小吞噬细胞的吞噬功能检测
实验五 大吞噬实验(医学免疫学,人民卫生出版社第7版)
大吞噬实验
【实验材料】
1.试剂：6%无菌淀粉肉汤液：取肉汤培养基100mL，加 入水溶性淀粉6g，混匀，高压灭菌； 无菌Hanks液、生理盐水、瑞氏染液，蒸馏水
2.器材：显微镜、无菌注射器、载玻片、烧杯、吸管、 解剖剪、镊、解剖板
3.材料：体重22~25克健康小鼠、 2%鸡红细胞悬液：以生理盐水按红细胞比容配制
噬碱性粒细胞
噬酸性粒细胞
淋巴细胞
中性粒细胞
单核细胞
将染色后的涂片置于显微镜油镜下观察，绘图记录。 未被吞噬的鸡红细胞
吞噬了鸡红细胞的吞 噬细胞
【检测指标】
随机观察100个巨噬细胞，分别计数吞噬有鸡 红细胞的细胞数和所吞噬的鸡红细胞总数，按下 述公式分别计算吞噬百分率和吞噬指数。
显微镜油镜的使用方法
• 采用一种和玻片折光率相
接近的介质如香柏油，加于标本 与玻片之间，使光线不通过空气， 这样射入镜头的光线就较多，物 象就可看得清楚。
先用低倍镜找到视野：粗调、细调 依次再进行中倍、高倍观察 油镜观察：高倍镜下找到清晰的物象后 a．将光线调至最强程度（聚光器提高，光圈全部开放）。 b．转动粗调节器使载物台下降，滴香柏油1小滴 （不要过多，不要涂开）于接物镜正下方标本上。 c．转动接物镜转换盘，使油镜头于镜筒下方。 d．俯身镜旁侧面在肉眼的观察下，转动粗调节器使油镜头徐徐浸入香柏 油内，轻轻接触玻片为止。 e．慢慢转动粗调节器，使载物台徐徐下降至见到标本的物象为止。 f．转动微调节器，使视野物象达到最清晰的程度。 g．左手徐徐移动推进器，并转动微调节器以观察标本。 h．标本观察完毕后，转动粗调节器将载物台下降，取下标本玻片。 先用擦镜纸擦去镜头上的油， 然后再用擦镜纸沾取少量二甲苯擦去残留的油， 最后用擦镜纸擦去残留的二甲苯，后将镜体全部复原
医学免疫学实验“小吞噬”.pptx
培养葡萄球菌
医学免疫学实验
烧灼接种环
取菌种
37℃，培养18～24h
接种
接种前 接种后
8
制备6%熟淀粉溶液
医学免疫学实验
称取6g淀粉
将淀粉倒入烧杯
量取10ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱml蒸馏水
将蒸馏水倒入淀粉中
搅拌均匀
9
加热煮熟，晾至室温
医学免疫学实验
实验前4小时
医学免疫学实验
建立无菌炎症小鼠模型
将放凉的熟淀粉 吸入注射器
腹水
血性腹水
15
小鼠腹腔液印片制备
医学免疫学实验
做标记
印片
逐一印片
自然晾干
甲醇固定1min
美兰染色0.5min
细水冲片
吸去附水16
镜下观察吞噬现象
医学免疫学实验
正常小鼠印片（10*10）
中性粒细胞 渗出RBC
无有菌炎症小鼠印片（10*100）
细菌
无菌炎症小鼠印片（10*10）
无有菌炎症小鼠印片（10*100）
思考题
医学免疫学实验
小吞噬细胞为什么能游出血管发挥吞噬作用？ 实验中哪些因素会影响吞噬现象的观察？ 炎症发生前后小鼠腹腔大体形态有何变化？
医学免疫学实验
谢谢！
主要试剂 甲醇
美蓝染液 葡萄球菌菌液 6%熟淀粉等
器材 显微镜、培养箱、 电炉、注射器、 手术剪、镊子、
载玻片等
5
实验内容
医学免疫学实验
实验前一天
培养葡萄球菌 制备6%熟淀粉溶液
实验前4小时
建立无菌炎症小鼠模型
实验当天
建立有菌炎症小鼠模型 解剖小鼠 制备印片
观察腹腔脏器 观察吞噬现象
小鼠荧光吞噬实验原理
小鼠荧光吞噬实验原理
小鼠荧光吞噬实验是一种常用的实验方法，用于研究小鼠体内吞噬作用的机制。
这个实验的原理是通过观察小鼠体内特定细胞的吞噬能力来评估其免疫功能。
实验开始前需要准备一种荧光标记物，比如荧光微球。
荧光微球是一种可以被细胞吞噬并在细胞内产生荧光信号的微小颗粒。
将荧光微球注射到小鼠体内后，它们会被机体内的吞噬细胞摄取。
在实验过程中，可以通过多种方法观察吞噬细胞的活动。
一种常用的方法是采用显微镜观察小鼠体内吞噬细胞的荧光信号。
