鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞的增值抑制研究【开题报告】
鱿鱼墨功能活性研究进展
酶时间 ( APTT) 和凝血酶原时间 ( PT) 的效果ꎬ 对
凝血因子 FⅡa 和 FⅩa 均有显著的抑制作用ꎮ
5 4 2020ꎬVol 40ꎬNo 24
农业与技术 ※农业科学
制作用最高ꎬ IC50 为 0 34ppmꎮ Naveen 等 [13] 的研究
李丽等 [21] 的研究表明ꎬ 经酸法提取的鱿鱼墨多
肽对前列腺癌 DU - 145 和 PC - 3 细胞有增殖抑制作用ꎬ
能诱导 DU - 145 和 PC - 3 细胞凋亡ꎮ Tetsushi 等 [22] 从
鱿鱼墨中分离出抗肿瘤活性ꎬ 其中肽聚糖和酪氨酸酶
显示出抗肿瘤活性ꎮ
5 抗菌及皮肤损伤治疗
表明ꎬ MFI 具有较强的 DPPH 和 ABTS 自由基清除活
-1
性ꎬ 500mgL 的 MFI 可以阻止 β - 胡萝卜素 - 亚油酸
物ꎬ 可以被 开 发 为 海 产 品 的 天 然 防 腐 剂ꎮ R C Sari1
香醚 ( BHA) ꎻ 当 MFI 在 90℃ 下进行长达 30min 的热
高血清溶血素含量、 增强迟发型变态反应能力、 提高
6 提高免疫力
环磷酰胺 ( CP ) 是一种常用的抗肿瘤和免疫抑
制药物ꎬ 但会通过诱导睾丸中的氧化应激而对年轻男
性患者造成长期或永久的生殖损害ꎮ Luo 等
相互作用行为ꎬ 静态吸附结果表明ꎬ 黑色素在 pH4 0
的条件下络合 Fe (Ⅲ) 最大吸附量为 1 33mmolg ꎮ 吸
-1
附率受温度影响较大ꎬ 随温度上升而升高ꎻ 络合过程
中羧基、 羟基和亚胺基 3 个官能团都参与了与金属离
子的络合ꎮ 络合后可能因发生了氧化还原反应ꎬ 致使
乌贼墨多肽体外抗氧化活性研究
乌贼墨多肽体外抗氧化活性研究景奕文;杨最素;丁国芳;黄芳芳【摘要】[目的]研究乌贼墨多肽体外抗氧化活性.[方法]采用分光光度法测定多肽对2,2'-连氮基-双-(3-乙基苯并二氢噻唑林-6-磺酸)二铵盐(ABTS)、1,1-二苯基-2-三硝基苯肼(DPPH)、羟自由基(·0H)的清除能力和还原能力,利用琼脂糖凝胶电泳检测多肽对羟自由基诱导的DNA损伤的保护作用.[结果]乌贼墨多肽具有明显清除ABTS自由基(半数有效浓度EC50为3.45 mg/ml)、·DPPH自由基(EC50为4.34 mg/ml)和羟自由基(EC50为3.30 mg,/ml)的能力;当乌贼墨多肽的浓度达到5.00 mg/ml时,还原力达到0.387.[结论]乌贼墨多肽具有较好的抗氧化活性.【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2013(000)027【总页数】4页(P10971-10973,11025)【关键词】乌贼墨;多肽;抗氧化【作者】景奕文;杨最素;丁国芳;黄芳芳【作者单位】浙江海洋学院食品与医药学院,浙江省海洋生物医用制品重点工程技术研究中心,浙江舟山316004;浙江海洋学院食品与医药学院,浙江省海洋生物医用制品重点工程技术研究中心,浙江舟山316004;浙江海洋学院食品与医药学院,浙江省海洋生物医用制品重点工程技术研究中心,浙江舟山316004;浙江海洋学院食品与医药学院,浙江省海洋生物医用制品重点工程技术研究中心,浙江舟山316004【正文语种】中文【中图分类】S567自从Harman提出自由基理论以来,人们认识到人的衰老和许多疾病与其体内氧化产生的超氧化物阴离子(O2-)、过氧化氢(H2O2)、过氧化自由基(ROO)和羟自由基(-OH)等自由基相关联[1-2]。
