实验四 巨噬细胞的吞噬实验
细胞生物学实验5 巨噬细胞吞噬现象的观察
实验5 巨噬细胞吞噬现象的观察〔实验目的〕1、通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及意义2、掌握小鼠腹腔注射给药和脊柱脱臼处死的方法〔实验原理〕巨噬细胞由骨髓干细胞分化而来，然后进入血液到达各组织，并进一步分化成为巨噬细胞。
当病原体或其他异物进入机体时，能招引巨噬细胞。
巨噬细胞具有趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃的变形运动向异物或病原体移行，在接触到病原体或异物时即伸出伪足，将之包围并吞入胞内，形成吞噬泡，既而细胞中的溶酶体与吞噬泡融合，形成吞噬溶酶体，通过水解酶的作用将病原体杀死消化，最后将不能消化的残留物排除细胞外。
〔试剂材料〕1、器材：解剖盘、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、注射器、吸管、吸水纸2、试剂：（1）0.85%生理盐水（2）Alverse溶液：葡萄糖2.05g，柠檬酸钠（NaC6H5O7.2H2O）0.89g, 柠檬酸（C6H6O7. H2O）0.05g, 氯化钠0.42g，蒸馏水100ml。
pH值调至7.2，过滤或高压灭菌，4℃保存（3）4%台盼蓝染液：台盼蓝粉末0.4g，0.85%生理盐水100ml，4.6%淀粉肉汤（牛肉膏0.3g，蛋白胨1.0g，氯化钠0.5g，蒸馏水100ml，加热后加入可溶性淀粉6g，使其溶解，煮沸灭菌，4℃保存。
用时加热融化，加入适量台盼蓝染液）3、材料：（1）小白鼠（2）1%鸡红细胞〔内容方法〕一、腹腔巨噬细胞的吞噬1、实验前二天，每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盼蓝，起标记作用）1ml以刺激腹腔产生较多的巨噬细胞。
2、实验时，每组取一只上述处理的小鼠，腹腔注射1%鸡血悬液0.5~1ml，注射后轻揉小鼠腹部以使红细胞悬液分散均匀。
3、20分钟后，用颈椎脱臼法处死小鼠，迅速剖开小鼠腹部，向腹腔部注射0.5~1ml生理盐水，用吸管轻轻使生理盐水与腹腔液混匀。
4、用吸管抽取腹腔液，涂片，自然干燥。
5、甲醛固定10min。
巨噬细胞吞噬作用的观察 细胞学实验报告
生命科学学院专业生物技术 2016级生技班612组姓名同实验者 2018年 3 月 26日题目：巨噬细胞吞噬作用的观察一．实验目的1.通过小鼠腹腔巨噬细胞对异物吞噬作用的观察，了解巨噬细胞在非特异性免疫中的功能。
2.掌握小鼠等实验动物腹腔巨噬细胞采集和制片的方法。
3.学习小鼠腹腔注射的操作方法和步骤。
二．实验原理1.向小鼠腹腔内注射无菌淀粉肉汤，排异反应使小鼠产生大量巨噬细胞，且巨噬细胞吞噬淀粉肉汤后不会对细胞造成伤害，反而被“喂养”。
连续多天注射使小鼠腹腔内聚集大量巨噬细胞。
2.台盼蓝是一种生物染料，专一染色死细胞。
活细胞的细胞质膜对台盼蓝有不透过性。
巨噬细胞吞噬含有台盼蓝的淀粉肉汤后，可以消化其中的淀粉和蛋白质，但是不能消化其中的台盼蓝，因此台盼蓝会聚集在溶酶体中。
是一种溶酶体染色的方法。
生命科学学院专业生物技术 2016级生技班612组姓名同实验者 2018年 3 月 26日3.当向小鼠腹腔中注射鸡红细胞时，鸡红细胞作为外源物质，会被小鼠细胞识别并吞噬，在适当的的时机，我们就有可以在显微镜下观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的过程三．实验材料及设备1.实验材料：a)连续2~3天向腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤的小鼠一只b)鸡红细胞悬液c)生理盐水2.实验设备：a)普通光学显微镜b)载玻片、盖玻片若干c)注射器d)染色皿若干、吸水纸、滴管、剪刀、白瓷板等生命科学学院专业生物技术 2016级生技班612组姓名同实验者 2018年 3 月 26日四．实验方法及步骤1.小鼠处理与巨噬细胞采集a)连续2-3天（每天一次）向小鼠腹腔中注射含台盼蓝的淀粉肉汤。
b)选择已注射淀粉肉汤3小时以上的小鼠一只。
c)一人控制住小鼠，露出腹部，另一人用注射器向小鼠腹腔中注射1ml鸡红细胞悬液。
按摩小鼠腹部。
d)20-30分钟后，再注射1-1.5ml生理盐水（0.9%NaCl）按摩小鼠腹部。
e)3分钟后，引颈法处死小鼠f)迅速在腹腔剪开一个不大的开口（注意要剪开腹部的肌肉层），用无针头的注射器吸取腹腔液。
实验八巨噬细胞吞噬现象的观察
实验八巨噬细胞吞噬现象的观察
一、实验原理
