培养基平皿暴露时限验证方案
药品微生物限度检查方法验证步骤及示教
药品微生物限度检查方法验证一般步骤1.样品及确定验证项目样品要求：不含菌或少量菌验证项目：根据药品用药途径、处方、制法确定。
细菌、霉菌及酵母菌计数验证（一般必作）；控制菌检查如为中药制剂必须查标准，根据用药途径、处方、制法确定控制菌检查项目。
特殊的如滴眼剂、用于烧伤、严重创伤等应根据制剂通则项下要求及微生物限度标准来确定。
2. 确定供试液制备方法3. 方法选择预试验（1）目的：确定样品对试验菌有无抑菌活性及计数验证各试验菌的回收试验方法。
（2）查资料，根据样品的功能、主治及所含成分等确定方法选择预试验方案。
（3）根据预试验结果确定各试验菌计数验证方法控制菌验证方法4. 验证试验：选择3个批号样品进行3次独立实验，证明方法的有效性；5. 据验证结果优化试验条件，建立微生物限度检查方法SOP。
6. 写出验证资料。
示教内容11.5.上午：菌液制备方法：一. 新鲜浓菌液制备（要求学员练习操作的内容）新鲜浓菌液接种：细菌大肠埃希菌[CMCC（B）44102]金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]生孢梭菌[CMCC（B）64941]（厌氧梭菌）铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]培养基：营养肉汤3-5ml、硫乙醇酸盐流体培养基3-5ml接种及培养：1.分别取各试验菌半个--1个菌落分别接种营养肉汤（充分研匀、摇匀），36±1℃培养16-18小时。
2.生孢梭菌新鲜培养物取0.1ml接种硫乙醇酸盐流体培养基（临用前排氧）36±1℃培养18-24小时。
霉菌及酵母菌白色念珠菌[CMCC（F）98001]、黑曲霉[CMCC（F）98003]培养基：改良马丁培养基3-5ml；改良马丁琼脂培养基斜面1.取白色念珠菌的菌落接种改良马丁培养基23-28℃培养24小时（可用36±1℃培养18-24）。
2.黑曲霉孢子悬液的制备：沾取黑曲霉孢子接种改良马丁琼脂培养（红字为示教内容基，培养5-7天待培养物黑色孢子生长（全部变黑，已制备好斜面培养物示教）加入5-10ml0.9%氯化钠溶液，小心振挡洗脱表面的黑色孢子1-2次，吸出洗脱液（注意不要触到菌丝体）即为孢子悬液。
培养基有效期验证方案2
培养基有效期验证方案2培养基有效期验证方案2在细菌学和微生物学领域中，培养基是一种含有必需营养物质和生长因子的媒介，用于培养和繁殖微生物。
然而，培养基的有效期是有限的，因为其中的营养物质和生长因子会逐渐降解或变质，从而影响微生物的生长和繁殖。
因此，科学家和实验室技术人员需要定期验证培养基的有效期，以确保其在实验中的可靠性和准确性。
1.选择需要验证有效期的培养基样品：从不同批次的培养基中选择一部分样品进行验证。
确保所选样品的储存条件相同，以排除其它因素对培养基有效期的影响。
2.分析培养基中的营养物质：使用化学分析方法，确定培养基中的营养物质含量。
常见的营养物质包括碳源、氮源和矿物质。
在不同时间点分析多个样品，以观察其营养物质含量的变化趋势。
3.测定微生物的生长曲线：选取一种广泛使用的微生物株，在标准培养条件下分别使用验证样品和新鲜培养基进行培养。
通过测定微生物的生长曲线，确定培养基有效期的变化趋势。
4.观察微生物的生长和形态特征：在培养基有效期内的不同时间点，从验证样品和新鲜培养基中分别取样进行观察。
特别注意微生物的生长速度、生长形态和生理特征的变化。
5.比较验证样品和新鲜培养基的结果：将验证样品和新鲜培养基的分析结果和微生物培养结果进行比较，确定培养基有效期的变化情况。
如果验证样品与新鲜培养基在营养物质含量和微生物生长扩增上无明显差异，那么验证样品的有效期可以延长。
6.数据分析和报告：将所得数据进行统计和分析，并撰写详细的验证报告。
报告应包含验证样品和新鲜培养基的相关数据、观察结果以及培养基的有效期结论。
需要注意的是，培养基的有效期验证可能因不同的培养基配方和储存条件而有所不同。
因此，在验证过程中，需要考虑和控制培养基的储存温度、湿度和光照等因素，以尽可能减少外部因素对培养基有效期的影响。
此外，培养基有效期验证方案还可以结合其他方法，如微生物学检测和保存条件优化等，以提高验证的准确性和可靠性。
通过这些有效期验证方案，科学家和实验室技术人员可以确保培养基的质量和性能，为微生物学研究和实验提供可靠的基础。
洁净区(间)空气消毒效果及周期验证
—验证文件—工艺验证文件名称: 洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证文件编号: SX/YZ6.4-06版本号: 2013版本编制: 日期：年月日审核: 日期：年月日批准: 日期：年月日实用标准文案目录1概述 (1)2验证目的 (1)3验证范围 (1)4验证方案制定的依据 (1)5验证人员职责分工 (1)6验证仪器设备 (2)6.1验证所需仪器设备仪表 (2)6.2仪器仪表校验记录确认 (2)7验证材料 (2)7.1材料的选取 (2)7.2材料的用量 (2)7.3材料的主要用途 (2)7.4材料的确认 (2)8验证方法 (2)8.1熏蒸消毒方法 (2)8.2熏蒸参数 (3)8.3熏蒸时间周期 (3)8.4生物指示剂试验方法 (3)8.5物体表面菌试验方法 (4)8.6沉降菌试验方法 (4)9验证环境 (4)9.1无菌实验室检测环境确认 (4)9.2洁净车间环境确认 (5)9.3洁净车间的清洁 (5)10验证检测 (5)10.1生物指示剂检测 (5)10.2物体表面菌检测 (5)10.3沉降菌检测 (5)10.4 验证标准 (6)11验证结果的综合评价 (6)12 再验证周期 (6)目录附件1 人员资格确认表附件2 计量器具确认记录附件3 洁净车间空气消毒剂的确认记录附件4 洁净车间空气消毒剂的确认记录附件5 洁净车间熏蒸消毒方法确认记录附件6 消毒试验方法确认记录附件7 检测环境确认报告附件8 生物指示剂检测记录附件9 洁净车间消毒后物体表面菌检测记录附件10 洁净室消毒30天后物体表面菌检测记录附件11 洁净车间消毒后沉降菌检测记录附件12 洁净车间消毒后30天沉降菌检测记录附件13 验证结果附件14 验证结果分析及评价附件15 验证结论附件16 验证报告附件17 验证证书天台县双星医疗器械厂编号SX/YZ6.4-06洁净室（区）空气消毒效果及周期再验证版本2013验证方案页数第1页共6页1概述甲醛是常用的消毒剂，其3～5%的水溶液或乙醇溶液能破坏细菌繁殖体及许多芽孢、真菌和病毒，使其蛋白质、酶类变性。
