柯萨奇B3病毒诱发小鼠心肌炎的动态研究

积 ２条 以上 肌纤 维为 １ 病灶 ， 均 每 ｌ 高 倍 视 个 平 Ｏ个
野见 １ 个病灶为 （ ； 个 高倍视 野见 １ 病灶 为 ＋） ５ 个 （ ＋＋ ； 个高倍视野见 １ ）３ 个病灶为（ ＋＋＋） 。
１２３ Ｃ Ｂ ． ． Ｖ ３核 酸原位 杂交 阳性 杂 交 信 号 的定 量 图
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山东 医药 ２０ ０ ７年第 ４ ７卷第 ２ ８期
柯 萨奇 Ｂ ３病 毒 诱 发 小 鼠心 肌 炎 的 动 态 研究
潘 理会 李春辉 。
（ 承德 医学院， １ 河北承德 ０ ７０ ； ６ ００ ２承德 医学院附属 医院）
［ 摘要 ］ 用柯 萨奇 Ｂ ３病毒 （ Ｖ ３ 诱发小 鼠病毒性心肌炎 （ ＭＣ 模型 ， ＣＢ） Ｖ ） 分别 在病毒感染 第 ３ ５ ７ ９天 ， 、、、 利用 光镜 Ｈ Ｅ染色 、 透射电镜技术 、 原位杂交技术观察 Ｖ ＭＣ形成过 程中形态学的动态变化 。结果 Ｖ ＭＣ小 鼠模型 于第 ３ 天开始 出现形态学改变 ， 但心肌结 构破 坏不明显 ， ９天心肌 结构 明显破 坏。表 明柯 萨奇 Ｂ 第 ３病 毒诱 发小 鼠 Ｖ ＭＣ
１． 计 软件 进 行 处 理 ， 间 配 对 用 检 验 ， ≤ １０统 组 Ｐ
００ ． ５有 统计学 意 义 。
２ 结 果
１２ １ 模型制备与分组 将小 鼠随机分成正常对 ．． 照组和模型组各 ４ Ｏ只 ， 模型组腹 腔注射 １ Ｔ Ｉ卯 ０ ＣＤ 病毒 液 ０ ３ｍ ， 常 对 照 组 注 射 等 量 生 理 盐 水 。两 ． ｌ正 组 分别设 ｄ 、５ ｄ 、９组 各 ｌ ３ ｄ 、７ ｄ Ｏ只 ， Ｃ Ｂ 于 Ｖ ３感 染 后
１ 材 料与 方法
细 胞浸 润 ： 观察 淋 巴细胞 、 核 细 胞 、 性 粒 细 胞 平 单 中
均 每 个 高 倍 视 野 ４个 以下 为 （＋ ／一） ５～９个 为 ； （＋） １ ；０～１ 为 （＋ ＋） １ 以上 或 成 堆 出现 为 ５个 ；６个
（ ＋＋＋） 。②心肌细胞损伤： 心肌细胞变性 、 坏死累
第 ３、、、 ５７９天处 死 ， 心 房 环 下 ５ｍ 处 取 ３ｍ 厚 在 ｍ ｍ
２ １ 心肌的组织病理学改变 ．
①大体观察 ：３பைடு நூலகம்ｄ 组心
肌 组织 未见 明显病 变 ，５ ｄ 、９组 心 肌 出 现黄 白色 ｄ 、７ ｄ
斑块及 白色点状 、 条索状病 变。② 光镜 Ｈ Ｅ染 色观
１２ 实 验方 法 ．
像分析
染色后的原位杂交片在低倍镜下通过病理
图像分析系统对 阳性杂交信 号逐个分析 ， 整合 出阳 性信号面积和被检测心肌面积 ， 以二者 的比值作 为 单 位 心 肌面积 中阳性杂 交信 号面 积 Ｊ 。
１ ３ 统计 学方 法 ． 所 有 数 据 用 元－ｓ 示 ， Ｓ ｓ Ｉ表 － 用 ＰＳ
心肌内已有炎细胞 浸润， 心肌坏死 和炎细胞 浸润呈
片状（＋～＋＋） ｄ ；９组心肌组织广泛变 性、 坏死伴