通过荧光显微镜观察，可以清晰地看到吞噬细胞内部的荧光微球，并计算吞噬细胞的数量和荧光强度，从而评估吞噬细胞的活性。
另一种方法是采用流式细胞术。
通过将小鼠体内的细胞制备成单细胞悬液，利用流式细胞术仪器可以将吞噬细胞与未吞噬细胞进行区分，并计算吞噬细胞的比例和吞噬指数。
通过这些实验方法，我们可以评估小鼠体内吞噬细胞的数量、活性和功能。
这对于研究免疫系统的功能以及疾病的发生机制具有重要意义。
例如，一些免疫缺陷病症可能导致吞噬细胞功能的异常，通过荧光吞噬实验可以帮助我们更好地理解这些疾病的发生机制，并为疾病的治疗和预防提供新的思路。
小鼠荧光吞噬实验是一种重要的实验方法，通过观察小鼠体内吞噬
细胞的活动来评估其免疫功能。
这个实验方法在免疫学研究和疾病治疗中具有重要意义，为我们揭示了免疫系统的运作机制，为疾病的治疗和预防提供了新的思路和方法。
项目十九吞噬细胞功能检测
项目十九吞噬细胞功能检测一、中性粒细胞吞噬功能测定(Neutrophil phagocytosis assay)(一)吞噬试验【实验原理】中性粒细胞具有吞噬功能，当与颗粒物质(如金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌等)混合孵育一定时间后，颗粒物质被吞噬。
根据吞噬率和吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能。
【试剂和器材】1．试剂20%FCS RPMI-1640培养液、pH6.4 0.015mol/L PBS、Wright染液、金黄色葡萄球菌培养物、抗凝剂(4g/L柠檬酸钠溶液)。
2．器材37℃温箱、显微镜、滴管、一次性采血针、微量细胞培养板、无菌干棉球、酒精棉球、碘酒棉球、接种环等。
【步骤和方法】1．热灭活葡萄球菌悬液配制取金葡菌24h琼脂斜面培养物，用无菌生理盐水洗下菌苔，用PBS洗涤2次，100℃加热15min灭活。
取热灭活金黄色葡萄球菌混悬于20% FCS RPMI-1640培养液中, 用比浊法调整浓度至6×107/ml。
4℃保存，备用。
2．于微量细胞培养板孔内加1滴(约50μl)抗凝剂，无菌采人末梢血2滴(约100μl)与抗凝剂混匀。
3．向孔内加6×107/ml金黄色葡萄球菌悬液2滴(约100μl)，混匀。
4．置37℃烛缸或5% CO2孵箱内培养30min。
5．取1滴培养液推片，自然干燥，Wright染色，水洗，干燥，油镜镜检。
【结果判定】计数200个中性粒细胞，并分别记下吞噬细菌的细胞数和各个细胞吞入的细菌数。
计算吞噬率和吞噬指数：200个中性粒细胞中吞噬细菌的中性粒细胞数? 100％200200个中性粒细胞吞噬的细菌总数200【注意事项】1．所用器材要洁净。
2．越接近片子末梢细胞数越多，计数时应取片子前、中、后三段计数，以提高准确性。
3．抗凝剂用量要适当，过高则抑制吞噬功能，过低使血液凝固。
【方法评价】此法易操作、不需特殊设备，省时，费用低廉。
结果直观，可用于评价其他方法获得的结果，但是光学显微镜分辨率低，有时难以计数吞入的细菌颗粒。
小吞噬实验_实验报告
1. 熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方法。
2. 观察中性粒细胞在小吞噬实验中的吞噬现象。
3. 分析实验结果，了解中性粒细胞吞噬功能的变化。
二、实验原理中性粒细胞（又称小吞噬细胞）是血液中的主要吞噬细胞，具有吞噬和消化细菌、病毒、细胞碎片等异物的作用。
小吞噬实验通过观察中性粒细胞吞噬异物的过程，了解其吞噬功能的强弱。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜血液、生理盐水、2%中性红溶液、2%亚甲蓝溶液、载玻片、盖玻片、显微镜等。
2. 实验仪器：离心机、移液器、恒温箱、显微镜等。
四、实验步骤1. 取新鲜血液1ml，加入等量生理盐水，混匀后离心，取上清液作为实验用血液。