所以,体内自由基的清除成为了防御机体疾病发生的一个重要途径。
抗氧化剂的摄入,对预防和治疗相关疾病的具有重要的意义[2]。
鱿鱼品质提升关键技术研究及调理食品开发【开题报告】
开题报告食品科学与工程鱿鱼品质提升关键技术研究及调理食品开发一、综述本课题国内外研究动态,说明选题的依据和意义浙江省是海洋经济发展的大省,而舟山作为海洋经济综合开发试验区对未来开发海洋经济有着举重轻重的地位。
近年来舟山市鱿鱼年捕捞产量10万吨,占浙江省50%;鱿鱼加工出口1亿多美元,占全国50%,产品80%以上出口日本等国;鱿鱼加工系列产品200多种,是全国最大的鱿鱼加工市场和鱿鱼制品主要出口基地。
鱿鱼调理食品营养价值高,肉味鲜美,食用方便,深受消费者欢迎。
中国鱿鱼经几十年的发展已成为世界最大的鱿鱼加工出口国。
据统计日本每年自产鱿鱼2~2.5万吨,其余依赖进口,日本鱿鱼进口量约占世界贸易总量的90% ,且市场容量逐年增长,现在年销量超过13万吨。
目前,中国是日本鱿鱼市场的主要供应国,对日出口占我国鱿鱼产业出口总量的90%。
日本消费者具有长期食用鱿鱼的习惯,对鱿鱼的质量要求高。
因此,如何提高鱿鱼加工品质,是市场竞争中各鱿鱼加工企业竞相研究解决的问题。
影响鱿鱼精深产品品质的主要因素除了烘烤工艺外,存在易褐变,保水困难等问题,多年来这些问题都制约了鱿鱼精深产品开发的脚步。
鱿鱼精深产品保水剂、抗褐变剂等作为鱿鱼加工专用的配料, 对鱿鱼调理食品的色、香、味起着重要作用, 因其特殊的口味, 而赋予了它特殊的用途,但国内一直以来多从日本进口。
研究表明只要攻克这些技术性的问题就能开发出具有一定货架寿命的鱿鱼系列产品,从而来丰富鱿鱼的产业结构,提高产品档次,扩展产品延续性,为鱿鱼的精深开发开辟出了一条新的道路,并且其技术成果可以为其它水产品的加工所借鉴,从而加快水产品精深加工技术发展脚步,带动水产加工业,促进地方经济。
有专家指出21世纪水产品的加工发展方向是方便化、模拟化、保健化和美容化。
近年来水产品的主要加工模式是先将一些水产品加工成鱼浆,然后再用生产出各式各样的贮藏和携带方便的产品,这些产品主要包括可直接食用鱼糕、鱼脯、鱼排、鱼香肠等。
鱿鱼墨多糖改善小鼠肠粘膜免疫及作用机制的研究
N K) : Mo u s e I g A a n t i b o d y( B e t h y l L a b o r a t o r i e s ) ; 山羊
R3 92. 11
摘要 : 目的
探讨鱿鱼墨多糖对小 鼠肠粘膜免疫 的影 响及其 将5 0只 B a l b / c小 鼠随机分为 5组 : 正常
作用机制 。方法
组、 模型组 、 低、 中、 高鱿鱼墨 多糖 剂量组 。采用 环磷酰 胺腹 腔注射法制备免疫低下小 鼠模型 , 并通过灌 胃给予各剂量组 小 鼠鱿鱼墨多糖饲养 2 8 d 。检测 胸腺指数/ 脾指数 ,取小 鼠 空肠段检测肠粘膜 s I g A的含量 , 观察 北太 平洋 鱿鱼 墨多糖 对肠道粘膜免疫 的保护作用 。采用酶联免疫反应和 R T — P C R 方法 , 检测了 p I g R的蛋 白质 与 mR N A表达量 。结 果 与 正
