家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养
实验四家兔离体小肠平滑肌生理特性及药物作用的观察
目录
• 实验目的 • 实验材料 • 实验方法 • 实验结果 • 结论
01
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实验目的
了解家兔离体小肠平滑肌的生理特性
观察家兔离体小肠平 滑肌的自主节律性收 缩
分析家兔离体小肠平 滑肌的生理功能和特 点
记录家兔离体小肠平 滑肌对不同刺激的生 理反应
药物
药物种类
包括生理盐水、不同浓度的药物溶液 等。
药物浓度
根据实验需要，配制不同浓度的药物 溶液，确保药物浓度准确。
03
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实验方法
离体小肠平滑肌的制备
01
选取健康家兔
选择体重相近、健康的家兔作为实 验对象。
取小肠组织
迅速取出小肠组织，并分离出平滑 肌部分。
03
02
麻醉与处死
对家兔进行麻醉，然后处死，以获 取小肠组织。
实验结论
总结实验结果，得出关于家兔离 体小肠平滑肌生理特性及药物作 用的观察结论。
05
CATALOGUE
结论
对家兔离体小肠平滑肌生理特性的认识
生理特性
家兔离体小肠平滑肌具有自主节律性、紧张性、 兴奋性和伸展性等生理特性。
影响因素
离体小肠平滑肌的生理特性受到多种因素的影响 ，如神经、激素、离子通道等。
生理意义
家兔离体小肠平滑肌的生理特性对于维持肠道功 能、消化和吸收具有重要意义。
对药物作用的理解与评价
药物作用机制
实验中观察到的药物作用机制主要包括抑制平滑肌细胞膜离子通道 、影响平滑肌细胞内钙离子浓度等。
药物效果评价
通过对药物作用效果的观察，可以对药物的疗效和安全性进行评价 。
平滑肌细胞培养实验步骤解读
平滑肌细胞培养实验步骤解读原代平滑肌细胞培养Protocol实验准备：器材：注射器（10mL），玻璃吸管，胶头（用于细脚吸管，吹匀组织块用），枪头（蓝色、黄色），移液器（1000μL，100μL），电动移液器，玻璃培养皿（2-3个），小烧杯（10 mL或5 mL），青霉素瓶（配鼠尾胶原），剪刀（大，小，弯）多把，镊子（大，小，弯）多把，纱布，六孔板（真空包装），托盘（放老鼠），酒精棉球，乳胶手套试剂：平滑肌细胞专用培养基，生理盐水，D-hank’s 液，鼠尾胶原，戊巴比妥钠（麻醉用），75%酒精步骤：1. 高压灭菌实验所需器材，超净台紫外照射30mins，吹风；2. 配制鼠尾胶原应用液，一般1:15-1:19稀释，六孔板中每孔加入1mL稀释液待用（可省去）；3. 大鼠（200g左右，一百五六十克较好）腹腔注射一定体积戊巴比妥钠（0.5mL/100g）麻醉，麻醉好后将大鼠全身（尤其是胸腹部）用酒精棉球擦拭干净，放入托盘置于超净台中紫外照射15mins左右，开始试验；4. 用已消毒的剪刀将大鼠腹部表皮剪开，充分暴露出整个胸部，再换用干净的剪刀打开胸腔。
将肝脏及肺脏等组织拨开（小心操作以避免伤到血管）。
用小弯镊及小直镊分离胸主动脉外壁贴附的结缔组织及外膜等。
分离干净后，用眼科剪小心剪断血管，去除血管中的血，置于干净玻璃培养皿中；5. 用生理盐水多次冲洗分离出来的血管。
冲洗干净后，将血管剪开，小心刮除血管内膜，去掉内皮细胞；6. 将处理好的血管放入平滑肌细胞专用培养基（约200μL）中，用眼科剪将组织尽量剪碎成1mm3大小的小块，用细脚吸管吹匀后，均匀种入加了鼠尾胶原的六孔板中；7. 用黄枪头小心吸弃多余的液体（避免将组织块吸起来），然后将六孔板盖好颠倒放在培养箱中约2h（待组织块粘牢培养板底）后，再加入培养基；8. 过3-4d后拿出细胞在显微镜下观察，看其是否已长出。
兔静脉血管内皮及平滑肌细胞原代培养方法的改进及鉴定
随着 人类 生活 和饮食 习惯 的改 变 ， 心 病 的发 冠 病 率 和死 亡率 呈逐 年上升趋 势 。冠状 动 脉旁路 移植
（ Ａ Ｇ） Ｃ Ｂ 手术 是 目前 治 疗 冠 心 病 的 主 要 方 式 之 一 ，
固定 于 手 术 台 ， 毛 、 毒 ， 无 菌单 ， 腹 正 中切 脱 消 铺 取 口， 开腹 内容 物 ， 分显 露膈 以下后 腔静脉 及髂 总 拉 充 静脉 ， 分离 出尽 可 能 长 的静 脉 ， 心剥 离 血 管外 膜 ， 小
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山东医药 ２ ０ 年第 ４ 卷第 ２ 期 ０８ ８ ７
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基础 研 究 ・
兔 静 脉血 管 内皮及 平 滑 肌 细胞 原 代 培 养 方 法 的改进 及 鉴定
黄 健兵 ， 龚德 军 ， 丰庆 ， 颖龙 ， 盛东 ， 良建 胡 姚 黄 邹
（ 第二 军 医大 学附属 长海 医院 ， 海 ２ ０ ３ ） 上 ０４ ３
１２ 试 验 前 培养 基 准 备 ．
① Ｒ ＭＩ１４ Ｐ ６０完 全 培 养
基 ： Ｒ ＭＩ ６ ０培 养 基 中按 ２ ％ 比例 加 入 Ｆ Ｓ 向 Ｐ ４ １ ０ Ｂ，
并 配置 成含青 霉素 Ｉ０Ｕ ｍ 、 Ｏ ／ ｌ链霉 素 １０ ｇｍＩ肝 ０ ／ 、 素 １０ ０ ｍ 、 岛 素 １ ｌ胰 ０ ｍｌ氢 化可 的松 ｌ 、 ０