2. 将2%中性红溶液和2%亚甲蓝溶液按1:1的比例混合，作为吞噬剂。
3. 取2ml混合液加入实验用血液中，混匀后置于37℃恒温箱中培养30分钟。
4. 取1滴混合液滴于载玻片上，盖上盖玻片。
5. 在显微镜下观察中性粒细胞的吞噬现象，记录吞噬百分率和吞噬指数。
五、实验结果与分析1. 实验结果实验结果显示，中性粒细胞在小吞噬实验中能够有效吞噬中性红和亚甲蓝颗粒，吞噬百分率和吞噬指数分别为80%和1.5。
2. 结果分析实验结果表明，中性粒细胞具有较强的吞噬功能。
吞噬百分率和吞噬指数的升高，说明中性粒细胞在小吞噬实验中能够有效地吞噬吞噬剂，具有一定的免疫防御能力。
通过小吞噬实验，我们了解到中性粒细胞在小吞噬实验中具有较强的吞噬功能，能够有效吞噬中性红和亚甲蓝颗粒。
这一实验结果有助于我们更好地了解中性粒细胞在人体免疫系统中的作用，为临床诊断和治疗提供理论依据。
七、实验反思与体会1. 实验过程中，需要注意无菌操作，防止污染。
2. 实验结果受多种因素影响，如实验材料、实验条件等，需要严格控制实验条件，提高实验结果的可靠性。
3. 通过本次实验，加深了对中性粒细胞吞噬功能原理的理解，提高了实验操作技能。
八、实验总结小吞噬实验是一种常用的细胞生物学实验，通过观察中性粒细胞在小吞噬实验中的吞噬现象，了解其吞噬功能的强弱。
免疫学实验
免疫学实验整理一、凝集试验、吞噬试验（一）凝集试验1、直接凝集反应（ABO血型鉴定）2、间接凝集反应（类风湿因子测定）3、金黄色葡萄球菌协同凝集试验（二）吞噬试验（示教）1、中性粒细胞的吞噬作用（小吞噬）2、巨噬细胞的吞噬作用（大吞噬）名解：1.免疫学检测技术：利用免疫学原理来检测抗原、免疫分子（抗体、补体、细胞因子和粘附分子等）及免疫细胞等免疫学研究对象的实验过程。
如凝集反应可用于检测抗原抗体，吞噬十堰可用于检测免疫细胞等。
2.凝集反应（agglutination reaction）:在一定浓度的电解质溶液中，颗粒性抗原与相应抗体结合后，出现肉眼可见的凝集块，称为凝集反应。
3.直接凝集反应（direct agglutination reaction）:细菌、细胞等颗粒性抗原，在适当电解质参与下可直接与相应抗体结合出现凝集，称为直接凝集反应。
4.间接凝集反应（indirect agglutination reaction）：将可溶性抗原或抗体先吸附于适当大小的颗粒性载体表面（这种载体与免疫无关），然后与相应抗体或抗原结合，在适量的电解质存在下，出现特异性凝集现象，称为间接凝集反应。
5.协同凝集实验（coagglutination）：利用金黄色葡萄球菌A蛋白（SPA）能与人和多种哺乳动物IgG的Fc段结合而不影响其Fab段功能的特性，将已知的特异性抗体吸附于金黄色葡萄球菌上，与相应的抗原发生的凝集反应即为协同凝集试验。
6.滴度（titer）、效价：The maximum dilution that gives obviously visible agglutination (++) is called the titer.实验及注意点：1、检测抗原抗体的基本原则：根据抗原抗体结合反应的高度特异性，用已知抗体（抗原）检测未知抗原（抗体），有现象则说明有相应抗原，无现象则无相应抗原。
2、直接凝集反应（ABO血型鉴定）：若加A抗体出现凝集说明血清中有A抗原，为A型血。
医学免疫学实验小吞噬+大吞噬+E花环
操作步骤
3.弃上清，吸取白细胞层制片，自然干燥。 4.甲醇固定1~ 2min后，姬姆萨染色15~20min, 水洗，干燥。 5.油镜下计数200个淋巴细胞，观察淋巴细胞的 形态变化，计算淋巴细胞转化率。
结果判断
未转化的淋巴细胞
医学免疫学实验
实验内容
1.中性粒细胞吞噬功能测定试验 2.单核巨噬细胞吞噬功能试验（示教） 3.E花环形成试验（示教） 4.T淋巴细胞转化试验（示教）
吞噬细胞（phagocyte）：主要包括中性粒细 胞（neutrophil）和单核吞噬细胞 （mononuclear -phagocyte）两类。
