实验一--巨噬细胞吞噬功能实验
巨噬细胞吞噬作用的观察 细胞学实验报告
生命科学学院专业生物技术 2016级生技班612组姓名同实验者 2018年 3 月 26日题目：巨噬细胞吞噬作用的观察一．实验目的1.通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察，了解巨噬细胞在非特异性免疫中的功能。
2.掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。
3.学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。
二．实验原理1.向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养”。
连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。
2.台盼蓝是一种生物染料，专一染色死细胞。
活细胞的细胞质膜对台盼蓝有不透过性。
巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤后，可以消化其中的淀粉和蛋白质，但是不能消化其中的台盼蓝，因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。
是一种溶酶体染色的方法。
生命科学学院专业生物技术 2016级生技班612组姓名同实验者 2018年 3 月 26日3.当向小鼠腹腔中注射鸡红细胞时，鸡红细胞作为外源物质，会被小鼠细胞识别并吞噬，在适当的的时机，我们就有可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程三．实验材料及设备1.实验材料：a)连续2~3天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只b)鸡红细胞悬液c)生理盐水2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片、盖玻片若干c)注射器d)染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等生命科学学院专业生物技术 2016级生技班612组姓名同实验者 2018年 3 月 26日四．实验方法及步骤1.小鼠处理与巨噬细胞采集a)连续2-3天（每天一次）向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤。
b)选择已注射淀粉肉汤3小时以上的小鼠一只。
c)一人控制住小鼠，露出腹部，另一人用注射器向小鼠腹腔中注射1ml鸡红细胞悬液。
按摩小鼠腹部。
d)20-30分钟后，再注射1-1.5ml生理盐水（0.9%NaCl）按摩小鼠腹部。
e)3分钟后，引颈法处死小鼠f)迅速在腹腔剪开一个不大的开口（注意要剪开腹部的肌肉层），用无针头的注射器吸取腹腔液。
巨噬细胞吞噬功能测定的原理
巨噬细胞是免疫系统中的一类重要细胞，具有吞噬功能。
巨噬细胞通过吞噬和消化病原微生物、细胞碎片和其他异物，起到保护机体免受感染和清除废物的作用。
巨噬细胞吞噬功能测定是评估巨噬细胞活性和功能的一种方法。
巨噬细胞吞噬功能测定的基本原理如下：1.制备巨噬细胞：首先需要从人或动物体内获取巨噬细胞，常用的来源包括骨髓、外周血单个核细胞、脾脏等。
这些组织中含有大量未分化或分化成熟的巨噬细胞前体，经过适当培养条件可以诱导其分化为成熟的巨噬细胞。
2.刺激剂处理：为了评估不同刺激剂对巨噬细胞吞噬能力的影响，常常将刺激剂加入到培养基中与巨噬细胞共同培养。
常用的刺激剂包括细菌成分（如脂多糖）、细菌、病毒等。
刺激剂的添加可以模拟体内感染环境，激活巨噬细胞。
3.吞噬实验：巨噬细胞吞噬功能测定通常采用荧光标记的微粒（如琼脂糖微球、细菌等）来评估巨噬细胞吞噬能力。
首先将荧光标记的微粒加入到培养基中与巨噬细胞共同培养，一定时间后，通过显微镜观察和计数吞噬的荧光标记微粒数量，进而评估巨噬细胞的吞噬能力。
4.统计分析：通过对多个样本进行重复实验，可以得到吞噬率、吞噬指数等数据。
根据不同实验设计和目的，还可以进行其他统计学分析，如t检验、方差分析等。
总结起来，巨噬细胞吞噬功能测定就是通过将刺激剂处理后的巨噬细胞与荧光标记微粒共同培养，然后观察和计数吞噬的荧光标记微粒数量来评估巨噬细胞的吞噬能力。
这种测定方法可以用于评估巨噬细胞在不同条件下的活性和功能，进而研究免疫应答、感染和疾病发展等相关问题。
巨噬细胞吞噬功能测定在实验室中有广泛的应用。
通过该方法可以评估不同刺激剂对巨噬细胞活性的影响，了解它们在感染和炎症过程中的作用。
此外，该方法还可以用于筛选新药物或治疗方法对巨噬细胞吞噬功能的影响，为药物开发提供参考。
然而，在进行巨噬细胞吞噬功能测定时需要注意以下几个方面：1.工作环境：实验室必须具备严格的无菌条件，以避免外源性污染对实验结果的干扰。
大吞噬实验的实验报告
一、实验目的1. 观察和了解巨噬细胞对异物的吞噬过程。
2. 掌握巨噬细胞吞噬实验的操作方法。
3. 分析巨噬细胞的吞噬功能。
二、实验原理巨噬细胞是一种具有吞噬功能的免疫细胞，主要来源于单核细胞。
在机体受到病原体感染时，巨噬细胞可以吞噬病原体，并激活其他免疫细胞，共同参与机体的免疫反应。
本实验通过观察巨噬细胞对异物的吞噬过程，了解巨噬细胞的吞噬功能。
三、实验材料1. 小鼠：体重20-25g，雌雄不限。
2. 无菌生理盐水。
3. 鸡红细胞悬液。
4. 巨噬细胞培养液。
5. 巨噬细胞培养瓶。
6. 显微镜及配套设备。
7. 吸管、试管、离心机、移液器等。
四、实验步骤1. 实验前准备：将小鼠置于恒温恒湿的环境中饲养，适应环境。
实验前1天，用无菌生理盐水给小鼠灌胃，以提高巨噬细胞的活性。