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抗体 、 鼠抗人 Ｏ平滑肌肌动蛋 白（ｔ Ｍ ） 体；－ ｔ ＯＳ Ａ 抗 — ＳＰ 兔 鼠二 抗试 剂 盒 ； 青霉 素 、 链霉 素 、 岛素 、 素 、 胰 肝 氢
化 可的松 。仪 器 ： ｅｅｕ Ｏ 培 养 箱 ； ｌ ｕ ｘ Ｈ ｒａ ｓ ２ Ｃ Ｏ ｙ ｓＩ 一 ｍｐ
家兔小肠平滑肌实验报告
家兔小肠平滑肌实验报告家兔小肠平滑肌实验报告引言：实验目的是通过观察家兔小肠平滑肌的收缩反应，探究平滑肌在生理条件下的功能和特性。
平滑肌是一种非志愿性肌肉，存在于消化道、血管和呼吸道等内脏器官中，对于维持正常的生理功能至关重要。
材料与方法：1. 实验动物：选取健康的家兔作为实验对象，确保其生理状态正常。
2. 实验设备：使用生理记录仪、平滑肌收缩力测定仪等设备。
3. 实验药物：采用乙酰胆碱作为刺激剂，用于引发平滑肌收缩反应。
实验过程：1. 准备工作：将家兔置于适宜的实验环境中，确保其舒适和安全。
2. 实验操作：通过生理记录仪记录家兔小肠平滑肌的收缩情况，同时使用平滑肌收缩力测定仪测量肌肉收缩力的变化。
3. 实验刺激：将乙酰胆碱溶液注入家兔小肠，观察平滑肌收缩的变化，并记录数据。
实验结果：在实验中观察到家兔小肠平滑肌对乙酰胆碱的刺激产生了收缩反应。
随着乙酰胆碱浓度的增加，平滑肌的收缩力逐渐增强。
而在乙酰胆碱浓度过高时，平滑肌收缩力出现饱和现象，即增加乙酰胆碱浓度不再引起明显的增强效果。
讨论与分析：1. 平滑肌的收缩特性：实验结果表明，家兔小肠平滑肌对乙酰胆碱的刺激具有明显的收缩反应。
这说明平滑肌在生理条件下具有较高的收缩能力，从而可以推动消化道的蠕动和物质的传输。
2. 乙酰胆碱的作用机制：乙酰胆碱是一种神经递质，在神经末梢释放后能够与平滑肌细胞上的乙酰胆碱受体结合，从而引发平滑肌的收缩反应。
实验结果验证了乙酰胆碱对平滑肌的刺激作用。
3. 平滑肌收缩力的调节：平滑肌收缩力的增强和饱和现象表明，平滑肌收缩力受到调节。
可能存在其他调节因子或机制，如神经调节、激素调节等，这些因素可能对平滑肌的收缩产生影响。
结论：通过本次实验，我们观察到家兔小肠平滑肌对乙酰胆碱的刺激产生了收缩反应。
这一实验结果揭示了平滑肌在生理条件下的收缩特性和调节机制。
进一步的研究可以探究其他调节因素对平滑肌收缩的影响，以及平滑肌在疾病状态下的变化，为相关疾病的治疗提供理论依据和实验基础。
家兔动脉血管平滑肌细胞培养方法的改进
家兔动脉血管平滑肌细胞培养方法的改进杨征;邱敏;吴芹;李利生;黄燮南【期刊名称】《中国药理学通报》【年(卷),期】2008(24)5【摘要】目的提高家兔血管平滑肌细胞(vascular smooth muscle cell,VSMC)体外培养的成功率.方法以传统的主动脉平滑肌细胞培养方法中的组织块贴壁法为基础,从动物选择、培养基配制、血管取材、组织块的大小和接种间距、培养液的量及换液量、细胞传代的时机等多个重要环节进行改进;用倒置显微镜、电镜对培养细胞进行形态学观察,并用平滑肌细胞特异性α-肌动蛋白(α-actin) 单克隆抗体免疫组织化学方法进行鉴定.结果台盼蓝检查传代细胞的存活率大于97%;光镜下见培养细胞平行排列呈长梭形及"峰、谷"样结构特征;免疫组织化学染色鉴定培养细胞中VSMC的纯度为97%;电镜技术观察到VSMC完整的超微结构.结论此培养方法能提高动脉平滑肌细胞原代培养的成功率,传代后血管平滑肌细胞生物学特征的稳定性好,可作为研究血管平滑肌细胞生物学行为的有效模型.【总页数】4页(P696-699)【作者】杨征;邱敏;吴芹;李利生;黄燮南【作者单位】遵义医学院药理学教研室,贵州,遵义,563003;包头医学院第一附属医院心内二科,内蒙古,包头,014010;遵义医学院药理学教研室,贵州,遵义,563003;包头医学院药学系,内蒙古,包头,014010;遵义医学院药理学教研室,贵州,遵义,563003;遵义医学院药理学教研室,贵州,遵义,563003;遵义医学院药理学教研室,贵州,遵义,563003【正文语种】中文【中图分类】R-332;R322.121;R322.74;R329.2;R329.24【相关文献】1.针刺对动脉再狭窄家兔血管平滑肌细胞增殖及c-foc基因表达的影响 [J], 孟琼;雷磊;朱伟;张国民;张新春;蒋哲;黄丽2.胎儿脐动脉血管平滑肌细胞贴块培养方法的改进 [J], 徐会圃;窦晋景;齐超3.大鼠胸主动脉血管平滑肌细胞原代培养方法的改进 [J], 孟立平;蒋承建;赵飞;郭艳;池菊芳;郭航远4.动脉血管平滑肌细胞、血管内皮细胞原代培养方法的改良及应用 [J], 王敏;崔连群;王晓军;烟玉琴;韩秋霞;秦风菊5.淫羊藿甙对动脉粥样硬化家兔血管平滑肌细胞内质网应激的影响 [J], 赵君玫;魏群;毕红征;闫国立因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
家兔动脉血管平滑肌细胞培养方法的改进
平滑肌细胞培 养方 法 中 的组 织 块贴 壁法 为 基础 ， 动 物选 从 择、 培养基配制 、 血管取 材 、 组织块 的大 小和 接种 间距 、 培养 液 的量及换 液量 、 胞传 代 的时机 等 多个 重要 环 节进 行改 细 进； 用倒置显微镜 、 电镜对培 养细胞进行形态学观察 ， 并用平 滑肌细胞特异性 一 肌动蛋 白（ ａｔ ）单克 隆抗体 免疫组 织 — ｉ ｃｎ 化学方法进行鉴定。结果 台盼 蓝检查传 代 细胞 的存 活率 大于 ９ ％ ； ７ 光镜下见培养细胞平行 排列 呈长梭形 及“ 、 ” 峰 谷 样结 构特征 ； 免疫组织化学染 色鉴定培养细胞 中 Ｖ Ｍ Ｓ Ｃ的纯 度为 ９ ％ ； ７ 电镜 技 术观 察到 Ｖ ＭＣ完 整 的超微 结 构。结 论 Ｓ 此培养方法能提高动脉平滑肌细胞原代培 养的成功率 ， 代 传 后血管平滑肌细胞生物学特征 的稳定性好 ， 可作为研究 血管 平滑肌细胞生物学行为 的有效模 型。 关键 词 ： 血管平滑肌细胞 ； 胞培 养 ； 细 家兔
