不同染色方法对两种禾本科牧草菌根侵染率的影响

第!"卷!第#!期
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草!地!学!报
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'899:'#115;1<6='!1!#'#!'1!=不同染色方法对两种禾本科牧草菌根侵染率的影响
张海娟# 芦光新#" 范月君! <" 周华坤! 周学丽6 窦声云6 颜珲瞞# 马!坤# 赵阳安#
##'青海大学农牧学院$青海西宁A #11#>(!'中国科学院西北高原生物研究所$青海省寒区恢复生态学重点实验室$青海西宁A #111A (6'青海省草原改良试验站$青海共和A #6111(<'青海农牧科技职业学院$青海湟源A #!#11%摘要 为探讨丛枝菌根#)V [F 94F &J VS U 4%V V E 8D J &$)B %真菌与禾本科牧草#,V J S 8:3%F 9O %V J C 39%共生情况$推进植物;微生物联合生态修复技术在退化高寒草地恢复中的应用$本研究采用盆栽试验的方法$研究了根内球囊霉#V &*+0('3$-"-"1'#,($,0%和摩西球囊霉#V &*+0(+*((,",$,B %对-川草!号+老芒麦#C &%+0(('6'-'#0(-*E F J :4J %(%'!+%和-阿坝+垂穗披碱草#C &%+0(30$"3(-)[J +%的侵染情况$比较了酸性品红'台盼蓝和墨水醋染色法对菌根侵染率的影响&结果表明!根内球囊霉和摩西球囊霉均能与-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂穗披碱草识别共生形成菌根结构$且菌根侵染率和孢子密度均为摩西球囊霉高于根内球囊霉##1'1=%(6种染色方法对菌根侵染率的影响存在差异$总体表现为台盼蓝&酸性品红&墨水醋$台盼蓝与酸性品红间差异不显著$与墨水醋之间差异显著#?#1'1=%&因此$为保证菌根观测效果$建议在测定禾本科牧草菌根侵染率时优先选用台盼蓝染色法&关键词 丛枝菌根真菌(禾本科牧草(染色(菌根侵染率
中图分类号 a 66>文献标识码 >文章编号 #115.1<6=#!1!#%#!.!A 6A .15
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E J 8Y V %X 8:43A #!#11$*E 8:J %67&/(')/!+%3]\&%V 3W E 39U S [8%989[3W Z 33:J V [
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39$J :T \V %;S %W 3W E 3J \\&84J W 8%:%O \&J :WS 84V %%V C J :89S34%&%C 84J &V 39W %V J W 8%:W 34E :%&%C U 8:W E 3V 39W %V J W 8%:%O T 3C V J T 3T J &\
8:3C V J 99&J :T $W E 38:O 34W 8%:%O V &*+0('3$-"-"1'#,(#,0%J :T V &*+0(+*((,",#,B %%:C &%+0(('6'-'#0(-*E F J :4J %(%'!+J :T C &%+0(30$"3(-)[J +Z 3V 38:X 39W 8C J W 3TZ 8W E \%W 3]\3V 8S 3:W $J :T W E 38:O &F 3:43%O J 48T O F 4E 98:$W V U \W J :[&F 3J :T 8:`X 8:3C J V 9W J 8:8:C %:S U 4%V V E 8D J &8:O 34W 8%:V J W 3Z J 94%S \