微生物限度检查方法验证方案
微生物实验室检测设备配置方案微生物限度检查方法验证方案1.目的：为确认所采用的方法适合于该药品的微生物限度检查，包括细菌、霉菌及酵母菌计数和控制菌检查，特制定本验证方案，通过比较试验菌的恢复生长结果，来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性，以确认供试品在该实验条件下无抑菌活性或其抑菌活性可忽略不计，所采用的方法适用于该品种的微生物限度检查。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需变更时，应填写验证方案修改申请并报验证领导小组批准2.范围：本验证方案适用于微生物限度检查方法的验证。
3.规范性引用文件：根据《中国药典》2010年版二部附录XI J微生物限度检查法的要求，由于某些供试品具有抗菌活性，在建立微生物检查方法或产品的组分发生改变或原检查法的检验条件发生改变时，可能影响检验结果的准确性，必须对供试品的抑菌活性及测定方法的可靠性进行验证。
4.验证实施：4.1.1试验前的准备：4.1.1.1试验用具的准备：将试验需用的试管、刻度吸管、薄膜过滤器、滤膜（孔径0.22um、直径50mm）、平皿、空三角瓶、称量纸等，用牛皮纸包扎好后，放于湿热灭菌器中，在121℃,灭菌30 min,在3天内使用。
4.1.1.2试验用培养基的制备：取适用性检查合格的营养琼脂培养基、玫瑰红钠琼脂培养基、营养肉汤培养基、胆盐乳糖培养基（BL）、改良马丁琼脂培养基、4-甲基伞形酮葡糖甘酸培养基（MUG）等脱水培养基，按照相应的配制微生物实验室检测设备配置方案说明，用纯化水配制、分装后，在2小时内，放于湿热灭菌器中，在121℃, 灭菌15 min，在3周内使用。
4.1.1.3试验用稀释剂/缓冲液、冲洗液的制备：取在有效期内的试剂，按照相应的配制方法，配制pH7.0无菌氯化钠-蛋白胨缓冲液、0.9%无菌氯化钠溶液、0.05%（ml/ml）聚山梨酯80的0.9%无菌氯化钠溶液等，用纯化水配制，加热使溶，过滤，分装，在121℃，灭菌15 min，在3周内使用。
沉降菌碟暴露时间验证方案
沉降菌碟暴露时间验证文件目录一、验证方案起草、审批 (1)二、验证报告起草审查及会审 (1)三、验证证书的批准 (1)四、引言 (2)五、菌种及培养基 (2)六、菌液制备 (2)七、验证方法 (2)八、回收率计算 (3)九、结果判断 (3)十、验证结果和记录（附后） (3)十一、验证报告（附后） (3)十二、验证证书（附后） (3)沉降碟暴露时间验证方案一、验证方案起草、审批二、验证报告起草审查及会审三、验证证书的批准四、引言1、验证目的：验证我公司沉降碟的暴露时间为4小时，依据《中国药典》2010年版附录无菌检查法和微生物限度检查法下灵敏度检查项进行验证，以证明沉降碟中培养基在空气暴露时间可以达到4小时。
2、概述：我公司沉降碟为普通的培养皿（φ90mm×15mm），所采用的培养基为大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA），每个培养皿含培养基20ml，根据培养基特性制订检验方法，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。
3、验证组织组长：彭伟添组员：陈杰辉，黄玉妍五、菌种及培养基1、菌种金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】、铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】、枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】、生孢梭菌【CMCC（B）64941】、白色念珠菌【CMCC（F）98001】。
2、培养基营养肉汤培养基、改良马丁培养基、硫乙醇酸盐流体培养基、大豆酪蛋白琼脂培养基3、无菌检验仪器及相关设备无菌室、净化工作台、恒温培养箱（30～35℃）、生化培养箱（23～28℃）、高压蒸汽灭菌器、电子天平、电冰箱、电热干燥箱、玻璃器皿。
六、菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中培养18～24小时；接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，培养24～48小时；上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。
洁净车间不连续生产验证方案
第 1 页共19 页洁净车间不连续生产验证方案编制/ 日期：***/****-2-8审核/ 日期：***/****-2-8批准/ 日期：***/****-2-8版本号：文件编号：******控制状态：受控*********有限公司****年2月第 2 页共19 页一、验证目的 (01)二、验证小组职责及概述 (01)三、采用文件 (02)四、验证方法 (02)五、验证步骤 (02)六、验证结论 (03)一、验证目的：无菌洁净生产车间不连续生产时,微生物和微粒是否符合洁净生产要求，是否能够达到无菌医疗器械生产需要的10万级净化环境。