2. 巨噬细胞培养：取小鼠腹腔巨噬细胞，加入巨噬细胞培养液，置于37℃、5%CO2的培养箱中培养。
3. 实验操作：a. 取鸡红细胞悬液，用生理盐水稀释至一定浓度。
b. 将培养好的巨噬细胞悬液加入鸡红细胞悬液中，混合均匀。
c. 将混合液加入巨噬细胞培养瓶中，置于培养箱中培养一段时间。
d. 取出培养瓶，用吸管轻轻吹打，使巨噬细胞与鸡红细胞分离。
e. 将分离后的巨噬细胞悬液离心，弃去上清液，收集沉淀。
4. 观察与记录：a. 取巨噬细胞沉淀，制成涂片。
b. 用姬姆萨染色液染色，置于显微镜下观察。
c. 记录巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况，包括吞噬细胞的形态、吞噬的鸡红细胞数量等。
五、实验结果与分析1. 观察结果：在显微镜下，观察到巨噬细胞呈现出典型的吞噬形态，细胞内含有多个鸡红细胞。
2. 分析：a. 巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用，说明巨噬细胞在机体免疫过程中起着重要作用。
b. 吞噬细胞的形态变化与鸡红细胞的吞噬程度有关，吞噬程度越高，细胞形态变化越明显。
c. 通过观察巨噬细胞的吞噬功能，可以了解巨噬细胞在机体免疫反应中的活性。
六、实验结论本实验通过观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，验证了巨噬细胞在机体免疫过程中的重要作用。
吞噬功能测定实验报告
一、实验目的1. 了解吞噬细胞吞噬功能的测定原理和方法。
2. 掌握中性粒细胞和巨噬细胞吞噬功能测定的操作步骤。
3. 分析吞噬功能测定的结果，评估吞噬细胞的功能状态。
二、实验原理吞噬细胞是免疫系统中的重要组成部分，具有吞噬、消化病原微生物和衰老细胞等功能。
吞噬功能测定是评估机体免疫功能的一种方法。
本实验通过测定中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬功能，了解其吞噬能力，从而评估机体免疫功能。
三、实验材料1. 实验动物：小白鼠（6-8周龄，体重20-25g）。
2. 试剂：中性粒细胞和巨噬细胞分离试剂、鸡红细胞悬液、瑞氏染液、生理盐水、0.1%吐温-80、磷酸缓冲盐溶液（PBS）等。
3. 仪器：显微镜、离心机、移液器、培养皿、载玻片、试管等。
四、实验方法1. 中性粒细胞和巨噬细胞分离将小白鼠处死，无菌操作取腹腔液，加入中性粒细胞和巨噬细胞分离试剂，充分混匀后室温放置5分钟。
低速离心（1000r/min，5分钟）分离中性粒细胞和巨噬细胞。
2. 吞噬功能测定（1）中性粒细胞吞噬功能测定取分离的中性粒细胞，加入鸡红细胞悬液，37℃孵育30分钟。
低速离心（1000r/min，5分钟）弃上清，加入瑞氏染液，染色5分钟。
洗涤、干燥、封片，显微镜下观察中性粒细胞吞噬鸡红细胞的情况。
（2）巨噬细胞吞噬功能测定取分离的巨噬细胞，加入鸡红细胞悬液，37℃孵育30分钟。
低速离心（1000r/min，5分钟）弃上清，加入瑞氏染液，染色5分钟。
洗涤、干燥、封片，显微镜下观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况。
3. 结果分析计算吞噬百分率和吞噬指数。
吞噬百分率=吞噬有鸡红细胞的细胞数/细胞总数×100%；吞噬指数=吞噬的鸡红细胞总数/吞噬有鸡红细胞的细胞数。
五、实验结果1. 中性粒细胞吞噬功能吞噬百分率：60.5%；吞噬指数：1.2。
2. 巨噬细胞吞噬功能吞噬百分率：70.2%；吞噬指数：1.8。
六、讨论本次实验成功测定了中性粒细胞和巨噬细胞的吞噬功能。
巨噬细胞的实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的基本生物学特性；2. 掌握巨噬细胞吞噬功能实验的操作方法；3. 分析巨噬细胞吞噬功能的影响因素。
二、实验原理巨噬细胞是免疫系统中的一种重要细胞，具有吞噬、清除病原体、分泌细胞因子等生物学功能。
本实验通过观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，评估巨噬细胞的吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：小鼠；2. 实验试剂：鸡红细胞、生理盐水、冷亚甲蓝染色液、培养皿、显微镜、移液器等。
四、实验方法1. 实验动物处理：取健康小鼠，腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导腹腔巨噬细胞产生。
2. 巨噬细胞收获：实验前3小时，将小鼠处死，无菌操作下取出腹腔液，加入等体积生理盐水，混匀后离心（1000r/min，10min），弃上清，用生理盐水洗涤2次，沉淀即为巨噬细胞。
3. 巨噬细胞吞噬实验：将收获的巨噬细胞加入培养皿中，加入适量鸡红细胞，37℃培养1小时。
4. 巨噬细胞染色：将培养好的巨噬细胞加入冷亚甲蓝染色液，染色5分钟。
5. 巨噬细胞观察：用显微镜观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的情况，计算吞噬百分率和吞噬指数。
五、实验结果与分析1. 实验结果：显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，部分鸡红细胞被吞噬细胞包裹。
2. 实验分析：（1）吞噬百分率：吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数/巨噬细胞总数×100%；（2）吞噬指数：吞噬的鸡红细胞总数/吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数。
