400 U / μL, 50 μL DT4200H 400 U / μL, 200 μL
包装组成： T4 DNA Ligase（400 U/μL） 10×T4 DNA Ligase Buffer 保存条件： -20℃
50 or 200 μL 1 mL
T4 DNA Ligase
1 μL
ddH2O
up to 25 μL
* DNA片段的摩尔数应控制在载体DNA摩尔数的3～10倍。 ** 平滑末端的载体与DNA片段进行连接，或单酶切位点重组时， 应首先将载体进行去磷酸化处理，以防止过高的载体自身环化。 注意： PCR产物的5’通常无磷，与平端载体连接时，载体不得脱 磷。如果载体脱磷，PCR产物必须磷酸化后才能连接。
制品说明： 该酶催化相邻DNA链的5’-P末端和3’-OH末端以磷酸二酯
键结合的反应，需ATP作辅酶。该酶主要用于催化匹配粘性末 端或平滑末端之间的DNA连接，也可催化DNA与RNA之间的连 接。
酶贮来自百度文库液：
Tris-HCl（pH 7.5） 10 mM
KCl
50 mM
DTT
1 mM
EDTA
0.1 mM
Glycerol
50%
10×连接反应缓冲液（Buffer）：
Tris-HCl（pH 7.6） 400 mM
MgCl2
100 mM
DTT
100 mM
ATP
5 mM
-20℃ 保存
Buffer在融解时，有时出现少量白色沉淀，属正常现象，请于
37℃温浴溶解后使用。
制剂来源： Cloned T4 bacteriophage DNA ligase gene and expressed in E. coli 。
40倍； 而连接Hae III末端的速度约为连接Sma I末端速度的5～ 10倍。
标准连接反应示例：
DNA片段和载体DNA的连接 1. 在微量离心管中制备下列连接反应液
10×T4 DNA Ligase Buffer DNA片段* 载体DNA**
2.5 μL 约 0.3 pmol 约0.03 pmol
活性定义： 在20 μL的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind III的分解
物在16 ℃下反应30 min时，90%以上的DNA片段被连接所需 要的酶量定义为1个活性单位（U）。该定义的125 U相当于 ATP-PPi交换反应中1.0 Weiss Unit。
纯度检验： 1） 2,000 U的本酶和1 μg的λ-Hind III片段在37℃下反应24 h， DNA的电泳谱带不发生变化。 2） 2,000 U 的本酶和 1 μg 的 Supercoiled pBR322 DNA 在 37 ℃ 下反应 24 h，DNA 的电泳谱带不发生变化。 3） 2,000 U 的本酶和 1 μg 的 16S，23S rDNA 在 37 ℃下反应 24 h，DNA 的电泳谱带不发生变化。
Vol. 2012.11
产品用途： 1）DNA片段和载体DNA的连接。 2）DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。
使用注意： 连接反应因末端碱基顺序的不同而反应速度各异，一般有下
列倾向： 粘性末端：Hind III＞Pst I＞EcoR I＞BamH I＞Sal I 平滑末端：Hae III＞Alu I＞Hinc II＞Sma I EcoR V＞Sca I＞Pvu II＞Nru I 其中连接Hind III末端的速度约为连接Sal I末端速度的10～
2. 16 ℃过夜反应。 3. 加入2.5 μL（1/10量）的3 M CH3COONa（pH5.2）。 4. 加入62.5 μL（2.5倍量）的冷无水乙醇，-20 ℃放置30～60 min。 5. 离心回收沉淀，用70％的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 6. 25～50 μL TE溶解，10～20 μL转化至100 μLl的感受态细胞 中。
使用说明
产品货号： DT4050H 400 U / μL, 50 μL DT4200H 400 U / μL, 200 μL
包装组成： T4 DNA Ligase（400 U/μL） 10×T4 DNA Ligase Buffer 保存条件： -20℃
50 or 200 μL 1 mL
T4 DNA Ligase
1 μL
ddH2O
up to 25 μL
* DNA片段的摩尔数应控制在载体DNA摩尔数的3～10倍。 ** 平滑末端的载体与DNA片段进行连接，或单酶切位点重组时， 应首先将载体进行去磷酸化处理，以防止过高的载体自身环化。 注意： PCR产物的5’通常无磷，与平端载体连接时，载体不得脱 磷。如果载体脱磷，PCR产物必须磷酸化后才能连接。
制品说明： 该酶催化相邻DNA链的5’-P末端和3’-OH末端以磷酸二酯
键结合的反应，需ATP作辅酶。该酶主要用于催化匹配粘性末 端或平滑末端之间的DNA连接，也可催化DNA与RNA之间的连 接。
酶贮来自百度文库液：
Tris-HCl（pH 7.5） 10 mM
KCl
50 mM
DTT
1 mM
EDTA
0.1 mM
Glycerol
50%
10×连接反应缓冲液（Buffer）：
Tris-HCl（pH 7.6） 400 mM
MgCl2
100 mM
DTT
100 mM
ATP
5 mM
-20℃ 保存
Buffer在融解时，有时出现少量白色沉淀，属正常现象，请于
37℃温浴溶解后使用。
制剂来源： Cloned T4 bacteriophage DNA ligase gene and expressed in E. coli 。
40倍； 而连接Hae III末端的速度约为连接Sma I末端速度的5～ 10倍。
标准连接反应示例：
DNA片段和载体DNA的连接 1. 在微量离心管中制备下列连接反应液
10×T4 DNA Ligase Buffer DNA片段* 载体DNA**
2.5 μL 约 0.3 pmol 约0.03 pmol
活性定义： 在20 μL的连接反应体系中，6 μg的λDNA-Hind III的分解
物在16 ℃下反应30 min时，90%以上的DNA片段被连接所需 要的酶量定义为1个活性单位（U）。该定义的125 U相当于 ATP-PPi交换反应中1.0 Weiss Unit。
纯度检验： 1） 2,000 U的本酶和1 μg的λ-Hind III片段在37℃下反应24 h， DNA的电泳谱带不发生变化。 2） 2,000 U 的本酶和 1 μg 的 Supercoiled pBR322 DNA 在 37 ℃ 下反应 24 h，DNA 的电泳谱带不发生变化。 3） 2,000 U 的本酶和 1 μg 的 16S，23S rDNA 在 37 ℃下反应 24 h，DNA 的电泳谱带不发生变化。
Vol. 2012.11
产品用途： 1）DNA片段和载体DNA的连接。 2）DNA片段和Linker或Adaptor DNA的连接。
使用注意： 连接反应因末端碱基顺序的不同而反应速度各异，一般有下
列倾向： 粘性末端：Hind III＞Pst I＞EcoR I＞BamH I＞Sal I 平滑末端：Hae III＞Alu I＞Hinc II＞Sma I EcoR V＞Sca I＞Pvu II＞Nru I 其中连接Hind III末端的速度约为连接Sal I末端速度的10～
2. 16 ℃过夜反应。 3. 加入2.5 μL（1/10量）的3 M CH3COONa（pH5.2）。 4. 加入62.5 μL（2.5倍量）的冷无水乙醇，-20 ℃放置30～60 min。 5. 离心回收沉淀，用70％的冷乙醇清洗沉淀，真空干燥。 6. 25～50 μL TE溶解，10～20 μL转化至100 μLl的感受态细胞 中。