二、验证小组职责及概述：1）验证小组组长：***验证小组成员：***、2）概述：无菌洁净生产车间的微生物和微粒超标,会导致无菌产品受到污染。
经过验证后,确认洁净生产车间在不连续生产时的最佳保持时限。
3）验证小组：负责验证方案的审批；负责验证协调工作，以确保验证方案顺利实施；负责验证数据及结果的审核；负责验证报告的审核；负责再验证周期的确认。
4）技术部：负责拟定验证方案。
负责收集各项验证数据、试验记录，并对试验结果进行分析后，起草验证报告。
5）****负责组织验证并根据验证结果，决策无菌洁净生产车间不连续生产时，超时限的洁净生产车间处理事项。
6）质检部：负责组织试验所用仪器、设备的验证。
负责仪器、仪表、量具的校正。
负责验证所第 3 页共19 页需样品、试剂、试液等的准备。
负责环境参数的测试，监控及对微生物检测。
三、采用文件YY0033—2000 无菌医疗器具生产管理规范四、验证方法：在无菌洁净生产车间停产时,通过逐天检测洁净生产车间内的微生物和微粒数量,找出不满足10万级生产要求的界限。
采用静态时间检测。
五、验证次数：连续10天，每天检测一次；采样培养一次。
六、验证步骤1、检测设备确认：1）尘埃粒子计数器测定：接通电源，调试设备运行正常。
2）培养箱测定：接通电源，升温运行正常。
培养基曝露时间
环境条件不一样，温度湿度及层流的风速，可能会使培养基干掉，不利于微生物的生长。
可以将沉降菌平皿布置在日常检测点，按照日常检测的方式放置4小时后，平行做2个，1个做阴性对照，1个接种各种菌，做培养基适用性检查。
当然还要用1个没有经过暴露的平皿接种菌。
然后算出回收率，应大于70%。
就可以了。
说明在这样的环境放置4小时，对培养基培养细菌的能力没有影响，即可！方法是参照《中国药典》2010版中“培养基的适用性检查”做的。
但不完全一致。
70%是指经过同等条件接种和培养后，样品皿与对照皿的微生物数量的比值不小于70%，即证明经过4小时暴露后，平皿的培养能力与对照皿相比没有大的变化。
更正一下，是1碟培养1个菌，对照皿也是。
培养接种什么菌要看你用什么培养基。
营养琼脂就要霉菌杂菌都要。
规定是50%~200%。
现附日常培养基适用性检查的步骤，用于验证的培养基的接种方法肯定不能用倾倒法，可以改用划线法。
4.3计数培养基的适用性检查4.3.1菌液制备：4.3.1.1接种金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，经30～35℃培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基上，经23～28℃培养24～48小时。
上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌落数小于100cfu的菌悬液。
4.3.1.2接种黑曲霉的新鲜培养物至改良马丁琼脂培养基上，23～28℃培养5～7天，加入3～5ml无菌的含0.05%（v/v）聚山梨酯80的0.9%氯化钠溶液，将孢子洗脱。
用无菌毛细吸管吸出孢子悬液至无菌试管内，用无菌的含0.05%（v/v）聚山梨酯80的0.9%氯化钠溶液制成每1ml含孢子数小于100cfu的孢子菌液。
4.3.2试验步骤4.3.2.1取大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌各50～100cfu，分别注入无菌平皿中，立即倾注营养琼脂培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，混匀，凝固，置30～35℃培养48小时，计数。
培养基无菌模拟灌装验证方案及报告
5.4.2.1 负责设备的安装、调试和维护保养，并做好相应的记录； 5.4.2.2 负责提供设备的详细资料及相关 SOP； 5.4.2.3 负责建立设备档案； 5.4.2.4 负责提供设备的计量器具校验详细情况。 5.4.3 质量部
5.4.3.1 负责组织 QA 人员对验证全过程进行监控； 5.4.3.2 负责验证相关的检验及结果分析报告； 5.4.3.3 负责数据的选择与评价。 5.4.4 生产部
产品接触的灌装设备部件的清洗、 灭菌、 安装过程必须遵循与实际生产操作相同的标准操作规程。 检查结果见附表 1、附表 2、附表 3、附表 4、附表 5、附表 6、附表 7、附表 8 及附表 9。 6.3.2 灌装机灌装速度保持与正常冻干粉针剂灌装及半压胶塞生产时的速度相同或略低于正
常的灌装速度。检查结果见附表 10、附表 11 及附表 12。 6.3.3 所有参加模拟试验的操作人员均应经过 GMP、无菌操作、无菌更衣程序技术等相关知识
页码：4/34 编号：VA-PV-A-201-01-12
模 拟 验 证 方 案
Simulation Validation Project
附表 17 附表 18 附表 19 附表 20 附表 21 附表 22 附表 23 附表 24 附表 25 附表 26 附表 27 附表 28 附表 29 附表 30
无菌培养基一般选用胰蛋白胨大豆肉汤培养基，按每 30g 加 1L 过滤纯化水的比例，配
制足够量（如考虑进行 3000 瓶的试验，每瓶灌装 3ml(约等于 3g)，则至少要配制 10～12L） 。 6.3 操作过程及操作规程 6.3.1 模拟灌装试验中使用的玻璃瓶和胶塞的清洗、灭菌，灌装及冻干设备的清洗、消毒，与
清洁情况灭菌情况维护保养使用情况设备名称标准实际结论精滤罐及微孔滤膜过滤圆盘应清洁无任何残余物符合规定符合sop规定良好玻璃瓶清洗应清洁无上一批残余物符合sop规定良好胶塞清洗机胶塞清洗应清洁无上一批残余物符合sop规定良好铝盖清洗机铝盖清洗应清洁无上一批残余物符合sop规定良好灌装及半压缩灌装半压塞应清洁无任何残余物符合规定符合sop规定良好应清洁无任何残余物符合规定符合sop规定良好应清洁无任何残余物符合sop规定良好结论