六、实验结论本实验成功观察到了巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，说明巨噬细胞具有吞噬功能。
吞噬百分率和吞噬指数可以作为评估巨噬细胞吞噬功能的重要指标。
七、实验讨论1. 巨噬细胞在免疫系统中具有重要作用，吞噬功能是其重要生物学特性之一。
2. 本实验采用腹腔巨噬细胞，操作简便，结果可靠。
3. 影响巨噬细胞吞噬功能的主要因素包括：巨噬细胞的来源、成熟度、环境因素等。
4. 本实验为后续研究巨噬细胞吞噬功能的影响因素提供了基础。
八、实验总结本实验通过观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，成功评估了巨噬细胞的吞噬功能。
吞噬现象观察实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的吞噬功能及其在免疫应答中的作用。
2. 观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，加深对吞噬作用机制的理解。
二、实验原理巨噬细胞是一类具有吞噬功能的免疫细胞，能够识别、吞噬并消化各种抗原物质，如细菌、病毒、细胞碎片等。
在本实验中，我们通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬作用，了解吞噬作用的过程和机制。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：清洁级雄性小鼠（体重20-25g）。
2. 实验试剂：鸡红细胞悬液、生理盐水、台盼蓝染色液、显微镜等。
3. 实验仪器：超净工作台、移液器、显微镜、离心机等。
四、实验步骤1. 麻醉小鼠，打开腹腔，收集腹腔巨噬细胞。
2. 将收集到的巨噬细胞用生理盐水洗涤两次，制成细胞悬液。
3. 将鸡红细胞悬液与巨噬细胞悬液按一定比例混合，置于37℃水浴中温育30分钟。
4. 取出混合液，用台盼蓝染色液染色，置于显微镜下观察。
5. 记录吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数量和形态变化。
五、实验结果在显微镜下观察到，巨噬细胞对鸡红细胞具有明显的吞噬作用。
具体表现为：1. 部分巨噬细胞表面出现鸡红细胞，表明巨噬细胞已将鸡红细胞吞噬入细胞内。
2. 吞噬鸡红细胞的巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变。
3. 部分巨噬细胞内可见被吞噬的鸡红细胞碎片。
六、实验分析与讨论1. 本实验结果表明，小鼠腹腔巨噬细胞具有吞噬鸡红细胞的能力，这与巨噬细胞的免疫功能相一致。
2. 吞噬过程中，巨噬细胞表面出现鸡红细胞，说明巨噬细胞通过表面受体识别鸡红细胞。
3. 吞噬后，巨噬细胞体积增大，细胞核形态发生改变，说明巨噬细胞在吞噬过程中发生了代谢变化。
4. 吞噬鸡红细胞过程中，部分鸡红细胞碎片被巨噬细胞消化，说明巨噬细胞在吞噬作用中具有一定的消化功能。
七、实验结论通过本实验，我们成功观察了小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，加深了对吞噬作用机制的理解。
实验结果表明，巨噬细胞在免疫应答中发挥着重要作用，具有识别、吞噬和消化抗原物质的能力。
吞噬活性检测实验报告
一、实验背景吞噬活性是机体免疫系统中的重要功能之一，主要由巨噬细胞等免疫细胞执行。
吞噬活性检测对于研究免疫细胞的生物学特性、疾病诊断及药物研发具有重要意义。
本实验旨在通过体外实验方法，检测巨噬细胞的吞噬活性，并分析影响吞噬活性的因素。
二、实验材料与仪器1. 材料：（1）小鼠巨噬细胞：购自某生物技术公司；（2）金黄色葡萄球菌（Staphylococcus aureus）：购自某微生物菌种保藏中心；（3）生理盐水、PBS缓冲液、DMEM培养基等；（4）台盼蓝染液、二甲基亚砜（DMSO）等；（5）激光共聚焦显微镜、倒置显微镜、流式细胞仪等。
2. 仪器：（1）CO2培养箱；（2）低温高速离心机；（3）超净工作台；（4）电子天平；（5）移液器、吸管等。
三、实验方法1. 巨噬细胞的制备与培养（1）将小鼠巨噬细胞接种于培养瓶中，置于CO2培养箱中培养；（2）待细胞生长至80%融合时，用PBS缓冲液洗涤细胞，加入新鲜DMEM培养基，调整细胞浓度为1×10^6个/mL；（3）将细胞悬液均匀接种于24孔板中，每孔200μL，置于CO2培养箱中培养。
2. 吞噬实验（1）将金黄色葡萄球菌接种于培养瓶中，培养至对数生长期；（2）收集菌液，用生理盐水洗涤3次，调整菌浓度为1×10^8个/mL；（3）将巨噬细胞与金黄色葡萄球菌混合，比例分别为1:1、1:5、1:10，置于CO2培养箱中培养1小时；（4）收集混合细胞，用PBS缓冲液洗涤3次，加入台盼蓝染液，室温下染色5分钟；（5）用流式细胞仪检测细胞内台盼蓝的阳性率，计算吞噬活性。
3. 影响吞噬活性的因素分析（1）观察不同温度（37℃、42℃、45℃）对吞噬活性的影响；（2）观察不同pH值（pH 6.5、7.0、7.5）对吞噬活性的影响；（3）观察不同细胞浓度对吞噬活性的影响。
四、实验结果1. 吞噬活性检测结果在不同比例的巨噬细胞与金黄色葡萄球菌混合培养后，细胞内台盼蓝的阳性率随着细胞比例的增加而增加，说明吞噬活性随着细胞比例的增加而增强。
吞噬作用
巨噬细胞吞噬水平的检测（1）实验原理：中性红是大分子的荧光试剂，在波长550nm 有强吸收峰。
由于中性红分子量较大，只能通过内吞作用才能被摄取进入巨噬细胞胞内，所以通过测量不同刺激和药物条件下细胞内中性红量来衡量巨噬细胞的吞噬功能。
本实验利用活巨噬细胞细胞所具有的吞噬活性，将大分子中性红内吞进入细胞内，去除胞外未被吞噬的中性红并用细胞裂解液破损细胞，放出溶解在细胞内的中性红，通过酶联免疫检测仪测出550nm 的光吸收值（A 550），被吞噬的中性红的量与A 550值成正比，所以可以用A 550衡量吞噬细胞的吞噬水平。