J V 3T J W W E 39J S 3W 8S 3'+E 3V 39F &W 99E %Z 3T W E J W C &%+0(('6'-'#0(-*E F J :4J %(%'!+J :T C &%
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O V &*+0(+*((,",#,B %Z 3V 3E 8C E 3V W E J :W E J W %O V &*+0('3$-"-"1'#,(#,0%#?#1'1=%'+E 33O O 34W %O W E V 339W J 8:8:C S 3W E %T 9%:S U
;4%V V E 8D J &8:O 34W 8%:V J W 3Z J 9T 8O O 3V 3:W $[3E J X 3T J 9W V U \J :[&F 3&J 48T O F 4E 98:&8:`X 8:3C
J V $W E 3T 8O O 3V 3:43[3W Z 33:W V U \J :[&F 3J :T J 48T O F 4E 98:Z J 9:%W 98C :8O 84J :W $J :TZ J 998C :8O 84J :WZ 8W E 8:`X 8:3C
J V #?#1'1=%'+E F 9$W %3:9F V 3W E 3%[93V X J W 8%:3O O 34W %OS U 4%V V E 8D J &$W V U \J :[&F 3Z J 99F C C 39W 3T W %[3\V 3O 3V V 3T 8:T 3W 34W 8:C W E 3S U
4%V V E 8D J &8:O 34;W 8%:V J W 3%O C V J S 8:3%F 9O %V J C
39'8%09"(!&!)V [F 94F &J VS U 4%V V E 8D J &O F :C 8(,V J S 8:3%F 9O %V J C 39(2U 38:C (B U 4%V V E 8D J &8:O 34W 8%:V J W 3收稿日期 !1!#;1>;1# 修回日期 !1!#;15;!#
基金项目 青海省科技厅基础研究面上计划项目#!1!#;P I ;"#=%(青海省寒区恢复生态学重点实验室开放课题#!1!1;6%资助作者简介 张海娟##""1;%$女$青海湟中人$博士研究生$主要从事草地生态与环境保护研究$.;S J 8&!#!1=="1!!!!__
'4%S ("通信作者)F W E %V O %V 4%V V 39\%:T 3:43$.;S J 8&!&F C ]5<!__'4%S (O J :U F 37
F :45"!#>6'4%S !!丛枝菌根#)V [F 94F &J VS U
4%V V E 8D J &$)B %真菌能与禾本科#,V J S 8:%8T 9%'豆科#?3C
F S 8:%9J 3%'莎草科#/3T C 39%等植物互作形成菌丝#
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E J 3%'泡囊#$3984&39%'孢子#9\
%V 3%'丛枝#)V [F 94F &J V %等菌根Copyright©博看网 . All Rights Reserved.
第#!期张海娟等!不同染色方法对两种禾本科牧草菌根侵染率的影响
结构)#*&菌根在调控植物株高和生物量)!;<*$促进植物根系发育和对氮磷等养分的吸收)=;A*$增强植物对低温)"*'干旱)#1*'盐碱)##;#!*及重金属)#6;#<*等非生物胁迫的抵抗和耐受能力$以及改善土壤养分状况及修复严重污染的土壤等方面发挥着重要的作用)#=;#>*&近年来$由于受到气候变化和人类活动等干扰$大面积高寒草地出现不同程度退化$丛枝菌根真菌也被逐渐用于退化高寒草地恢复治理中$而适宜的草种和菌种是退化高寒草地植被和土壤得以恢复的必要物质基础)#5*&禾本科牧草如-川草!号+老芒麦#C&%+0(('6'-'#0(-*E F J:4J%(%'!+%和-阿坝+垂穗披碱草#C&%+0(30$"3(-)[J+%等因具有抗寒'耐贫瘠等特点$是高寒地区人工草地建植'天然草地补播改良和退化草地恢复治理中重要的牧草资源)#A;!1*&