洁净车间不连续生产验证方案
编号洁净车间停机周期验证方案编制/日期：审核/日期：批准/日期：一、验证目的：无菌洁净生产车间不连续生产时,微生物和微粒是否符合洁净生产要求，是否能够达到无菌医疗器械生产需要的10万级净化环境。
二、验证小组职责及概述：三、采用文件YY0033—2000 无菌医疗器具生产管理规范四、验证方法：在无菌洁净生产车间停产时,通过逐天检测洁净生产车间内的微生物和微粒数量,找出不满足10万级生产要求的界限。
采用静态时间检测。
五、验证次数：连续10天，每天检测一次；采样培养一次。
六、验证步骤1、检测设备确认：1）尘埃粒子计数器测定：接通电源，调试设备运行正常。
2）培养箱测定：接通电源，升温运行正常。
2、检测方法确认1）悬浮粒子数测定：尘埃粒子计数器在净化系统运行30min以后，温度18—28℃；相对湿度45%—65%；空气压差与室外>10Pa，是相对正压。
打开尘埃粒子计数器电源开关，按一下“总清”按钮预热30min。
按“校时”一“计数”在计数位置，抽气泵接通，调流量计1000ml/min左右。
右旋“校正开关”到位对准0点稍待几秒看头指针指在中间，红线上，注意调节时间不超过1min。
作以上调整1-VI通道粒经档的计数，都历现零后，即可进行测量。
把采样管从后面清洗按嘴上拔下，放至所需的测量点上，采样测试每个测试点测量三次，取平均值，做出结果评定。
采样点在0.8m—1.5m高度采集空气样。
分别测定每个洁净房间的悬浮粒子2）沉降菌测定：培养基平皿的制备：将ф9cm的培养皿置于121℃湿热灭菌20min.。
将已灭菌的培养基加热溶化，冷至45℃时，在无菌操作要求下将培养基注入培养皿，每皿约15ml。
等琼脂疑固后，将培养基平皿倒置于30℃—35℃恒温培养箱中，培养48h，若培养基平皿上确无菌落生长，即可供采样用，制备好备用的培养基平皿放在2℃—8℃的环境中存放。
测试人员按受检车间工艺采样点，在操作台上放置双碟ф9cm平皿，打开培养皿盖，使培养基表面暴露30min，再将培养皿盖盖上后倒置。
微生物检验方法验证方案
微生物检验方法验证方案微生物限度检查方法（平皿法）验证方案一、验证方案的制定验证项目名称：微生物限度检查方法（平皿法）验证编号：VF-PR-17-A验证小组组员：组长：姓名副组长：姓名组员：姓名步骤：验证方案组织实施进度二、验证方案的起草与审批1.验证方案的起草验证项目名称：微生物限度检查方法（平皿法）验证编号：VF-PR-17-A主要工作职责：方案设计责任人：姓名方案实施负责人：姓名操作人：姓名、姓名、姓名、姓名实施日期：年月日起草部门：生产部、质控部2.验证方案的审核与批准起草人签名日期：年月日验证方案审核人：姓名，审核日期：年月日验证方案批准人：姓名，批准日期：年月日三、微生物限度检查方法（平皿法）验证方案1.验证目的和原理1.1 验证目的本方案旨在确认所采用的微生物限度检查方法（平皿法）适合于该药品的细菌、霉菌、酵母菌数的测定。
验证过程应严格按照本方案规定的内容进行，若因特殊原因确需要变更时，应报验证委员会批准。
1.2 原理通过比较试验4组中试验菌的恢复生长结果来评价整个检验方法的准确性、有效性和重现性。
2.验证方法步骤2.1 验证前的准备在进行微生物限度检查方法（平皿法）验证前，所有的平皿和稀释剂都应该严格按照相关的灭菌程序消毒，以确保其对试验的结果没有影响。
试验菌应包括G-、G+、酵母菌和霉菌类微生物以基本覆盖样品中可能存在的微生物。
2.2 验证试验的操作计划用3个不同批号产品按照微生物限度检测方法进行平行试验，通过计算回收率来判断微生物限度检查方法是否对产品有影响。
2.3 试验结果可接受标准用标准菌株评价方法“尿素维生素E乳膏的微生物限度检查”对检品中微生物的抑制性，试验结果应显示3次独立的平行试验中，稀释剂对照组的菌回收率应不小于70%，试验组的回收率也不低于70%。
3.试验实施3.1 试验前的准备3.1.1 主要仪器设备：高压蒸汽灭菌器、恒温烘干箱、净化工作台、生物安全柜、恒温培养箱、霉菌培养箱。
微生物限度-平皿法
微生物限度检测（平皿法）
1、用到的设备和仪器：
无菌均质袋(无菌锥形瓶）、电子天平。
2、环境要求：检验前先开紫外灯和空调净化系统半小时。
3、样品外包装在准备室用75%乙醇或0.1%的新洁尔灭溶液浸泡10秒钟，然后通过传递窗传到检测室超净工作台内
4、供试液制备:取样品10g溶于90ml胰酪大豆胨液体培养基（pH7.0无菌氯化钠蛋白胨缓冲液）中，为10-1，限度值高的可以逐步稀释为10-2，10-3
5、接种：各稀释级别分别取1ml加入培养皿，每个稀释级别平行做两皿，然后需氧菌加18ml胰酪大豆胨琼脂培养基，霉菌加18ml沙氏葡萄糖琼脂培养基。
6、培养：待培养基凝固后倒置培养需氧菌33℃，培养5天。
霉菌23℃培养7天。
注：1、操作过程中一定要有无菌意识，防止对样品和环境造成污染。
2、此操作没有具体到品种，如果要具体到品种，取样量要在符合药典和法规要求的同时通过方法验证来得到。
3、稀释倍数根据样品污染程度进行，稀释倍数也要经过验证来得到。
无菌检查用培养基灭菌后的保存有效期的验证方法
无菌检查用培养基灭菌后的保存有效期的验证方法1.检查培养基成分首先，检查培养基成分是否完好。
查看培养基的配方和规格，确保供应商提供的培养基成分和规格与所需一致。
2.制备培养基按照制备培养基的标准操作程序，使用标准工作制备培养基。
在制备过程中，注意无菌技术和操作规范，以避免可能引入外来微生物。
3.贮存培养基将制备好的培养基分装到适合贮存的容器中，如瓶子、培养皿等。
确保容器是无菌的，并在容器上标记相关信息，如配制日期、有效期、负责人等。
4.检测无菌性使用质量合格的培养基进行无菌性验证。
将一部分培养基用于培养对照菌株，以确保培养基的培养性能正常。
