分光光度法测定水果蔬菜及药物中vc

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•2. 标准曲线的绘制
• 加入准确吸取的40μg/L抗坏血酸标准溶液1.00、2.00、 3.00、4.00、5.00、6.00、7.00、8.00 mL分别置于系列洁净50 mL 容量瓶中，依次加入100 μg/L Fe3+ 标准溶液2.0 mL，摇匀； 再加入5.0 mL 0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液，摇匀；加 入5.0 mL HAc-NaAc缓冲溶液，摇匀；再加入2.0 mL 1 % （W/V） 氟化钠溶液，用水稀释至50 mL，摇匀。以相应试 剂空白作参比，在最大测定波长λmax处测定吸光度As, 用 Excel电子表格绘制标准曲线，并计算回归方程。
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2020/11/10
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•2、标准曲线的绘制与待测样品测定
标准溶液
水果 Vc药片
吸取溶液
/mL
1.00 2.00 3.00 4.00 5.00 6.00 7.00 8.00
V1
V2
Vc的含量 /μg.mL-1
吸光度A
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•附:光度计的使用说明
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•六、数据记录和结果处理 •1、吸收曲线的绘制
•分光光度计型号：
比色皿厚度： 年 月 日
λ/nm 420 430 440 450 460 470 480 490
A λ/nm 500 510 520 530 540 550 560
A
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•三、实验原理
•+ 2 Fe3+ =
•+ 2 Fe 2+ + 2H+
•Fe2+ +3 Phen（邻菲罗啉） = Fe (Phen)3 2+ (红色，λmax =510nm ) •Fe3+ (剩余) + 3• Phen（邻菲罗啉）= Fe (Phen)3 3+ •Fe (Phen)3 3+ + hγ = Fe (Phen)3 2+ •Fe (Phen)3 3+ + 6F- = FeF63- + 3 Phen
0.2 mol/L HAc-NaAc缓冲溶液（pH 4.75）；
•
1%（W/V） 氟化钠溶液；
•
1% HAc溶液。
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•五、实验步骤
•1、吸收曲线的绘制
• 加入准确吸取的40μg/L抗坏血酸标准溶液5.00 mL置于系 列洁净50 mL 容量瓶中，依次加入100 μg/L Fe3+ 标准溶液2.0 mL，摇匀；再加入5.0mL0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液， 摇匀；加入5.0 mLHAc-NaAc缓冲溶液，摇匀；再加入2.0 mL 1 %（W/V）氟化钠溶液，用水稀释至50 mL，摇匀。同时制 作相应的试剂空白。以相应试剂空白作参比，测定不同波长 条件下的吸光度A，绘制吸收曲线，选择最大测定波长λmax。
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•3、水果或蔬菜汁样品溶液的制备
•新鲜水果去皮、去核后 •或
•蔬菜去根，洗干净，沥干
•准确称重 •组织捣碎机中捣碎
•转移至烧杯中
•50 mL 1 % HAc 溶液浸泡、混匀
•脱脂棉粗滤
•精滤液转移至250 mL容量瓶中
•待测
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•摇匀，静置
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2020/11/10
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•一、背景知识
• 抗坏血酸，也叫维生素C，易溶于水。自然界存在两种 形式的维生坏血酸易被氧化成脱氢抗坏血酸，脱 氢抗坏血酸又易还原成抗坏血酸。化学名称为：L-3-氧代苏 己糖醛酸内酯，分子式为C6H8O6，相对分子质量：176.13。 两种天然形式都可被人体利用，体内也能有效地利用两种合 成的L-抗坏血酸。
•1% HAc溶液定容
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•4、药片溶液的制备
•准确称重 •VC片20片
•求平均片重后研细
•取适量(相当于VC l00 mg)精确称重后
•置1000 mL容量瓶 •加水到刻度 •摇匀，并过滤
•弃去初滤液，准确吸取续滤液2 mL置50 mL容量瓶中 •待测
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•四、仪器与试剂
•仪器： 电子天平；分光光度计（1厘米比色皿）；
•
移液管（5、10 mL）；比色管或容量瓶(25或50 mL)
•试剂： 100 μg/L Fe3+ 标准溶液；
•
0.1%（W/V）邻菲罗啉(Phen)溶液；
•
40μg/mL抗坏血酸；
•
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•二、实验目的 •1、掌握铁（II）-邻菲罗啉配合物测定抗坏血酸的原理与方法； •2、理解铁（II）-邻菲罗啉配合物测定抗坏血酸的条件； •3、掌握利用配位掩蔽法消除光还原作用的方法； •4、掌握用Excel电子表格法绘制吸收曲线及标准曲线的方法； •5、了解抗坏血酸测定的意义， •6、了解样品处理与制备、含量测定的全过程。
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• 维生素C是目前人类所知道的用途最为广泛的治疗药，预 防维生素C缺乏症，提高动物免疫力和抗应急能力，小剂量维生 素C可以预防和治疗坏血病，大剂量VC可以提高动物在疾病、 逆境和生理应急等情况下的抵抗能力，它帮助人体对铁的吸收， 可防止有害(低密度)胆固醇的氧化。维生素Ｃ也是非常有效的自 由基清除剂。但维生素C极不稳定，它很容易氧化，加热、暴露 于空气中，碱性溶液及金属离子Cu2＋、Fe3＋等,都能加速其氧化， 易受光、湿和强力挤压等因素影响而被破坏。维生素C广泛存在 于新鲜植物如水果、蔬菜中，由于植物中的有机酸及其他抗氧 化剂的保护使它免受破坏。