3.水洗（勿先倒掉染液，应以流水冲去）。
4.吸水纸拍干水分，干燥。
（三）显微镜油镜镜检
五、注意事项
➢ 注射菌液时不要注射到皮下或腹腔脏器内，注 射后轻揉腹部，使液体在腹腔内分散均匀。
➢ 涂片应薄厚均匀适中，避免过薄或过厚。 ➢ 瑞氏染液染色时间不能过长以免染色过重。
A 红细胞 B 、H 淋巴细胞 C 、E、I 中性粒细胞 D 嗜酸性粒细胞 F 单核细胞 G 血小板 J 嗜碱性粒细胞
实验原理
植物血凝素(PHA)
T淋巴细胞
增殖分化 淋巴母细胞
体积变大 胞浆增多、空炮 核染色质疏松 核仁明显 有丝分裂
试剂与器材 ■1. RPMI1640 培养液。包含:小牛血清10%、 青霉素100u/m1 、链霉素100ug/m1,用无菌 的3% NaHCO3调pH 至7. 2~7.4。 ■2.植物血凝素(PHA)。用含10%小牛血清 的RPMI培养液稀释至500~ 1000ug/ml.
检测指标：
中性粒细胞吞噬实验报告
本文介绍了吞噬细胞吞噬功能检测（assay of the phagocytic function of phagocyte）实验的大体原理、操作步骤及注意事项等。
实验原理
吞噬细胞具有对异物(细菌、绵羊红细胞、鸡红细胞等)吞噬和消化的功能，在机体非特异性免疫中发挥重要作用。
3）杀伤和降解：吞噬溶酶体形成以后，吞噬细胞通过溶酶体酶（溶菌酶、杀菌素、酸性水解酶、乳铁蛋白等）可破坏细菌菌膜或菌体代谢噬细胞代谢产物如氧代谢活性产物和酸性代谢产物也具有杀伤和降解细菌作用。
【方式】
（1）制板：将熔化的1%琼脂加在载玻片上约5ml
（2）打孔：待琼脂凝固后，将载玻片置于打孔样板上，用打孔器打孔
（3）加样：在中央孔内加抗体，上下两孔加抗原1，左右加抗原二，每孔加10μl
（4）结果观看：将琼脂板置于湿盒，37℃一天后观看结果。
【结果】
在中央孔与添加抗原1的孔之间显现沉淀线，有抗原抗体反映，为阳性反映，说明抗原1与抗体相对应。中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线，说明抗原2与抗体之间不相对应。
2. 用尖吸管吸取腹腔液时，尽可能躲开腹腔脏器，幸免损伤血管引发出血，阻碍实验结果。
篇二：中性粒细胞吞噬功能实验(小吞噬实验)
中性粒细胞吞噬功能实验（小吞噬实验）
实验目的
1.熟悉中性粒细胞的吞噬作用原理和方式。
实验原理 血液中的中性粒细胞即小吞噬细胞，通过趋化、调理、吞入和杀菌等几个步骤，能吞噬和消化衰老、死亡细胞及病原微生物等异物，是机体非特异性免疫的重要组成部份。 实验材料
中性粒细胞吞噬实验报告
篇一：小吞噬实验报告
篇一：巨噬细胞吞噬实验&沉淀实验实验报告
实验二
项目十九 吞噬细胞功能检测
项目十九 吞噬细胞功能检测一、中性粒细胞吞噬功能测定 (Neutrophil phagocytosis assay)(一)吞噬试验【实验原理】中性粒细胞具有吞噬功能，当与颗粒物质(如金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌等)混合孵育一定时间后，颗粒物质被吞噬。
根据吞噬率和吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能。
【试剂和器材】1．试剂 20%FCS RPMI-1640培养液、pH6.4 0.015mol/L PBS 、Wright 染液、金黄色葡萄球菌培养物、抗凝剂(4g/L 柠檬酸钠溶液)。
2．器材 37℃温箱、显微镜、滴管、一次性采血针、微量细胞培养板、无菌干棉球、酒精棉球、碘酒棉球、接种环等。
【步骤和方法】1．热灭活葡萄球菌悬液配制 取金葡菌24h 琼脂斜面培养物，用无菌生理盐水洗下菌苔，用PBS 洗涤2次，100℃加热15min 灭活。
取热灭活金黄色葡萄球菌混悬于20% FCS RPMI-1640培养液中, 用比浊法调整浓度至6×107/ml 。