巨噬细胞由骨髓干细胞分化生成, 然后进入血液到达各组织内, 并进一步分化为各种巨噬细胞, 当病原微生物或其它异物侵入机体时, 能招引巨噬细胞, 而巨噬细胞又有趋化性, 能响应招引因子的招引, 产生活跃的变形运动, 主动向病原体和异物移行, 在接触到病原体和异物时, 即伸出伪足, 将之包围并内吞入胞质, 形成吞噬体, 继而细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡发生融合, 形成吞噬性溶酶体, 通过其中水解酶等作用下, 将病原体杀死, 消化分解, 最后将不能消化的残渣排了出细胞外。
台盼蓝染色：如果细胞膜不完整、破裂, 台盼蓝染料进入细胞, 细胞变蓝, 即为坏死。
如果细胞膜完整, 细胞不为台盼蓝染色, 则为正常细胞或凋亡细胞。
此方法对反映细胞膜的完整性, 区别坏死细胞有一定的帮助。
二、实验步骤
1. 在小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盼蓝）1ml。
2．24h后注射1%鸡红细胞悬液1ml, 轻按腹部使分散。
3. 20分钟后脱颈骨处死小鼠。
4. 开腹取腹腔液（慎防小鼠血污染）。
5．腹腔液滴于载玻片上, 盖上盖玻片。
6. 显微镜观察吞噬现象。
三、实验结果
四. 结果讨论。
实验四巨噬细胞吞噬现象的观察
• 1．小鼠腹腔注射1％旳鸡红细胞悬液1ml，轻揉 腹部使鸡细胞分散。
• 2 ． 15～20分钟后，用颈椎脱臼法处死小鼠。 • 3 ．将小鼠置于解剖盘中，剪开腹腔，把内脏推
向一侧，用吸管吸收腹腔液，滴在载玻片上，加 盖玻片。显微镜下观察。
五、作业
• 绘制小鼠巨噬细胞吞噬鸡血红细胞旳过程 图。
三、试验用具
• 1．器材 • 显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、
注射器、吸管、吸水纸 • 2．试剂 • 生理盐水、Alsever溶液、4％台盼蓝染液 • 3．材料 • 小白鼠、1%鸡血红细胞。
四、试验ห้องสมุดไป่ตู้节
• 试验前一天取小白鼠腹腔注射6％淀粉肉汤液(含 台盼蓝)1毫升（连续注射三天效果很好）。
试验四 巨噬细胞吞噬现象旳观察
一、试验目旳
• 1. 观察巨噬细胞旳吞噬活动。 • 2. 掌握小鼠腹腔注射给药和脱颈椎处死措
施。
二、试验原理
• 高等动物具有大小两类吞噬细胞(即巨噬细 胞和嗜中性粒细胞)，专司吞噬作用，为非 持异免疫功能旳主要构成部分。
• 小鼠腹腔腹腔注射 淀粉肉汤液，可诱导巨 噬细胞。
实验四 膜的通透性和巨噬细胞的吞噬作用
实验四膜的通透性和巨噬细胞的吞噬作用细胞膜又称细胞质膜（plasma membrane),是指围绕在细胞最外层，由脂双层分子和蛋白质组成的生物膜。
细胞膜在细胞与环境之间形成一个通透性的屏障，使细胞具有一个相对稳定的内环境，同时还在细胞与环境之间的物质运输，能量转换及信息传递过程中起着决定性的作用。
小分子物质进出细胞主要通过简单扩散，协助扩散，主动运输及基团转移等方式，而大分子和颗粒物质主要通过胞吞作用和胞吐作用出入细胞。
吞噬作用是细胞胞吞作用的一种类型，是单细胞动物摄取营养物质的主要方式，也是高等动物的一种非特异性免疫防护机制。
高等动物中只有某些特化的细胞如巨噬细胞、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，这些细胞起着防御微生物的侵染和清除衰老的细胞或细胞碎片的作用。
一、实验目的(一)掌握细胞膜对物质通透性的一般规律。
(二)了解并掌握溶血现象及其发生机制。
(三)了解巨噬细胞在非特异免疫中的作用。
二、实验原理(一)细胞膜的通透性 细胞膜是细胞与环境进行物质交换的选择通透性屏障。
它是一种半透膜，可选择性控制物质进出细胞。
各种物质出入细胞的方式是不同的，在简单扩散的跨膜运动中，跨膜物质首先溶解在膜脂中，再从膜脂一侧扩散到另一侧，最后进入细胞质水相中。
水是生物界最普遍的溶剂，水分子可以按照物质浓度梯度从渗透压低的一侧通过细胞膜向渗透压高的一侧扩散，这种现象就是渗透。
渗透作用是细胞膜的主要功能之一。
将红细胞放在低渗盐溶液中，水分子大量渗到细胞内，可使细胞膨胀而破裂，血红蛋白释放到介质中，红细胞悬液由不透明变为红色透明的血红蛋白溶液，这种现象称为溶血。
将红细胞放在某些高渗溶液中，由于红细胞膜对各种溶质的通透性不同，疏水性强的极性小分子物质如乙醇，甘油能够较快速地进入红细胞，使细胞内地渗透性活性分子地浓度大为增加，继而导致水地摄入，导致溶血现象；而在高渗地电解质溶液中，由于电解质在水中解离成带电荷的离子使得这些电解质的渗透作用大大降低，过膜速度缓慢甚至不能过膜，所以不易发生溶血现象。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验
目的要求
1．了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理 2．熟悉细胞吞噬作用的基本过程 3．了解细胞吞噬实验的研究意义
基本原理