另一部分培养基作为对照，进行传统无菌试验或使用快速无菌检测方法，如膜过滤法或微生物培养系统检测培养基。
在进行无菌性验证时，必须严格按照操作规程进行，避免外界污染。
例如，在操作过程中，需要手套、面具、实验台等设备的无菌操作，并进行负压操作或使用专业无菌操作设备，以保证验证结果准确可靠。
5.评估培养基质量根据无菌性验证的结果，评估培养基的质量。
如果培养基通过了无菌性验证，没有发现微生物污染，可以认为培养基在灭菌后的保存有效期是可靠的。
可以依据培养基制备和贮存的相关记录，评估培养基合格的时间范围。
此外，还可以进行培养基质量的其他评估，如pH值的测定、溶解度的测定等。
这些评估数据也可以作为判断培养基质量是否合格的依据。
总结：无菌检查用培养基灭菌后的保存有效期的验证方法主要包括检查培养基成分、制备培养基、贮存培养基、检测无菌性及评估培养基质量。
通过这些步骤，可以确保培养基的保存有效期符合要求，从而保证无菌实验的准确性和可靠性。
培养基平皿暴露时限验证方案
编号:V-AQ507 培养皿暴露时限验证方案1、起草、审核与批准2.2、目的2.3、范围2.4、职责2.5、概述2.6、执行标准和规范3.7、验证前的支持性确认3.8、验证内容5.9、数据分析6.10、偏差6.11、确认结果评定与结论6.12、再验证周期6.1、起草、审核与批准：2、目的：确认培养基平皿在洁净区暴露4个小时，保证培养基暴露后不会因失水等原因而影响微生物的正常生长，菌落生长应符合《中国药典》2010年版的规定。
3、范围：本方案适用于培养基平皿暴露时限的确认。
4、职责：5、概述：在对洁净区环境的微生物质量监控时，所获得的测试结果必须具有准确性和重现性，以保证被监测区域的环境状况确实处于受控状态。
作为被动式取样的沉降碟（平皿直径一般为90mm）,用于环境中沉降菌的监测。
沉降碟以其价廉、轻便、对空气环境破坏较小等优点而被广泛应用于洁净区环境的监测。
不足之处在于它只能作为定性测试，所获得数据的准确性较差。
但在层流区，沉降碟不会干扰气流方向，不失为一种比较好的方法。
为了尽可能地获得可靠性数据，沉降碟的放置时间不宜过短，至少为半小时，不大于4小时。
应对沉降菌的暴露时间进行确认，以保证暴露后的培养基不会因失水等原因而影响微生物的正常生长。
6、执行标准与规范：本方案以《药品生产质量管理规范》（2010年版）、《药品GMP》指南-无菌药品、《中国药典》（2010年版）为依据，制定了培养基平皿暴露时限验证方案。
7、验证前的支持性确认：1.1.1文件的检查确认：7.2仪器仪表的检查确认：1.1.2仪器仪表量程、规格必须符合测试及设计规范要求。
1.1.3仪器仪表使用前必须经具有相应资质机构校验，且在有效期内。
7.3公用工程系统的检查确认：7.4相关人员的培训:7.4.1文件培训7.4.2人员培训8、验证内容：8.1验证前参与实施验证的人员必须已经接受本方案的培训且考核合格。
见附表1。
8.2确认内容：培养基平皿暴露时限8.3验证前准备8.3.1试验用品8.3.1.1培养基：8.3.1.2可接受标准：所有培养基的规格、数量和保存条件满足要求，且在有效期内；脱水培养基呈流动粉末状，无结块，无潮解，且在有效期内。
胰酪胨大豆琼脂培养基平皿暴露时长研究
胰酪胨大豆琼脂培养基平皿暴露时长研究宋倩倩【摘要】对制药企业测定洁净区环境中沉降菌采用的胰酪胨大豆琼脂培养基平皿(简称TSA平皿)暴露后微生物生长情况进行评价,使用2种规格、3个厂家、2个时间段的方法进行对比试验。
结果表明:直径为90mm,装量为30m L的TSA平皿在暴露2.1h和4.1h后,接种于表面的金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌和黑曲霉的生长均符合要求;直径为90mm、装量为25m L的TSA平皿在暴露2.1h后微生物的生长符合要求,但暴露4.1h后,接种的黑曲霉生长情况不好。
由此表明,TSA平皿在暴露一段时间后,由于水分的流失影响微生物的生长,培养基灌装量大的TSA平皿耐受的暴露时间较长。
【期刊名称】《生物化工》【年(卷),期】2016(000)003【总页数】3页(P13-15)【关键词】TSA平皿;暴露时间;微生物生长【作者】宋倩倩【作者单位】上海仁会生物制药股份有限公司【正文语种】中文【中图分类】TQ460根据《药品生产质量管理规范》规定，药品生产企业洁净区环境需监控浮游菌和沉降菌，结合医药工业洁净室（区）沉降菌的测试方法（GB/T-16294-2010）[1]，静态测试时，培养基暴露时间30min以上，动态测试时，培养基暴露时间不大于4h，在符合法规要求的基础上减少换碟带来的风险，培养基的暴露耐受时间一直是制药企业关心的问题[2]。
本试验应用2种常规装量的TSA平皿进行不同时间暴露，根据对微生物培养结果的分析评价，研究保证沉降菌监测结果真实可信的有效方法。
1.1 试验地点笔式水针车间D级区清洗室A级层流。
1.2 培养基及规格大豆酪蛋白琼脂培养基，φ90mm，装量分别为25mL和30mL。
1.3 主要仪器及设备HPX-9272MBE数显电热恒温培养箱，MJX-250B-Z霉菌培养箱，TSI 9515风速仪，175H1TESTO温湿度记录仪。
1.4 试验方法1.4.1 风速及温湿度试验监测前用TSI 9515风速仪测量笔式水针车间D级区清洗室A级送风四角及中部风速，共5个点，各区域风速均在0.36～0.54m/s；用TESTO温湿度记录仪测量笔式水针车间D级区清洗室A级送风环境及湿度，要求温度18～26℃，湿度45%～65%。
培养基适用性检查验证方案
培养基适用性验证方案编制:审核:批准:1.验证目的：本次验证的目的是确认无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基应进行培养基的适用性检查，符合灵敏度要求。