这种方法灵敏度较高，是目前较为常用的检测巨噬细胞吞噬能力的一种手段。
药物的恢复率recovery rate 由下面公式计算给出：%100ΑΑΑΑ1rate%recovery ATP 550control 550sample 550control 550⨯⎪⎭⎫ ⎝⎛---=,,,,。
其中A 550，control 为无处理对照组的中性红吸光值；A 550，sample 为加药样本的吸光值；A 550，ATP 为只加刺激的阳性对照吸光值。
（2）实验步骤：通过不同浓度药物孵育的巨噬细胞实验组和参照组中，加入不同刺激，摇匀后再加入无菌（需要抽滤）中性红（最终质量分数为0.1%）。
恒温培养箱中培养30min 让巨噬细胞充分吞噬。
取出细胞用HBSS 溶液清洗2遍以清除残留在胞外未被吞噬的中性红。
加入细胞裂解液（1:1=乙醇：乙酸），震荡15min 使细胞破裂，放出已被吞噬的中性红。
酶联免疫检测仪测出每个样本孔在550nm 的光吸收值（A 550），以表示每个样本内巨噬细胞的吞噬活性。
文献报道35mm 的培养皿中种植500K 细胞，一，加入60000K/皿尼罗红荧光微球（1um 大小），加入ATP 或其他刺激，37℃孵育30 min.二，然后用含有1％血清的PBS 洗三次.,加入胰酶 1000R/5min 用流式细胞仪检测（654~606nm ），并且可以分选到符合吞噬标准的细胞.三，将收集到的细胞铺到盖玻片上，用4％的多聚甲醛固定15min.四，用1ug/ml DAPI(溶于PBS)进行核染色1min ，在荧光显微镜下观察。
巨噬细胞的吞噬作用
巨噬细胞的吞噬作用——巨噬细胞体内吞噬鸡红细胞实验前言：病原微生物一旦突破体表防御屏障侵入体内，首先接触的是遍布全身的大、小吞噬细胞，他们分布于血液和组织中，并可以在某些趋化因子的作用下被吸引至微生物侵入部位。
吞噬细胞依据其形态大小分为两大类：一类是血液中的单核细胞及从血液游走到血管外并固定于各组织中的巨噬细胞，称为大吞噬细胞；另一类是血液中的嗜中性粒细胞称为小吞噬细胞。
它们是机体非特异性免疫的重要因素。
今我设计的实验是检测巨噬细胞的吞噬功能，淀粉可以在实验动物腹腔内引起非感染性炎症渗出，在腹腔局部聚集较多巨噬细胞；将鸡红细胞注入实验动物腹腔内，可检测腹腔内的巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬功能。
【实验目的】熟悉巨噬细胞吞噬功能的体外测定功能。
【实验原理】当鸡红细胞注入小鼠腹腔内，巨噬细胞可借助细胞表面的免疫识别受体或直接吞噬鸡红细胞而将其消化，通过显微镜观察该吞噬现象，可了解巨噬细胞的吞噬功能。
【实验材料及试剂配制】（1）体重25g左右的小鼠。
（2）5ml、1ml无菌注射器，6号、9号针头，10ml离心管，清洁载玻片，烧杯，解剖剪，眼科镊，湿盒，解剖板，图钉，37℃水浴箱。
（3）4%淀粉肉汤：称面粉3克、可溶性淀粉5克、加营养肉汤至100ml，混匀，先微火加热，不断搅拌使成糊状，再高压灭菌。
临用时，与无菌营养肉汤等量混合。
（4）D-Hank’s液：NaCl 8.0g、KCl 0.4g、Na2HPO4•H2O 0.12g、KH2PO4 0.06g、葡萄糖 1.0g、1%酚红 2.0ml。
将上述成分溶于1000ml双蒸水，分装于500毫升盐水瓶，8磅15min灭菌，4℃冰箱保存，临用时用3.5%NaHCO3调pH至7.2~7.4. （5）生理盐水（6）2%鸡红细胞：无菌操作抽取鸡翅静脉血，抗凝，置于离心管中，用无菌生理盐水洗3次，最后一次离心2000r/min, 10min，按积压将鸡血细胞用Hank’s液配成2%浓度。
巨噬细胞吞噬作用的观察细胞学实验报告
巨噬细胞吞噬作用的观察细胞学实验报告实验目的：观察巨噬细胞的吞噬作用，了解巨噬细胞在防御机体内外侵犯的微生物和异物时的作用机制。
实验原理：巨噬细胞是一种能够吞噬和消化体内外各种微生物及其他异物的免疫细胞，其作用主要通过两种方式实现：异物与巨噬细胞表面的膜蛋白结合，通过膜囊泡（吞噬体）形成吞噬泡；吞噬泡与溶酶体融合，形成溶酶体-吞噬体复合物，完成异物的吞噬和溶解。
实验步骤：1.实验前准备1.1. 预先培养巨噬细胞至对数生长期，并调整细胞浓度为1×10^6 cells/mL；1.2.准备巨噬细胞富集培养液、悬浮液和含有正常培养液的对照组，分别标记为A、B和C组；1.3.准备大肠杆菌溶菌液；1.4.准备各组的显微镜载玻片。
2.差速计数法确定吞噬指数2.1.取3只显微镜载玻片，分别滴加A、B和C组巨噬细胞液，每个组各滴2滴；2.2.于25℃恒温槽中孵育15分钟；2.3.分别在显微镜下用10倍镜进行巨噬细胞数目计数；2.4.计算巨噬细胞吞噬指数，公式如下：吞噬指数=A-B/C-B。
3.吞噬试验3.1.在显微镜盖片上涂抹一层巨噬细胞富集液；3.2.将滴管中的巨噬细胞悬浮液加入巨噬细胞富集液之上，形成巨噬细胞层；3.3.在巨噬细胞层上滴加大肠杆菌溶菌液，并进行密封；3.4.将盖片置于37℃恒温槽中孵育30分钟；3.5.取出巨噬细胞盖片，用0.01%新洁尔灭溶液洗涤；3.6.加入吉姆萨酮染色试剂，显色15分钟后以洁净水洗净；3.7.在显微镜下观察巨噬细胞内的大肠杆菌数量。
4.数据处理4.1.统计吞噬细胞内大肠杆菌数量；4.2.分析吞噬指数和巨噬细胞内大肠杆菌数量的关系。
实验结果：根据差速计数法得出的巨噬细胞吞噬指数为0.67、在吞噬试验中观察到，巨噬细胞内存在许多吉姆萨酮染色的大肠杆菌。
实验讨论：巨噬细胞的吞噬作用是免疫系统中重要的第一道防线，可以吞噬和杀灭多种病原菌和异物。
实验结果表明，巨噬细胞吞噬指数为0.67，说明巨噬细胞具有较强的吞噬能力。
荧光乳胶微粒法检测巨噬细胞吞噬实验技术方法
荧光乳胶微粒法检测巨噬细胞吞噬实验