? 吞噬是单细胞动物摄取营养物质的主要方式，也是高等动 物的一种非特异性免疫防护机制。高等动物内的巨噬细胞 、单核细胞和中性粒细胞等具有吞噬功能，当病原微生物 或其他异物侵入机体时，巨噬细胞由于具有趋化性，会向 异物处聚集，将其内吞入细胞质，形成吞噬泡，然后吞噬 泡与溶酶体融合，将异物消化分解。
0.85%生理盐水；阿氏（ Alsever）血液保存液； 蛋白胨 2.0g 加水 100ml 灭菌备用。 3．材料：小白鼠； 1%鸡红细胞悬液
方法与步骤
? 鸡翼下静脉取血后，加生理盐水离心两次，然后 根据获得的红细胞的体积加入适量的生理盐水， 调至鸡红细胞浓度为 1%。
实验前三天，每天向小鼠腹腔注射 2%的蛋白胨溶液1ml， 实验前1小时，向腹腔内注射 1%鸡红细胞1ml。
吸取腹腔液
脱椎致死
在干净的载玻片上滴加一滴生理盐水，向其中滴加一滴 腹腔液，静置 10分钟，使腹水细胞贴壁，弃去生理盐水， 待其稍干后，进行瑞氏染色。
未被吞噬的鸡红细胞
吞噬了鸡红细胞 的吞噬细胞
实验报告
? 镜检时，你能在视野中看到几种类型的细胞？ ? 计算吞噬细胞的吞噬指数和吞噬百分数。
吞噬百分数 =
? 吞噬泡的形成需要有微丝及其结合蛋白的帮助，如果用降 解微丝的药物细胞松弛素B处理细胞，则可阻断吞噬泡的形 成；免疫抑制剂环磷酰胺（ CYP）对巨噬细胞的吞噬作用也 有影响。
? 通过观察细胞对鸡红细胞、酵母菌等的吞噬，计算吞噬百 分数和吞噬指数，可以分析判断机体的免疫水平。
实验用品
1．器材：显微镜、解剖：
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬试验
首先用吸管吸取少许稀释后的单细胞悬液，从盖片 端滴一小滴（不宜过多），液体自行向内渗入，静置数 分钟后，再放在微镜下观察计数。
温育30min。
取1滴混合液置玻片上加盖玻片，在高倍镜下观察 计数。
高倍镜下观察计算： 吞噬率％=(吞噬白色念珠菌的巨噬细胞数/100个巨噬
细胞)×100％
吞噬指数％=100个巨噬细胞中吞噬白色念珠菌总数 /100个巨噬细胞
**(吞噬指数式中巨噬细胞为阳性吞噬细胞)
注意事项
1、菌与细胞混合后充分混匀非常重要。对于此实验，菌 与吞噬细胞之比10：1时吞噬作用容易观察和计数。但 是吞噬效果好，能真正反映实际情况又可被检测的比 例为1：1。
计数时，若细胞位于小方格的线上，应遵循“数上 线不数下线，数左线不数右线”的原则，以减少误差。 计数应重复3次，取其平均值。
数完毕后，依下式计算： 每1mL白细胞悬液细胞数＝（4个中方格细胞总数 /4） ×104× 稀释倍数
每1mL红细胞悬液细胞数＝（80个小方格细胞总数 /80） ×400×104× 稀释倍数
2、菌和细胞在摇床中作用的时间不超过30 min，如果在 37C 条件下作用时间过长，被吞噬的菌很快会被裂解， 也就不能计数为吞噬了菌的细胞。
3、滴片时加入的细胞数依细胞的大小而定，如果使用的 吞噬细胞是细胞系，细胞体积较大，那么加入的细胞 数就相应的少一点。
血球计数板计数法
血球计数板是由一块厚玻片特制而成，其中央有 两个计数室。每个计数室划分出9个大方格（见下图）， 每格面积1mm2，加盖玻片后的深度为0.1mm。因此， 每大方格容积为0.1mm3。
实验四 巨噬细胞的吞噬实验
注射后30分钟，处死小鼠。
（右手抓住鼠尾，用力向后拉， 左手拇指与食指同时向下按住 鼠头，使脊髓与脑髓间断开）
吸取腹腔液
在干净的载玻片上滴加一滴生理盐水，向其中滴加一滴腹 腔液，静置10分钟，使腹水细胞贴壁，弃去生理盐水，待 其稍干后，进行瑞氏染色。
实验四 小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验
实验简介
细胞的胞吞胞吐是细胞进行新陈代谢的方 式之一。高等动物的细胞在摄取营养物质的同 时，有的细胞如单核细胞和巨噬细胞还有通过 识别与吞噬细菌、病毒等外来物质的作用来达 到机体防御的功能。本实验通过预先激活腹腔 巨噬细胞，然后腹腔注射鸡红细胞，从而引起 腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞。通过光镜可清楚 地观察到这一有趣的现象。
目的要求
1．了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理 2．熟悉细胞吞噬作用的基本过程
基本原理
高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞，具 有吞噬的功能。它们广泛分布在组织和血液中，在机体的 非特异免疫功能中起着重要的作用。当病原微生物或其它 异物侵入机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又具有趋 化性，它通过产生活跃的变形运动，主动向病原体和异物 移行聚集，首先把异物吸附在细胞表面，随之，吸附区域 的细胞膜向内凹陷，伸出伪足包围异物，并吞入胞质，形 成吞噬泡，继而在细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡融合， 形成吞噬溶酶体，把病原体杀死，异物消化分解。