菌根侵染率表示植物受)B真菌侵染的程度$其检测值会受染色效果的影响)!#*$检测菌根侵染率常用的染色方法有酸性品红'台盼蓝和墨水醋染色法&不同研究者因植物种类等不同而采用了不同的染色方法$其菌根观测效果亦有所差异&房凤如)!!*'景跃波等)!6*和晏梅静等)!<*用台盼蓝分别染色杨树#*40&0(%'杉木林#E03. 3'3)2"+'"&"3#,*&"$"%和桑树#9*-0("&6"%根部的)B真菌后$能观察到孢子'菌丝和泡囊等结构(毛圆圆)!=*'蔡柏岩等)!>*'邵金诚等)!5*和李文彬等)!A*用酸性品红分别染色香根草#M,$'8,-'"7'. 7"3'*'1,(%$黄檗#?2,&&*1,31-*3"+0-,3(,%$甘蔗#D"##2"-0+*L L'#'3"-0+%和高羊茅#O,($0#" "-031'3"#,"%根系)B真菌后$也能清晰观察到菌丝'孢子和泡囊结构(汪茜等)!"*和廖楠等)61*用墨水醋染色生姜#\'3)'6,-*L L'#'3"&,H*(#*,%和甘蔗根系)B真菌后$亦能清楚观察到菌丝'泡
囊和孢子结构&
目前$对禾本科牧草接种)B真菌检测菌根侵染效应的研究已有很多$涉及的禾本科牧草有早熟禾#*"4-"$,3('(%)6#;6!*'黑麦草#:*&'0+4,. -,33,%)66;6>*'狗牙根#E%3*1*31"#$%&*3%)65*'狼尾草#D,$"-'"8'-'1'(%)6A*'羊草#:,%+0(#2'3,3('(%)6"*'冷蒿#>-$,+'('"L-')'1"%)<1*'高羊茅#O,($0#" "-031'3"#,"%)#!*等$但未见对-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂穗披碱草接种)B真菌的研究&为此$本研究通过对-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂穗披碱草接种根内球囊霉#V&*+0('3$-"-"1'#,($,0%和摩西球囊霉#V&*+0(+*((,",$,B%$探讨!种禾本科牧草与)B真菌的共生情况$同时探讨了酸性品红'台盼蓝和墨水醋6种染色方法对菌根侵染率的影响$以期为禾本科牧草菌根侵染率的测定提供技术指导$同时也为/植被;微生物0联合生态修复技术提供理论依据&
:!材料与方法
:;:!试验材料
:':':!禾本科牧草!试验材料为环青海湖地区引种的-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂穗披碱草$购自四川省草原科学研究院&播种前$供试牧草种子均用#1eG
!Q!
消毒#1S8:$无菌水清洗干净后用滤纸吸干水分备用&
:':'<!供试菌剂!供试)B真菌为由长江大学吴楚教授馈赠的根内球囊霉和摩西球囊霉$均为包含根段'丛枝'菌丝和孢子等的混合物&
:':'=!培养基质!培养基质为青海大学农牧试验田壤土和河沙#6s#%的混合物$养分含量见表#$经高压蒸汽灭菌后使用##!#g$!E%&
表:!试验田土壤养分含量
+J[&3#!/%8&:F W V83:W4%:W3:W%O W39W O83&T
总氮+%W J&:8W V%C3:"S C,`C d#氨态氮)S S%:8J:8W V%C3:"S C,`C d#硝态氮(8W V J W3:8W V%C3:"S C,`C d#有机碳Q V C J:844J V[%:"e 516'11#'5!6='>!1'A5
:':'>!培养盆钵!培养盆钵为规格#A4S k#= 4S k#64S#上口径k下口径k高%的塑料花盆$使用前用5=e酒精反复擦拭消毒&