2.参照标准2010版中国药典二部附录：XII A无菌检查法和XI G微生物限度检查法。
3.验证项目无菌检查、微生物限度检查、控制菌检查用培养基的适用性检查。
45.前提条件确认5.1所有本次验证实施过程中用到的仪器都已经过计量并且在计量有效期内。
5. 2所有参与本次验证的公司人员均进行相关培训6.接受标准6.1.液体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌应生长良好。
6.2.液体培养基指示能力桧查：与对照培养基管比较，被检培养基管试验菌生长情况、指示剂反应等应与对照培养基一致。
6.3.固体培养基促生长能力检査：被检培养基与对照培养基上生长的菌落大小、形态特征应一致。
6.4.固体培养基指示能力检査：被检培养基上试验菌生长的菌落大小、形态特征、指示剂反应情况等应与对照培养基一致。
6.5.培养基抑制能力检査：试验菌应不得生长。
6.6.无菌性检查：应不得有菌生长。
6・7・被检培养基上的菌落数不小于对照培养基上的菌落平均数的 生长的菌落大小、形态特征应一致。
7. 验证实施7.1 •试验用仪器和物料所用培养皿、移液管、工器具均应严格按照相关的灭菌程序灭菌；生物安全柜、灭菌器、霉菌培 养箱、生化培养箱、水浴锅、电热鼓风干燥箱等。
72验证用培养基及试剂适用性检查:70%,且74测试菌悬液菌液制备接种大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌、枯草芽抱杆菌、铜绿假单胞菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中，于30〜35 ° C培养18〜24小时。
分别取上述新鲜培养物用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数50^100cful的菌悬液。
接种生抱梭菌至硫乙醇酸盐流体培养基中，30〜35 C培养18〜24小时。
上述新鲜培养物用0. 9%无菌氯化钠溶液制成每lml含菌数lO^lOOcfu的菌悬液。
培养基有效期的验证方案-2
培养基有效期的确认本方案已由下列人员审查并批准1.目的：确定日常环境监控、微生物限度检测使用培养基的有效期。
2.接受标准:2.1试验用菌悬液每1ml含菌数应小于100cfu。
2.2 培养基配制后无菌性检查和营养性检查需符合要求。
2.3 培养基的pH值应符合相应培养基的要求。
3.操作程序：3.1实验仪器及器具：生化培养箱LRH-250A（广东省医疗器械厂，30-35℃, 23-28℃, 20-25℃）；XG1.DMX-0.36B 型脉动真空灭菌器（山东医疗器械股份有限公司编号10.0311）；FE20型pH计（梅特勒）；灭菌生理盐水；移液管；试管；双碟。
3.2验证培养基：硫乙醇酸盐流体培养基TGB(德国merk)，大豆酪蛋白消化肉汤培养基TSB(德国merk)，营养琼脂培养基NA(德国merk)，萨布罗葡萄糖琼脂培养基SDA(德国merk)、平板计数培养基PCA(德国merk)、远腾琼脂培养基ENA(德国merk)、硫酸月桂醇肉汤LST(德国merk)、亮绿乳糖肉汤培养基BGLBB (德国merk)、麦康凯琼脂培养基Mac.A (德国merk)、大豆酪蛋白消化琼脂培养基TSA(德国merk)、假单胞菌分离琼脂培养基PIA (BD)、绿脓荧光素测定用培养基PAF (德国merk)、绿脓菌素测定用培养基PAP (德国merk)、甘露醇胆盐琼脂培养基(MSA) (德国merk)、溴化十六烷基三甲铵琼脂培养基（CET）(德国merk)、沙门氏菌增菌培养基(RVSB) (德国merk)、木糖赖氨酸脱氧胆盐琼脂XLD(德国merk)、麦康凯肉汤培养基Mac.B(德国merk)、曙红亚甲蓝琼脂培养基EMB(德国merk)、三糖铁琼脂TSI(德国merk)、萨布罗葡萄糖肉汤培养基SDB(德国merk)、梭菌增菌培养基RCM(德国merk)、哥伦比亚琼脂培养基CA(德国merk)、肠肝菌增菌培养基EEB-M(德国merk)、紫红胆汁葡萄糖培养基VRBGA(德国merk)3.3试验菌:金黄色葡萄球菌Staphylococcus aureus [ATCC 6538]大肠埃希菌Escherichia coli [ATCC 8739]沙门氏菌Salmonella typhimurium [ATCC 14028]铜绿假单孢菌Pseudomonas aeruginosa [ATCC 9027]枯草芽孢杆菌Bacillus subtilis [ATCC6633]生孢梭菌Clostridium sporogenes [ATCC 19404]白色念珠菌Candida albicans [ATCC 10231]黑曲霉Aspergillus niger [ATCC 16404]3.4菌悬液的制备：3.4.1各取金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、生孢梭菌斜面培养物一支，无菌操作接种一白金耳至TSB管中，30-35℃培养24-48小时，其中生孢梭菌需厌氧培养，取出置2－8℃贮存使用7天，每次使用前用灭菌生理盐水或灭菌水稀释至含菌约为10－100cfu/ml。
沉降菌碟暴露时间验证方案讲解
沉降菌碟暴露时间验证文件目录一、验证方案起草、审批 (1)二、验证报告起草审查及会审 (1)三、验证证书的批准 (1)四、引言 (2)五、菌种及培养基 (2)六、菌液制备 (2)七、验证方法 (2)八、回收率计算 (3)九、结果判断 (3)十、验证结果和记录（附后） (3)十一、验证报告（附后） (3)十二、验证证书（附后） (3)沉降碟暴露时间验证方案一、验证方案起草、审批二、验证报告起草审查及会审三、验证证书的批准四、引言1、验证目的：验证我公司沉降碟的暴露时间为4小时，依据《中国药典》2010年版附录无菌检查法和微生物限度检查法下灵敏度检查项进行验证，以证明沉降碟中培养基在空气暴露时间可以达到4小时。
