复方藤乌软膏制备及皮肤安全性考察

75第15卷 第2期 2013 年 2 月辽宁中医药大学学报JOURNAL OF LIAONING UNIVERSITY OF TCMVol. 15 No. 2 Feb .，2013复方藤乌软膏是我院骨伤外科专家与药学科研人员结合传统中医理论，运用现代制药技术，经过反复实践共同研制而成的中药制剂。

全方由鸡血藤、生川乌、生草乌、海桐皮、自然铜等中药组成，具有消肿止痛、续筋接骨等功效，临床中主要用于运动劳损、急性扭伤、挫伤、闪伤及轻度骨折引起的疼痛。

本研究采用薄层色谱法对复方中主要有效成分乌头碱进行定性鉴别，并用Wistar 大鼠进行皮肤刺激性试验、急性毒性试验，考察了该软膏皮肤使用的安全性。

1 仪器与材料LDZ5-2型低速自动平衡离心机（北京医用离心机厂），BSA223S 型电子分析天 平（赛多利斯科学仪器有限公司），电热恒温水浴锅（龙口市先科仪器公司），薄层层析硅胶G 型（青岛海洋工厂），乌头碱对照品（中国药品生物制品检定所，批号：110720-200410），生川乌、生草乌等药材（济南宏济堂药材公司），乙醚、二氯甲烷、环己烷、二乙胺等试剂均为分析纯。

SPF 级健康Wistar 大鼠，雌雄各半，由山东大学动物实验中心提供，合格证号：SCXK（鲁）2009000101。

实验室温度 20~25℃，湿度（50±20）%，照明为12 h 明暗交替。

2 方法与结果2.1 处方及制备2.1.1 处方组成鸡血藤、生川乌、生草乌、海桐皮、透骨草、黄柏、肉桂、地榆炭、自然铜、樟脑等。

2.1.2 制备工艺取方中鸡血藤、生川乌、生草乌、海桐皮、透骨草等粉碎成粗粉，加入10倍量食醋共同煮沸30 min，倒入不锈钢桶内，继续加10倍量食醋，浸泡3~5 d，过滤，制成药液（A）；地榆炭、自然铜等混合，烘干，粉碎制成极细粉，过120目筛，得药粉（B）。

取1000 mL A 液，加入400 g B 粉、200 g 淀粉，充分混合均匀以无包块为度，得混合物（C）。

另取剩余A 液加热浓缩至2∶1，再加入C，继续加热搅拌至呈稠膏状，待温度降至50 ℃，加入樟脑50 g （以乙醇溶解）搅匀，分装即得。

2.2 乌头碱的薄层色谱鉴别2.2.1 供试液的制备[1]取本品10 g，置具塞碘量瓶中，加入氨水5 mL 润湿1 h，加乙醚50 mL，时时振摇，放置6 h，摇匀，滤过，滤渣用20 mL 乙醚分次洗涤，合并滤液及洗涤复方藤乌软膏制备及皮肤安全性考察赫清雪1，2，王爱武1，王楠楠1，2（1.山东大学附属省立医院药剂科，山东 济南 250021；2.山东中医药大学，山东 济南 250355）摘 要：目的：制备复方藤乌软膏，建立复方中主要成分乌头碱的定性鉴别方法，并考察该软膏皮肤用药的安全性。

方法：遵循传统理论和方法制备复方藤乌软膏，采用薄层色谱法，以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（10∶7∶1）为展开剂对方剂中的有效成分乌头碱进行鉴别，采用Wistar 大鼠进行皮肤刺激性试验、急性毒性试验。

结果：复方藤乌软膏中乌头碱薄层鉴别斑点清晰，阴性对照无干扰。

该制剂对大鼠完整、破损皮肤均无急性毒性，对破损皮肤有轻微刺激性，可自行缓解。

结论：复方藤乌软膏定性方法简单、专属性强，是一种较安全的外用制剂。

关键词：复方藤乌软膏；制备；薄层色谱；皮肤刺激性试验；急性毒性试验中图分类号：R283 文献标志码：A 文章编号：1673-842X (2013) 02- 0075- 02收稿日期：2012-08-23作者简介：赫清雪（1988-），女，黑龙江伊春人，硕士研究生，研究方向：中药合理应用的临床与实验研究。

通讯作者：王爱武（1966-），女，山东巨野人，副主任药师，硕士研究生导师，研究方向：中药合理应用的临床与实践研究。

E-mail ：wawyy@。

Experimental Study on Preparation and Cutaneous Safety of Complex Tengwu OintmentHE Qingxue 1，2，WANG Aiwu 1，WANG Nannan 1，2（1.Provincial Hospital Affiliated to Shandong University，Ji'nan 250021，Shandong，China ；2.Shandong University of Traditional Chinese Medicine，Ji'nan 250355，Shandong，China）Abstract ：Objective ：To prepare and establish a qualitative method for Compound Tengwu Ointment，and to explore the safety of transcutaneous drug delivery. Methods ：Followed the traditional theories and methods，Compound Tengwu Ointment was made. Aconitine was identified by TLC，and developing solvent was Cyclohexane- ethyl acetate-diethylamine（10∶7∶1）. Skin irritation test and acute toxicity test were conducted in Wistar rats. Result ：The TLC spots of Compound Tengwu Ointment were clear with good resolution and free from interference of negative samples. Compound Tengwu Ointment had no irritation to the integral skin and low-grade irritation to the damage skin of rats，but it was easy to be disappeared. Conclusion ：The method is simple，precise and specific. Compound Tengwu ointment belongs to the safe preparation.Key words ：Compound Tengwu Ointment ；preparation ；TLC ；dermal irritation ；acute toxicity test辽宁中医药大学学报15卷液，低温挥干，残渣加二氯甲烷使成1 mL，作为供试品溶液。