:':'@!染色剂!酸性品红!1'#=C酸性品红f#11 S?乳酸f#11S?甘油f#11S?蒸馏水(台盼蓝!1'1=C台盼蓝f#11S?乳酸f#11S?甘油f#11S?蒸馏水(墨水醋!=S?@F8:`牌纯黑墨水f"=S?家用白醋&:;<!试验设计
试验设置接种根内球囊霉#,0%'接种摩西球囊霉#,B%和不接种#*%:W V%&4E34`$*R%6个处理$每个处理<次重复$每种牧草有#!盆$共有!<盆$随机排列$隔天依次调换花盆位置$确保各盆所处的培养条件一致&称取<11C灭菌基质装于经消毒处理的塑料花盆中$喷洒适量无菌水$准确称取#1C供试)B真菌菌剂均匀的铺撒于上面$覆盖>1C灭菌
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草!地!学!报
第!"卷
基质$每盆浇#11S ?无菌水$然后以61粒每盆的播种密度分别播种!种禾本科牧草种子$覆土<1C 后再次喷少量无菌水$出苗5T 后间苗并定苗至!1株每盆&盆栽试验在青海大学农牧实验楼草地微生物实验室进行$栽培周期为!个月#!1!#年#月#6日至!1!#年6月#6日%&试验期间$自然采光$白天温度为#!=o !%g $夜间##"o !%g &
:;=!测定指标
:'=':!孢子密度!栽培!个月后$每个处理随机称取!1C 风干后混匀的根际土$采用湿筛倾析;
蔗糖离心法分离孢子)!#
*$每个处理6次重复$分离后在体式和光学
显微镜下观察孢子形态并用直接计数法计数&:'='<!菌根侵染率!取#C 宿主植物的新鲜根样$
抖落根际土后轻轻地用水漂洗干净$剪成#4S 左右的根段$置于甲醛;乙酸;乙醇固定液#^%V S J &T 3E U T 3J 43W 84J 48T $^))%
中固定过夜$次日取出适量根系洗净后分别用台盼蓝'酸性品红和墨水醋染色法进行染色)!5
*&染色完成后随机选取#1条根段$完成制片$6次重复&做好的压片通过光学显微镜观察孢子'菌丝'泡囊等菌根结构$
染色质量较好的压片在荧光显微镜下拍照$然后按H 83V S J ::等的方法计算菌根侵染率)<
#*&侵染率#e %j $#1k 根段数f #1k 根段数f !1k 根段数f 5#11k 根段数%观察根段数
:;>!数据分析
用.]43&软件整理数据$用/Y //!!'1软件进行单因素方差分析#Q :3;Z J U )(Q $)%$2F :4J :法进行多重比较&
<!结果与分析
<;:!孢子密度
通过湿筛倾析;蔗糖离心法分离获得的孢子在体式和光学显微镜下的形态如图#所示&可以看出$
两种)B 真菌孢子形态多为不规则球形$
浅黄至黄褐色&直接观测计数后分析发现$不接种的对照处理均无孢子出现#图#J $#T %$而接种的处理均能分离出孢子#图#[$#4$#3$#O
%&-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂穗披碱草分别接种根内球囊霉和摩西球囊霉!个月后$-川草!
号+老芒麦根际孢子密度分别为##"个,#!1C %d #和#<=个,#!1C
%d #
$-阿坝+垂穗披碱草根际孢子密度分别为>6个,#!1C %d #和5<个,#!1C
%d #$且-川草!号+老芒麦接种处理的孢子密度显著高于-阿坝+垂穗披碱草#?#1'1=
%#表!%
&图:!<种6Q 真菌接种处理下<种禾本科牧草根际孢子显微形态
^8C '#!B 84V %S %V \E %&%C U %O V E 8D %9\E 3V 39\%V 3F :T 3V W Z %)BO F :C 8%O W Z %C V J S 8:3%F 9O %V J C