方法与步骤
鸡翼下静脉取血后，用Alsever以1:4比例保存 于4度（可保存一周）。实验前加生理盐水离 心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适 量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为1%。
中性粒细胞吞噬实验报告
中性粒细胞吞噬实验报告篇一：小吞噬实验报告篇一：巨噬细胞吞噬实验&沉淀实验实验报告实验二一巨噬细胞吞噬功能实验【原理】巨噬细胞是单核吞噬细胞系统的主要细胞，局域活跃的吞噬功能。
吞噬细胞受抗原刺激后活化，可使吞噬功能明显增强。
在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡血红细胞，30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷亚甲蓝染色，显微镜下计数吞噬红细胞的百分数，及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目，以判断吞噬细胞的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。
【方法】体内法：（1）实验前3小时，小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
（2）实验时，每只小鼠注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使其在腹腔中分布均匀，利于吞噬。
（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用载玻片轻擦腹腔，使腹腔液均匀涂于载玻片过，再滴一滴0.03%冷亚甲蓝溶液，盖上盖玻片。
（4）高倍镜下进行观察，计数。
【结果】【分析】在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液，可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并且可看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
二沉淀反应双向琼脂扩散实验【原理】将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内，二者均可发生扩散，并且随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
本实验是定性实验，常用于分析抗原抗体的纯度关系以及相互关系。
【方法】（1）制板：将熔化的1%琼脂加在载玻片上约5ml（2）打孔：待琼脂凝固后，将载玻片置于打孔样板上，用打孔器打孔（3）加样：在中央孔内加抗体，上下两孔加抗原1，左右加抗原二，每孔加10μl（4）结果观察：将琼脂板置于湿盒，37℃一天后观察结果。
【结果】在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线，有抗原抗体反应，为阳性反应，说明抗原1与抗体相对应。
中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线，说明抗原2与抗体之间不相对应。
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告
小鼠腹腔巨噬细胞吞噬实验报告
实验目的：
本实验的主要目的是观察小鼠腹腔巨噬细胞对胶体金颗粒的吞噬作用并初步探究巨噬细胞的吞噬过程及机制。
实验材料：
1. 胶体金溶液；
2. 无菌生理盐水；
3. 酶消化试剂；
5. 显微镜和激光共聚焦显微镜。
实验步骤：
1. 将腹腔巨噬细胞准备好，收集细胞的方法可以在Gibco™血清教育中心找到。
2. 将100微升的胶体金颗粒溶液加入小鼠巨噬细胞的培养基中。
3. 将培养基加入培养箱中，并调节适当的条件，使细胞生长。
4. 观察并拍摄巨噬细胞吞噬胶体金颗粒的过程。
5. 经过一段时间后，将巨噬细胞用生理盐水洗涤几次，以去除吞噬的颗粒和其他杂质。
6. 对巨噬细胞进行显微镜观察，并用激光共聚焦显微镜观察细胞的粒饱和度，探究吞噬过程中的机制。
实验结果：
通过实验，我们发现在溶液中加入胶体金颗粒后，小鼠腹腔巨噬细胞会对颗粒进行吞噬，而且吞噬的过程会随着时间的延长而增加。
在观察吞噬过程时，我们发现颗粒先进入到巨噬细胞的液泡内，液泡随后与溶质相合并，颗粒进入到细胞内部。
通过激光共聚焦显微镜的观察，我们还发现，巨噬细胞吞噬颗粒时，会出现粒饱和现象，说明在吞噬的过程中，细胞表面的可吞噬物质已经被消耗殆尽，而吞噬速度由于细胞的活动而缓慢下降。