泌 活性 的多糖 类 物质鲜 有报 道 。鱿 鱼墨 主要 由黑色
常组 相 比, 模 型组小 鼠胸腺 指数 、 脾 指数分 别下 降 4 4 . 4 %、
1 9 . 4 %, 肠道 S I g A的表达量下降 4 0 . 9 %, 免疫组织化学染 色 也显示肠道 I g A明显下 降; 与模 型组 相 比, 鱿 鱼墨 多糖 可以 改善免疫低下小 鼠的机体免 疫功 能 , 并且 呈剂 量依赖 性 , 胸 腺指数在模型组水平上分别 升高了 5 3 . 5 %、 6 7 . 6 %、 6 1 . 8 %, 脾指 数分别 升高 了 1 2 . 7 %、 1 3 . 1 %、 1 5 . 6 % 。鱿 鱼墨 多糖还 可以提高小鼠肠粘 膜 S I g A的分泌功能 , 相 比于模型组小 鼠, 鱿鱼墨 多 糖 组 小 鼠 S I g A 的分泌量 分别升 高 了 4 3 . 9 %、 6 3 . 6 %、 6 8 . 7 %; 免疫 组织化学 染色 发现 鱿鱼 墨多 糖组 小 鼠 肠道 固有层 中 I g A明显增加 , 且E L I S A检测发现鱿鱼墨多糖 高剂量组小 鼠小肠 p l g R的蛋 白表达量明显增 加。结论 北 太平洋鱿鱼墨多糖能 够促进 小 鼠肠 粘膜 S I g A 的分 泌 , 并呈 剂量依赖关系 , 作 用机 制可能与其促 进浆细胞分 泌 I g A以及
鱿鱼墨多糖和黑色素的研究的开题报告
鱿鱼墨多糖和黑色素的研究的开题报告
题目:鱿鱼墨多糖和黑色素的研究
摘要:
鱿鱼墨是鱿鱼类生物中一种重要的生物染料,主要成分是多糖和黑色素。
多糖和黑色素是鱿鱼墨的主要功能成分,有很多生物学和生物医学应用。
本研究旨在探究鱿鱼墨多糖和黑色素的结构和生物活性,为进一步开发鱿鱼墨的应用提供基础研究支持。
本研究将采用各种化学和生物学方法,通过对鱿鱼墨多糖和黑色素的分离纯化、结构鉴定和生物功能评价等方面的研究,综合分析鱿鱼墨多糖和黑色素的特性和生物活性。
具体研究内容包括:
1. 多糖的提取纯化与结构分析:采用化学和生物技术手段提取纯化鱿鱼墨多糖,并利用现代分析技术如HPLC、NMR和质谱等对多糖的结构进行分析。
2. 黑色素的提取纯化与生物功能评价:通过化学和生物技术手段提取纯化鱿鱼墨中的黑色素,并对其抗氧化性能、自由基清除能力等生物功能进行评价。
3. 鱿鱼墨多糖和黑色素的相互作用与结构调控:通过纯化得到的多糖和黑色素进行相互作用实验,探究其结构调控机制。
通过以上研究,本研究有望揭示鱿鱼墨多糖和黑色素的结构和功能特性,为鱿鱼墨的应用提供基础研究支持。
同时,本研究方法也可为其他天然产物的研究提供参考。
鱿鱼墨多糖对环磷酰胺诱导的小鼠肠道黏膜损伤的保护作用及初步机制研究
鱿鱼 墨多糖
具有 保护小 鼠肠道黏膜 的作用 , 预防环磷酰胺所致 的消化 道 小 良反应 。上述作用 与鱿鱼墨 多糖 能够提 高小 鼠肠 道黏 膜
的抗氧化能力有关
S I g A分泌 的作 用 , 提 示 其 具有 保 护 肠 道 黏膜 的作 用
( 论 文另 发表 ) 。
本文 拟 深入研 究 北太 平洋 鱿鱼 墨多 糖对 化疗 小 鼠肠 道黏 膜损 伤 的保 护 作 用 , 并 对 其作 用 机 制 进 行