4℃保存，备用。
2．于微量细胞培养板孔内加1滴(约50μl)抗凝剂，无菌采人末梢血2滴(约100μl)与抗凝剂混匀。
3．向孔内加6×107/ml 金黄色葡萄球菌悬液2滴(约100μl)，混匀。
4．置37℃烛缸或5% CO 2孵箱内培养30min 。
5．取1滴培养液推片，自然干燥，Wright 染色，水洗，干燥，油镜镜检。
【结果判定】计数200个中性粒细胞，并分别记下吞噬细菌的细胞数和各个细胞吞入的细菌数。
计算吞噬率和吞噬指数：％菌的中性粒细胞数个中性粒细胞中吞噬细吞噬率＝100 200200 200200菌总数个中性粒细胞吞噬的细吞噬指数＝ 【注意事项】1．所用器材要洁净。
2．越接近片子末梢细胞数越多，计数时应取片子前、中、后三段计数，以提高准确性。
3．抗凝剂用量要适当，过高则抑制吞噬功能，过低使血液凝固。
【方法评价】此法易操作、不需特殊设备，省时，费用低廉。
小吞噬实验报告问题(3篇)
第1篇一、实验背景中性粒细胞是人体免疫系统的重要组成部分，具有吞噬和杀灭病原体的功能。
小吞噬实验是研究中性粒细胞吞噬功能的重要方法之一。
通过观察中性粒细胞对特定颗粒的吞噬情况，可以评估中性粒细胞的吞噬活性及其在免疫反应中的作用。
本实验旨在探讨中性粒细胞对小吞噬体的吞噬能力，并分析影响吞噬效果的因素。
二、实验目的1. 熟悉中性粒细胞吞噬实验的基本原理和操作步骤。
2. 观察中性粒细胞对荧光标记小吞噬体的吞噬情况。
3. 分析影响中性粒细胞吞噬效果的因素，如温度、pH值、细胞浓度等。
4. 评估中性粒细胞吞噬功能在免疫反应中的作用。
三、实验材料与试剂1. 实验材料：- 中性粒细胞来源：人外周血- 荧光标记小吞噬体：直径约为1μm的聚苯乙烯颗粒- 细胞培养液：RPMI-1640培养基- 其他：细胞计数板、离心机、显微镜、荧光显微镜等2. 实验试剂：- 胰蛋白酶：用于消化外周血中的红细胞- 胰蛋白抑制剂：用于抑制胰蛋白酶活性- 荧光标记剂：用于标记小吞噬体- pH缓冲液：用于调节细胞培养液的pH值- 温度调节装置：用于维持实验过程中的温度四、实验方法1. 细胞制备：- 收集人外周血，用生理盐水洗涤3次，去除红细胞。
- 加入胰蛋白酶和胰蛋白抑制剂，消化细胞，制成中性粒细胞悬液。
- 用细胞计数板计数，调整细胞浓度至1×10^6 cells/ml。
2. 实验分组：- 设定对照组：细胞培养液+未标记小吞噬体。
- 设定实验组：细胞培养液+荧光标记小吞噬体。
- 设定不同条件组：不同温度、pH值、细胞浓度等。
3. 实验操作：- 将细胞悬液和荧光标记小吞噬体按比例混合，加入细胞培养板。
- 将细胞培养板放入37℃、pH7.4的细胞培养箱中培养1小时。
- 取出细胞培养板，用磷酸盐缓冲盐溶液（PBS）洗涤细胞3次。
- 使用荧光显微镜观察中性粒细胞对荧光标记小吞噬体的吞噬情况。
4. 数据分析：- 计算不同条件下中性粒细胞对荧光标记小吞噬体的吞噬率。
吞噬细胞吞噬功能的检测
吞噬细胞吞噬功能的检测一、小吞噬细胞的吞噬作用(一) 体内法［材料］(1) 动物：豚鼠。
（2）菌种：金黄色葡萄球菌菌液。
（3) 无菌注射器及针头、无菌肉汤、玻片、瑞氏染液。
［方法］（1）第1天注射无菌肉汤10 ml 于豚鼠腹腔，隔24 h 同法注射肉汤5 ml。
20 min 后，再注射金黄色葡萄球菌菌液Iml 于上述部位。
(2）注射完毕，每隔20 min 用注射器抽取腹腔液，并做推片，待其自千后，用瑞氏染色法染色，镜检时见金黄色葡萄球菌被小吞噬细胞吞入胞浆时为宜.(3) 瑞氏染色方法如下：将瑞氏染液滴加数滴于涂片上。
加入等量的蒸馏水，轻轻混匀，染5 -10 min。
用蒸馏水(或自来水）冲洗。
待干或轻轻用吸水纸将涂片吸干，油镜检查.[结果］染色后，可见小吞噬细胞的核及被吞噬的细菌呈深紫蓝色，而小吞噬细胞的胞浆为紫色.（二）体外法[目的]1。
熟悉检测白细胞吞噬作用的原理与实验方法。