结论：
细胞吞噬是一种重要的细胞生理过程，对于身体的免疫防御系统具有重要意义。
而小鼠腹腔巨噬细胞具有良好的吞噬能力，对于异物、死亡细胞和各种病原体的清除起到了重要作用。
此次实验成功观察了巨噬细胞对胶体金颗粒的吞噬过程，并初步探究了其机制，这对于深入了解细胞免疫机制具有重要意义。
巨噬细胞吞噬实验报告
巨噬细胞吞噬实验报告巨噬细胞吞噬实验报告巨噬细胞是一类重要的免疫细胞，它们在机体内起着清除病原体和细胞垃圾的重要作用。
巨噬细胞通过吞噬和消化来清除这些有害物质，从而维护机体的健康。
本次实验旨在探究巨噬细胞的吞噬能力，并观察不同条件下巨噬细胞的吞噬效果。
实验材料和方法：1. 巨噬细胞：从小鼠腹腔摘取巨噬细胞，经过离心、洗涤后制备成细胞悬液。
2. 有害物质：使用荧光染料标记的细菌和细胞碎片作为巨噬细胞吞噬的目标。
3. 细胞培养基：提供适宜的营养和环境条件供巨噬细胞生长。
4. 显微镜：观察和记录巨噬细胞的吞噬情况。
实验步骤：1. 将巨噬细胞悬液均匀分配到培养皿中，加入适量的细胞培养基，使巨噬细胞处于良好的生长状态。
2. 在巨噬细胞培养基中加入荧光染料标记的细菌和细胞碎片，使其与巨噬细胞悬液充分接触。
3. 将培养皿置于恒温培养箱中，以37摄氏度、5%二氧化碳的条件下培养巨噬细胞。
4. 在培养的不同时间点，取出培养皿进行显微镜观察，并记录巨噬细胞吞噬的数量和程度。
5. 对实验结果进行统计和分析，得出结论。
实验结果：在观察巨噬细胞吞噬的过程中，我们发现了一些有趣的现象。
首先，在实验开始的早期，巨噬细胞对细菌和细胞碎片的吞噬速度较快，数量也相对较多。
然而，随着时间的推移，巨噬细胞的吞噬速度逐渐减慢，吞噬的数量也逐渐减少。
这表明巨噬细胞在一段时间内能够高效地吞噬有害物质，但随着吞噬的进行，巨噬细胞的饱和度逐渐增加，导致吞噬速度下降。
此外，我们还发现了巨噬细胞对不同类型有害物质的吞噬能力存在差异。
在实验中，我们使用了荧光染料标记的细菌和细胞碎片作为巨噬细胞的吞噬目标。
观察结果显示，巨噬细胞对细菌的吞噬效果较好，吞噬数量较多，而对细胞碎片的吞噬效果相对较差。
这可能是因为细菌具有较小的体积和较强的运动能力，更容易被巨噬细胞捕获和吞噬。
而细胞碎片可能较大且较为静态，巨噬细胞需要更多的时间和能量来吞噬。
结论：通过本次实验，我们对巨噬细胞的吞噬能力有了更深入的了解。
中性粒细胞吞噬实验报告
中性粒细胞吞噬实验报告篇一：小吞噬实验报告篇一：巨噬细胞吞噬实验&沉淀实验实验报告实验二一巨噬细胞吞噬功能实验【原理】巨噬细胞是单核吞噬细胞系统的主要细胞，局域活跃的吞噬功能。
吞噬细胞受抗原刺激后活化，可使吞噬功能明显增强。
在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠腹腔注射鸡血红细胞，30min后处死小鼠，取出腹腔液，以冷亚甲蓝染色，显微镜下计数吞噬红细胞的百分数，及观察吞噬细胞内鸡红细胞的数目，以判断吞噬细胞的杀伤能力，由此间接地测定机体的非特异性免疫水平。
【方法】体内法：（1）实验前3小时，小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
（2）实验时，每只小鼠注射鸡红细胞1ml，轻柔腹部，使其在腹腔中分布均匀，利于吞噬。
（3）30min后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用载玻片轻擦腹腔，使腹腔液均匀涂于载玻片过，再滴一滴0.03%冷亚甲蓝溶液，盖上盖玻片。
（4）高倍镜下进行观察，计数。
【结果】【分析】在小鼠体内诱导腹腔巨噬细胞产生后，再给小鼠注射鸡红细胞后镜检腹腔液，可观察到巨噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，并且可看到部分鸡红细胞聚集到吞噬细胞附近。
二沉淀反应双向琼脂扩散实验【原理】将可溶性抗原与相应抗体分别加入琼脂板上的孔内，二者均可发生扩散，并且随扩散距离的增大浓度降低，在抗原抗体比例适宜处形成可见的沉淀线。
本实验是定性实验，常用于分析抗原抗体的纯度关系以及相互关系。
【方法】（1）制板：将熔化的1%琼脂加在载玻片上约5ml（2）打孔：待琼脂凝固后，将载玻片置于打孔样板上，用打孔器打孔（3）加样：在中央孔内加抗体，上下两孔加抗原1，左右加抗原二，每孔加10μl（4）结果观察：将琼脂板置于湿盒，37℃一天后观察结果。
【结果】在中央孔与添加抗原1的孔之间出现沉淀线，有抗原抗体反应，为阳性反应，说明抗原1与抗体相对应。
中央孔与添加抗原2的孔之间没有沉淀线，说明抗原2与抗体之间不相对应。
巨噬细胞吞噬实验报告
一、实验目的1. 了解巨噬细胞的基本特性及其在免疫反应中的作用。
2. 观察和分析巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。