（1）将巨噬细胞以50%密度接种于六孔板中，待细胞贴壁后，给予干预处理，并设对照组，干预后弃去培养基。
（2）将细胞与乳胶珠粒（10μL乳胶珠稀释于2mL DMEM中）共孵育2小时。
（3）用1×PBS洗3次，目的是洗掉没有被吞噬的乳胶粒。
流式细胞法
（4）收集细胞，1200r/min，离心5min，弃上清液。
（5）1×流式Buffer重悬细胞，1200r/min，离心5min。
（6）细胞计数，每组调整细胞个数为1×106个细胞，1200r/min，离心5min。
（7）弃上清，加入1×流式Buffer 重悬细胞，清洗2次，1200r/min，离心5min。
（9）弃上清液，加入500μl 1×流式Buffer 重悬细胞，等待上机流式细胞仪检测。
荧光显微镜法
（1）将巨噬细胞以50%密度接种于含细胞爬片的六孔板中，待细胞贴壁后，给予干预处理，并设对照组，干预后弃去培养基
（2）将细胞与乳胶珠粒（10μL乳胶珠稀释于2mL DMEM中）共孵育2小时。
（3）用1×PBS洗3次，目的是洗掉没有被吞噬的乳胶粒。
（4）加入4%多聚甲醛固定30min。
（5）弃甲醛液，加入1×PBS 洗涤5min×3次。
（15）避光条件下，DAPI 染液染细胞核5min。
（16）1×PBS 洗涤5min×3次。
（17）用抗荧光淬灭剂封片，荧光显微镜下观察并保存图像。
巨噬细胞吞噬功能检测
巨噬细胞吞噬功能测定【实验原理】巨噬细胞对颗粒性异物具有很强的吞噬功能。
当鸡红细胞被注入小鼠腹腔时，会被腹腔中的巨噬细胞吞噬。
取小鼠腹腔液涂片、染色，在显微镜下可见到鸡红细胞被吞噬的现象。
计算吞噬百分率和吞噬指数，可判断吞噬细胞的吞噬功能。
【试剂和器材】1. 动物体重20-25g的健康小鼠。
2. 1%鸡红细胞（CRBC）悬液自鸡液静脉或心脏采血，放Alsever液中保存（鸡血与Alsever 液1：5混合），置4℃可有效保存1个月，临用前用生理盐水将CRBC洗3次，按红细胞压积配成1%CRBC悬液。
3. 6%可溶性淀粉肉汤培养基肉汤培养基100ml加入可溶性淀粉6g，混匀，置100℃水浴煮沸消毒。
4. 其他试剂瑞氏（Wright）染液、生理盐水等。
5. 器材无菌注射器及针头、剪刀、镊子、解剖盘、载玻片、显微镜等。
【步骤和方法】1.试验前3天，于小鼠腹腔注射6%可溶性淀粉肉汤培养基1ml。
2.于试验当天，小鼠腹腔注入1%CRBC悬液0.5ml，并轻轻揉腹。
3.30min后小鼠颈椎脱臼处死，取腹腔液涂片，自然干燥后瑞氏染色，用油镜观察。
【结果判定】镜下可见吞噬细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形，其胞浆呈红色而核被染成蓝色。
呈油镜下随机观察100个巨噬细胞，计数吞噬有鸡红细胞的巨噬细胞数和吞噬的鸡红细胞总数。
吞噬百分率= (吞噬CRBC的巨噬细胞数/100)*100%吞噬指数= 吞噬细胞吞噬的CRBC总数/100【注意事项】1.涂片的薄厚要适当，否则影响计数。
2.小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。
3.如小鼠腹腔液过少，可注入适量生理盐水。
4.剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。
5.被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。
阿氏液配方：葡萄糖 2.05克柠檬酸钠0.8克柠檬酸0.055克氯化钠0.42克加蒸馏水至100毫升，加热溶解后将pH值调到6.1，经过69千帕，15分钟的高压灭菌，放置在4℃的环境内，保存备用。
巨噬细胞吞噬功能的测定
免疫教研室
*目的：掌握巨噬细胞的吞噬功能、测定、判断方法
及意义。
*原理：巨噬细胞对颗粒性抗原物质具有强大的吞噬
功能。将一定量鸡红细胞或白色念珠菌等颗粒性物 质与巨噬细胞悬液共同孵育，即可见吞噬现象发生， 通过计算吞噬百分率和吞噬指数来判断其吞噬功能， 可作为判定非特异性免疫指标之一
*
*
小白鼠（20克左右），5％可溶性淀粉液, 5％鸡红细胞，无菌 注射器和针头、毛细管、剪刀、 载物玻片、培养箱、显微镜等。
*观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞等级，借以判定巨噬细胞吞噬和消化功能。 *Ⅰ级表示有吞噬功能，I一Ⅳ级表示消化功能
*Ⅰ级：被吞噬的鸡红细胞完整；未消化，胞浆浅红或浅黄绿色，胞核为浅紫
红色。
*Ⅱ级；轻度消化，胞浆浅黄绿色，核固缩染成紫兰色。 *Ⅲ级：重度消化，胞浆淡紫，胞核呈浅灰黄色。 *Ⅳ级：完全消化，巨噬细胞胞浆内仅见形态类似鸡红细胞大小的空泡，边缘
整齐，胞核隐约可见。
*
*
*
*吞噬百分率=
* 吞噬指数=
*
吞噬鸡红细胞的巨噬细 胞数×100℅
100 个巨噬细胞
* 正常人巨噬细胞吞噬百分至为62.77±1.38％，吞噬指数为1.058±0.049，有人报道食道癌、胃癌、
肠癌、乳房癌、宫颈癌以及其它恶性肿瘤病人的吞噬百分率在45％以下，吞噬指数也降低。当 手术切除肿瘤后。吞噬功能可出现不同程度的回升。故本实验可用作判断肿瘤疗效的参考指标。
*1、腹腔Mφ含量较多的动物有哪些，常用刺激腹腔
Mφ增多的刺激剂有哪些？
*2、Mφ吞噬功能测定常用的靶细胞是什么，常用浓
度，小鼠腹腔注射量多少适量，注射靶细胞多长时 间观察效果较好？ 3 为什么选用鸡的红细胞
实验一 巨噬细胞吞噬功能实验
实验一巨噬细胞吞噬功能实验ﻫ1、【实验原理】(１)巨噬细胞作为单核吞噬细胞系统得主要细胞,具有活跃得吞噬功能、能清除体内抗原物质及变性得细胞,在特异性及非特异性免疫中均起重要作用、MΦ受抗原刺激后活化,可使其吞噬功能明显增强。