・
1 5 5 8‘
中 国 药理 学通 报
C h i n e s e P h a r m a c o l 0 g i c a l B u l l e t i n 2 0 1 3 N o v ; 2 9 ( 1 1 ) : 1 5 5 8~ 6 2
网络 出版 时 间 : 2 0 1 3—1 0— 2 6 1 5: 2 9 网络 出版 地 址 : h t t p : / / w w w . c n k i . n e t / k c ms / d e t a i l / 3 41 0 8 6 . R. 2 0 1 31 0 2 6 . 1 5 2 9 . 0 2 0 . h t ml
摘要 : 目的 观察北太平洋鱿鱼墨 多糖对化 疗小 鼠肠道黏 膜 损伤 的保护作用 , 并初步探讨其作用机 制。方法 连续 给小
鼠灌 胃鱿 鱼墨 多糖 2 8 d , d 2 6 、 2 7连 续 两 天 腹 腔 注射 环 磷 酰
胺建立化疗小 鼠模 型 , d 2 9 脱 颈椎 处死 。取空肠组织进行 石 蜡切片 , H E染色 , 统计 绒毛 高度 、 隐窝深 度及 绒毛高 度与 隐 窝深度 比值 ( V / C) 。取肠组织匀 浆进 行蛋 白质 电泳 , 考 马斯 亮蓝染 色观察特异性表 达 的蛋 白质 。取 特异 性表 达蛋 白质
鱿鱼墨黏多糖对小鼠免疫调节作用的研究
鱿鱼墨黏多糖对小鼠免疫调节作用的研究刘治东;王静凤;王玉明;薛勇;赵芹;薛长湖【期刊名称】《中国海洋大学学报:自然科学版》【年(卷),期】2009(0)S1【摘要】采用免疫学评价方法,研究了鱿鱼墨黏多糖对小鼠免疫功能的调节作用。
Balb/c小鼠随机分为正常对照组、模型对照组、阳性对照组和鱿鱼墨黏多糖低、中、高剂量组,每组10只。
除正常组外,其余皮下注射氢化可的松造成免疫低下模型后灌胃。
鱿鱼墨黏多糖组小鼠分别灌胃不同剂量的鱿鱼墨黏多糖溶液(分别为25,50和100 mg/kg),阳性对照组灌胃盐酸左旋咪唑(20 mg/kg),进行免疫指标的测定。
实验结果表明,鱿鱼墨黏多糖能显著提高免疫低下小鼠的脾脏/体重比值(P<0.05,P<0.01)、提高血清溶血素含量(P<0.05)、增强迟发型变态反应能力(P<0.05,P<0.01)、提高腹腔巨噬细胞吞噬鸡红细胞能力(P<0.05,P<0.01)和碳廓清能力(P<0.05,P<0.01)。
提示鱿鱼墨黏多糖能提高免疫低下小鼠的体液免疫、细胞免疫和非特异性免疫功能。
【总页数】4页(P147-150)【关键词】鱿鱼墨黏多糖;免疫低下小鼠;特异性免疫;非特异性免疫【作者】刘治东;王静凤;王玉明;薛勇;赵芹;薛长湖【作者单位】中国海洋大学海洋生命学院;中国海洋大学食品科学与工程学院【正文语种】中文【中图分类】S917.4【相关文献】1.鱿鱼墨多糖改善小鼠肠粘膜免疫及作用机制的研究 [J], 左涛;李学敏;曹露;王静凤;王玉明;李兆杰;薛长湖;唐庆娟2.鱿鱼墨多糖对环磷酰胺诱导的小鼠肠道黏膜损伤的保护作用及初步机制研究 [J], 曹露;左涛;李学敏;于卿;曹斌斌;王静凤;王玉明;薛长湖;唐庆娟3.白芷多糖对免疫低下模型小鼠免疫调节作用的研究 [J], 刘红萍;吴江;王芬;刘家瑞4.黄芪多糖对实验性自身免疫性脑脊髓炎小鼠脾细胞的免疫调节作用研究 [J], 刘建春;张红珍;李俊莲;樊慧杰;柴智;尉杰忠;于婧文;肖保国;马存根5.泰山四叶参多糖对幼年小鼠和免疫抑制小鼠的免疫调节作用 [J], 王德才;邱玉玉;张显忠;高丽君因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
