DNA检测中琼脂糖凝胶重复使用效果_秦艳晶

DNA检测中琼脂糖凝胶重复使用效果
秦艳晶高丽君秦文斌
(包头医学院基因诊断研究所,内蒙古包头014010)
摘要目的:摸索在DNA检测中琼脂糖凝胶多次重复使用的效果。

方法:按常规制备琼脂糖凝胶,胶不离框,上样、电泳,电泳后胶连框一起放于饭盒内,盖好盒盖,于4e冰箱保存。

下次使用时保证电泳方向与前次相反,即把胶调转方向加样、电泳。

结果:重复使用6~7次,DNA条带仍清晰可见。

结论:这是一种简便易行、效率高、节省实验经费并易于推广的好方法。

关键词DNA;检测;琼脂糖凝胶;重复使用;电泳
The R euse of A garose Ge l in DNA D etection
Q IN Yanjing,GAO L ijun,Q IN W enb i n
(G ene D iagno sis Ins titute of Baotou M e d ical Co llege,Baotou014010,China)
Abstrac t O bjecti ve:T o fi nd ou t a si m ple m ethod for the reuse o f aga rose ge l i n DNA de tecti on.M ethods:A garose gelw as prepared by conven tiona lm ethod,and then t he sa m ples we re l oaded i nto the sl o t o f t he g e.l A fter e lectrophoresis,t he ag arose ge l w it h t he m o l d w as put i n t o a l unch box,and was st o red i n4e re frigerator.T he e l ectrophoresis d i recti on shou l d be opposite to the prev ious ti m e when the ge lw as reused.R esu lts:T he agarose gel cou l d be reused about6-7ti m es,and the DNA bands w ere still clear l y v isi b l e.Conc l usion:The m e t hod is si m p l e,effi c i ent,econo m y and easy t o popular i ze.
K ey word s DNA;D etection;A ga rose ge;l R euse;E l ectrophoresi s
琼脂糖凝胶电泳是核酸研究工作中不可缺少的重要分析手段,它广泛应用于基础理论研究、农业科学、医药卫生、工业生产、国防科研、法医学和商检等许多领域。

虽然很多参考书上均有该方法的介绍,但实际操作中的一些技巧是无法从书本上获得的。

琼脂糖凝胶重复使用是核酸研究实验室力行解决的实际问题。

因为反复制胶既费时又费力,浪费经费。

本文介绍琼脂糖凝胶电泳重复使用的简易方法,这些经验源自多年的教学、科研实践,操作简便、节省经费、电泳条带清晰,结果容易判定,能满足生物化学和分子生物学的教学科研的实验需要,并已在我院研究生教学和科研中得到应用。

1材料与方法
1.1材料自配0.5@TBE制胶缓冲液[1],琼脂糖(西班牙生产国内分装),制胶槽,梳子,电泳仪和水平电泳槽(北京六一厂生产)。

1.2方法
1.2.1制胶按常规制备琼脂糖凝胶[2],取0.5@ TBE缓冲液45mL,置于200mL锥形瓶中,加入0.9g 琼脂糖,于电磁炉上水浴锅内煮沸约6m in,边煮边摇,至琼脂糖全部熔化,此为2%琼脂糖凝胶液。

1.2.2倒胶将胶槽置于水平支持物上,插上样品梳子。

向冷却至60e左右的琼脂糖胶液中加入溴乙锭50L L,混匀,倒入胶槽内,使胶液形成均匀的胶层。

室温自然冷却,待胶完全凝固后,置于饭盒内盖好盒盖,于8e冰箱内放置约10m in。

从冰箱取出胶后再拔掉梳子备用。

注意不要损伤梳底部的凝胶。

1.2.3加样将扩增好的PCR产物12L L直接加入梳子孔中,再用0.5@TBE缓冲液补满加样孔。

1.2.4电泳连胶带框一起放入电泳槽内,用纱布搭桥。

接通电源,电压一般为5~15V/c m。

电泳20~ 30m i n即可。

1.2.5判定结果电泳好的琼脂糖凝胶连框带胶一起放在自制的紫外灯箱上,用数码相机拍照留图,连接电脑,看图判定结果。

1.2.6重复使用琼脂糖凝胶电泳前先在紫外灯箱上看好上次电泳的方向,使本次的电泳方向与前次相反;加样,补满缓冲液,电泳方法重复1.2.3至1.2.5。

2结果
一次制胶可重复使用6~7次,方法相同。

图1为本所日常工作中病原体DNA检测电泳图,新制的琼脂糖凝胶第一次使用,DNA条带清晰,利于
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2011年第27卷第1期V o l127N o112011
包头医学院学报
J OURNAL O F BAOTOU M ED I CAL COLLEGE
结果判定。