(2)此实验采用体内法,即:在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠腹腔注射鸡红细胞３0mｉn后处死小鼠,取出腹腔液,以冷美蓝染色,油镜下计数吞噬鸡红细胞得百分数,及观察巨噬细胞中内因被杀死而染为蓝色得鸡红细胞得形态、数目,以判断巨噬细胞中得杀伤能力,由此间接地测定机体得非特异免疫水平、２、【实验步骤】(1)试验前3d,小白鼠腹腔注射６％无菌淀粉液1ml,诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
(2)实验时,每只小鼠腹腔注射鸡红细胞液1ml,轻揉腹部,使红细胞在腹腔中分布均匀,利于吞噬(３)3０mｉn后,将小鼠拉颈处死,固定,打开腹腔暴露肠管,用吸管取出腹腔液,均匀涂布于载玻片上,然后再滴一小滴0、03％冷美蓝溶液,盖上盖玻片。
ﻫ(4)低倍镜下找到观察区域后,换高倍镜下进行观察,计数3、【实验结果】4、【结果分析】(1)如图所示,在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后,再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液,可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞得现象,并且可以瞧到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
(2)镜下可见吞噬细胞核呈蓝色,被吞噬得鸡红细胞呈椭圆形,其胞浆呈红色而核被染成蓝色。
(3)由于未将腹腔液与冷美蓝溶液充分混合均匀,使得视野中出现大片深染区域。
总体实验结果较好,视野中央可见清晰得吞噬了鸡红细胞得巨噬细胞、ﻫ5、【注意事项】(1)涂片得薄厚要适当,否则影响计数、(２)小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。
(3)如小鼠腹腔液过少,可注入适量生理盐水、(4)剪开小鼠腹腔时应避免出血,否则将影响试验结果。
(5)被吞噬得鸡红细胞时间过长可被消化,时间过短未被吞噬,必须掌握好吞噬作用时间、实验二双向琼脂扩散实验1、【实验原理】(1)可溶性抗原与相应抗体特异性结合,两者比例适当并有电解质存在及一定得温度条件下,经一定得时间,可形成肉眼可见得沉淀线／环得现象,称为沉淀反应、(2)琼脂扩散就是指为可溶性抗原与抗体在琼脂凝胶中所呈现得一种沉淀反应。
巨噬细胞吞噬实验报告
巨噬细胞吞噬实验报告巨噬细胞吞噬实验报告巨噬细胞是一类重要的免疫细胞，它们在机体内起着清除病原体和细胞垃圾的重要作用。
巨噬细胞通过吞噬和消化来清除这些有害物质，从而维护机体的健康。
本次实验旨在探究巨噬细胞的吞噬能力，并观察不同条件下巨噬细胞的吞噬效果。
实验材料和方法：1. 巨噬细胞：从小鼠腹腔摘取巨噬细胞，经过离心、洗涤后制备成细胞悬液。
2. 有害物质：使用荧光染料标记的细菌和细胞碎片作为巨噬细胞吞噬的目标。
3. 细胞培养基：提供适宜的营养和环境条件供巨噬细胞生长。
4. 显微镜：观察和记录巨噬细胞的吞噬情况。
实验步骤：1. 将巨噬细胞悬液均匀分配到培养皿中，加入适量的细胞培养基，使巨噬细胞处于良好的生长状态。
2. 在巨噬细胞培养基中加入荧光染料标记的细菌和细胞碎片，使其与巨噬细胞悬液充分接触。
3. 将培养皿置于恒温培养箱中，以37摄氏度、5%二氧化碳的条件下培养巨噬细胞。
4. 在培养的不同时间点，取出培养皿进行显微镜观察，并记录巨噬细胞吞噬的数量和程度。
5. 对实验结果进行统计和分析，得出结论。
实验结果：在观察巨噬细胞吞噬的过程中，我们发现了一些有趣的现象。
首先，在实验开始的早期，巨噬细胞对细菌和细胞碎片的吞噬速度较快，数量也相对较多。
然而，随着时间的推移，巨噬细胞的吞噬速度逐渐减慢，吞噬的数量也逐渐减少。
这表明巨噬细胞在一段时间内能够高效地吞噬有害物质，但随着吞噬的进行，巨噬细胞的饱和度逐渐增加，导致吞噬速度下降。
此外，我们还发现了巨噬细胞对不同类型有害物质的吞噬能力存在差异。
在实验中，我们使用了荧光染料标记的细菌和细胞碎片作为巨噬细胞的吞噬目标。
观察结果显示，巨噬细胞对细菌的吞噬效果较好，吞噬数量较多，而对细胞碎片的吞噬效果相对较差。
这可能是因为细菌具有较小的体积和较强的运动能力，更容易被巨噬细胞捕获和吞噬。
而细胞碎片可能较大且较为静态，巨噬细胞需要更多的时间和能量来吞噬。
结论：通过本次实验，我们对巨噬细胞的吞噬能力有了更深入的了解。
巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告
巨噬细胞吞噬作用的观察实验报告一．实验目的1.通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察，了解巨噬细胞在非特异性免疫中的功能。
2.掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。
3.学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。
二．实验原理1.向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养”。
连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。
2.台盼蓝是一种生物染料，专一染色死细胞。
活细胞的细胞质膜对台盼蓝有不透过性。
巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤后，可以消化其中的淀粉和蛋白质，但是不能消化其中的台盼蓝，因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。
是一种溶酶体染色的方法。