另取乌头碱对照品，加二氯甲烷制成每毫升含1 mg的溶液，作为对照品溶液。

2.2.2 阴性供试液的制备按处方比例取除生川乌、生草乌以外的药材，再按“2.1.2”项下工艺制备样品，同“2.2.1”项下处理方法处理阴性供试液。

2.2.3 层析条件参照 2010年版中国药典（一部）附录ⅥB薄层色谱法[2]项下试验，吸取供试品溶液20 μL及对照品溶液5 μL点于同一硅胶G薄层板上，以环己烷-乙酸乙酯-二乙胺（10∶7∶1）为展开剂，展开，取出，晾干，喷稀碘化铋钾试液观察。

供试品色谱中，在与对照组色谱相同位置上，显相同颜色的斑点，阴性对照无干扰。

2.3皮肤刺激性试验Wistar大鼠16只，雌雄各半，平均分为2组，实验采用同体左右侧自身对比法，分为完整皮肤组及破损皮肤组。

试验前24 h大鼠对背部进行剃毛处理，去毛范围为左、右各3 cm×3 cm。

完整皮肤组给药前检查去毛皮肤是否有损伤，有损伤的皮肤不宜进行完整皮肤实验。

破损皮肤组在用药部位用消过毒的手术刀划“井”字并以渗血为度。

对受试动物左侧去毛区均匀涂抹藤乌软膏2 g/kg，右侧对照区涂基质，两侧均用玻璃纸及2层纱布覆盖，以无刺激胶布及绷带缠绕固定。

贴敷6 h后除去受试药物并用生理盐水清洁给药部位。

去除药物后0.5、1、24、48及72 h时观察并记录涂药部位有无红斑和水肿及恢复情况，计算每一观察时间点各组受试物及基质皮肤反应积分平均分值，按照表1进行刺激强度评价。

表1 皮肤刺激反应评分标准刺激反应分值红斑无红斑0轻度红斑（勉强可见）1中度红斑（明显可见）2重度红斑3紫红色红斑到轻度焦痂形成4水肿无水肿0轻度水肿（勉强可见）1中度水肿（明显可见）2重度水肿（皮肤隆起1 mm，轮廓清晰）3严重水肿（皮肤隆起1 mm以上并有扩大）4最高总分值8当记录分值为0~0.49时刺激强度为无刺激，0.5~2.99为轻度刺激，3~5.99为中度刺激，6分及以上为强刺激。

实验结果见表2，大鼠完整皮肤两侧均未见红斑及水肿发生，皮肤刺激反应评分为0，皮肤刺激强度评价为无刺激性；大鼠损伤皮肤，去除药物后有轻微红斑及水肿现象，1 h后红肿基本消失，72 h破损皮肤基本结痂恢复完全。

2.4皮肤急性毒性实验Wistar大鼠24只，雌雄各半，平均分为3组，即高剂量组、低剂量组与基质对照组。

试验前24 h进行背部剃毛处理，去毛范围为高剂量组4 cm×4 cm，低剂量组3 cm×3 cm。

高剂量组涂藤乌软膏5 g/kg，低剂量组为2 g/kg，对照组给予软膏基质2 g/kg，用玻璃纸及2层纱布覆盖，以无刺激胶布及绷带缠绕固定，贴敷6 h后去除受试药物，用生理盐水除去残留药物后连续观察7 d并记录受试动物的体重变化、饮食、外观、行为、分泌物、死亡情况及中毒反应等，按规定方法[3]进行毒性反应评价。

7 d后对大鼠进行大体解剖观察有无病理变化。

表2 大鼠皮肤刺激性实验结果（n=8）组别药物积分总和 平均反应值 皮肤刺激强度0.5 h 1 h24 h48 h72 h0.5 h1 h24 h48 h72 h完整皮肤组藤乌软膏0000000000无刺激性软膏基质0000000000无刺激性破损皮肤组藤乌软膏5 1.1000 1.250.27000轻度刺激性软膏基质4100010.25000轻度刺激性结果显示，大鼠高剂量及低剂量组动物7 d内体重饮食、外观、行为、分泌物等均未见异常反应，各组动物体重变化见表3，所有动物无死亡，实验结束解剖后各脏器无明显病理变化，各脏器指数见表4。

表3 复方藤乌软膏对大鼠体重的影响（kg，n=8，x—±s）组别给药前给药7d后高剂量组0.312±0.0300.339±0.040低剂量组0.302±0.0450.326±0.049基质对照组0.309±0.0510.334±0.045注：与对照组比较，P>0.05。