图1琼脂糖凝胶第一次使用(新胶)
图2仍为本所日常工作中病原体DNA检测电泳图,琼脂糖凝胶第6次重复使用。

DNA条带仍整齐可见,同样容易判定结果。

图2琼脂糖凝胶第6次使用(重复胶)
3讨论
琼脂糖凝胶电泳中重复制胶费时、费力、浪费经费。

为了解决这一问题,赵绍林等[3]报道的在琼脂糖凝胶配制中加入各种防腐剂后,将制好的超薄琼脂糖凝胶放在湿盒中,置于玻璃干燥容器中或用铝箔密封保存。

蒋安等[4]报道把用过的胶抠下来,重新加热融化再制胶。

刘水平和罗志勇[5]报道一次多煮些凝胶放于三角烧瓶中,每次用前先融化再制胶。

我们在长期反复实验过程中,不断积累经验,在保证结果准确的前提下力行减少制胶次数。

本文介绍的琼脂糖凝胶重复使用的方法操作更简单方便,容易实施,省时、省力,效率高。

目前已在我院研究生教学和科研中推广使用。

参考文献
[1]萨姆布鲁克,D.W拉塞尔.分子克隆实验指南[M].3版,
北京:科学出版社,2002:385-396.
[2]姜泊,张亚历,周殿元.分子生物学常用实验方法[M].北
京:人民军医出版社,1996:48-49.
[3]赵绍林,吴惠毅,杨新玲,等.超薄琼脂糖凝胶的简易制备
技术[J].临床检验杂志,2004,22(4):251.
[4]蒋安,梁慧,陈旭,等.回收琼脂糖凝胶中DNA的简便方
法[J].生物技术通报,2006,(2):102-104.
[5]刘水平,罗志勇.琼脂糖凝胶电泳实验技巧[J].实用预防
医学,2006,13(4):1068.
(收稿日期:2010-06-08)
急性矽性蛋白沉着症1例
贾珂君王琳琳
(包头医学院第一附属医院职业病科,内蒙古包头014010)
矽肺是尘肺病之一,急性矽肺是矽肺的一种罕见类型,亦称为急性矽性蛋白沉着症,是由于吸入大量矽尘,引起肺部肺泡蛋白沉着,其发病机制、病理改变、影像学表现和病变过程与普通矽肺有很大的不同[1]。

现报道1例急性矽肺性蛋白沉着症病例,患者脱离粉尘后自愈。

1临床资料
患者,男,45岁,2009年5月至2009年10月在某石英矿业公司从事破碎工作,每天工作8h后在休息室休息16h,破碎机运转时无任何除尘设施,个人也无任何防护措施。

休息室位于距破碎机5m远的工房里,由于房屋简陋,破碎机运转时,粉尘在工房里飞扬。

自2009年9月开始出现胸闷、气短、活动后喘息等症状,咳嗽、痰少,无发热、胸痛、盗汗,在当地医院抗感染治疗无效。

2009年10月1日来我院进行尘肺病诊断,既往史无特殊记载。

查体:体温37.0e,脉搏80次/m i n,呼吸22次/m i n,血压120/75mmH g,双肺可闻及少量湿啰音,心脏未见异常,双下肢无浮肿。

血白细胞7.5@109/L,血沉7mm/h,结核菌素试验阴性。

肺功能:轻度限制性肺通气功能障碍,胸片示双肺大片状、弥漫分布的磨玻璃样阴影,以双肺中上为著(见图1A);胸部肺尖至肺底层间距2.5mm连续CT 扫描示双肺实质内可见多发片状结节样磨玻璃影,
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16包头医学院学报第27卷。