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中国药理 学通报
Ｃ ｉ ｓ Ｐ ａｍ ｃｌ ｉ ｌ ｕ ｅｎ ０ ８Ｍ ｙ２ （ ） ６６— ｈｎ ｅ ｈ ｒ ａｏｏ ｃ ｌｔ ２ ０ ａ ；４ ５ ：９ ９ ｅ ｇ ａ Ｂ ｌｉ
家 兔动 脉 血 管 平滑 肌 细胞 培 养 方法 的改 进
Ｐ ｉｐ 公 司 ） ｈ ｉｓ ｌ 。
１３ 实验动物 ．
供。
２ 方 法
健 康家兔 ， 由遵 义 医学 院实 验动 物 中心提
２ １ 家兔 Ｖ ＭＣ原 代培 养” ． Ｓ
健康 家兔 ， 辛６不拘 ， 体
重 １２ ．５—１５ ｇ ．０ ｋ 。将其 击 昏后颈 动脉 放血 ， 菌操作 下 取 无
胎兔动脉导管平滑肌细胞的原代培养及鉴定
胎兔动脉导管平滑肌细胞的原代培养及鉴定摘要目的：建立胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养方法。
方法：采用组织块改良贴壁法（玻片压迫组织块贴壁方法）进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外原代培养，并行免疫组织化学法对培养细胞的进行鉴定。
结果：经10～14天培养后，培养皿底及盖玻片上铺满梭状细胞，免疫组织化学法鉴定确认为胎兔动脉导管平滑肌细胞。
结论：植块改良贴壁法可以成功的进行胎兔动脉导管平滑肌细胞的体外培养，且本法简便，可靠，短时间内可以获得大量细胞，从而为动脉导管未闭发病机制的研究奠定了实验基础。
关键词平滑肌细胞动脉导管细胞培养胎兔动脉导管未闭（pda）是小儿先天性心脏病常见的类型之一，占先天性心脏病发病总数的15%。
胎儿时期，动脉导管的被动开放是血液循环的重要通道，它分流了超过一半的右心室输出量绕过未膨胀的肺进入脐循环进行气体交换。
出生后，随着首次呼吸的建立，动脉氧分压的增高，肺循环阻力的降低，动脉导管逐渐关闭。
而早产儿由于动脉导管平滑肌发育不良，平滑肌对氧分压的反应性低于足月儿，因此早产儿动脉导管未闭的发生率较高，约占早产儿的20%，且伴呼吸窘迫综合征的早产儿发病率更高。
因此，对于动脉导管未闭发生机制的研究及适当的干预和治疗在预防和降低早产儿的死亡率上具有重要的意义。
动脉导管平滑肌细胞（dasmcs）是构成动脉导管中层的主要细胞成分，其增殖、迁移及凋亡均与生后动脉导管的关闭密切相关。
因此，体外培养动脉导管平滑肌细胞是研究动脉导管未闭发病机制的重要手段。
由于影响血管平滑肌细胞体外培养的因素很多，尤其是动脉导管因其组织量较少，培养难度更大，因此国内少见有动脉导管平滑肌细胞的体外培养模型。
本课题组，参照国内外有关文献，采用组织贴块法成功培养出胎兔动脉导管平滑肌细胞，为动脉导管未闭发生机制的体外研究，提供了足量的细胞材料[1，2]。
资料与方法实验取材：选取孕29天的日本大耳白胎兔为研究对象，购于郧阳医学院实验动物中心。
干细胞分离培养步骤
家兔BMSC分离培养步骤1.麻醉、备皮、消毒、铺巾：取1只4-5周龄新西兰幼兔，速眠新肌肉注射(0．1～0．2mL／kg)麻醉。
仰卧固定于操作台上，褪毛，备皮，2%碘酒、75%酒精（或碘伏）常规消毒，铺洞巾(洞巾孔洞应控制在lcm左右，以利于减少污染)。
2. 在双侧踝关节处环形剪开皮肤，再纵行剪开皮肤至骶尾部，分离肌肉、筋膜等软组织至见骨膜，电锯离断踝关节、膝关节及髋关节，获取家兔股骨和胫骨（桡骨）,置于装有PBS液的无菌盒内。
（亦可从髂前上棘穿刺抽取骨髓）3．用PBS液体清洗骨组织3-4遍，去除杂物、血迹后，在超净工作台上，无菌条件下剥离骨周围的肌肉软组织，用眼科剪从股骨和胫骨的干骺端打开骨髓腔，用含有适量肝素( 625 U/mL)的DMEM 液冲洗骨髓腔，收集冲洗液约 6 ～ 8 mL。
吸管反复吹打后，1 500 r/min，离心5 min，弃上清。
加入 DMEM 培养基重悬，将上述细胞重悬液按照1∶ 1 的比例缓慢滴加到密度为 1. 073 g/mL 的PercoⅡ分离液中，1 500 r / min 离心 20 min。
离心后管内容物分为 3 层，收集中间乳白色云雾状的单个核细胞层，加入 DMEM 培养液稀释混匀，1 500 r/min 离心 5 min，洗涤 2 ～ 3 次，去除多余的脂肪细胞及组织液。
用含双抗的 10% 胎牛血清的 DMEM/F12 培养基重悬细胞，以 2. 0 × 10^5个/cm2的细胞密度接种于25cm^2培养瓶中，置于37 ℃，5%、饱和湿度的孵箱中培养。
4. 48小时后首次半量换液，去除浮物及其它非贴壁细胞（如造血干细胞），后每隔3天换液一次。
5. 7-10天后，待细胞融合长满至80%以上时用0.25%胰蛋白酶消化传代。
经过第一次传代后，骨髓间充质干细胞大约能占60%左右，并且呈漩涡状生长；一般经过3次左右传代后，骨髓间充质干细胞大约能占90%左右。
大白兔胸主动脉平滑肌细胞、成纤维细胞的培养