39注!J 为不接种处理-阿坝+垂穗披碱草根际孢子体式显微镜形态([为-阿坝+垂穗披碱草根际根内球囊霉孢子体式显微镜形态(4为-阿坝+垂穗披碱草根际摩西球囊霉孢子体式显微镜形态(T 为不接种处理-川草!号+老芒麦根际孢子体式显微镜形态(3为-川草!号+老芒麦根际根内球囊霉孢子体式显微镜形态(O 为-川草!号+老芒麦根际摩西球囊霉孢子体式显微镜形态(C 为-阿坝+垂穗披碱草根际根内球囊霉孢子光学显微镜形态(E 为-阿坝+垂穗披碱草根际摩西球囊霉孢子光学显微镜形态(8为-川草!号+老芒麦根际根内球囊霉孢子光学显微镜形态(7为-川草!号+老芒麦根际摩西球囊霉孢子光学显微镜形态
(%W 3!J 8:T 84J W 399\%V 3S %V \E %&%C U F :T 3V 9W 3V 3%S 84V %94%\3%O C J 30$"3(-)[J +F :T 3V 4%:W V %&W V 3J W S 3:W ([8:T 84J W 399\%V 3S %V \E %&%C U %O V J '3.$-"-"1'#,(F :T 3V 9W 3V 3%S 84V %94%\3%O C J 30$"3(-)[J +(48:T 84J W 399\%V 3S %V \E %&%C U %O V J +*((,",F :T 3V 9W 3V 3%S 84V %94%\
3%O C J 30$"3(-)[J +(T 8:T 84J W 399\%V 3S %V \E %&%C U F :T 3V 9W 3V 3%S 84V %94%\3%O C J ('6'-'#0(-*E F J :4J %(%'!+F :T 3V 4%:W V %&W V 3J W S 3:W (38:T 84J W 399\%V 3S %V \E %&%C U %O V J '3$-"-"1'#,(F :T 3V 9W 3V 3%S 84V %94%\3%O C J ('6'-'#0(-*E F J :4J %(%'!+(O 8:T 84J W 399\%V 3S %V \E %&%C U %O V J +*((,",F :T 3V 9W 3V 3%S 84V %94%\
3%O C J ('6'-'#0(-*E F J :4J %(%'!+(C 8:T 84J W 399\%V 3S %V \E %&%C U %O V J '3$-"-"1'#,(F :T 3V %\W 84J &S 84V %94%\3%O C J 30$"3(-)[J +(E 8:T 84J W 399\%V 3S %V \E %&%C U %O V J +*((,",F :T 3V %\W 84J &S 84V %94%\3%O C J 30$"3(-)[J +(88:T 84J W 399\%V 3S %V \E %&%C U %O V J '3$-"-"1'#,(F :T 3V %\W 84J &S 84V %94%\3%O C J ('6'-'#0(-*E F J :4J %(%'!+(78:T 84J W 399\%V 3S %V \E %&%C U %O V J +*((,",F :T 3V %\W 84J &S 84V %94%\
3%O C J ('6'-'#0(-*E F J :4J %(%'!+1
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第#!期
张海娟等!不同染色方法对两种禾本科牧草菌根侵染率的影响
表<!接种对<种禾本科牧草根际孢子密度的影响
+J [&3!!.O O 34W %O 8:%4F &J W 8%:%:V E 8D %9\E 3V 39\%V 3T 3:98W U %O W Z %C V J S 8:3%F 9O %V J C
39处理+V 3J W S 3:W
-川草!号+老芒麦
C &%
+0(('6'-'#0(-*E F J :4J %(%'!+-阿坝+垂穗披碱草
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J )5<'66o #6'>#
J H !!注!
