内皮脂肪酶启动子—384A／C多态性与急性冠脉综合征及血脂的相关性

内皮脂肪酶启动子—384A／C多态性与急性冠脉综合征及血脂的相
关性
多项研究表明，环境和遗传[1-3]因素共同参与急性冠脉综合征（acute coronary syndrome，ACS）的发生和发展。

内皮脂肪酶（endothelial lipase，EL）的基因多态性与冠心病（coronary heart disease，CHD）关系密切[4-5]。

Yamakawa-Kobayashi[6]和Hutter等[7]发现EL启动子区-384A/C基因多态性（rs3813082）与血浆HDL水平相关，并且可能增加人群心血管疾病的患病风险。

但是到目前为止，EL-384A/C基因多态性是否与中国苏南地区汉族人群ACS发病存在相关性尚未见报到。

本研究旨在通过采用PCR-RFLP方法了解中国苏南地区汉族人群EL-384A/C基因多态性频率分布，并探讨其与ACS之间的关系。

1 资料与方法
1.1 一般资料
2008年8月至2011年1月在江苏大学附属武进人民医院心内科住院的ACS 患者320例，其中男201例，女119例，年龄60～88岁，（61.44±11.15）岁，ACS定义按照美国心脏病学会/美国心脏协会标准[8]，患者均行冠脉造影检查，结果由两名有经验的心导管室医师判断。

对照组为315例同期住院并经冠脉造影检查排除冠心病者（心外膜下冠状动脉或其主要分支狭窄50%分别记为1支病变，左主干病变记为2支病变。

1.2.4 采用标准酚氯法提取患者外周血基因组DNA，采用聚合酶链反应-限制性片段长度多态性（polymerase chain reaction-restriction fragment length polymorphism analysis，PCR-RFLP）方法检查EL-384A/C基因型。

参照Yamakawa-Kobayashi[5]的文献合成引物，上游引物5’-TAG CTC CGC CGG GTT ATT GTG C-3’，下游引物5’-CCA GAT CCT CCT CTC CCC ACT G-3’，引物由大连宝生物有限公司合成。

总PCR反应体系50 μL，包括1 ul基因组DNA，5 μL 10×PCR Ex Taq Buffer （Mg2+），4 μL dNTP Mixture，0.25 μL TaKaRa Ex Taq，上下游引物各1 μL，去离子水补充至50 μL。

PCR扩增条件：94 ℃预变性5 min，94 ℃变性45 s，66 ℃退火45 s，72 ℃延伸45 s，共40个循环，最后72 ℃延伸10 min。

PCR产物经限制性内切酶Hha I （由大连宝生物有限公司提供）酶切37.0 ℃水浴过夜。

酶切产物经胶红染色的3%琼脂糖凝胶100 V电泳45 min，紫外灯下观察分型。

约10%左右样本被随机重复检查。

为证实笔者的结果，部分PCR产物送上海生工行基因测序。

1.3 统计学方法
采用SPSS 17.0软件进行统计分析。

计量资料以均数±标准差（x±s）表示，组间均数比较采用独立样本t检验；计数资料比较采用χ2检验。

基因多态性与ACS的多因素相关分析采用Logistic回归分析。

以P＜0.05为差异具有统计学意
义。

2 结果
对照组与ACS组患者一般资料比较，见表1。

两组性别、年龄差异无统计学意义，资料具有可比性。

与对照组相比，ACS组高血压、糖尿病和吸烟者比率明显较高，差异具有统计学意义。

ACS组血清TC/HDL明显高于对照组，而血清HDL、ApoA-I水平及ApoA-I/ ApoB明显低于对照组，差异具有统计学意义。

对照组及ACS组均存在AA、AC、CC三种基因型，EL-384A/C基因型在人群中分布达到Hardy-Weinberg平衡（χ2分别为0.878，2.876；P>0.05），具有群体代表性。

ACS组AA、AC、CC基因型和A、C等位基因分布频率分别为250（78.1%）、62（19.4%）、8（2.5%）和87.8%、12.2%；对照组AA、AC、CC基因型和A、C等位基因分布频率分别为219（69.5%）、90（28.6%）、6（1.9%）和83.8%、16.2%；由于CC基因型数量较少，笔者把AC+CC基因型合并为C 等位基因携带者进行统计分析，两组间基因型及等位基因频率分布差异均有统计学意义，见表2。

EL-384A/C不同基因型间血脂水平及血脂比值比较，与AA基因型比较，C 等位基因携带者（AC+CC）HDL、ApoA-I水平明显较高[HDL：（1.20±0.35 ）mmol/L vs.（1.11±0.29）mmol/L，P=0.001；ApoA-I：（1.14±0.25）g/L vs. （1.08±0.21）g/L，P=0.009]，见表3。