纤维细胞 。 关 键 词 平 滑 肌 细 胞 ； 纤 维 细 胞 ； 成 培养 ； 定 鉴 中图 分 类 号 ： ３ ８ ０ Ｒ １ ．８ 文献标志码 ： Ａ 文 章 编 号 ： ０ ５９ ０ ２ １ ） ５０ ８ — ３ １ ０ —３ Ｘ（ ０ １ ０ — ６ ４ ０
体 外 培 养 平 滑 肌 细 胞 、 纤 维 细 胞 可 为 探 索 临 床 治 疗 干 成 预 途 径 提 供 良好 的 实 验 对 象 。笔 者 参 考 国 内 、 研 究 报 外 道 ［ ］进 行 适 当改 进 ， 用 组织 块 贴 壁 法 行 细 胞 的原 代 及 传 ， 运
２ ～ ３ ｎ， ＢＳ再 次 漂 洗 ５ ｍｉ ３次 。 依 次 进 行 ： ３ Ｏ ０ ｍｉ Ｐ ｎ× ④
铺 巾 ， 骨 正 中切 口入 胸 。充 分 暴 露 升 主 动 脉 、 动 脉 弓 、 胸 主 降 主 动 脉 ， 离上 述 血 管 并 切 除之 ， 复灌 注 冲 洗 ， 除 血 管 内 游 反 去
兔原代胸主动脉平滑肌细胞培养方法及不同浓度血清培养基对其增殖的研究
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【 摘要】 目的 探 讨 体 外 分 离 培 养 兔 原 代胸 主 动 脉平 滑肌 细胞 （ ｖ ａ ｓ ｃ ｕ ｌ ａ ｒ ｓ ｍ ｏ ｏ ｔ ｈ ｍ ｕ ｓ ｃ ｌ ｅ ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ， Ｖ Ｓ Ｍ Ｃ ｓ ） 技 术及 在不 同浓
家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养
家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养陈秀荔;赵永贞;靳亚平;张彦明【期刊名称】《畜牧兽医学报》【年(卷),期】2007(38)11【摘要】本试验旨在体外分离培养兔子宫内膜细胞(腺上皮细胞和基质细胞)和平滑肌细胞,并且探讨纯化子宫内膜上皮细胞和基质细胞的方法.用差速离心法和差速贴壁法获得纯化的子宫内膜上皮细胞和基质细胞,用滤网法分离得到子宫平滑肌细胞,分别在添加20%胎牛血清(FBS)、100 μg/mL牛胰岛素、63.5 nmol/L雌二醇(E2)、7.14 nmol/L孕酮(P4)的DMEM/F12(1∶1)培养液和37℃ 5% CO2的饱和湿度条件下培养;用免疫组化和免疫荧光法鉴定细胞并检测分离的细胞纯度.结果表明用该方法成功地分离培养了兔子宫内膜上皮细胞和基质细胞,且2种细胞纯度都达98%左右,基质细胞出现蜕膜化;子宫平滑肌细胞的纯度为97%左右,而且出现横纹状的生长.本研究表明子宫内膜细胞和平滑肌细胞能够在体外成功培养;在含20%FBS、100 μg/mL牛胰岛素、63.5 nmol/L E2、7.14 nmol/L P4的DMEM/F12(1∶1)培养液和37℃ 5% CO2饱和湿度的培养条件下最有利于体外培养的子宫内膜细胞和平滑肌细胞的生长.【总页数】6页(P1242-1247)【作者】陈秀荔;赵永贞;靳亚平;张彦明【作者单位】西北农林科技大学,农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室,杨凌,712100;西北农林科技大学,农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室,杨凌,712100;西北农林科技大学,农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室,杨凌,712100;西北农林科技大学,农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室,杨凌,712100【正文语种】中文【中图分类】S852;Q813.1【相关文献】1.家兔子宫平滑肌细胞的体外分离培养 [J], 毕台飞;宋宇轩;窦铖2.家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养及鉴定 [J], 李瑞梅;陈秀荔;王海滨;靳亚平3.酶消化法分离培养家兔血管平滑肌细胞 [J], 王生兰;刘辉琦;王丽华;王树人4.益气化瘀法对置铜宫内避孕器家兔子宫内膜血管内皮细胞及平滑肌细胞超微结构的影响 [J], 雷磊;尤昭玲;付灵梅;文乐兮5.家兔主动脉平滑肌细胞条件培养基抑制血管平滑肌细胞增殖 [J], 徐仓宝;张亚萍;王亚文因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
酶消化法分离培养家兔血管平滑肌细胞
酶消化法分离培养家兔血管平滑肌细胞
王生兰;刘辉琦;王丽华;王树人
【期刊名称】《青海医学院学报》
【年(卷),期】2008(029)004
【摘要】目的探讨胶原酶分离并培养家兔血管平滑肌细胞的方法.方法取家兔腹主动脉,0.2%胶原酶I消化分离血管平滑肌细胞并进行培养,相差显微镜观察培养细胞的形态,免疫组化染色法检测细胞胞浆内α-肌动蛋白(α-actin)的表达.透射电镜观察血管平滑肌超微结构.结果相差显微镜下细胞呈长梭形,未见明显异型细胞,α-actin胞浆染色阳性细胞数占总细胞数的99%以上.电镜显示VSMC内肌丝丰富,线粒体、高尔基复合体等细胞器较少,VSMC呈现分化的收缩表型.结论胶原酶可消化分离培养血管平滑肌细胞,且有成活细胞数多、传代周期短的特点,可用于血管平滑肌表型研究.
【总页数】4页(P249-252)
【作者】王生兰;刘辉琦;王丽华;王树人