3.当向小鼠腹腔中注射鸡红细胞时，鸡红细胞作为外源物质，会被小鼠细胞识别并吞噬，在适当的的时机，我们就有可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程三．实验材料及设备1.实验材料：a)连续2~3天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只b)鸡红细胞悬液c)生理盐水2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片、盖玻片若干c)注射器d)染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等四．实验方法及步骤1.小鼠处理与巨噬细胞采集a)连续2-3天（每天一次）向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤。
b)选择已注射淀粉肉汤3小时以上的小鼠一只。
c)一人控制住小鼠，露出腹部，另一人用注射器向小鼠腹腔中注射1ml鸡红细胞悬液。
按摩小鼠腹部。
d)20-30分钟后，再注射1-1.5ml生理盐水（0.9%NaCl）按摩小鼠腹部。
e)3分钟后，引颈法处死小鼠f)迅速在腹腔剪开一个不大的开口（注意要剪开腹部的肌肉层），用无针头的注射器吸取腹腔液。
g)在载玻片上滴2-3滴腹腔液，加上盖玻片，在显微镜下观察。
2.观察在不同倍数下观察样本，找到正在消化或者吞噬鸡红细胞的巨噬细胞。
注意避免玻片液体干涸。
五．实验结果小鼠红细胞巨噬细胞鸡红细胞已吞噬鸡红细胞的巨噬细胞图1小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡血红细胞装片（100X物镜不染色）左上角示未知种类细胞100x物镜放大倍数，光镜下可见随机分布的不同种类的细胞。
巨噬细胞吞噬现象的实验观察
巨噬细胞吞噬现象的实验观察一．实验目的：1.观察巨噬细胞吞噬全过程和意义。
2.掌握小鼠腹腔注射给药和颈椎脱臼处死方法。
二．实验原理吞噬细胞由骨髓干细胞分化生成，具有非特异性免疫功能。
当病原微生物或其他异物侵入机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又有趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃的变形运动，主动向病原体或异物移动，在接触到病原体或异物时，即伸出伪足将之包围，并内吞入细胞，形成吞嗜体，继而细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合形成吞噬性溶酶体，通过其水解酶作用，将病原体杀死，消化分解，最后将不能消化的残渣排除细胞外。
三．实验用品1.器材：显微镜解剖盘剪刀镊子载玻片盖玻片注射器吸管2.试剂：A.0.85%生理盐水B.alsever溶液（葡萄糖2.05g 柠檬酸钠0.89g 柠檬酸0.05g 氯化钠0.42g 蒸馏水100ml）将alsever溶液ph调至7.2，高压灭菌10分钟，保存于4℃冰箱中。
C.0.4％台盼蓝染液D.4.0％淀粉肉汤（牛肉膏0.3g 蛋白胨1.0g 氯化钠0.5g 蒸馏水100ml 含台盼蓝染液）加热后加入可溶性淀粉6.0g，促使溶解，再煮沸灭菌，置4℃冰箱中保存，用时水浴融化，加入适量台盼蓝染液混匀，使其成蓝色。
3.材料:A.小白鼠B．1％鸡红细胞悬液（从健康鸡翼静脉采血1ml，放入盛有4mlalsever溶液瓶中，混匀置4℃冰箱中备用。
用时加0.85％生理盐水离心，洗涤两次，再用生理盐水配成1％浓度悬液。
）四．实验方法1.实验前一天给小白鼠腹腔注射6％淀粉肉汤1ml。
2.试验时，将注射过淀粉肉汤的小白鼠腹腔注射1％鸡红细胞悬液1ml，轻按小鼠腹部，使悬液分散。
3.二十分钟后，用颈椎脱臼法处死小鼠。
4.将小鼠置于解剖盘中，剪开腹部，把内脏推向一侧，用不装针头的注射器或吸管取腹腔液。
5.取一干净载玻片，滴一滴腹腔液，盖上盖玻片，置显微镜下观察。
五．实验结果10*100 图中椭圆形有核淡黄色细胞为鸡红细胞；较大的呈圆形或不规则细胞，内含蓝色颗粒的为巨噬细胞，仔细观察玻片，可见巨噬细胞吞噬红细胞的过程。
巨噬细胞吞噬实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的基本特性及其在免疫反应中的作用。
2. 观察和分析巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。
3. 掌握显微镜下观察细胞吞噬作用的实验技术。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中重要的细胞类型，具有强大的吞噬能力。
当巨噬细胞遇到抗原时，会通过吞噬作用将其捕获、消化并清除。
本实验以鸡红细胞作为抗原，观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，从而了解巨噬细胞的吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：健康小鼠（体重20-25g）2. 实验器材：解剖显微镜、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、剪刀、镊子、吸管等3. 实验试剂：生理盐水、鸡红细胞悬液、冷亚甲蓝染色液、无菌淀粉液四、实验步骤1. 小鼠腹腔巨噬细胞诱导：实验前3小时，将小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导腹腔巨噬细胞渗出。
2. 鸡红细胞悬液制备：将鸡红细胞用生理盐水洗涤三次，制成红细胞悬液，浓度为1×10^9/L。
3. 腹腔巨噬细胞收集：将小鼠处死，打开腹腔，用生理盐水冲洗腹腔，收集腹腔液。
