EB病毒潜伏膜蛋白LMP_1在鼻咽癌中的表达及临床意义

近年来，对 LMP-1 的生物学研究还表明，其可以 促进 EB 病毒阳性的鼻咽癌细胞转移。体内外研究中 应用 RNA 干扰技术，抑制鼻咽癌细胞中 LMP-1 基因 的表达，使细胞的贴壁生长能力大大提高，基膜穿透能
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实用癌症杂志 2010 年 11 月第 25 卷第 6 期 The Practical Journal of Cancer，November 2010，Vol 25，No． 6
采用 SPSS 16． 0 统计软件处理，行 χ2 检验，P ＜ 0． 05为差异有统计学意义。
2 结果
2． 1 鼻咽拭子中 LMP-1 表达情况 试 验 组 129 例 中 114 例 LMP-1 呈 阳 性 表 达
（ 88． 37% ） 。经 PCR 法检测 LMP-1 阳性表达的条带 见图 1，maker 在 100 ～ 1 000 bp，约在 290 bp 处可见清 晰的扩增条带。
【Key words】 Nasopharyngeal carcinoma （ NPC） ； Epstein-Barr virus（ EBV） ； Latent membrane protein-1 （ LMP-1） （ The Practical Journal of Cancer，2010，25： 564 ～ 567）
【关键词】 鼻咽癌； EB 病毒； 潜伏膜蛋白 LMP-1 中图分类号： R739． 63 文献标识码： A 文章编号： 1001-5930（ 2010） 06-0564-04
Expressions of LMP-1 in Nasopharyngeal Carcinoma and its Clinical Significance
13
89． 08
91
10
90． 10﹟
23
5
82． 14
﹟为组内比较 P ＞ 0． 05； ※为 N0 期与 N1 ～ 3 期比较，χ2 = 9． 7925，P ＜ 0． 05
3 讨论
EB 病毒是 1 种具有致瘤潜能的 DNA 疱疹病毒， 其基因产物有 3 种潜伏性膜蛋白 （ LMP1、LMP2A 和 LMP2B） ，其中 LMP-1 是 1984 年在 EB 病毒转化的 B 淋巴细胞中发现的含量最丰富的病毒产物，其生物学 功能具有多效性，Wang 等研究发现，LMP-1 表达会使 鼠成纤维细胞 Rat -1 细胞的形态学发生变化，导致细 胞无限制增 殖，细 胞 间 失 去 接 触 抑 制，并 发 生 恶 性 转 化［2］，此后大量研究还表明其可恶性转化原代 B 细胞 和人上皮细胞，而被列为癌基因。
（ LMP-1） in nasopharyngeal carcinoma （ NPC） ． Methods 129 patients with pathologically confirmed NPC between 2007 and 2008 were involved in this study． After informed consent，nasopharyngeal swab was performed to obtain cells for the LMP-1 PCR assay． Results Of the 129 patients，LMP-1 was expressed in 114 （ 88． 37% ） ． The positive expression rate of LMP-1 in patients with neck lymph node metastasis was significantly higher than that without neck lymph node metastasis （ P ＜ 0． 05） ． The expression of LMP-1 was not correlated with age，gender，clinical stage，T stage，M stage and histological type （ P ＞ 0． 05） ． Conclusion The detection rate of positive LMP-1 expression was higher by PCR assay than that by immunohistochemisty． The positive expression of LMP-1 was highly correlated with lymph node metastasis． It could be used to predict the metastatic potential of NPC，and further be used as a potential target for anti － metastasis therapy．