免疫调节肽对白血病细胞增殖、凋亡与分化的作用研究的开题报告
免疫调节肽对白血病细胞增殖、凋亡与分化的作用研究的开题报告1. 研究背景和意义白血病是一类危害巨大的血液系统恶性肿瘤,其发病率和致死率呈逐年上升的趋势。
目前治疗白血病的药物主要包括化疗药物和干细胞移植,但这些方法存在一定的副作用和局限性,因此开发新的治疗手段势在必行。
免疫调节肽是一类具有广泛生物活性的多肽,已被证实具有抗炎、免疫调节、抗氧化等多种生物功能。
研究表明,免疫调节肽对癌细胞增殖、凋亡和分化具有显著的调节作用,因此可能成为治疗白血病的潜在药物。
基于此,本研究旨在探究免疫调节肽对白血病细胞的生物学效应及其分子机制,为开发治疗白血病的新型药物提供理论基础和实验依据。
2. 研究内容和技术路线本研究选取几种常见的白血病细胞系(如K562、HL60等),采用细胞培养、MTT法、流式细胞术、Western blot等技术方法,研究免疫调节肽对白血病细胞增殖、凋亡和分化的影响及其可能的分子机制。
具体实验流程如下:(1)培养白血病细胞系将选取的白血病细胞系接种于含有10%热灭菌胎牛血清的RPMI 1640培养基中,并放置在37℃下的恒温培养箱内培养24-48小时。
(2)实验分组将白血病细胞系分成对照组和实验组,实验组分别添加不同剂量的免疫调节肽,并在不同时间点取样,进行后续实验。
(3)MTT法检测细胞增殖用MTT法检测细胞增殖情况,观察不同剂量免疫调节肽对白血病细胞增殖的影响。
(4)细胞凋亡率检测利用流式细胞术检测细胞凋亡率,观察不同剂量免疫调节肽对白血病细胞凋亡的影响。
(5)Western blot检测蛋白表达水平用Western blot技术检测细胞内相关蛋白的表达水平,如caspase-3、PARP、Bax、Bcl-2等,探讨免疫调节肽对白血病细胞凋亡的分子机制。
3. 预期结果和意义通过本研究,我们可以探究免疫调节肽对白血病细胞的影响及其分子机制,为开发治疗白血病的新型药物提供理论基础和实验依据。
多肽片段连接、衍生物及偶合物的化学合成研究的开题报告
多肽片段连接、衍生物及偶合物的化学合成研究的开题报告题目:多肽片段连接、衍生物及偶合物的化学合成研究一、选题背景多肽是由氨基酸分子通过肽键连接而成的,其分子量通常在数千到数十万之间。
多肽在生物体内扮演着重要的角色,如发挥生物信息传递、细胞信号转导、抗菌等作用。
由于多肽分子骨架不稳定,在药物研发和工业化生产过程中存在困难。
因此,寻找多肽的替代物质以及对多肽进行改造,成为当前的热点领域之一。
连接、衍生物及偶合物的化学合成是多肽化学研究的重要领域之一。
通过改变连接方式、引入不同的官能团、组成复合结构,可以调控多肽的稳定性、活性和药代动力学性质。
因此,多肽片段连接、衍生物及偶合物的化学合成研究具有广泛的应用前景,尤其是在新型药物的研发中。
二、研究目的本研究旨在探索多肽片段连接、衍生物及偶合物的化学合成方法,并对其结构和性质进行表征和分析,为新型药物的研发提供一定的理论和实验基础。