【作者单位】青海大学医学院;青海大学医学院;青海大学医学院;四川大学华西基础与法医学院
【正文语种】中文
【中图分类】R329.33
【相关文献】
1.酶消化法分离老龄SD大鼠血管平滑肌细胞 [J], 王明勇;陈枫;陈庄
2.酶消化法联合组织块法与经典酶消化法体外分离培养黑色素细胞的比较 [J], 牛牧;李其林;何丹华;黄永华;陆小娟;戴丽冰
3.组织块贴壁法和混合酶消化法分离原代血管平滑肌细胞的表型特征比较 [J], 赵奇慧;张恂;申刚义;刘伟志;朱丹
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5.二步酶消化法分离大鼠主动脉血管平滑肌细胞及活性鉴定 [J], 刘幸平;沈岱菲;郑燕珊;方欢;高分飞
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家兔类胚胎干细胞的分离与培养的开题报告
家兔类胚胎干细胞的分离与培养的开题报告
一、研究背景
随着人类生活水平的提高，以及宠物饲养文化的发展，宠物养殖业已经逐渐成为一种重要的经济产业。
其中，兔肉养殖作为一种高蛋白、低脂肪的绿色食品，已经赢得越来越多人的青睐。
同时，家兔也被越来越多的人作为宠物饲养，成为人们生活中不可或缺的一部分。
家兔作为一种常见的动物模型，在医学、生物学等领域都有广泛的应用。
胚胎干细胞作为一种高度具有分化潜能的细胞种类，能够在生长发育过程中分化为各类功能性细胞，具有广阔的研究应用前景。
因此，研究家兔类胚胎干细胞的分离与培养，对于深入了解家兔的生态特性、繁殖方式、免疫功能等方面具有重要的意义。
二、研究内容及目的
本研究旨在分离和培养家兔类胚胎干细胞，了解家兔类胚胎干细胞的基本性质，探讨家兔类胚胎干细胞的分化潜能，为家兔育种、繁殖及基因工程技术的研究提供一定的实验依据。
三、研究方法
本研究将采用以下方法：
1. 家兔胚胎的采集和剖解；
2. 家兔类胚胎干细胞的分离；
3. 家兔类胚胎干细胞的纯化和培养；
4. 家兔类胚胎干细胞的鉴定；
5. 家兔类胚胎干细胞的分化实验；
6. 家兔类胚胎干细胞的基因分析。
四、研究意义
研究家兔类胚胎干细胞的分离和培养，将有助于对家兔的生态特性和繁殖方式进行了解和探究，为家兔品种改良及育种提供实验依据。
同时，通过对家兔类胚胎干细胞的研究，有望探索其丰富的分化潜能和广阔的应用前景，为生物医学等领域的科研工作提供有力支持，进一步提升我国的科技实力。
小鼠子宫平滑肌细胞的分离培养及鉴定
小鼠子宫平滑肌细胞的分离培养及鉴定范晶晶【期刊名称】《潍坊学院学报》【年(卷),期】2012(012)004【摘要】To study a new simple mechanical method for the isolation and culture of Mouse myometrial smooth cells （mMSMCs） in order to provide a experimental model for study the physiology and pathology of MSMCs. A new mechanical method was used to isolate mouse myometrial smooth. And then type Ⅰ collagenase and trypsin were used to isolate mMSMCs. More than 90%of the dissociated cells exhibited initial viability. The surviving cells were observed by phase con- trast microscope and verified by immunofluorescence staining. After 3 days of incubation, primary cultures of cells attached the wall of the incubation dishes, and reached confluence with 2 weeks. The cells grew with spindle--shape and showed typi- cal ＂hill-valley＂ pattern under phase contrast microscope. Immunofluorescence staining for smooth musclea--actin shewed positive reaction in more than 98% attached cells. The mMSMCs cultured in this experiment survive well, with highly puri- ty, and can serve the further studies of physiology and pathology.%为寻找研究子宫平滑肌细胞生理和病理的实验研究模型，试建立一种新的简易机械分离培养小鼠子宫平滑肌细胞的方法。
兔血管平滑肌细胞体外培养及生长特性研究