2.通过吞噬细胞的吞噬功能检测了解机体的非特异性免疫功能。
3。
掌握显微镜、油浸镜的使用与保护方法。
[原理]中性粒细胞具有在噬杀菌功能，当与颗粒物质(如金黄色葡萄球菌、白色葡萄球菌等)混合后，孵育一定时间，颗粒物质被中性粒细胞吞噬.根据吞噬率和吞噬指数可反映该细胞的吞噬功能，但不能反映其杀伤功能。
［材料］(1) 3。
8％枸橼酸钠。
（2）碘伏、无菌注射器及针头、吸管、试管、载玻片、温箱等.（3)瑞氏染液(4）葡萄球菌悬液: 取白色葡萄球菌在琼脂斜面上生长24 h的培养物，用无菌生理盐水刮洗下菌苔,用PBS洗涤2次，最后用比浊法将菌液调整至5 x107ml 悬液，100℃加热15min，置4℃冰箱备用。
［方法](1) 自静脉采血0.2 m,放于含3。
8% 枸橼酸钠0.2 ml的小试管中，混匀，防止凝血(或由一人抽血10 ml 抗凝，供全小班使用)。
(2）取葡萄球菌悬液0。
2 ml，加于上述血液中混匀.(3）37 C温箱孵育30min，每10 min取出振摇1次,再继续静置孵育，于30 min 时取出。
中性粒细胞吞噬实验报告
中性粒细胞吞噬实验报告篇一：小吞噬实验报告篇一：巨噬细胞吞噬实验&沉淀实验实验报告实验二一巨噬细胞吞噬功能实验【原理】巨噬细胞是单核吞噬细胞系统的主要细胞，局域活跃的吞噬功能。
吞噬细胞受抗原刺激后活化，可使吞噬功能明显增强。
在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡血红细胞，30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷亚甲蓝染色，显微镜下计数吞噬红细胞的百分数，及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目，以判断吞噬细胞的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。
【方法】体内法：（1）实验前3小时，小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
（2）实验时，每只小鼠注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使其在腹腔中分布均匀，利于吞噬。
（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用载玻片轻擦腹腔，使腹腔液均匀涂于载玻片过，再滴一滴0.03%冷亚甲蓝溶液，盖上盖玻片。
（4）高倍镜下进行观察，计数。
【结果】【分析】在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液，可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并且可看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
二沉淀反应双向琼脂扩散实验【原理】将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内，二者均可发生扩散，并且随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
本实验是定性实验，常用于分析抗原抗体的纯度关系以及相互关系。
【方法】（1）制板：将熔化的1%琼脂加在载玻片上约5ml（2）打孔：待琼脂凝固后，将载玻片置于打孔样板上，用打孔器打孔（3）加样：在中央孔内加抗体，上下两孔加抗原1，左右加抗原二，每孔加10μl（4）结果观察：将琼脂板置于湿盒，37℃一天后观察结果。
【结果】在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线，有抗原抗体反应，为阳性反应，说明抗原1与抗体相对应。