4. 巨噬细胞染色：取腹腔液1ml，加入1ml冷亚甲蓝染色液，混匀，染色5分钟。
5. 制片观察：取载玻片，滴加1滴腹腔液，盖上盖玻片，用解剖显微镜观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的形态学变化。
五、实验结果1. 在显微镜下观察到，巨噬细胞呈圆形或椭圆形，细胞质丰富，细胞核较大，呈蓝色。
2. 鸡红细胞呈圆形，直径约为7-8μm，呈红色。
3. 观察到部分巨噬细胞周围有红细胞聚集，说明巨噬细胞已经吞噬了鸡红细胞。
4. 部分巨噬细胞内部可见吞噬的红细胞，且红细胞被巨噬细胞质包围，说明巨噬细胞已经将鸡红细胞包裹在内。
六、实验分析1. 本实验观察到巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，说明巨噬细胞具有吞噬能力。
2. 吞噬过程中，巨噬细胞通过质膜内陷形成吞噬泡，将鸡红细胞包裹在内，然后将其消化。
3. 吞噬作用是机体免疫系统的重要组成部分，有助于清除体内的病原体和衰老细胞。
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实验一巨噬细胞吞噬功能实验
1、【实验原理】
(1)巨噬细胞作为单核吞噬细胞系统的主要细胞，具有活跃的吞噬功能。
能清除体内抗原物质及变性的细胞，在特异性及非特异性免疫中均起重要作用。
MΦ受抗原刺激后活化，可使其吞噬功能明显增强。
(2)此实验采用体内法，即：在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡红细胞30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷美蓝染色，油镜下计数吞噬鸡红细胞的百分数，及观察巨噬细胞中内因被杀死而染为蓝色的鸡红细胞的形态、数目，以判断巨噬细胞中的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异免疫水平。
2、【实验步骤】
（1）试验前3d，小白鼠腹腔注射6％无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
（2）实验时，每只小鼠腹腔注射鸡红细胞液1ml，轻揉腹部，使红细胞在腹腔中分布均匀，利于吞噬
（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用吸管取出腹腔液，均匀涂布于载玻片上，然后再滴一小滴0.03％冷美蓝溶液，盖上盖玻片。
（4）低倍镜下找到观察区域后，换高倍镜下进行观察，计数
3、【实验结果】
4、【结果分析】
（1）如图所示，在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液，可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并且可以看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
（2）镜下可见吞噬细胞核呈蓝色，被吞噬的鸡红细胞呈椭圆形，其胞浆呈红色而核被染成蓝色。
(3)由于未将腹腔液和冷美蓝溶液充分混合均匀，使得视野中出现大片深染区域。
总体实验结果较好，视野中央可见清晰的吞噬了鸡红细胞的巨噬细胞。
5、【注意事项】
（1）涂片的薄厚要适当，否则影响计数。
（2）小鼠腹腔注射时不要刺伤内脏。
（3）如小鼠腹腔液过少，可注入适量生理盐水。
（4）剪开小鼠腹腔时应避免出血，否则将影响试验结果。
（5）被吞噬的鸡红细胞时间过长可被消化，时间过短未被吞噬，必须掌握好吞噬作用时间。
实验二双向琼脂扩散实验
1、【实验原理】
（1）可溶性抗原与相应抗体特异性结合，两者比例适当并有电解质存在及一定的温度条件下，经一定的时间，可形成肉眼可见的沉淀线/环的现象，称为沉淀反应。
（2）琼脂扩散是指为可溶性抗原与抗体在琼脂凝胶中所呈现的一种沉淀反应。
当对应的抗原、抗体在半固体琼脂终相遇，且二者比例适当时，便出现可见的白色沉淀线，这组沉淀线是一组抗原、抗体的特异性复合物。
当琼脂中有多组不同的抗原、抗体存在时，便各自依其扩散速度的差异，再适当的部位形成独立的沉淀线。
因此，琼脂扩散不仅用于疾病的诊断，更广泛地用于抗原成分的分析。
（3）双向琼脂扩散试验是定性实验。
将可溶性抗原与相应抗体分别加人琼脂板上的孔内，两者均可扩散，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
如果不是相应的抗原与抗体，就不出现沉淀线。
本试验常用于分析抗原抗体的纯度及相互关系。
2、【实验步骤】
（1）制板：将熔化的1%琼脂加在玻片上，3ml/板。
（2）打孔：待琼脂凝固后，在板上打孔。
（3）加样：在空中加入相应抗原、抗体。
（4）结果观察将琼脂板放入湿盒内置 37c 温箱中 24 小时后取出观察结果。
3、【实验结果】
4、【结果分析】
（1）如图所示，在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线，有抗原抗体反应，为阳性反应，说明抗原1与抗体相对应。
中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线，说明抗原2与抗体之间不相对应。
（2）抗体与抗原发生扩散时，随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
当有沉淀线出现时，说明有抗原抗体反应。
5、【注意事项】
（1）加样时不要将琼脂划破，以免影响沉淀线的形成。
（2）反应时间要适宜，时间过长，沉淀线可解离而导致假阴性、不出现或不清楚。
（3）加样时不同浓度抗体和抗原不要混淆，影响试验结果。
（4）试验前应做预试验，确定抗体的稀释度。