EL-384A/C基因多态性与冠脉病变支数，不同基因型间冠脉病变支数差异无统计学意义，见表4。

ACS危险因素Logistic回归分析，将基因型、性别、年龄、糖尿病、高血压、吸烟和血脂纳入回归模型进行分析，结果显示在校正性别、年龄等ACS危险因素后，EL-384A/C基因多态性仍然与ACS有明显相关性（P=0.042，OR=0.682，95%CI=0.472～0.986），见表5。

3 讨论1999年Hirata 等[9]首次采用消减杂交技术在体外培养的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）中发现EL mRNA。

EL定位于人类染色体18q21.1，由483个氨基酸组成，分子量约为55000。

EL主要由血管内皮细胞合成，与肝脂肪酶（hepatic lipase，HL）、脂蛋白脂肪酶（lipoprotein lipase，LPL）三者同属于脂肪酶，共同参与脂蛋白代谢。

EL可能通过裂解高密度脂蛋白（high density lipoprotein，HDL）及其他多条途径参与动脉粥样硬化（atherosclerosis，AS）和CHD的发病。

但是到目前为止，对于EL基因多态性是否影响血脂水平以及是否与CHD 发病有关，国内外研究结论尚不一致[4-5]。

2003年Yamakawa-Kobayashi等[6]研究发现启动子-384A/C多态性与日本学龄儿童HDL胆固醇水平相关。

2006年Hutter等[7]也发现-384A/C基因多态性与日裔美国人家系人群HDL水平有关，并且可能增加人群心血管疾病的患病风险。

我国成都地区高甘油三酯血症（hypertriglyceridemia，HTG）患者EL基因-384A/C位点多态性时，发现其C 等位基因频率为0.178，但正常人和HTG患者之间C等位基因频率无明显差异，
与AA基因型者比较，C等位基因携带者（AC及CC型者）血清HDL水平差异无统计学意义。

本研究发现，中国苏南地区汉族人群存在EL-384A/C基因多态性，且这一多态性位点已达到遗传平衡，具有群体代表性。

与AA基因型比较，C等位基因携带者（AC+CC）HDL、ApoA-I水平明显升高，这与Yamakawa-Kobayashi和Hutter等[6-7]的研究结果一致。

ACS组EL-384A/C基因型和等位基因频率分布与对照组比较差异有统计学意义；在经校正性别、年龄、糖尿病、高血压、吸烟、高脂血症等ACS危险因素后，结果仍然表明该多态性是ACS的独立危险因素。

但是本研究也发现该基因多态性与冠状动脉病变严重程度之间却无明显相关性。

参考文献
[1]师干伟，何国平，蔡高军，等. 单核细胞趋化蛋白-1基因A-2518G多态性与急性冠脉综合征相关性研究[J]. 中华急诊医学杂志，2012，21（7）：687-693.
[2]钱志宏，何国平，蔡高军，等. PAPP-A/IVS6+95多态性与女性急性冠脉综合征相关性[J]. 中华急诊医学杂志，2011，20（3）：302-305.
[3]何国平，戚猛，肖箐，等. 急性冠脉综合征患者C反应蛋白基因T-757C 多态性分析[J]. 中国急救医学，2011，31（6）：493-496.
[4] Tang NP，Wang LS，Yang L，et al. Protective effect of an endothelial lipase gene variant on coronary artery disease in a Chinese population[J]. J Lipid Res，2008，49（2）：369-375.
[5]Shimizu M，Kanazawa K，Hirata K，et al. Endothelial lipase gene polymorphism is associated with acute myocardial infarction，independently of high-density lipoprotein-cholesterol levels[J]. Circ J，2007，71（6）：842-846.
[6] Yamakawa-Kobayashi K，Yanagi H，Endo K，et al. Relationship between serum HDL-C levels and common genetic variants of the endothelial lipase gene in Japanese school-aged children[J]. Hum Genet，2003，113（4）：311-315.
[7] Hutter CM，Austin MA，Farin FM，et al. Association of endothelial lipase gene （LIPG）haplotypes with high-density lipoprotein cholesterol subfractions and apolipoprotein AI plasma levels in Japanese Americans[J]. Atherosclerosis. 2006，185（1）：78-86.
[8] Chen MS，Bhatt DL. Highlights of the 2002 update to the 2000 American College of Cardiology/American Heart Association acute coronary syndrome guidelines[J]. Cardiol Rev，2003，11（3）：113-121.
[9] Hirata K，Dichek HL，Cioffi JA，et al. Cloning of a unique lipase from
endothelial cells extends the lipase gene family[J]. Biol Chem，1999，274（20）：14170-14175.。