3. 掌握显微镜下观察细胞吞噬作用的实验技术。
二、实验原理巨噬细胞是机体免疫系统中重要的细胞类型，具有强大的吞噬能力。
当巨噬细胞遇到抗原时，会通过吞噬作用将其捕获、消化并清除。
本实验以鸡红细胞作为抗原，观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬过程，从而了解巨噬细胞的吞噬功能。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：健康小鼠（体重20-25g）2. 实验器材：解剖显微镜、显微镜、载玻片、盖玻片、滴管、剪刀、镊子、吸管等3. 实验试剂：生理盐水、鸡红细胞悬液、冷亚甲蓝染色液、无菌淀粉液四、实验步骤1. 小鼠腹腔巨噬细胞诱导：实验前3小时，将小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导腹腔巨噬细胞渗出。
2. 鸡红细胞悬液制备：将鸡红细胞用生理盐水洗涤三次，制成红细胞悬液，浓度为1×10^9/L。
3. 腹腔巨噬细胞收集：将小鼠处死，打开腹腔，用生理盐水冲洗腹腔，收集腹腔液。
4. 巨噬细胞染色：取腹腔液1ml，加入1ml冷亚甲蓝染色液，混匀，染色5分钟。
5. 制片观察：取载玻片，滴加1滴腹腔液，盖上盖玻片，用解剖显微镜观察巨噬细胞吞噬鸡红细胞的形态学变化。
五、实验结果1. 在显微镜下观察到，巨噬细胞呈圆形或椭圆形，细胞质丰富，细胞核较大，呈蓝色。
2. 鸡红细胞呈圆形，直径约为7-8μm，呈红色。
3. 观察到部分巨噬细胞周围有红细胞聚集，说明巨噬细胞已经吞噬了鸡红细胞。
4. 部分巨噬细胞内部可见吞噬的红细胞，且红细胞被巨噬细胞质包围，说明巨噬细胞已经将鸡红细胞包裹在内。
六、实验分析1. 本实验观察到巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，说明巨噬细胞具有吞噬能力。
2. 吞噬过程中，巨噬细胞通过质膜内陷形成吞噬泡，将鸡红细胞包裹在内，然后将其消化。
3. 吞噬作用是机体免疫系统的重要组成部分，有助于清除体内的病原体和衰老细胞。
大小的吞噬实验报告
1. 掌握吞噬实验的基本原理和方法。
2. 了解巨噬细胞和小吞噬细胞的功能特点。
3. 观察并分析吞噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。
二、实验原理吞噬作用是细胞通过质膜内陷形成内吞泡的方式吞入不能渗透过膜的较大固体物质的过程。
在动物体内，巨噬细胞和小吞噬细胞是主要的吞噬细胞，它们具有识别、摄取、消化和清除病原体、衰老细胞和异物的功能。
吞噬作用在机体非特异性免疫中起着重要作用。
三、实验材料与试剂1. 实验动物：昆明种小鼠2. 实验材料：鸡红细胞、无菌生理盐水、6%无菌淀粉液、冷亚甲蓝染色液3. 仪器设备：显微镜、离心机、移液器、培养皿、吸管等四、实验方法1. 诱导巨噬细胞渗出：实验前3小时，小鼠腹腔注射6%无菌淀粉液1ml，诱导巨噬细胞渗出至腹腔中。
2. 制备鸡红细胞悬液：取鸡红细胞，用无菌生理盐水洗涤3次，制成鸡红细胞悬液。
3. 观察吞噬现象：实验时，每只小鼠注射鸡红细胞悬液1ml，轻柔腹部，使其在腹腔中分布均匀，利于吞噬。
30分钟后，将小鼠拉颈处死，固定，打开腹腔暴露肠管，用载玻片轻擦腹腔，使腹腔液均匀涂于载玻片上。
滴一滴冷亚甲蓝染色液，盖上盖玻片。
在高倍显微镜下观察巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象。
五、实验结果1. 观察到巨噬细胞形态正常，细胞核清晰可见。
2. 部分巨噬细胞周围有鸡红细胞聚集，说明巨噬细胞已吞噬鸡红细胞。
3. 部分鸡红细胞被吞噬细胞吞噬后，细胞内出现鸡红细胞。
1. 本实验通过观察小鼠腹腔巨噬细胞对鸡红细胞的吞噬现象，证实了巨噬细胞具有吞噬功能。
2. 吞噬细胞在机体非特异性免疫中起着重要作用，能够清除病原体、衰老细胞和异物，维持机体内环境的稳定。
3. 吞噬细胞吞噬鸡红细胞的现象，进一步说明了吞噬细胞在清除血液中异物方面的作用。
七、实验讨论1. 吞噬细胞的吞噬能力受多种因素影响，如细胞表面的受体、吞噬物质的性质等。
2. 吞噬细胞在吞噬过程中，需要消耗能量，并分泌多种生物活性物质，如溶酶体酶等。
大小吞噬实验报告
一、实验目的1. 了解吞噬细胞的功能和特点；2. 掌握吞噬细胞吞噬细菌的实验方法；3. 分析吞噬细胞吞噬细菌的过程和结果。
二、实验原理吞噬细胞是一类具有吞噬功能的细胞，如巨噬细胞、中性粒细胞等。
它们能够吞噬和消化各种病原体、细胞碎片等异物。
本实验通过观察吞噬细胞吞噬细菌的过程，了解吞噬细胞的功能和特点。
三、实验材料1. 实验动物：小鼠；2. 实验试剂：生理盐水、肝素钠、细菌悬液、姬姆萨染色液；3. 实验仪器：显微镜、离心机、移液器、培养皿、试管等。