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EB 病毒潜伏膜蛋白 LMP-1 在鼻咽癌中的表达及临床意义
林 锦 郭巧娟 韩 露 陈奇松 宗井凤 潘建基 林少俊
具体方法见参考文献［1］，若未提取到足够的 DNA 用于 PCR 检测，则重复采集。 1． 4 DNA 提取
具体方法见参考文献［1］。 1． 5 PCR 法检测 LMP-1 基因
于微量离心管中混合下列反应体系： 5 μL 提取 DNA，20 μmol / L 上 游 和 下 游 引 物 （ BN1 为 5 ’AGCGACTCTGCTGGAAATGAF-3’，BN2 为 5’-TGATTAGCTAA GGCATTCCCA -3 ’） 各 1 μL，2． 5 mmol / L dNTP（ 脱氧三磷酸核苷） 5 μL，10 × PCR MIX 5 μL， 0． 25 μL 单位耐热 DNA 聚合酶（ 含 1． 25 U） ，加无菌水 至 50 μL。PCR 程序： 95℃ 预变性 5 min，热循环： 35 个 循环，94℃ 变性 30 s、50℃ 退火 30 s，72℃ 延伸 60 s。最 后 72℃ 延伸 10 min，4℃ 保存。琼凝胶电泳，溴乙锭染 色显影 DNA，所使用的 DNA marker 为上海博鸿公司 产品，PCR 产物在胶上显示位于 100 bp 与 1 000 bp 间，符合实验的设想，说明所得的条带为 Lmp-1，另以 B95-8 细胞提取的 DNA 经 PCR 检测的阳性条带作为 阳性对照，无菌水反应作为阴性对照。 1． 6 统计学分析
EB 病毒（ Epstein-Barr virus，EBV） 是 1 种人类致 瘤性 DNA 疱疹病毒，与鼻咽癌（ nasopharyngeal carcinoma，NPC） 发生密切相关。潜伏膜蛋白 1 （ latent membrane protein-1，LMP-1） 是 EB 病毒编码产物中被证实 具有癌基因功能的蛋白质之一，现已证明其可通过一 系列复杂的调节机制抑制细胞凋亡，促进细胞无限制 增生，可能在鼻咽癌的发生、发展过程中起关键作用。 本研究采用 PCR 方法，检测鼻咽癌患者鼻咽拭子中 LMP-1 的表达情况，分析 LMP-1 与 NPC 临床病理特征 的相关性，以为 LMP-1 应用于诊断及靶向性治疗提供 实验依据。
图 1 PCR 法检测 LMP-1 基因的表达
2． 2 LMP-1 表达与鼻咽癌临床病理特征的关系 （ 表 1）
LMP-1 表达与鼻咽癌患者性别、年龄、T 分期、临 床分期无显著相关性（ P ＞ 0． 05） 。N0 期与 N1 ～ 3 期比 较 LMP-1 阳性表达率差异具有显著性（ χ2 = 9． 7925，P ＜ 0． 05） 。远处转移组与无远处转移组 LMP-1 阳性表 达率差异无统计学意义（ P ＞ 0． 05） 。
PCR 仪（ BIO-RAD 公司产品） ，DNA 试剂盒 （ QI-
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GEN 公司产品） ，DNA 聚合酶（ TAKARA 公司产品） ， Marker（ 上海博鸿公司产品） ，贝克曼高速冷冻离心机 （ Sigma 公司产品） ，CO2 培养箱 （ Thermo 公司产品） ， 紫外投射分析仪（ 上海康禾光电仪器有限公司产品） ， B95-8 细胞株来自我院放射生物学实验室。 1． 3 鼻咽拭子标本采集
LIN Jin，GUO Qiao-juan，HAN Lu，et al． Fujian Medical University，Fujian Provincial Tumor Hospital，Fuzhou，350014 【Abstract】 Objective To investigate the clinical significance of Epstein-Barr virus （ EBV） latent membrane protein-1
122 7
10 119
101 28
阳性
LMP － 1 表达 阴性 阳性率（ % ）
83
9
90． 22﹟
31
6
83． 78
66
9
88． 00﹟
48
6
88． 89
28
7
80． 00﹟
86
8
91． 50
11
1
91． 67※
103
14
88． 03
10
15
87． 70﹟
7
0
100． 00
8
2
80． 00﹟
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表 1 LMP-1 表达与鼻咽癌临床病理特征的关系（ 例）
临床病理因素
性别 男 女
年龄（ 岁） ＜ 50 ≥50
T 分期 T1 ～ 2 T3 ～ 4
N 分期 N0 N1 ～ 3