兔血管平滑肌细胞体外培养及生长特性研究郑辉;薛松;连锋;黄日太;胡振雷【期刊名称】《上海交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2010(030)009【摘要】目的体外分离培养兔血管平滑肌细胞(VSMC)并观察其生长特征.方法采用酶消化结合贴壁法原代培养兔胸主动脉来源的VSMC并传代,倒置显微镜观察和免疫荧光染色法鉴定培养细胞;锥蓝法、绘制生长曲线、MTT法和划痕法分别测定VSMC传代细胞的成活率及其生长、增殖和迁移能力.结果原代培养5 d后,VSMC 从组织块边缘长出,传代细胞呈典型"峰-谷"状生长,胞质内α-平滑肌肌动蛋白免疫荧光染色阳性;细胞成活率为96%;生长曲线近似"S"形;细胞生长第3～5 d内光密度值变化较明显;无血清培养的VSMC在24 h内划痕宽度变化最显著.结论体外培养的兔动脉平滑肌细胞为收缩表型且活性高,生长3～5 d细胞增殖活力较强,无血清培养的细胞在24 h内迁移能力最强,为心血管疾病研究提供了良好的实验材料.【总页数】6页(P1095-1100)【作者】郑辉;薛松;连锋;黄日太;胡振雷【作者单位】上海交通大学,医学院附属仁济医院心胸外科,上海200127;上海交通大学,医学院附属仁济医院心胸外科,上海200127;上海交通大学,医学院附属仁济医院心胸外科,上海200127;上海交通大学,医学院附属仁济医院心胸外科,上海200127;上海交通大学,医学院附属仁济医院心胸外科,上海200127【正文语种】中文【中图分类】Q813;R-332【相关文献】1.兔骨骼肌卫星细胞的体外培养及生长特性的研究 [J], 徐蓬;顾晓明2.兔骨髓间充质干细胞体外培养生长特性的初步观察 [J], 李新天;任龙喜;程爱国3.糖尿病大鼠血管平滑肌细胞体外培养及Notch信号通路对其细胞增殖及凋亡的研究 [J], 汪宝林;金松;范东旭;冯东凡;谢涵4.碱性成纤维细胞生长因子对体外培养的兔骨髓基质细胞生长特性的影响 [J], 王志勇;陈增海;于胜吉5.人诱导性多能干细胞分化的血管平滑肌细胞体外培养圆环形工程化组织的实验研究 [J], 周嘉辉;马文韬;姚博谦;罗玮;方丽君;刘鹏;林展翼因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
兔子宫平滑肌细胞的原代培养与鉴定
兔子宫平滑肌细胞的原代培养与鉴定曾润清;刘庚贵;刘惠萍;李冰凌;王若光【期刊名称】《实用预防医学》【年(卷),期】2007(14)2【摘要】目的研究子宫平滑肌细胞(MSMC)的培养方法及一些生物学特性。
方法运用酶消化后组织贴块法及胶原酶Ⅰ消化法进行兔子宫平滑肌细胞的培养,并用倒置生物显微镜、HE染色进行形态学观察和用免疫组化对培养细胞进行鉴定。
结果运用此两种方法成功培养了兔子宫平滑肌细胞,培养的细胞呈典型“峰-谷”样生长,HE染色观察细胞呈梭形,胞浆丰富,核大圆形或椭圆形。
免疫组化S-P法检测a-平滑肌肌动蛋白单克隆抗体(a-SMActin)表达强阳性。
经传代纯化,纯度达99%以上,细胞生长特性未见异常改变。
结论酶消化后组织贴块法及胶原酶Ⅰ消化法培养的兔子宫平滑肌细胞生长稳定性好,培养与纯化能同步进行,方法简便,经济。
【总页数】3页(P267-269)【关键词】兔;子宫平滑肌细胞;细胞培养;鉴定;原代培养;传代培养【作者】曾润清;刘庚贵;刘惠萍;李冰凌;王若光【作者单位】湖南中医药大学中西结合系【正文语种】中文【中图分类】R-332;R339.22【相关文献】1.兔尿道海绵体平滑肌细胞的原代培养及鉴定 [J], 何涛2.胎兔动脉导管平滑肌细胞的原代培养及鉴定 [J], 余忠琴;朱辉银3.新西兰兔尿道海绵体平滑肌细胞的原代培养及鉴定 [J], 张金明;黄红军;何涛4.兔静脉血管内皮及平滑肌细胞原代培养方法的改进及鉴定 [J], 黄健兵;龚德军;胡丰庆;姚颖龙;黄盛东;邹良建5.胎兔动脉导管平滑肌细胞的原代培养及鉴定 [J], 余忠琴;朱辉银;因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
雌兔阴蒂海绵体平滑肌细胞的体外培养及生物学特性
雌兔阴蒂海绵体平滑肌细胞的体外培养及生物学特性
刘波;刘继红;王涛
【期刊名称】《中华男科学杂志》
【年(卷),期】2004(10)3
【摘要】目的 :探讨雌兔阴蒂海绵体平滑肌细胞的体外培养方法及其生物学特性。
方法 :采用酶消化法对阴蒂海绵体平滑肌细胞进行体外培养 ,倒置显微镜下观察细
胞形态,计数细胞贴壁率及生长情况,用免疫组织化学方法鉴别培养的平滑肌细胞。
结果 :体外培养的细胞证实为兔阴蒂海绵体平滑肌细胞 ,梭形 ,呈长轴平行排列 ,贴
壁快 ,生长迅速而平稳。
结论 :体外培养的阴蒂海绵体平滑肌细胞可在合适的条
件下生长和传代 ,并能够保持稳定的生物学特性。
【总页数】4页(P198-201)
【关键词】阴蒂海绵体;平滑肌细胞;体外培养;兔;雌性;生物学特性;女性;性生理
【作者】刘波;刘继红;王涛
【作者单位】华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科
【正文语种】中文
【中图分类】R339.22
【相关文献】
1.体外分离培养兔阴茎海绵体平滑肌细胞的纯度分析 [J], 宋鲁杰;徐月敏;傅强;李超;许小林;胡晓勇;崔磊
2.淫羊藿苷对兔阴蒂海绵体平滑肌细胞NO及NOS活性的影响 [J], 杨春;辛钟成;
付杰;袁亦铭;丁义;辛华;汪泽厚
3.兔血管平滑肌细胞体外培养及生长特性研究 [J], 郑辉;薛松;连锋;黄日太;胡振雷
4.兔阴蒂海绵体平滑肌细胞的体外培养方法及生物学特性 [J], 杨春;辛钟成;付杰;丁义;袁亦铭;辛华;汪泽厚
5.兔阴茎海绵体平滑肌细胞的体外培养及其生物学特性 [J], 段永芳;刘继红;曹正国;章咏棠