四、实验方法1. 选取健康小鼠，无菌操作下取小鼠腹腔巨噬细胞；2. 将巨噬细胞悬液用生理盐水洗涤2次，离心后弃上清液；3. 加入肝素钠溶液，使细胞悬液稀释至适当浓度；4. 将细菌悬液与巨噬细胞悬液按一定比例混合，37℃孵育30分钟；5. 将混合液离心，弃上清液；6. 加入姬姆萨染色液，染色5分钟；7. 用显微镜观察吞噬细胞吞噬细菌的情况。
五、实验结果1. 巨噬细胞在显微镜下呈圆形或椭圆形，细胞质丰富，细胞核呈蓝色；2. 部分巨噬细胞表面附着有细菌，细菌呈紫色；3. 部分巨噬细胞内部出现细菌，细菌呈紫色；4. 部分巨噬细胞表面和内部均无细菌。
六、实验分析1. 巨噬细胞在实验过程中表现出较强的吞噬功能，能够吞噬细菌；2. 部分巨噬细胞在吞噬细菌后，细菌存在于细胞表面，说明吞噬细胞在吞噬过程中可能发生粘连；3. 部分巨噬细胞在吞噬细菌后，细菌存在于细胞内部，说明吞噬细胞在吞噬过程中可能发生吞入；4. 部分巨噬细胞表面和内部均无细菌，可能是因为吞噬细胞未能成功吞噬细菌或细菌未被染色。
七、实验结论1. 巨噬细胞具有较强的吞噬功能，能够吞噬细菌；2. 吞噬细胞在吞噬细菌的过程中可能发生粘连和吞入；3. 本实验成功观察了吞噬细胞吞噬细菌的过程，为研究吞噬细胞的功能和特点提供了实验依据。
八、实验讨论1. 本实验中，吞噬细胞吞噬细菌的过程可能受到多种因素的影响，如细菌种类、巨噬细胞活性等；2. 吞噬细胞在吞噬细菌的过程中，可能存在吞噬、消化、排泄等多个阶段；3. 吞噬细胞吞噬细菌的能力与人体免疫力密切相关，研究吞噬细胞的功能有助于提高人体免疫力。
组织中巨噬细胞的检测方法
组织中巨噬细胞的检测方法
巨噬细胞的检测方法主要包括以下三种：
1. 巨噬细胞功能的检测：通过给小鼠定量静脉注射印度墨汁（炭粒悬液），间隔一定时间反复取静脉血，测定血中炭粒的浓度，根据血流中炭粒被廓清的速度，判断巨噬细胞的功能。
2. 吞噬功能的检测：实验室常用比细菌大的细胞性抗原作为被吞噬颗粒，如鸡红细胞。
将受检细胞与适量的颗粒抗原混合后，置37℃保温0.5～1h，其间时加振摇，最后离心取测定细胞制成涂片，染色镜检，分别计数出吞噬百分比和吞噬指数。
3. 巨噬细胞溶酶体酶的测定：巨噬细胞富含溶酶体酶，如酸性磷酸酶、非特异性酯酶、溶菌酶等，测定这些酶的活性也是衡量巨噬细胞功能的实用指标之一。
请注意，这些方法需要一定的实验设备和专业知识，建议在专业人士的指导下进行。
1。
细胞生物学实验5巨噬细胞吞噬现象的观察
细胞生物学实验5巨噬细胞吞噬现象的观察实验5 巨噬细胞吞噬现象的观察〔实验目的〕1、通过对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞活动的观察，加深理解细胞吞噬作用的过程及意义2、掌握小鼠腹腔注射给药和脊柱脱臼处死的方法〔实验原理〕巨噬细胞由骨髓干细胞分化而来，然后进入血液到达各组织，并进一步分化成为巨噬细胞。
当病原体或其他异物进入机体时，能招引巨噬细胞。
巨噬细胞具有趋化性，能响应招引因子的招引，产生活跃的变形运动向异物或病原体移行，在接触到病原体或异物时即伸出伪足，将之包围并吞入胞内，形成吞噬泡，既而细胞中的溶酶体与吞噬泡融合，形成吞噬溶酶体，通过水解酶的作用将病原体杀死消化，最后将不能消化的残留物排除细胞外。
〔试剂材料〕1、器材：解剖盘、剪刀、镊子、载玻片、盖玻片、注射器、吸管、吸水纸2、试剂：（1）0.85%生理盐水（2）Alverse溶液：葡萄糖 2.05g，柠檬酸钠（NaC6H5O7.2H2O）0.89g, 柠檬酸（C6H6O7. H2O）0.05g, 氯化钠0.42g，蒸馏水100ml。
pH值调至7.2，过滤或高压灭菌，4℃保存（3）4%台盼蓝染液：台盼蓝粉末0.4g，0.85%生理盐水100ml，4.6%淀粉肉汤（牛肉膏0.3g，蛋白胨1.0g，氯化钠0.5g，蒸馏水100ml，加热后加入可溶性淀粉6g，使其溶解，煮沸灭菌，4℃保存。
用时加热融化，加入适量台盼蓝染液）3、材料：（1）小白鼠（2）1%鸡红细胞〔内容方法〕一、腹腔巨噬细胞的吞噬1、实验前二天，每天向小鼠腹腔注射6%淀粉肉汤（含台盼蓝，起标记作用）1ml以刺激腹腔产生较多的巨噬细胞。
2、实验时，每组取一只上述处理的小鼠，腹腔注射1%鸡血悬液0.5~1ml，注射后轻揉小鼠腹部以使红细胞悬液分散均匀。
3、20分钟后，用颈椎脱臼法处死小鼠，迅速剖开小鼠腹部，向腹腔部注射0.5~1ml生理盐水，用吸管轻轻使生理盐水与腹腔液混匀。
4、用吸管抽取腹腔液，涂片，自然干燥。
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血细胞包括红细胞、白细胞和血小板。根据白细胞的细胞质 内是否含有特殊颗粒，把白细胞分为有粒、无粒两类。含有 颗粒的白细胞为粒细胞，按瑞色染色时所染成的不同颜色分为 中性、嗜酸性和嗜碱性三种粒细胞。无粒白细胞又分为淋巴 细胞和单核细胞。 白细胞5000～10000/ml个。嗜中性粒细胞数量最多，占50～70％