表中*R 代表不接种$,0代表接种根内球囊霉$,B 代表接种摩西球囊霉(同列不同小写字母表示同种牧草在不同接种处理间差异显著$同行不同大写字母表示不同牧草在同种接种处理间差异显著##1'1=
%&下同(%W 3!*R 8:T 84J W 39:%8:%4F &J W 8%:$,08:T 84J W 398:%4F &J W 8%:Z 8W E V &*+0('3$-"-"1'#,($,B8:T 84J W 398:%4F &J W 8%:Z 8W E V &*+0(+*((,",(28O O 3V ;3:W &%Z 3V 4J 93&3W W 3V 98:9J S 34%&F S :8:T 84J W 398C :8O 84J :W T 8O O 3V 3:439[3W Z 33:T 8O O 3V 3:W W V 3J W S 3:W 9%O 9J S 3C V J S 8:3%F 9O %V J C 39$J :TT 8O O 3V 3:W F \;\3V 4J 93&3W W 3V 98:9J S 3V %Z8:T 84J W 398C :8O 84J :W T 8O O 3V 3:439[3W Z 33:W E 39J S 3W V 3J W S 3:W %O T 8O O 3V 3:W C V J S 8:3%F 9O %V J C 39J W W E 31'1=&3X 3&'+E 39J S 3J 9[3&%Z
<;<!不同染色方法对菌根侵染率的影响
<'<':!台盼蓝染色的菌根结构观测效果!由图!可知$用台盼蓝染色法对-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂穗披碱草根系的根内球囊霉和摩西球囊霉进行水浴加热染色后$除了对照外$均能清晰的观察到
根皮层)B 真菌的泡囊'孢子和菌丝结构$说明台盼蓝染色剂利于泡囊等菌根结构着色$利于菌根结构的观察&可以看出$
未接种)B 真菌的处理无菌根侵染的迹象#图!)$!2%$而接种的处理则被不同程度侵染#图!H $!*$!.$!^%
&图<!台盼蓝染色剂对<种禾本科牧草根系<种6Q 真菌的染色效果
^8C '!!2U 38:C 3O O 34W 9%O W V U \J :[&F 3%:W Z %)BO F :C 88:V %%W 9%O W Z %C V J S 8:3%F 9O %V J C
39注!)为不接种处理-阿坝+垂穗披碱草根系菌根结构(H 为-阿坝+垂穗披碱草根系根内球囊霉(*为-阿坝+垂穗披碱草根系摩西球囊霉(2为不接种处理-川草!号+老芒麦根系菌根结构(.为-川草!号+老芒麦根系根内球囊霉(^为-川草!号+老芒麦根系摩西球囊霉&下同(%W 3!)8:T 84J W 39S U 4%V V E 8D J &9W V F 4W F V 38:V %%W 9%O C J 30$"3(-)[J +F :T 3V 4%:W V %&W V 3J W S 3:W (H 8:T 84J W 39V J '3$-"-"1'#,(8:V %%W 9%O C J 30$"3(-)[J +(*8:T 84J W 39V J +*((,",8:V %%W 9%O C J 30$"3(-)[J +(28:T 84J W 39S U 4%V V E 8D J &9W V F 4W F V 38:V %%W 9%O C J ('6'-'#0(-*E F J :4J %(%'!+F :T 3V 4%:W V %&W V 3J W S 3:W (.8:T 84J W 39V J '3$-"-"1'#,(8:V %%W 9%O C J ('6'-'#0(-*E F J :4J %(%'!+(^8:T 84J W 39V J 9*((,",8:V %%W 9%O C J ('6'-'#0(-*E F J :4J %(%'!+'+E 39J S 3J 9[3&%Z
<'<'<!酸性品红染色的菌根结构观测效果!用酸性品红对-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂穗披碱草根系的根内球囊霉和摩西球囊霉染色后发现$除了不接种的对照处理外#图6)$62%
$在光学显微镜下均能较为清晰的观察到泡囊'菌丝等菌根结构#图6H $6*$6.$6^
%$但其效果略次于台盼蓝染色剂染色的效果&因此$在实际研究中$可根据试剂的存储情况等进行选择&!种染色剂也可以交叉使用$
视觉效果会更佳&#
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草!地!学!报第!"