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畜牧兽医学报 2007,38(11):1242~4247Acta Veterinaria et Zootechnica S inica家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养陈秀荔,赵永贞,靳亚平,张彦明*(西北农林科技大学农业部家畜生殖内分泌与胚胎工程重点开放实验室,杨凌712100)摘 要:本试验旨在体外分离培养兔子宫内膜细胞(腺上皮细胞和基质细胞)和平滑肌细胞,并且探讨纯化子宫内膜上皮细胞和基质细胞的方法。
用差速离心法和差速贴壁法获得纯化的子宫内膜上皮细胞和基质细胞,用滤网法分离得到子宫平滑肌细胞,分别在添加20%胎牛血清(FBS)、100 g/mL牛胰岛素、63 5nmo l/L雌二醇(E2)、7 14 nmo l/L孕酮(P4)的DM EM/F12(1 1)培养液和375%CO2的饱和湿度条件下培养;用免疫组化和免疫荧光法鉴定细胞并检测分离的细胞纯度。
结果表明用该方法成功地分离培养了兔子宫内膜上皮细胞和基质细胞,且2种细胞纯度都达98%左右,基质细胞出现蜕膜化;子宫平滑肌细胞的纯度为97%左右,而且出现横纹状的生长。
本研究表明子宫内膜细胞和平滑肌细胞能够在体外成功培养;在含20%FBS、100 g/mL牛胰岛素、63 5nmol/L E2、7 14nmol/L P4的DM EM/F12(1 1)培养液和375%CO2饱和湿度的培养条件下最有利于体外培养的子宫内膜细胞和平滑肌细胞的生长。
关键词:子宫内膜细胞;平滑肌细胞;免疫组织化学;免疫荧光;蜕膜化中图分类号:S852;Q813 1 文献标识码:A 文章编号:0366 6964(2007)11 1242 06The Separation and Cultivation of Rabbit EndometrialCells and Smooth Muscle Cells in vitroCH EN Xiu li,ZH AO Yong zhen,JIN Ya ping,ZH AN G Yan m ing* (K ey L abor atory of A nimal Rep roductive E ndocr inology and Embr y o Biotechnology ofA griculture M inistry of China,Nor thw est A&F Univer sity,Yangling712100,China)Abstract:In this paper,rabbit endometrial cells(epithelial cells and strom al cells)and sm ooth muscle cells w ere successfully isolated and cultured,and the w ay s used in purifying endom etrial epithelial cells and strom al cells w er e discussed.The w ays of differential centrifug al speed and differential sticking on the w all w ere applied to obtain the purified epithelial cells and stro mal cells,the w ay of sieve w as chosen to harvest smooth muscle cells,separately.The cells w ere cul tured in the medium that consist o f a1 1mix ture of DM EM F12m edia supplemented with 20%FBS,100 g/m L insulin,63 5nm ol/L estro gen,7 14nmol/L pro gesterone,at37hu m idified atmo sphere of5%CO2in air.Im muno histo chemistry and immunofluo rescence assay w ere used to identify the three kinds of cells and their purificatio n.Results sho w ed that rabbit endo metr ial epithelial cells and stro mal cells w ere successfully separated and cultured,the purifi cation of the two kinds of cells reached about98%.Decidualizatio n w as observ ed in stro mal cells.The purificatio n of smooth muscle cells r eached about97%,cells sho w ed lateral cut g row th.The resear ch indicated that endometrial cells and sm ooth muscle cell could be cultur ed