2、思考题
实验前一天，给小白鼠注射含淀粉肉汤
的目的是什么？
1、能否用生理盐水、葡萄糖等代替淀粉肉汤？能否单纯注射 台盼蓝？
不能用生理盐水、葡萄糖代替淀粉肉汤（可用蛋白胨 等代替），因为所有细胞都具有生理盐水及葡萄糖，它们可以 通过浓度梯度进入细胞，不足以诱导更多巨噬细胞的作用； 不能单纯注射台盼蓝，因为其不能诱导巨噬细胞的产生。 在注射淀粉肉汤后，抽取腹腔液，后在离体条件下在培 养皿中加入墨汁，可以观察到巨噬细胞吞噬墨汁，变成黑色。
淀粉肉汤为异物， 但是无毒害，可刺 激小鼠巨噬细胞的 产生，并且淀粉肉 汤里含有台盼蓝， 巨噬细胞吞噬后会 被染成蓝色，便于 观察。
注射后30分钟，处死小鼠。
（右手抓住鼠尾，用力向后拉， 左手拇指与食指同时向下按住 鼠头，使脊髓与脑髓间断开）
吸取腹腔液
在干净的载玻片上滴加一滴生理盐水，向其中滴加一滴腹 腔液，静置10分钟，使腹水细胞贴壁，弃去生理盐水，待 其稍干后，进行瑞氏染色。
方法与步骤
鸡翼下静脉取血后，用Alsever以1:4比例保存 于4度（可保存一周）。实验前加生理盐水离 心两次，然后根据获得的红细胞的体积加入适 量的生理盐水，调至鸡红细胞浓度为1%。
实验前1天，向小鼠腹腔注射1ml淀粉肉汤(预先激活腹腔 巨噬细胞：诱导腹腔内产生较多的巨噬细胞 )，实验前30 分钟，向腹腔内注射1ml1%的鸡红细胞。
观察时，将视野光线调暗。在高倍镜下，先分辨清鸡红细胞和 巨噬细胞。鸡红细胞为淡黄色、椭圆形、有核的细胞。而数量较 多、体积较大圆形或不规则的细胞，其表面有许多似毛刺状的小突 起（伪足），胞质中有数量不等的蓝色颗粒（为吞入的含台盼蓝 淀粉肉汤形成的吞噬泡）即为巨噬细胞。变换视野，仔细观察巨噬 细胞吞噬鸡红细胞的过程。可见有的鸡红细胞（一至多个）紧贴附 于巨噬细胞的表面；有的巨噬细胞已将1至数个红细胞部分吞入； 有的巨噬细胞已吞入1个或几个红细胞在胞质中刚刚形成椭圆形的 吞噬泡；有的巨噬细胞内的吞噬泡体积缩小，并呈现圆形，这是 与初级溶酶体发生融合，泡内物正在被消化分解。
常穿出血管，聚集于炎症组织的周围，作变形运动，吞噬细菌。 体内有炎症时，它的数量就增多。嗜酸性粒细胞数量最少。淋巴
细胞与免疫有密切关系，患结核病时，淋巴细胞明显增加。单核
细胞是血液中最大的细胞，变形活动非常活跃，能吞噬细菌和 异物。单核细胞穿出血管到结缔组织中可变为巨噬细胞。
嗜酸性粒细胞具有粗大的嗜酸性颗粒，颗粒内含有过氧化物酶
实验四 小鼠腹腔巨噬细胞的吞噬实验
实验简介
细胞的胞吞胞吐是细胞进行新陈代谢的方 式之一。高等动物的细胞在摄取营养物质的同 时，有的细胞如单核细胞和巨噬细胞还有通过 识别与吞噬细菌、病毒等外来物质的作用来达 到机体防御的功能。本实验通过预先激活腹腔 巨噬细胞，然后腹腔注射鸡红细胞，从而引起 腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞。通过光镜可清楚 地观察到这一有趣的现象。
注意事项
小鼠处死后立即注人生理盐水
2ml，轻揉 腹部，可获得较多的巨噬细胞。
作业
1吞噬阶段的巨噬细胞图各一个，示 吞噬作用的过程。 计算吞噬细胞的吞噬指数和吞噬百分数。 吞噬百分率＝100个巨噬细胞中内含鸡红细胞的巨噬细 胞数/100个巨噬细胞总数 吞噬指数＝100个巨噬细胞吞噬的鸡红细胞总数/100个巨 噬细胞总数
将染色后的涂片置于显微镜油镜下观察，绘图记录。 未被吞噬的鸡红细胞
吞噬了鸡红细胞 的吞噬细胞
实验结果的观察
观察细胞的形态特征，注意不同细胞的大 小比例和形状；鸡红细胞和巨噬细胞的区分； 吞噬前后的大小和形状的不同。注意鸡红细胞 被吞噬后形态上的变化：多观察不到核，且形 态变圆。 吞噬过程的观察：吸附、正在吞噬、吞噬 后、消化后（一般观察不到正在吞噬的过程， 想想为什么）。
目的要求
1．了解小鼠腹腔巨噬细胞吞噬现象的原理 2．熟悉细胞吞噬作用的基本过程
基本原理
高等动物体内的巨噬细胞、单核细胞和嗜中性粒细胞，具 有吞噬的功能。它们广泛分布在组织和血液中，在机体的 非特异免疫功能中起着重要的作用。当病原微生物或其它 异物侵入机体时，能招引巨噬细胞，而巨噬细胞又具有趋 化性，它通过产生活跃的变形运动，主动向病原体和异物 移行聚集，首先把异物吸附在细胞表面，随之，吸附区域 的细胞膜向内凹陷，伸出伪足包围异物，并吞入胞质，形 成吞噬泡，继而在细胞质中的初级溶酶体与吞噬泡融合， 形成吞噬溶酶体，把病原体杀死，异物消化分解。
和酸性磷酸酶；嗜碱性粒细胞中有嗜碱性颗粒，内含组织胺、 肝素与5-羟色胺等生物活性物质 ；中性粒细胞具有变形运动和 吞噬活动的能力。
噬碱性粒细胞
噬酸性粒细胞
淋巴细胞
噬中性粒细胞 单核细胞
实验用品
1．器材：显微镜、解剖盘、剪刀、镊子、注射器、 载玻片、盖玻片、吸管等 2．试剂： 0.85%生理盐水；阿氏（Alsever）血液保存液； 6%的淀粉肉汤。 3．材料：小白鼠；1%鸡红细胞悬液