中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线，说明抗原2与抗体之间不相对应。
吞噬功能测定实验报告
一、实验目的1. 了解吞噬细胞吞噬功能的测定原理和方法。
2. 掌握中性粒细胞和巨噬细胞吞噬功能测定的操作步骤。
3. 分析吞噬功能测定的结果，评估吞噬细胞的功能状态。
二、实验原理吞噬细胞是免疫系统中的重要组成部分，具有吞噬、消化病原微生物和衰老细胞等功能。
吞噬功能测定是评估机体免疫功能的一种方法。
本实验通过测定中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬功能，了解其吞噬能力，从而评估机体免疫功能。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠（6-8周龄，体重20-25g）。
2. 试剂：中性粒细胞和巨噬细胞分离试剂、鸡红细胞悬液、瑞氏染液、生理盐水、0.1%吐温-80、磷酸缓冲盐溶液（PBS）等。
3. 仪器：显微镜、离心机、移液器、培养皿、载玻片、试管等。
四、实验方法1. 中性粒细胞和巨噬细胞分离将小白鼠处死，无菌操作取腹腔液，加入中性粒细胞和巨噬细胞分离试剂，充分混匀后室温放置5分钟。
低速离心（1000r/min，5分钟）分离中性粒细胞和巨噬细胞。
2. 吞噬功能测定（1）中性粒细胞吞噬功能测定取分离的中性粒细胞，加入鸡红细胞悬液，37℃孵育30分钟。
低速离心（1000r/min，5分钟）弃上清，加入瑞氏染液，染色5分钟。
洗涤、干燥、封片，显微镜下观察中性粒细胞吞噬鸡红细胞的情况。
（2）巨噬细胞吞噬功能测定取分离的巨噬细胞，加入鸡红细胞悬液，37℃孵育30分钟。
低速离心（1000r/min，5分钟）弃上清，加入瑞氏染液，染色5分钟。
洗涤、干燥、封片，显微镜下观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况。
3. 结果分析计算吞噬百分率和吞噬指数。
吞噬百分率=吞噬有鸡红细胞的细胞数/细胞总数×100%；吞噬指数=吞噬的鸡红细胞总数/吞噬有鸡红细胞的细胞数。
五、实验结果1. 中性粒细胞吞噬功能吞噬百分率：60.5%；吞噬指数：1.2。
2. 巨噬细胞吞噬功能吞噬百分率：70.2%；吞噬指数：1.8。
六、讨论本次实验成功测定了中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬功能。
免疫细胞及其功能检验技术—吞噬细胞功能检测(免疫学检验课件)
正常值： NBT阳性细胞率应7%~15%
二、巨噬细胞功能检测
• 炭粒廓清试验：主要用于动物实验 • 吞噬功能检测：（吞噬鸡红细胞或白假丝酵母等） • 促凝血活性测定：
（一）炭粒廓清试验
在受检者前臂屈侧中央3㎜范围内，搔刮皮肤后， 用盖玻片压紧固定，在第2，5，8，12，24，36小时 各取样一次，染色观察中性粒细胞聚集开始时间、 聚集程度等。健康正常人一般2～3小时后开始聚集， 达50～100个，6小时可达1000个以上。
体外法--Boyden小室法
Boyden 小室
体外法--琼脂糖平板法
液混合，温育后涂片、固定和染色。在油镜下观察
中性粒细胞对细菌的吞噬情况，计数100个细胞中吞
噬和未吞噬细菌的中性粒细胞数，并记录吞噬的细
菌数。
吞噬率
吞噬细菌的中性粒细胞数 计数的中性粒细胞数
100%
吞噬指数
吞噬的细菌总数 吞噬细菌的中性粒细胞数
100%
（三）中性粒细胞杀伤功能检测 硝基蓝四氮唑（NBT）还原试验
正常小鼠肝中库普弗细胞可吞噬清除90％炭粒， 脾巨噬细胞约吞噬清除10％炭粒。据此给小鼠静脉注 射定量印度墨汁（炭粒悬液），间隔一定时间反复取 静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓 清的速度，判断巨噬细胞的功能。
主要用于动物实验
（二）巨噬细胞吞噬功能检测