2、概述：我公司沉降碟为普通的培养皿（φ90mm×15mm），所采用的培养基为大豆酪蛋白琼脂培养基（TSA），每个培养皿含培养基20ml，根据培养基特性制订检验方法，按制定的方法进行试验，根据验证结果判断是否符合验证标准。
3、验证组织组长：彭伟添组员：陈杰辉，黄玉妍五、菌种及培养基1、菌种金黄色葡萄球菌【CMCC（B）26003】、铜绿假单胞菌【CMCC（B）10104】、枯草芽孢杆菌【CMCC（B）63501】、生孢梭菌【CMCC（B）64941】、白色念珠菌【CMCC（F）98001】。
2、培养基营养肉汤培养基、改良马丁培养基、硫乙醇酸盐流体培养基、大豆酪蛋白琼脂培养基3、无菌检验仪器及相关设备无菌室、净化工作台、恒温培养箱（30～35℃）、生化培养箱（23～28℃）、高压蒸汽灭菌器、电子天平、电冰箱、电热干燥箱、玻璃器皿。
六、菌液制备接种金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌的新鲜培养物至营养肉汤培养基中培养18～24小时；接种生孢梭菌的新鲜培养物至硫乙醇酸盐流体培养基中培养18～24小时；接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基中，培养24～48小时；上述培养物用0.9%无菌氯化钠溶液制成每1ml含菌数小于100cfu的菌悬液。
培养基平皿添加青霉素酶验证预试验
培养基平皿添加青霉素酶验证预试验1培养基平皿名称及代号：2.培养基平皿层流采样因目前本公司产品其抑菌性最强的是盐酸头孢吡肟/L-精氨酸原料药及其制剂，所以本次验证将选择风量大粉尘大的地点进行采样，且采样时须进行盐酸头孢吡肟/L-精氨酸原料药或其制剂生产操作。
2.1沉降菌检测采样按《洁净区微生物监测标准操作规程》SOP-QA-031-V00进行操作。
打开培养皿（规格型号：90mm）盖，使培养基表面在百级层流下暴露4小时（风淋4小时），再将培养皿盖盖上后交QC处理。
采样地点：107车间（由QA定具体位置）采样高度：0.8~1.5m。
（日常采样高度或平台上）每种培养基采样数量：20皿/采样地点（百级层流）2.2附着菌检测采样按《洁净区微生物监测标准操作规程》SOP-QA-031-V00进行操作。
采样完后再将培养皿交QC处理。
采样地点：201车间（由QA定具体位置）每种培养基采样数量：20皿/采样地点（百级层流）3 促生长试验：3.1菌种（1）细菌：金黄色葡萄球菌[CMCC（B）26003]铜绿假单胞菌[CMCC（B）10104]大肠埃希菌[CMCC（B）44102]（2）细菌芽孢：枯草芽孢杆菌[CMCC（B）63501]3.2菌液制备：接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、铜绿假单胞菌、大肠埃希菌的新鲜培养物至营养琼脂培养基上，经30～35℃培养18～24小时，取上述培养物分别加入0.9%无菌氯化钠溶液洗下菌苔转移至空试管中作为菌悬液原液，用0.9%无菌氯化钠溶液进行10倍梯度稀释至浓度（500～1000）cfu/ml。
3.3试验组：采用涂布法进行接种，将含菌量（500～1000）cfu/ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌悬液分别接种0.1ml至经采样后的培养基上，然后用无菌涂布棒快速地将其均匀涂布，每种菌悬液各接种2皿，于30~35℃培养72小时，测定菌数。
3.4阳性对照组：(未经采样的各种培养基平板)采用涂布法进行接种，将含菌量（500～1000）cfu/ml的金黄色葡萄球菌、大肠埃希菌、铜绿假单胞菌、枯草芽孢杆菌菌悬液分别接种0.1ml至未经采样的各种培养基中，每种试验菌在每种培养基中平行制备2个平板，于规定温度下培养72小时，测定菌数。
平板培养基质量检测标准操作规程
1.0PURPOSE目的1.1制定平板培养基质量检验标准操作规程，减少实验误差。
2.0SCOPE 范围2.1本文件适用于实验室平板培养基的质量控制管理。
3.0BACKGROUND/DEFINITIONS 基础/定义3.1培养基促生长试验：就是通过利用检查特定的微生物在该培养基上的生长情况来判断该批培养基质量是否符合要求的一种方法。
通过培养基生长试验，为该批培养基的使用提供可靠的保证。
4.0RESPONSIBILITIES 责任人4.1微生物实验室工作人员。
5.0PREREQUISITES 必读文件5.1QC-01F1 Medium Quality Test 培养基质量监控6.0EHS INFORMATION 安全健康环境信息6.1促生长实验操作应在阳性实验室生物安全柜内进行，包装袋无菌检测应在无菌室A级洁净环境检测。
7.0PROCEDURE 规程7.1无菌性检测操作：7.1.1随机抽取最终灭菌的当批一个最小包装，整包装培养，切记不要撕裂外包装袋。
（此过程目的为防止平板培养基在操作过程中意外打开，造成人为性污染，影响无菌性结果的判断）。
7.1.2将培养基转移至20-25℃培养3天，再在30-35℃培养2天计数。
7.1.3培养后每个平板培养基上均应无微生物生长。
7.2促生长实验操作：7.2.1将阳性菌液（少于100CFU/0.1mL）用涂布棒均匀的涂布到培养基上，同时应将菌液倾倒培养作为阳性对照。
每种微生物接种2个平板。
7.2.2细菌在30~35℃，倒置培养（应为3天），真菌20~25℃，倒置培养，（应为5天）。
7.2.32个培养皿中微生物的计数平均值与阳性对照相比回收率应在70-130%之间。
7.3培养基pH监控7.3.1随机选择2块平板培养基用琼脂测定探头测试，测定温度25±2℃，将探头按压在琼脂表面，观察PH读数。