三、研究内容1. 多肽片段的设计与合成根据目标多肽的序列及功能需求,设计合成相应的多肽片段,并通过化学合成方法进行制备。
2. 多肽片段的连接通过不同的化学反应方式,将多肽片段连接成线性、环状、支链等结构,并对其结构进行表征和分析。
3. 多肽衍生物的合成引入各种不同的官能团(如羟基、氨基、硫醇等),将多肽衍生物进行合成,并进行结构和性质的表征。
4. 多肽偶合物的合成通过与其他生物活性分子(如抗体、酶)进行偶联,获得具有双重生物活性的多肽偶合物,并进行结构和性质的表征。
四、研究意义本研究将探索多肽片段连接、衍生物及偶合物的化学合成方法,为多肽替代物质的研发提供一定的理论和实验基础。
通过制备不同结构、不同功能的多肽连接体、衍生物和偶合物,为多肽类药物的研发提供新的思路和方法。
同时也可以拓展多肽连接相关的化学合成领域的研究,为相关领域的进一步发展提供支持和创新。
鱿鱼墨多糖和黑色素的研究的开题报告
鱿鱼墨多糖和黑色素的研究的开题报告一、研究背景鱿鱼是一种优质的海鲜,其中含有丰富的墨汁,墨汁已被广泛应用于食品加工和医药领域。
鱿鱼墨中的多糖和黑色素是墨汁的重要成分,具有很高的应用价值。
多糖具有多种生物学活性,如免疫调节、抗氧化、抗菌等作用。
黑色素则可作为一种天然色素,广泛应用于食品、化妆品及医药领域中。
二、研究内容本研究将通过分离、提取和纯化鱿鱼墨中的多糖和黑色素,探究它们的结构、性质及生物学活性,并对其应用进行探索研究。
1.分离、提取和纯化鱿鱼墨中的多糖和黑色素本研究将采用不同的纯化技术,如醇沉、离子交换层析、凝胶过滤层析等,对鱿鱼墨中的多糖和黑色素进行提取和纯化。
2.研究多糖和黑色素的结构和性质通过对多糖和黑色素的纯化产物进行质谱、色谱和核磁共振等物化手段的分析,以确定其分子结构和性质。
3.研究多糖和黑色素的生物学活性通过检测多糖和黑色素的免疫调节、抗氧化、抗菌等生物学活性,以探究其在医药和食品领域中的应用潜力。
三、研究意义1.鱿鱼墨多糖和黑色素的研究有助于开发新的药物和食品添加剂,丰富市场的多样性,提高经济效益。
2.对鱿鱼墨中多糖和黑色素的深入研究,有助于丰富多糖和黑色素的结构与性质,为完善其应用提供更多有益信息。
3.本研究结果为相关领域的产品规范化、标准化提供了先决条件。
四、研究方法1.采集鱿鱼并取出墨囊,将墨汁分离收集。
2.利用醇沉、离子交换层析、凝胶过滤层析等纯化技术对墨汁中的多糖和黑色素进行提取和纯化。
3.利用质谱、色谱、核磁共振等物化手段对多糖和黑色素进行结构和性质的鉴定。
4.利用细胞、动物模型等方法,检测多糖和黑色素的生物学活性。
五、研究预期结果本研究预计将成功分离、提取和纯化鱿鱼墨中的多糖和黑色素,并通过物化手段和生物学活性的检测,深入探究其结构、性质及生物学活性。
同时,本研究有望为鱿鱼墨多糖和黑色素的应用提供科学依据,为丰富市场多样性、提高经济效益做出贡献。
鱿鱼肝脏中鱼油和降血压活性肽的制备及研究的开题报告
鱿鱼肝脏中鱼油和降血压活性肽的制备及研究的开
题报告
一、选题背景及意义
高血压是全球公认的血管性疾病,是引发心脑血管疾病的重要因素之一。
鱿鱼肝脏是一种潜在的海洋资源,含有丰富的鱼油和蛋白质,具有降血压、改善心血管健康等作用,是一种优质的功能性食品成分。