炎 细胞 浸 润 ， 以纤 维化病 灶 （＋＋ 一 ＋＋ ＋） 继 。
１２２ 心肌组 织光镜 的形态学观察指标¨ ① 炎 ．．
２２ 透射电镜超微结构观察 ｄ ． ３组偶有 心肌 细胞 线粒体轻度肿胀 ， 血管 内皮细胞有类 似凋亡 的改变 ； ｄ 、７ ｄ 组线 粒体肿胀、 ５ ｄ 、９ 嵴断裂 ， 的呈空 泡样 变 有
１ １ 实验 动 物及 材 料 ．
６周 龄雄 性 ＩＲ纯 种 小 鼠 Ｃ
８ ， Ｏ只 体质量 ２ ２ ， Ｏ～ ５ｇ 由北京 实验动 物研究 所提 供 。Ｃ Ｂ Ｖ ３亲 心肌病 毒 株 ， 由河 北 医科 大学 微 生物 教 研室提供 ； 病毒株在 Ｖ ｒ ｅ ｏ细胞 中传代 ， 反复冻融三 次， 测定 Ｔ Ｉ ∞ ＣＤ 。分装后 一 Ｏｃ 冷冻保存。Ｃ ＩＳ ７ ＝ Ｉ ＭＡ 真彩 色病理 图像 分析 系 统 ，Ｅ １０ Ｅ 电子显 微 镜 Ｊ Ｍ一２０ Ｘ 下观察 。Ｃ Ｂ Ｖ ３病毒 核 酸 （ ｉ—Ｖ ３ 原 位杂 交 试 剂 ＢｏＣ Ｂ ） 盒由北京大学基因诊断研究中心提供。
发生过程 中， 不同时间段 内形态学 呈动态 改变。 在
［ 关键 词］ 小 鼠； 病毒性心肌炎 ； 形态学 ［ 中图分类号］ Ｒ ４ ． ５ ２２ ［ 文献标识码 ］ Ｂ ［ 文章编号 ］ １０ －６ Ｘ【０ ７ ２ － ２ －２ ０ ２２６ ２０ ）８０ ８ ０ ０
病 毒性 心肌炎 （ ＭＣ 是 由病 毒感染 所 致 。现 已 Ｖ ） 证实， 起 Ｖ 引 ＭＣ 的 主 要 病 因 是 柯 萨 奇 Ｂ ３病 毒 （ Ｖ ３ 感染 ， ＣＢ ） 目前有 关 Ｃ Ｂ Ｖ ３感染 后 心 肌形 态 学 的 动态 研究 少见 报道 。本 研究 通 过 对 小 鼠 Ｃ Ｂ Ｖ ３感 染 模 型在不 同时 间段 内 进行 动 态 观 察 ， 旨在 为 Ｉ 诊 临床 断 和治疗 Ｖ ＭＣ提 供实 验依 据 。
［ 基金项 目］承德市科学技术研究 与发展 计划项 目（０ ６ １ ７ 。 ２０ ２ ０ ） ０
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山东医药 ２０ ０７年第 ４ 卷第 ２ 翅 ７ ８
性 ， 浆 网扩张 ， 丝稀 疏溶 解 ， 肌 肌 细胞 核异 型 变 ， 血 小 管 内皮细胞 呈 凋 亡改变 ，７ ｄ ｄ 、９心肌 细胞 开 始 向成纤 维细胞 转 化 ， 常 对 照 组 各 时 间段 心 肌 组 织 超 微 结 正 构均 未见 病变 。 染初 期 病毒 核 酸主要 出现在 心 外 膜 、 肌 周 围 、 管 心 血
察 ：３组 心肌 细胞 肿 胀 ， ｄ 细胞 横 纹 不 清 ， 肌 细 胞 间 心 和小 血 管周 围有少 量炎 细胞 （＋ ／一 ～ ＋） ｄ 、７组 ；５ ｄ
心肌 ， ％ 甲醛固定 ， １ ０ 石蜡包埋 ， Ｅ染色和 Ｃ Ｂ Ｈ Ｖ ３核
酸原位 杂交 检 测 。 同 时 取 １ｍ ｍ 心 肌 组 织 ，３ 戊 ％ 二醛 固定 ， 于透 射 电镜 观察 。 用