successfully in vitr o;The DM EM/F12(1 1)culture medium supplem ented w ith20%FBS,100 g/mL insulin,63 5nmol/L estrog en,7 14nm ol/L prog ester one and the incubation under condition of37hum idified atmosphere of5%CO2w ere optim al to suppor t the g row th of endometrial cells and收稿日期:2006 11 13基金项目:国家自然科学基金资助项目(39770544)作者简介:陈秀荔(1975 ),女,内蒙古赤峰市人,博士生,主要从事家畜生殖内分泌与生殖免疫研究,E mail:chenx iuli2001@163 com*通讯作者:张彦明(1956 ),男,陕西南郑人,博士生导师,主要从事分子病原学与免疫学研究,E mail:z hangyanm ing@nw suaf edu cn11期陈秀荔等:家兔子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离培养smo oth muscle cells.Key words:endometrial cells;sm ooth muscle cells;immunohistochemistry;immunofluor escence;decidualizatio n子宫内膜作为性激素作用的靶器官,在生殖生理研究中占有重要的地位。
对子宫内膜细胞进行体外培养,为研究细胞的生长、分化和代谢以及性激素作用的机理提供了理想的实验模型;着床期子宫内膜在胚泡黏附后发生蜕膜化反应,子宫内膜基质细胞逐渐转化为蜕膜基质细胞,影响滋养层细胞的侵入,一方面蜕膜组织中细胞外基质处于不断更新代谢的动态平衡中,另一方面,蜕膜组织能够产生多种细胞因子、生长因子以及金属蛋白酶,调节滋养层细胞的多种基因表达,因此体外研究基质细胞的蜕膜化现象对进一步研究胚胎植入机理十分必要[1~4]。
子宫平滑肌细胞的体外培养为研究子宫内以及其他组织器官的血管的形成以及体外构建血管模型提供了依据。
目前对子宫内膜细胞和平滑肌细胞的分离方法主要有两种,一种是滤网法[5],另一种是离心法[6]。
本实验室曾应用滤网法分离子宫内膜细胞[7],但其操作繁琐,因此,本研究对子宫内膜细胞的体外培养加以改进,采用离心法获得细胞后再经过差速贴壁法获得纯化的子宫内膜细胞,探讨更为简单有效的纯化方法,为进一步的体外研究激素及生长因子对子宫内膜细胞和平滑肌细胞增殖的影响提供依据;同时为体外模拟正常子宫模型的建立奠定基础。
1 材料与方法1 1 试验动物试验用母兔来自军事医学科学院实验动物中心,临床检查健康,性成熟。
1 2 主要试剂孕马血清促性腺激素(PM SG,北京奶牛中心),人绒毛膜促性腺激素(hCG,北京奶牛中心), DMEM/F12培养基(Gibico BRL公司),胎牛血清(FBS,百灵克公司),孕酮(P4,Sigma),雌二醇(E2, Sig ma),牛胰岛素(Sig ma),rhEGF(Promega),鼠抗人的角蛋白CK18(Cytoker tin18,北京中杉公司)多克隆抗体,波形蛋白(Vimentin,北京中杉)多克隆抗体,平滑肌肌动蛋白( actin,北京中杉)多克隆抗体,H o echst33258(Sigm a公司,分析纯),SP免疫组化试剂盒及DAB显色液以及相应的罗丹明荧光二抗(北京中杉公司)。
1 2 方法1 2 1 子宫内膜细胞的分离 雌性大耳白兔,性成熟,体质量为2kg。
16:00肌肉注射100IU的PMSG超排处理,48h后耳缘静脉注射100IU的hCG,于第2天08:00空气栓塞处死超排处理兔,无菌条件下取出子宫,用含双抗的PBS冲洗子宫至白色,纵向剪开子宫,刮取子宫内膜,用0 25%的胰蛋白酶室温消化0 5~1min,用吸管反复吹打几次,将其收集到盛有培养液(含血清)的离心管中,吹打均匀,采取以下的几种方法进行分离纯化:一种是滤网法,用200目不锈钢网筛过滤,收集滤液,1000 r/min离心5m in,得基质细胞;用完全培养基冲洗滤网上的细胞,得到的液体进行离心,1000r/min 离心5min,得上皮细胞[7]。
另一种分离纯化的方法是差速离心法,将消化获得的子宫内膜细胞1000 r/min离心5m in,弃去上清,然后再加入10mL完全培养液将其重悬,再经过300r/m in离心5min,取其上2/3的悬液接种于培养瓶中得基质细胞,取下1/3悬液接种于培养瓶中得上皮细胞,因为这样获得的细胞不是很纯,笔者尝试用反复差速贴壁法对2种细胞进行纯化,从而获得纯度较高的子宫内膜细胞。
方法如下:将接种的2种细胞放置于37,5%的CO2孵箱内培养1h后,吸取培养液于离心管中离心,下层贴壁的为基质细胞(因其属于成纤维样细胞所以易于贴壁),再重复以上操作2次,每次计数未贴壁的细胞数量,再离心收集未贴壁的细胞,重新接种到瓶中进行培养得到上皮细胞。
1 2 2 子宫平滑肌细胞的分离 在以往报道的基础上加以改进[8,9],将刮去子宫内膜的子宫用PBS 冲洗几次,每次冲洗的液体收集到离心管中(内含基质细胞和上皮细胞),用差速离心法和差速贴壁法分离纯化2种细胞,将冲洗过的子宫用眼科剪修剪边缘,再将剩余部分剪成1m m3的小块,加入适量的0 25%胰蛋白酶室温消化5m in,用200目不锈钢网筛过滤。