7.4培养基内包装袋无菌测试7.4.1在A级洁净工作台上用无菌剪刀剪下约100平方厘米的内包装袋，以无菌方式接种至TSB培养基中培养，（先在20~25℃培养7天，再在30~35℃培养7天，观察培养基的变化。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
验证方案
编号：V-AQ507 培养皿暴露时限验证方案
目录
1、起草、审核与批准 (2)
2、目的 (2)
3、范围 (2)
4、职责 (2)
5、概述 (2)
6、执行标准和规范 (3)
7、验证前的支持性确认 (3)
8、验证内容 (5)
9、数据分析 (6)
10、偏差 (6)
11、确认结果评定与结论 (6)
12、再验证周期 (6)
1、起草、审核与批准：
确认培养基平皿在洁净区暴露4个小时，保证培养基暴露后不会因失水等原因而影响微生物的正常生长，菌落生长应符合《中国药典》2010年版的规定。
3、范围：
本方案适用于培养基平皿暴露时限的确认。
4、职责：
在对洁净区环境的微生物质量监控时，所获得的测试结果必须具有准确性和重现性，以保证被监测区域的环境状况确实处于受控状态。
作为被动式取样的沉降碟（平皿直径一般为90mm），用于环境中沉降菌的监测。
沉降碟以其价廉、轻便、对空气环境破坏较小等优点而被广泛应用于洁净区环境的监测。
不足之处在于它只能作为定
性测试，所获得数据的准确性较差。
但在层流区，沉降碟不会干扰气流方向，不失为一种比较好的方法。
为了尽可能地获得可靠性数据，沉降碟的放置时间不宜过短，至少为半小时，不大于4小时。
应对沉降菌的暴露时间进行确认，以保证暴露后的培养基不会因失水等原因而影响微生物的正常生长。
6、执行标准与规范：
本方案以《药品生产质量管理规范》（2010年版）、《药品GMP》指南-无菌药品、《中国药典》（2010年版）为依据，制定了培养基平皿暴露时限验证方案。
7、验证前的支持性确认：
7.1 文件的检查确认：
7.2.1 仪器仪表量程、规格必须符合测试及设计规范要求。
7.2.2 仪器仪表使用前必须经具有相应资质机构校验，且在有效期内。
7.3 公用工程系统的检查确认：
7.4.1 文件培训
8、验证内容：
8.1 验证前参与实施验证的人员必须已经接受本方案的培训且考核合格。
见附表1。
8.2 确认内容：培养基平皿暴露时限
8.3 验证前准备
8.3.1 试验用品
8.3.1.1培养基：
内；脱水培养基呈流动粉末状，无结块，无潮解，且在有效期内。
8.3.1.3 培养基检查确认记录见附表2。
8.3.1.4菌种
用的标准菌种不能超过第五代。
8.3.1.6 应确认菌种名称、来源、代数，见附表3。
8.4 检查法
8.4.1将洁净区暴露4小时经培养后未有微生物生长的营养琼脂培养基平皿4只，分别划线接种大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌各2只，同时分别做阴性对照各1只，上述试验共做3次，置30～35℃培养24小时，观察菌落生长情况。
8.4.2 将洁净区暴露4小时经培养后未有微生物生长的玫瑰红钠琼脂培养基平皿4只，分别划线接种大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌各2只，同时分别做阴性对照各1只，上述试验共做3次，置23～28℃培养24小时，观察菌落生长情况。
8.4.3 将洁净区暴露4小时经培养后未有微生物生长的胰酪胨大豆琼脂培养基平皿4只，分别划线接种大肠埃希菌，金黄色葡萄球菌各2只，同时分别做阴性对照各1只，上述试验共做3次，置30～35℃培养24小时，观察菌落生长情况。
在培养基平皿暴露时限的确认试验中：
8.4.4 划线接种的大肠埃希菌、金黄色葡萄球菌的平皿均有菌落生长，阴性对照未有菌生长。
9、数据分析：
培养基平皿暴露时限三次检验结果均应符合合格标准。
10、偏差：
10.1 在确认过程中有无偏差，如有偏差应找出原因，并通知被检测部门进行调查处理。
10.2 偏差调查记录应由质量管理部存档。
11、验证结果评定与结论：
质量管理部负责收集各项确认、试验结果记录，根据确认、试验结果起草验证报告，报验证委员会。
验证委员会负责对结果进行综合评审，作出确认结论，发放证书，确认培养基平皿暴露时限的各项结果达到合格标准。
并对确认结果进行评审，内容包括：
确认结果评审表
12、验证周期：
12.1一般再确认周期为五年。
12.2 当国家药典附录或标准发生改变时，应进行再确认。
12.3培养基配制条件（包括培养条件)发生变更时，必须对新的或变更后的条件加以确认。
附表1 培养基检查确认记录
培养皿暴露时限验证方案
第 9 页 共 10 页
附表2 标准菌种检查确认记录
菌种名称 菌种编号
来 源 工作菌种代次
工作菌种保存条件
有效期至
金黄色葡萄球菌 大肠埃希菌
可接受标准
1. 标准菌种必须来源可靠、来源可溯、保存方法与条件合适。
2. 使用的标准菌种不能超过第五代。
结 论 检查人 日 期 年 月 日 复核人
日 期
年 月 日
培养皿暴露时限验证方案
附表3 培养基平皿暴露时限验证记录
培养基名称：营养琼脂培养基
培养箱编号：培养温度：℃
培养时间：年月日时至月日时
培养结果
菌种名称（1）（2）（3）阴性对照大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
结论
检验人日期年月日复核人日期年月日
培养基名称：玫瑰红钠琼脂培养基
培养箱编号：培养温度：℃
培养时间：年月日时至月日时
培养结果
菌种名称⑴⑵⑶阴性对照大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
结论
检验人日期年月日复核人日期年月日
培养箱编号：培养温度：℃
培养时间：年月日时至月日时
培养结果
菌种名称（1）（2）（3）阴性对照大肠埃希菌
金黄色葡萄球菌
结论
检验人日期年月日复核人日期年月日
第10页共10 页。