因此,对鱿鱼肝脏中鱼油和降血压活性肽的制备及研究具有重要的科学意义和应用价值。
二、研究内容和方法
(一)研究内容:
1. 鱿鱼肝脏中鱼油的提取和分离纯化;
2. 鱿鱼肝脏中降血压活性肽的提取和分离纯化;
3. 鱿鱼肝脏中鱼油和降血压活性肽的生物学活性研究;
4. 鱿鱼肝脏中鱼油和降血压活性肽的应用研究。
(二)研究方法:
1. 鱿鱼肝脏的提取:选用传统浸提、超临界二氧化碳提取等方法进行鱿鱼肝脏中鱼油的提取;
2. 鱿鱼肝脏中降血压活性肽的提取:采用超声波辅助酶解等方法进行鱿鱼肝脏中降血压活性肽的提取;
3. 鱿鱼肝脏中鱼油和降血压活性肽的生物学活性研究:通过细胞实验、动物实验等方法,研究鱿鱼肝脏中鱼油和降血压活性肽的生物学活性;
4. 鱿鱼肝脏中鱼油和降血压活性肽的应用研究:将提取的鱿鱼肝脏
中鱼油和降血压活性肽用于制备功能性食品,探索其应用价值。
三、预期成果及意义
1. 成果:成功从鱿鱼肝脏中提取出高质量的鱼油和降血压活性肽,
并对其生物学活性进行评价和研究。
2. 意义:为海产品的深加工和开发提供新思路,同时为高血压等心
血管疾病的预防和治疗提供新的选择,具有重要的科学意义和应用价值。
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开题报告
药学
鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞的增值抑制研究
一、综述本课题国内外研究动态,说明选题的依据和意义
癌症已经成为影响人类生命健康与致死的重要因素,经典的化疗药物虽然可以在一定程度上抑制肿瘤生长,但同时也损害了患者的正常细胞与器官,给病人带来极大的痛苦。
随着海洋药物和肿瘤细胞分子生物学研究的快速进展,恶性肿瘤的细胞内信号转导、细胞凋亡的诱导、细胞的转移、血管生成以及细胞与胞外基质的相互作用等各种基本过程正逐渐被阐明。
以一些与肿瘤细胞分化增殖相关的细胞信号转导通路的关键酶(蛋白酪氨酸激酶、芳香化酶、拓朴异构酶I等)作为药物筛选靶点已经被大量研究,并由此发现了选择性地作用于特定靶位的高效、低毒、特异性强的新型抗肿瘤药,即分子靶向药(Molecular targeted drugs, MTD) 和抗体靶向药(Antibody targeted drugs,ATD),该类型药物已成为当今世界各国抗肿瘤药物研发的重要方向。
乳腺癌是女性最常见的恶性肿瘤之一,其发病率在我国女性恶性肿瘤中居第二位,且呈明显上升的趋势,尤其在一些沿海发达地区,如上海市,其发病率在2000年已跃居女性恶性肿瘤发病率之首。
所以能找到一种特定靶位的高效、低毒、特异性强的新型抗肿瘤药尤为重要。
生物活性肽(biologically active peptides)是指那些具有特殊生理活性的肽类,是世界上药物及保健品研究的热点,目前通过提取生产的活性肽主要来源于陆地的蛋白源,如牛乳酯蛋白、大豆蛋白、玉米醇溶蛋白等。
海洋生物为了适应高盐、高压、低温、缺氧等极端的海洋生境,其蛋白质的氨基酸组成或序列都与陆地生物蛋白有很大的不同,在种类和数量上也远远超过陆地蛋白资源。
近年来对海洋生物活性肽 ,特别是抗肿瘤活性肽的研究取得了很大进展。
人们现如今所提取的抗肿瘤蛋白主要有从海鞘、海绵、软体动物、珊瑚中提取的环行多肽,从贝类、海参、乌贼墨等中提取的糖蛋白,还有从海藻、鲎、鲨鱼软骨中提取的多肽。