巨噬细胞
＋
鸡红细胞或 白假丝酵母
孵育
等），B细胞（增殖、分泌抗体能力），NK（杀伤）， 中性粒细胞（趋化、吞噬、杀伤），巨噬细胞（吞噬 功能--炭粒廓清、鸡红细胞吞噬实验）
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吞 噬 细 胞 分 类
大吞噬细胞（单核巨噬细胞）
小吞噬细胞（中性粒细胞）
来源： 单核巨噬细胞 存在部位： 血液（单核细胞) 全身结缔组织及小血管的基底 膜 组织（巨噬细胞）
小吞噬细胞的吞噬功能检测 （请同学们每人借显微镜一台）
班长到实验准备室领取实验器材
新乡医学院免疫学教研室
实 验 目 的
掌握吞噬作用的原理和方法
掌握显微镜油镜的使用方法
掌握瑞氏染色的方法
实 验 原 理
血液中的多形核白细胞是一种小吞噬细 胞，其细胞浆内含有多种酶类，对侵入 体内的细菌具有强大的吞噬和消化功能， 是机体非特异性免疫的重要组成部分。
使 用 方 法
e．慢慢转动粗调节器，使载物台徐徐下降至见到标本 的物象为止。
f．转动微调节器，使视野物象达到最清晰的程度。
g．左手徐徐移动推进器，并转动微调节器以观察标本。
h．标本观察完毕后，转动粗调节器将载物台下降，取ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ下标本玻片。 最后用擦镜液将油镜头上的香柏油擦干净
下 周 实 验 课 内 容
大 吞 噬 细 胞
功能基础：富含溶酶体及线粒体 功能： 吞噬病原微生物（寄生虫 等），死亡细胞。 反应时间及寿命：反应时间长 （48h），寿命长。
小 吞 噬 细 胞
来
源： 中性粒细胞 存在部位： 血液 、 炎症部 位（全身） 功能基础：溶酶体，过氧化 物酶及杀菌物质。 功 能：主要吞噬化脓菌 反应时间及寿命：反应时间 快,数分钟到几小时，寿命 短.平均数小时
注 意 事 项
注射菌液时不要注射到皮下或 腹腔脏器内，注射后轻揉腹部， 使液体在腹腔内分散均匀
注意掌握好染色时间
大 吞 噬
（ 示 教 片 ）
巨噬细胞吞噬鸡红细胞
油 镜 头 的 识 别
油镜头上常刻有白色环圈，或标 有“油”字、 “oil”、100/1.30 等。 使用油镜可放大1000倍
原
理
使用油镜观察时，需加香柏油， 因为油镜需要进入镜头的光线 多，但油镜的透光孔最小，这 样进入的光线就少，物体不易 看清楚。同时又因自玻片透过 的光线，由于介质（玻片－空 气－接物镜）密度（玻片： n=1.52，空气：n=1.0）不同而 发生了折射散光，因此射入镜 头的光线就更少，物体更看不 清楚。
原
采用一种和玻片折光率相接近 的介质如香柏油，加于标本与 玻片之间，使光线不通过空气， 这样射入镜头的光线就较多， 物象就可看得清楚。
理
原
理
先用低倍镜找到视野 a．将光线调至最强程度（聚光器提高，光圈全部开 放）。 b．转动粗调节器使载物台下降，滴香柏油1小滴（不要 过多，不要涂开）于接物镜正下方标本上。 c．转动接物镜转换盘，使油镜头于镜筒下方。 d．俯身镜旁侧面在肉眼的观察下，转动粗调节器使油 镜头徐徐浸入香柏油内，轻轻接触玻片为止。
吞 噬 示 意 图
吞噬过程
无菌肉汤
实 验 材 料
白葡菌液
注射器
瑞氏染液 PBS缓冲液 解剖器材 玻片、显微镜等
实 验 方 法
1.诱导：实验前1小时给小白鼠腹 腔注射无菌肉汤2ml，诱导浆液 渗出
2. 注射：给小白鼠腹腔内注射白 葡菌液1ml，让小鼠活动 3. 取样： 注射后35 分钟处死小 白鼠，抽取腹腔液涂片 4.染色：标本干燥后瑞氏染液染 色
豚鼠的过敏实验（发敏）
瑞 氏 染 色
5.瑞氏染色：滴加3~4滴瑞氏染 液于标本上，以完全盖住标本 为宜。
30秒后滴两倍体积的缓冲液， 吹吸均匀。 3分钟后甩去玻片上的染液，吸 水纸吸干。 油镜镜检
实 验 结 果
油镜下见中性粒细胞胞浆呈淡 兰色，核分叶、紫红深染，白 葡菌呈兰色。可见中性粒细胞 胞浆内吞噬有很多白葡菌。