卷
图=!酸性品红染色剂对<种禾本科牧草根系<种6Q真菌的染色效果
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<'<'=!墨水醋染色的菌根结构观测效果!使用=e的墨水醋染色剂对-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂穗披碱草根系的根内球囊霉和摩西球囊霉染色后发现$在光学显微镜下很难观察到菌根结构#图<%$随后进行的多次染色试验效果亦是如此&可见$墨水醋染色法对-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂穗披碱草根系的根内球囊霉和摩西球囊霉的染色效果差$会影响菌根侵染率的测定$实际研究中应慎选
&
图>!墨水醋染色剂对<种禾本科牧草根系<种6Q真菌的染色效果
^8C'<!.O O34W%O8:`X8:3C J V9W J8:%:W Z%)BO F:C88:V%%W9%O W Z%C V J S8:3%F9O%V J C39
<'<'>!不同染色方法对菌根侵染率的影响!6种
染色方法对-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂穗披碱草
菌根侵染率的影响存在差异#表6%&用台盼蓝染色
后$根内球囊霉对-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂穗
披碱草的菌根侵染率分别为>>'6e和=='6e$摩西
球囊霉对-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂穗披碱草的
菌根侵染率分别为5#'6e和56'6e(用酸性品红染
色后$根内球囊霉对-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂
穗披碱草的菌根侵染率分别为>6'1e和<"'#e$摩
西球囊霉对-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂穗披碱草
的菌根侵染率分别为>='6e和>6'1e(而用墨水醋
染色的菌根侵染率均为1&经分析$根内球囊霉和
摩西球囊霉对-川草!号+老芒麦的菌根侵染率之间
差异不显著$对-阿坝+垂穗披碱草的菌根侵染率之
间差异显著##1'1=%(台盼蓝和酸性品红染色法
对!种禾本科牧草菌根侵染率的影响差异均不显
著$与墨水醋染色的菌根侵染率之间差异显著#?#
1'1=%&
表=!=种染色方法对<种禾本科牧草菌根侵染率的影响
+J[&36!.O O34W%O W E V33T U8:C S3W E%T9%:S U4%V V E8D J&8:O34W8%:V J W3%O W Z%C V J S8:3%F9O%V J C39处理
+V3J W S3:W
-川草!号+老芒麦
C&%+0(('6'-'#0(-*E F J:4J%(%'!+
-阿坝+垂穗披碱草
C&%+0(30$"3(-)[J+
台盼蓝
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酸性品红
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墨水醋
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台盼蓝
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第#!期张海娟等!不同染色方法对两种禾本科牧草菌根侵染率的影响
=!讨论
=;:!不同6Q真菌对不同植物的接种效应
本研究结果显示根内球囊霉和摩西球囊霉对-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂穗披碱草的菌根侵染率存在差异$这可能是由这!种禾本科牧草对菌根的依赖性不同所致$也可能是因为!种牧草根部产生的分泌物对!种)B真菌的刺激程度不一样引起的&许多相关研究与本研究结果一致$如肖雪毅等对黑麦草#:*&'0+4,-,33,%分别接种6种不同的)B真菌后侵染率分别为!e$#<e和6e)6=*(杨婷等对紫花苜蓿#9,1'#")*("$'8"%和黑麦草分别接种苏格兰球囊霉#V&*+0(#"&,1*3'0+%后紫花苜蓿菌根侵染率大于黑麦草)6>*(王丽萍等测得摩西球囊霉对黑麦草的菌根侵染率在66'66e">>'>5e之间)#=*(冯海艳等用摩西球囊霉和根内球囊霉分别接种黑麦草后测得菌根侵染率分别为6<e和6A e)<!