但是由于海洋资源的开发利用较晚,海洋活性肽尚未形成规模产业,因此,借鉴陆地活性肽开发的酶工程技术,以海洋生物蛋白资源为原料,通过对酶解、制备等工艺的综合研究,即可研制出陆地蛋白源和化学合成所无法生产的系列天然、高效、新颖的生物活性肽。
鱿鱼盛产于我国渤海、黄海等海域,现代研究表明,鱿鱼蛋白质含量较高,并含有丰富的维生素、微量元素及较高含量的不饱和脂肪酸,被作为防治动脉粥样硬化及预防高血压的保健食品。
已有研究表明,鱿鱼蛋白提取物有抗肿瘤、抗衰老、抗病毒和抗菌等功能,具有增加机体免疫能力、降低血脂含量的功效。
浙江海洋学院地处海岛,附近海域鱿鱼十分丰富,仅嵊泗县鱿鱼年产量就达5吨左右,样品采集方便,价格较低。
长期以来,对于鱿鱼的开发利用以鲜品为主,部分被加工成为干品及罐装品,所有这些产品都未能使鱿鱼的药用价值得到利用。
近年来,研究人员开始从鱿鱼中提取多糖、蛋白质、多肽等活性物质,试图开发利用其在疾病治疗与预防方面的功能,但是对于鱿鱼酸解多肽抗肿瘤的研究在国内外尚属空白。
二、研究的基本内容,拟解决的主要问题:
主要内容:
1. 酸解工艺部分:选取四种常见的酸,通过正交实验,确定鱿鱼的最佳酸解条件。
本人对该部分的见解:首先,正交实验中各因素与水平的选择要合理;其次,实验号的选择要具有随机性;最后,为了尽可能的减少误差,每个实验号做三个平行实验,取其平均值。
2. 分离纯化部分:以抑制乳腺癌细胞增殖率以及在显微镜下观察的细胞形态为评价标准,通过超滤法、色谱层析等技术分离纯化出具有较强抗乳腺癌细胞增殖的酸解多肽。
本人对该部分的见解:该部分的关键点是色谱柱平衡缓冲液及洗脱液的选择,洗脱流速及洗脱液的收集。
3.酸解物抗乳腺癌作用:选用HE染色法、MTT法、流式细胞术等技术方法,研究酸解多肽对乳腺癌细胞形态的影响、酸解多肽作用浓度对乳腺癌细胞增殖率及凋亡率的影响。
本人对该部分的见解:本部分在三个部分当中具有重要的位置,该部分所采用的方法和技术是整个实验成败的关键,因为本研究的最终目的是分析酸解多肽抗乳腺癌细胞的作用,从而为将来抗肿瘤保健品和药品的开发提供理论和技术支持
4.采用mtt法培养肿瘤细胞,研究其抑制作用。
拟解决的主要问题:
1.酸解技术的研究。
2.分离纯化过程中超滤技术、层析技术、高效液相色谱等技术的研究。
3.凝胶电泳技术的研究。
4.细胞培养技术、HE染色技术、MTT法、流式细胞术。
三、研究步骤、方法及措施:
步骤:
1. 选用4种酸进行比较,考虑到酸提料液比、酸的种类、酸解温度及酸解时间对鱿鱼墨多肽的影响,最终确定酸解鱿鱼墨多肽的最佳条件。
2. 利用超滤法、凝胶层析法、离子交换层析法、反相高效液相色谱法等分离纯化出具有高效抗乳腺癌活性的酸解多肽。
3.鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞的增值抑制研究。
MTT法研究不同浓度的鱿鱼墨多肽对SKBR3细胞的增值抑制率, HE染色法后在显微镜下观察鱿鱼墨多肽作用后SKBR3细胞的形态。
措施:购买鱿鱼,提取分离出鱿鱼多肽粗提物,。
分析各种因素对于对鱿鱼多肽提取量的影响。
四、参考文献
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