*&这些研究结果都表明$不同)B真菌对黑麦草的侵染率存在差异&马放等用摩西球囊霉和根内球囊霉分别接种早熟禾#*" 4-"$,3('(%后$测得菌根侵染率分别为<"'<"e和<#'A#e)6#*(杨海霞等用!种不同的)B真菌分别接种高羊茅#O,($0#""-031'3"#,"%和草地早熟禾发后发现菌根侵染率草地早熟禾&高羊茅$分别为#5'1e$ #"'=e和=5'5e$6"'<e)#!*(王立等对早熟禾分别接种了根内球囊霉和摩西球囊霉后发现摩西球囊霉的菌根侵染率高于根内球囊霉$分别为6='5#e和<6'!5e)6!*&可见$早熟禾的菌根侵染率也因)B真菌类型不同而呈现差异&对其他植物的菌根侵染率亦是如此$如贾振宇等对羊草#:,%+0(#2'3,3('(%分别接种摩西球囊霉和地表多抱囊霉#!'8,8,-('L*-+,%后测得菌根侵染率分别为#5e和=>e)#1*(叶少萍等对狗牙根#E%3*1*31"#$%&*3%接种摩西球囊霉和聚丛球囊霉#V&*+0("))-,)"$0+%后菌根侵染率为<"'=1e和=A'1#e)65*(宁楚涵等对芦苇#?2-")+'$,( #*++03'(%和狼尾草#?,33'(,$0+"&*4,#0-*'1,(%接种摩西斗管囊霉#O033,&'L*-+'(+*((,",%和根内根孢囊霉#H2'7*42")0('3$-"-"1'#,(%后测得菌根侵染率分别为=='6e$=!'5e和<>'<e$<<'>e)6A*&以上研究结果表明$不同)B真菌对同种或不同植物的菌根侵染率存在差异&
=;<!不同染色方法对不同植物根系6Q真菌的染色效果
通过对比台盼蓝'酸性品红和墨水醋染色的效
果发现$台盼蓝和酸性品红染色的效果明显优于墨水醋染色的效果&用前!种染色方法染色$)B真菌的孢子'菌丝和泡囊着色效果很好$便于观察菌根结构和测定侵染率&这一方面可能跟植物的根系结构相关$如根的坚韧程度&栽培!个月的-川草!号+老芒麦和-阿坝+垂穗披碱草的根系较为细嫩$用#1eR Q G溶液透明处理#E后$牧草根部皮层细胞中的细胞质基本清除干净$极大的方便了染色剂的渗透)!#*$因此孢子等更容易着色&其他研究者也做了相关研究$如娄璇)<6*采用台盼蓝对水稻根系)B 真菌染色后$能清晰观察到根内菌丝和泡囊以及根细胞内形成的丛枝结构(而刘晓迪等)<<*同样采用台盼蓝对番茄#D*&"30+&%#*4,-('#0+%根段染色后菌根观测效果却一般(蔡柏岩等)!>*采用酸性品红对黄檗根围)B真菌染色后菌根观测效果不佳&另一方面可能跟水浴加热透明和染色的时间有关&本研究对供试材料在处理时间上控制到位$因此观测效果较好&房凤如)!!*采用台盼蓝对杨树根部)B真菌进行了过夜染色$结果能清晰观察到孢子'菌丝和泡囊等结构&毛圆圆)!=*对香根草根系)B真菌用酸性品红染色后静置过夜$次日在香根草根系中可以观察到)B真菌的侵入点'菌丝'泡囊和丛枝等结构&可见$染色时间也是影响染色效果的关键因素之一$把控好染色时间可以改善观测效果&用墨水醋染色后$本研究很难观察到任何菌根结构&然而$汪茜等)!"*$廖楠等)61*同样采用了墨水醋染色法$却能清楚观察到生姜和甘蔗根系)B真菌的菌丝等菌根结构&这可能是因为墨水醋染色法适用于生姜'甘蔗等根系相对坚韧的植物根系的)B真菌的染色$而本研究所选的宿主植物根系幼嫩$因而导致孢子'泡囊等着色困难$进而影响了染色质量(也有可能是染色时间或者墨水质量的问题&
>!结论
不同染色方法对!种禾本科牧草根系)B真菌的染色效果不一致$用台盼蓝染色法染色后发现$孢子'菌丝和泡囊等菌根结构更易于着色&因此$为了保证菌根观测效果和菌根侵染率测定结果的准确性$在研究不同植物菌根侵染率时$应根据菌根着色效果选择最佳的染色方法&
参考文献
)#*!张亮$王晓娟$王强$等'青藏高原高寒生境中丛枝菌根真菌研
6
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草!地!学!报第!"卷
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责任编辑!闵芝智
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